Genetica Microbiana

PRINCIPIOS MOLECULARES DE GENETICA MICROBIANA
Los microorganismos procariotas tienen sistemas genticos relativamente

simples. Tienen un solo cromosoma de ADN (ADNChr), los microorganismos
eucariotas tienen sistemas genticos mucho mas complejos, sus cromosomas
estn estructurados de manera mas compleja y generalmente son mas de dos,
presentan mecanismos de reproduccin sexual para realizar la recombinacin
gentica.
Estructura molecular del ADN
La estructura del ADN fue puesta de manifiesto por Watson y Crick en 1953 y se
representa como una doble hlice de estructura tridimensional. La molcula del
ADN, tanto en procariotas y eucariotas tiene un dimetro es de 2 2.5 nm y la
abertura entre la dos espiras es de 3,4 nm, dado que en cada vuelta del hlice se
hallan 10 nucletidos, la distancia entre dos bases consecutivas es de 0.34 nm.
(1/3 nm). En los procariotas su longitud al ser desenrollado puede ser superior a
1 mm y el peso molecular es muy variado dependiendo del microorganismo a
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quien pertenece, en procariotas se aproxima a los 3 x 10 daltons.
Surco
menor
3.4 nm
Esqueleto
azcar
fosfato
Una Vuelta
helicoidal
Surco
Mayor
0.34 nm
3
2 nm
Fig. 1. Modelo del ADN en doble hlice
GENETICA MICRBOBIANA
Las bases del ADN son de dos tipos, las pricas (adenina, guanina) y
pirimidnicas (citosina, timina), cada base se une al C1 de la pentosa. La unin
base mas pentosa forma desoxinuclesido (desoxiadenosina, desoxiguanosina,
3desoxitimidina, desoxicitidina). Cada desoxinuclesido se une al grupo PO4
(ortofosfato) en el C5 de la pentosa y forma desoxinucletido (desoxiadenosin
monofosfato,
desoxiguanosin
monofosfato,
desoxitimidin
monofosfato,
desoxicitidin monofosfato). La cadena de ADN es una sucesin de
desoxinucletidos unidos entre s por molculas de ortofosfato. Cada una de
estas molculas esterifica, por un lado, la desoxirribosa de un nucletido en
posicin 5 (C5) y por el se une al C3 (posicin 3) del azcar siguiente, de modo
3que el PO4 une los C5 y C3 de las pentosas. Las cadenas tienen polaridades
opuestas, son antiparalelas, pues frente al tipo de unin fosfato-3desoxirribosa se
encuentra una unin en posicin 5, y el ensamblaje entre las dos cadenas se
realiza por puentes de hidrgeno que dada la disposicin espacial tan peculiar, se
establece entre adenina-timina y entre guanina-citosina en los dos sentidos (A-T,
T-A, G-C, C-G). Es decir que frente a una fraccin de la cadena, por ejm.
5GCCATACG3 debe hallarse una hebra 3CGGTATGC5.
Fig. 2. Secuencia y apareamiento de bases del ADN
PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA
Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.
Cada Regin del ADN que produce una molcula de ARN funcional se denomina
GEN. El ADN de los procariotas es polignico y todas sus regiones codifican para
un gen. Los genes de los eucariotas son discontinuos a lo largo del ADN con
regiones no codificadoras llamadas INTRONES que se encuentran entre
secciones codificadoras o EXONES. El nmero de intrones es variables y flucta
desde ninguna hasta ms de 50. Cada gen puede tener en los eucariotas
5
alrededor de 1 x 10 pares de bases (pb), aunque hay genes que tienen hasta 2 x
6
10 pb. El 75 % del ADN eucaritico tienen secuencias nicas o singulares, de
esto el 13% son genes (un 10 % del genoma).El resto un 25 % de ADN son
secuencias repetitivas sin funcin conocida.
El total de la informacin gentica contenida en el ADN de la clula microbiana se
denomina GENOMA.
Repeticiones invertidas y estructura secundaria del ADN
Aunque la secuencia de bases a lo largo de la cadena de ADN est determinada
por el cdigo gentico, suelen darse secuencias de bases no causadas por sus
propiedades de codificacin sino debido a que influyen en la estructura
secundaria del ADN o la forma como ste interacta con las protenas. As estas
secuencias pueden emparejar sus bases formando una horquilla, la secuencia
que corresponde a dicha estructura consiste en dos copias de una secuencia
idntica dispuestas en orientacin inversa, y denominan repeticiones invertidas.
La secuencia de las repeticiones invertidas forma un Palndromo, (del griego
regresar de nuevo) Un palndromo una secuencia de caracteres que se lee lo
mismo de derecha a izquierda y al contrario, ejm. Dbale arroz a la zorra el
abad, Anita lava la tina, Atar a la rata, molecularmente se define como una
secuencia de ADN bicatenario que es idntica cuando una cualquiera de sus
cadenas se lee en una direccin definida.
As por ejemplo la secuencia
5 TGAGAAT ATTCTCA 3
3 ACTCTTA TAAGAGT 5
es palindrmica porque leda en sentido 5 a 3 cualquiera de las dos cadenas
presenta las misma bases, es decir de izquierda a derecha en la cadena superior
y de derecha a izquierda en la cadena inferior.
Una secuencia palindrmica se describe formalmente como una regin de
simetra binaria en la que el eje de simetra separa las repeticiones invertidas. En
nuestro ejemplo el eje de simetra est sealado por una lnea que en ambos
lados aparece la misma secuencia en orientacin invertida. Las dos copias de
una repeticin invertida no tienen porque ser necesariamente contiguas, podra
darse el siguiente caso
5 TGAGAATNNN NNNATTCTCA 3
3 ACTCTTANNN NNNTAAGAGT 5
la secuencia sigue formando una repeticin invertida, pero el eje de simetra se ha

