La deteccin de familias sospechosas de ser portadoras de un HNPCC se realiza a travs

de criterios clnicos de seleccin internacionales, como son los establecidos en las

reuniones de Amsterdam y Bethesda. El criterio de Amsterdam se basa en la seleccin
de familias que incluyen al menos tres familiares en primer grado afectados con cancer
colorrectal (y cnceres asociados a HNPCC), todo ello en dos generaciones sucesivas,
adems al menos uno de los casos debe haberse presentado antes de los 50 aos. Debido
al alto grado de estrictez que presenta este criterio, para el cual no todos los pacientes
tienen la informacin adecuada para completar los requisitos establecidos, es que se
utilizan los criterios de Bethesda los cuales son ms flexibles, ya que considera slo al
paciente afectado. El paciente seleccionado con este ltimo criterio es posteriormente
analizado por la tcnica de inestabilidad microsatelital. Ambos criterios de seleccin han
sido creados para favorecer el xito en la bsqueda de mutaciones en los genes
reparadores del ADN anteriormente nombrados.
El anlisis de inestabilidad microsatelital (MSI) se realiz en muestras de los tumores
colorrectales obtenidas desde cada uno de los hermanos. Este anlisis incluy los
marcadores microsatelitales establecidos en el panel de referencia para HNPCC:
mononucletidos BAT25 y BAT26, adems de los dinucletidos D5S346, D2S123 y
D3S1029. Se compar el ADN tumoral y ADN normal de linforcitos del mismo
paciente mediante la prueba de reaccin en cadena de la polimerasa radiactiva (rPCR).
Se considera que un tumor es altamente inestable cuando presenta dos o ms
marcadores positivos, es decir, que presentan cambios de longitud, debido a inserciones
o desapariciones de una unidad repetitiva en una regin del microsatlite y estable si no
presenta cambios de longitud en ninguno de los 5 marcadores.
Por otra parte, se realiz una evaluacin de la expresin de las protenas MLH1 y
MSH2 a travs de inmunohistoqumica. La bsqueda de mutaciones en los genes
MLH1 y MSH2 se llev a cabo a travs de la tcnica de conformmeros de hebra
simple (SSCP, single strand conformer polymorphisms) y posterior secuenciacin
automtica del ADN.
El anlisis funcional de los efectos de la mutacin se realiz a partir de la extraccin
de ARN total a partir de linfocitos de dos de los pacientes. El ADN complementario
(cADN) se sintetiz a partir del ARN total por transcripcin reversa y amplificacin por

PCR (RT-PCR) el cual fue secuenciado en forma automtica para determinar la

presencia o ausencia del splicing alternativo.
Para el estudio se pidi el consentimiento informado de cada uno de los pacientes.
RESULTADOS
El anlisis gentico molecular revel el cambio c.1731+3A>T, que consiste en la
sustitucin de una adenina por timina en el nucletido nmero tres del intrn 15. La
mutacin fue identificada en los tres hermanos que presentaban cancer colo-rrectal y no
as en el paciente con plipo adenomatoso.
El anlisis funcional de esta mutacin indic que este cambio nucleotdico presente en
el intrn del gen MLH1 tena un efecto en el splicing del ARN mensajero, produciendo
la prdida del exn 15 completo del gen MLH1.
El anlisis de inestabilidad microsatelital en los tumores colorrectales de los cuatro
hermanos revel que tres de ellos presentaban un fenotipo inestable (dos o ms
marcadores positivos). A su vez, el anlisis inmunohistoqumico evidenci la ausencia
de la protena MLH1 y la presencia de la protena MSH2, en estos mismos tumores. Por
el contrario, el anlisis del plipo adenomatoso presente en la cuarta hermana demostr
ser estable para los 5 marcadores microsatelitales estudiados, presentando adems la
expresin de ambas protenas en el tejido tumoral.