desplazado al centro de los seis pares de bases adicionales, que separan las dos
copias de la repeticin.
La existencia de una repeticin invertida se puede reflejar en la estructura
secundaria de cualquier cido nucleico de cadena simple o doble. En un ADN
bicatenario, las secuencias complementarias situadas en la misma cadena slo
tiene la oportunidad de emparejar sus bases si la cadena se separa de su
complementaria. La situacin es idntica para cada cadena: se podra formar una
horquilla. La formacin simultnea de dos horquillas opuestas origina una
estructura cruciforme (observadas solo In Vitro), llamada as porque representa la
unin de cuatro regiones bicatenarias.
Las regiones de repeticin invertida sirven como sitios de reconocimiento para
enzima y otras protenas que se unen con el ADN.
ADN en los microorganismos eucariotas
En eucariotas el ADN est constituyendo la Cromatina y se encuentra unido a
protenas tipo Histonas. El ADN en la cromatina se encuentran formando
cromosomas que se ubican en el ncleo celular, el cul consta de tres
componentes: una envoltura nuclear, la cromatina (ADN y protenas asociadas) y
el nuclelo (expresin de la sntesis del ARN). Se observan regiones de ADN
eucaritico que se encuentra unidos por protenas no identificadas a la matriz
nclear (armazn nuclear) denominadas regiones asociadas a la matriz (MAR)
que tiene influencia en la replicacin y transcripcin del ADN.
En este acpite se tratar lo relacionado a la Cromatina y ADN eucaritico, de los
otros componentes del ncleo celular eucaritico mayor informacin puede
encontrarse en los textos especializados de biologa molecular y gentica.
- Histonas. Son pequeas protenas con elevado porcentaje de aminocidos (aa)
cargados positivamente, son protenas bsicas, pero la afinidad de la cromatina
por los colorantes bsicos se funda en que el ADN est en elevada proporcin
(50% de ADN y 50% de histonas). El 20% a 30% de los aa de stas protenas
son arginina (ARG), lisina (LIS) e histidina (HIS). Las histonas se unen al ADN por
atraccin electrosttica entre las cargas positivas de los aa y las cargas negativas
de los grupos fosfatos del ADN. Aproximadamente el 80% de los aa de las
histonas estn formando una hlice . Muchas histonas sufren modificaciones
covalentes: metilaciones (LIS, ARG e HIS), acetilaciones (LIS), fosforilaciones
(SER, HIS), ADP-ribosilaciones y uniones a ubiquitina.
La ubiquitina es un polipptido de 76 aa que se une mediante enlace peptdico
entre el grupo (epsilon) de las LIS de la Histona y la glicina (GLI) del carbono
terminal de la ubiquitina. Estas modificaciones ocurren a lo largo del ciclo celular.
La mayor parte de las acetilaciones de H2A, H2B, H3 y H4 tienen lugar al mismo
tiempo que la replicacin del genoma, mientras que la mxima fosforilacin y la
ADP-ribosilacin de H1 tiene lugar despus. La funcin de las histonas es
empaquetar el ADN que de otra manera no cabra fsicamente en el ncleo
eucaritico. Cada cromosoma (Chr) eucaritico contiene una molcula de ADN,

dos, si la clula ya ha replicado su ADN.
Existen dos grupos de Histonas:
- Las Histonas nucleosmicas, son de cuatro tipos:
- H2A, con 127 aa, 14 kDa de Mr (masa molecular relativa o PM), con 11 %
de LYS y 9 % de ARG (14 resduos de LYS y 12 de ARG).
- H2B, con 125 aa, 13.8 kDa de Mr, con 16 % de LYS y 6 % de ARG (20
resduos de LYS y 8 de ARG).
- H3, con 135 aa, 15.342 kDa de Mr, un 9.6 % de LYS y 13 % de ARG (13
- H4, con 102 aa, 11.3 kDa de Mr, con 10.7 % de GLY y 13.7% de ARG (11
Son protenas muy bsicas, especialmente la H3 y H4. Se renen para dar
lugar a un tetrmero que forma un disco de 10 nm de dimetro y 5 nm de
altura. Dos tetrmeros se unen para formar un octmero que mide 10 x 10 nm
y alrededor del cual se enrolla el ADN dando aproximadamente 1.8 vueltas,
constituyendo el Nucleosoma o unidad bsica de la estructura de la cromatina.
Mas adelante se tratar mas sobre esto.
- El otro grupo est formado por la histona no nucleosmica, la Histona 1 (H1) que
tiene unos 213 aa, con Mr de 23 kDA y con un 29 % de LYS (62 resduos de LYS)
y 1.4 % de ARG (3 resduos de ARG). Es muy heterognea encontrndose
varios tipos diferentes en la misma clula. Cada H1 presenta una regin globular
central y dos extremos (carboxilo y amino). Las H1 son necesarias para el
plegamiento helicoidal de la fibra de cromatina.
- Otras protenas. Se encuentran tambin en menor proporcin protenas cidas
del tipo fosfoprotenas, abundantes en la eucromatina. Se caracterizan por su alta
velocidad de recambio (turn-over) y porque se sintetizan durante todo el ciclo
celular, a diferencia de las histonas que solo se sintetizan en el perodo S del ciclo
celular eucariota. Las protenas mejor conocidas son la nucleoplasmina, protena
cida de 29 kDa que se une a las histonas H2A y H2B y la protena N1, que se
une a la H3 y H4. En el ncleo eucariota tambin existen protenas cidas no
unidas al ADN ni al ARN denominadas residuales (HMG, de alta velocidad) las
mas conocidas son la HMG 1 2, 14 y 17. Otras protenas son diversas enzimas
como ADN sintetasa, nuclesido trifosfatasa, acetilasa de histonas o histona
acetilasa, etc.
- Nucleosoma. Constituido por ocho molculas de histonas sobre las que se
enrolla el ADN. El octmero de histonas est compuesto por 2 molculas de cada
una de las histonas H2A, H2B, H3 y H4. Las histonas forman una estructura
central de aproximadamente 11 x 11 x 5.7 nm, con 146 pb del ADN enrollados

alrededor formando una hlice levgira. Por cada nucleosoma existe una
molcula de H1 que interacciona con el ADN vecino al nucleosoma pero no forma
parte del octmero, dicho de otro modo la H1 se localiza en el sitio donde el ADN
entra y sale de el ncleo central cerrando efectivamente dos vueltas completas de
ADN alrededor del octmero histnico. Las protenas HMG 1 y 2 tambin
interaccionan con el ADN espaciador Inter-nucleosoma y dos molculas de
HMG14 y HMG17 se asocian in vitro por cada nucleosoma. Esta estructura del
nucleosoma espaciados cada 200 pb a lo largo de la molcula de ADN
extendido recibe el nombre de fibra bsica de la cromatina o fibra de 10 nm.
En el nucleosoma el ADN se enrolla sobre la superficie del octmero de histonas
dando 1,8 vueltas y abarcando unos 146 pb que vara poco de una parte del
genoma a otra y de una especie a otra. La longitud del ADN espaciador entre
nucleosomas es variable y va de 4 pb a 104 pb. El octmero tiene una forma
aproximada de disco de 7,3 nm de dimetro y 4 nm de altura. Las dimensiones
del nucleosoma que incluye los 146 pb del ADN enrollados sobre el octmero son
11 nm de dimetro y 5,7 nm de altura. El hecho de que el ADN se enrolle sobre la
superficie externa del octmero permite que el ADN sea accesible a otras
protenas que interaccionan con secuencias especficas del ADN.
NUCLEOSOMA
MADURO
ADN
ESPACIADOR
146 pb
220 pb
Fig. 3. Esquema representativo del nucleosoma
Cada una de las cuatro histonas presenta un extremo extendido rico en LIS y
ARG por el que se une al ADN, y otro ms compacto por el que se une al extremo
compacto de las otras tres histonas. Cada tetrmero entonces, tiene una regin
central (unin de los cuatro extremos compactos de las histonas) y cuatro colas
(los cuatro extremos distendidos) de unin al ADN. Alrededor de cada tetrmero
se dispone una vuelta del doble helicoide de ADN formando as un hemioctmero.
De la unin de ambos hemioctmeros resulta el nucleosoma completo. Los
octmeros forman una unidad fija, es decir no se desplazan por la cadena. Esta
cadena de nucleosomas o fibra de 10 nm corresponde a la cromatina totalmente
desespiralizada, tal como se encuentra en el momento de actividad funcional

(replicacin o transcripcin), pero cuando se une a ella la H1, la cadena de
nucleosomas se pliega y los octmeros se acercan quedando enmascarada su
configuracin globular dando lugar a la fibra de 25 nm que constituye una unidad
de empaquetamiento de la cromatina.
En el plegamiento de la fibra, segn el modelo del solenoide de Finch y Klug, el
nucleofilamento solenoidal presenta un enrollamiento helicoidal en el que cada
vuelta tiene 6 a 7 nucleosomas. Cada H1 presenta una regin globular central y
dos extremos (carboxilo y amino). No se conoce el ensamblaje de las H1 a las
fibras de cromatina, la parte globular se une al octmero y los brazos conectan
con los octmeros contiguos. Cada H1 se adosa a la base de cada nucleosoma.
Esta unin del nucleosoma y la H1 se denomina Cromatosoma. La cabeza de
cada H1 se conecta con la cola de la siguiente H1.
Los nucleosomas no se colocan al azar a lo largo de una secuencia de ADN. Hay
una localizacin preferente de los nucleosomas a lo largo del fragmento de ADN,
la localizacin depende de la flexibilidad o capacidad de curvarse que ofrezca un
tramo determinado de ADN. La torcedura (bending) depende del tamao de la
molcula de ADN considerada y en ltima instancia de la secuencia de sus bases.
Algunas regiones del ADN eucaritico carecen de nucleosomas que corresponden
a las regiones reguladoras de cada gen.
- Eucromatina y Heterocromatina
La cromatina no se encuentra en forma de fibra de 10 nm sino en forma mas
condensada, consistente en un enrollamiento de la fibra 10 nm para dar la fibra de
25 nm o 30 nm) o fibra gruesa. Esta fibra es estable en el ncleo interfsico y la
forma mas extendida del ADN en situacin fisiolgica. La fibra de 30 nm contiene
6 a 7 nucleosomas por vuelta en el solenoide. La H1 se localiza en el interior de
esta fibra de 30 nm y su presencia es crtica para que se mantenga su estructura.
Los extremos de la H1 unen ADN y nucleosomas entre s. El factor de
empaquetamiento de la fibra de 30 nm es 40 es decir 1 m de fibra de 30 nm
equivale a 40 m de ADN extendido.
En el ncleo interfsico las fibras de 30 nm se encuentran formando lazos y
superenrollamientos alcanzando un factor de empaquetamiento de 1000 a 2000.
Esta forma de cromatina se llama Eucromatina y no puede ser observada con el
microscopio ptico. Zonas de cromatina mas empaquetadas y visibles son la
Heterocromatina, y el ADN est en ella 10 000 veces empaquetado. Parte de ella
contiene genes que no se expresan en la clula en ese momento, pero s en otras
clulas o en otro momento, por lo que se llama Heterocromatina Facultativa. Esta
se puede convertir en eucromatina cuando se activa su expresin. La
Heterocromatina Constitutiva contiene ADN que no se expresa nunca y que en su
mayor parte corresponde al ADN satlite. Durante la mitosis todo el ADN del
ncleo ya replicado se condensa en forma de heterocromatina y en la metafase
se pueden visualizar los cromosomas debido a su alto grado de
empaquetamiento.
Cada cromosoma metafsico contiene 2 molculas de ADN cada uno de de 30

nm que luego se superenrolla en forma de cromtidas. Las 2 cromtidas
hermanas se separan en un movimiento dirigido por microtbulos que conectan
con las cromtidas en los centrmeros (Heterocromatina constitutiva) que
contiene ADN satlite. El alto grado de empaquetamiento asegura la correcta
segregacin de la dotacin genmica entre las clula hijas.
-Cromosomas (Chrs). El nmero de cromosomas es muy variable depende de la
especie microbiana. El tamao tambin vara con una longitud de 4 a 10 m y
segn el momento de la mitosis en que se encuentren, son mas largos en la
profase y mas cortos en la anafase.
En el ncleo interfsico como en cromosomas interfsicos las fibras de 30 nm
estn formando lazos de 1 - 100 m que corresponden a 3 -300 kb de ADN con
un promedio de 99 kb. Un lazo de cromatina no supone una unidad funcional, es
decir que el tamao de los lazos y los genes no estn relacionados. El
cromosoma metafsico muestra un grado de empaquetamiento mayor que la
cromatina en interfase.
Dentro del cromosoma los lazos estn unidos en sus bases a una estructura
proteica o armazn metafsico (metaphasic scaffold) que contiene principalmente
dos tipos de protenas no histnicas, siendo una de ellas la Topoisomerasa II o
girasa (de 170 kDa) que determina los cambios que ocurren en la superhlice del
ADN durante la condensacin o empaquetamiento. Las protenas del armazn
interaccionan con el ADN y no con las histonas. En la interfase el ncleo contiene
una estructura fibrilar o matriz nuclear la que se une a la cromatina, sta ltima
posee lazos mudos que se unen en la base de la matriz nuclear.
Las secuencias ADN de los genes que se unen a la matriz nuclear llamadas MAR
(matriz attachment regions) o SAR (scaffold attachment regions) son secuencias
ricas en A + T (70 %) y estn separadas entre s por distancias variables de 5 a
100 kb. En la matriz pueden anclar las protenas que intervienen en la replicacin,
transcripcin y procesamiento de los genes eucariticos.
Los cromosomas estn integrados por componentes filamentosos o cromtidas
unidas por el Centrmero o constriccin primaria que contiene al cinetocoro donde
se conecta el huso mittico. Ambas cromtidas se separan en la anafase y cada
una de ellas se convierte en un nuevo cromosoma en las clulas hijas.
La presencia del centrmero divide a cada cromosoma metafsico en 2 brazos:
largo (p) y corto (q). Los extremos de los brazos se denominan telmeros,
denominndose a los cromosomas segn el tamao de sus brazos Metacntricos
con centrmero central, Submetacntricos con centrmero alejado del centro y,
Acrocntricos (Telocntrico) con centrmero con cerca de un extremo y el brazo
es a veces inapreciable. En algunos cromosomas existe una constriccin
secundaria (constriccin telomrica o organizador nucleolar) que no dan lugar a
brazos sino a satlites los cules forman parte de un brazo, esta constriccin
formar un nuclelo en torno a ella.
Cromtidas
Constriccin secundaria
paracentromrica
Brazo q
centrmero
cinetocoro
Heterocromatina
constitutiva
Cromonema
Brazo p
Microcvulas
bandas
Entramado
proteco
Constriccin secundaria
(organizador nucleolar)
telmero
Fig.4. Esquema de un cromosoma eucaritico

mostrando algunos de sus componentes
Los Genes
Un gen se puede definir como entidad que especifica la estructura de un
polipptido. Los genes son unidades que predisponen y motivan a originar o
producir diferentes rasgos o caractersticas. Se les denomina unidades o
potencialidades de herencia o transmisin. Desde el punto de vista molecular es
la secuencia de ADN que contiene informacin requerida para fabricar una ARN y
a travs de ste una protena. Este flujo de informacin se conoce como dogma
central de la biologa molecular.
Transcripcin
Replicacin
ADN
Traduccin
ARN
Protena
En los procariotas pueden existir unos 5 000 genes, en los eucariotas pueden ser
unos 100 000 genes, mas o menos el 10 % del ADN, el resto del ADN no tiene
significado. En los eucariotas los genes son discontinuos (genes partidos) con
secuencias no codificadoras insertadas entre las secuencias que en realidad
codifican para una protena. Durante la transcripcin tanto los intrones como
exones son copiados y las secuencias de intrones son luego cortadas y
eliminadas cuando el ARN mensajero es procesado en el citoplasma.
Los eucariotes tienen en realidad mucho mas ADN por genoma que el necesario
para codificar todo lo requerido para la funcin celular, el ADN eucaritico puede
dividirse en tres tipos: el ADN de una copia, que tiene secuencias codificadoras
para las principales protenas de la clula; el ADN moderadamente repetitivo, que
10
se encuentra en unas cuantas o relativamente grande nmero de copias y que

codifica para las principales macromolculas de la clula como las histonas,
inmunoglobulinas, ARN ribosmico, ARN de transferencia,. etc.; y el ADN
altamente repetitivo satlite que se encuentra en un gran nmero de copias, cuya
funcin an es desconocida.
La informacin gentica se encuentra en el material nuclear (procariotas) o ncleo
(eucariotas) pero la sntesis proteica se da en el citoplasma, es por ello es
necesario que la informacin sea transferida, esto es por medio del ARNm que
dirige la sntesis proteica. Algunos ARNm dan lugar a poliprotenas transitorias de
las que posteriormente surgen varias protenas cada una determinante de un
rasgo fsico diferente.
Superenrollamiento del ADN
Para que el ADN se empaquete dentro de una clula microbiana debe estar
superenrollado, que es un estado en el cual el ADN se repliega sobre s mismo
imprimiendo torsin a la molcula de ADN de modo que su enrollamiento es muy
apretado, esto es estable siempre que se mantenga la estructura circular del
ADN. El superenrollamiento puede ser positivo o negativo. El superenrollamiento
negativo se presenta cuando el ADN se enrolla en direccin contraria a la doble
hlice dextrgira. La enzima que induce al superenrollamiento es la
topoisomerasa II o girasa. La enzima capaz de eliminar el superenrollamiento del
ADN es la topoisomerasa I. Por medio de la accin de estas dos enzimas el ADN
puede enrollarse o relajarse para alcanzar dentro de los lmites de la clula o para
la etapa de replicacin respectivamente.
Replicacin del ADN
Mecanismo de Replicacin Procariota
Al ADN cromosomal tambin se le denomina unidad de replicacin o replicn, de
estructura circular, y es el portador de dos determinantes genticos especficos: el
autoduplicador o replicador que contiene ADN polimerasa que seala el punto de
inicio de la duplicacin y el iniciador que es un sistema encargado de informar al
autoduplicador para que de comienzo a la replicacin.
El ADN se replica (autoduplica) segn el mecanismo semiconservador. La
duplicacin del ADN por la polimerasa implica la apertura de la doble hlice por
ruptura de los puentes de hidrgeno y la separacin de las dos cadenas que
actan cada una de ellas como un molde sobre el que se van polimerizando
subunidades de nucletidos hasta dar lugar a una cadena complementaria. Esto
se produce mediante el giro del cromosoma sobre el punto de unin en el
mesosoma en el que se inserta. La formacin de puentes de hidrgeno
condicionan el orden de sucesin de las bases de la nueva cadena.
La replicacin del ADN lineal comienza en el extremo 5' y termina en el extremo
opuesto 3'. La replicacin de las molculas circulares termina en el punto de
donde se inici siempre en sentido 5' a 3'. La molcula de ADN que se est
11
copiando se denomina matriz pero la nueva molcula de ADN no est unida

covalentemente a la molcula ADN vieja, la nueva cadena a medida que crece
sirve de cebador o punto de origen sitio en el cual se fijan los nucletidos que van
a ir formando la nueva cadena. Debemos considerar que la replicacin del ADN
precede siempre del extremo con el fosfato 5 al extremo con el oxhidrilo en 3
unindose con el fosfato 5 del nucletido entrante al oxhidrilo 3 del nucletido
incorporado con anterioridad.
Fig. 5
Replicacin del ADN. a). El cromosoma se une al mesosoma de la

membrana, donde se halla el autoduplicador, las hebras se separan. b). El
extremo 5 de una de las hebras fragmentadas se fija en otra zona (otro
mesosoma) prxima al mesosoma. c). El ADN gira en sentido contrario a
las agujas del reloj sobre los puntos de unin, aparecen filamentos recin
sintetizados (puntos discontinuos). d). La replicacin se ha completado y
se unen los extremos libres de los nuevos cromosomas
En los procariotas la enzima que cataliza la adicin de nucletidos a la cadena en

crecimiento es la ADN Polimerasa III o ADNpol III (en E. coli existen tres
polimerasas: Pol l, Pol II y Pol III ), esta enzima no puede sintetizar ADN de
novo a partir de una mezcla de nucletidos, solo adiciona al ADN preexistente.
Para que se inicie la actividad el ADNpol III se necesita de la presencia de un
cebador que es un ARN. Al abrirse la doble hlice formando la horquilla de
replicacin una enzima polimerizante llamada Primasa participa junto con la ADN
helicasa en la sntesis del cebador dejando un tramo corto (506 nucletidos) de
ARN, estas dos enzimas constituyen el denominado Primosoma.
12
En el extremo en crecimiento del ARN-cebador hay un grupo oxhidrilo en 3 al

cual la ADNpol III adiciona el primer desoxirribonucletido y comienza a crecer la
molcula como ADN y ya no como ARN. Posteriormente se elimina el fragmento
de ARN base y se reemplaza por ADN por accin de la ADNpol I.
ADN (Cadena vieja)
3
PPP- 5
5
3
Base de ARN
ADN (Cadena nueva)
Fig. 6. Esquema del inicio de la sntesis de ADN con el ARN cebador
El lugar donde se inicia la sntesis de ADN es el origen de la replicacin que es

una secuencia reconocida por protenas de iniciacin y, ocurre en el interior de la
molcula y no en los extremos. Una vez abierta la doble hlice se inicia la
replicacin en las dos cadenas sencillas, a medida que se efecta la replicacin el
sitio de la replicacin, llamado horquilla de replicacin se mueve hacia el ADN. Al
producirse el desenrollamiento del ADN duplex circular prolongado como el que
tiene lugar durante la replicacin se origina un esfuerzo de torsin que provoca un
superenrollamiento subsiguiente, por lo que la Protena Destorcedora, tambin
denominada alacranasa (swivelase, en ingls), actua provocando el mellado
(ruptura) de una de las hebras del ADN superenrollado liberando asi la tensin
torsional, lo que permite un cierto desenrollamiento del polinucletido para
despus resoldar la mella inicialmente producida.
Fig. 6. La iniciacin de la sntesis ocurre en el interior del ADN a

parir del origen de la replicacin y en forma bidireccional.
13
El ADN se desenrolla por accin de la enzima helicasa dependiente de ATP. La

regin monocatenaria generada forma un complejo con una protena de unin de
una sola cadena la cual estabiliza al ADN de cadena sencilla evitando formacin
de enlaces de hidrgeno dentro de la cadena. La cadena de ADN que crece en
sentido 5 3 es la cadena conductora, siempre hay un OH-3 en la horquilla de
replicacin para recibir un nuevo nucletido. El crecimiento en sentido 3 5,
que corresponde a la cadena retardada es discontinuo porque no hay un nuevo
OH-3 en la horquilla de replicacin para recibir a un nuevo nucletido. El OH-3
de esta cadena esta en el extremo opuesto, lejos del punto de crecimiento, por
ello en la cadena retardada se debe aadir fragmentos de cebador ARN para
proporcionar OH-3 libres y entonces aadir desoxirribonucletidos hasta que la
ADN polimerasa alcance el ADN sintetizado previamente. La conexin o ligadura
de los pedazos de ADN tienen lugar entonces, el cebador se elimina y se llenan
los espacios vacos.
Fig 7. Horquilla de replicacin del ADN. Enzimas desestabilizadoras de la hlice

permiten la separacin de las cadenas. La cadena de arriba o cadena conductora
(comienza en 3 y termina en 5) es copiada de un modo continuo (en direccin 5 3 )
por la ADN polimerasa, la cadena retrasada (de abajo) que comienza en 5 y termina en
3, es copiada de un modo discontinuo en fragmentos pequeos en direccin 5 3
(fragmentos de Okasaki) que son unidos por la ADN ligasa. Para iniciar la replicacin de
cada fragmento se necesita un ARN cebador que es sintetizado por la ARN primasa
14
Hebra conductora
continua
ADN polimerasa
sintetizado sobre la
cadena conductora
3
5
Hebra sintetizada sobre

la cadena conductora
Fragmento de Okasaki
3
ARN
cebador
Fragmento de Okasaki 2
ADN polimerasa
sintetizado sobre la
cadena retrasada
Protenas
desestabilizadoras de
la hlice
ADN ligasa
uniendo dos
fragmentos de
Fig. 8. Horquilla de replicacin tal como debe ocurrir. La cadena retrasada sufre
un plegamiento de tal forma que las protenas que intervienen en la
replicacin formen un complejo nico que puede ser utilizado ala vez por
ambas cadenas.
La replicacin es bidireccional, en el ADN circular como en el de las bacterias, da

lugar a las estructuras theta , bajo estas condiciones se sintetizan molculas
lineales de ADN a partir de la forma circular fabricada primero formando una
estructura de replicacin llamada crculo rodante. Puede surgir una crculo
rodante porque una mella en una de las dos cadenas del crculo origina la
iniciacin de una cadena sencilla sobre solamente una de las dos cadenas del
crculo. El crculo rodante no es semiconservador puesto que una cadena recin
sintetizada sirve de matriz para otra cadena sintetizada de nuevo. La replicacin
en circulo rodante se observa en algunos bacterifagos y en bacterias durante el
proceso de conjugacin.
Hay por lo menos 7 tipos de protenas implicadas en la replicacin: la protena
iniciadora que reconoce y se une al origen, la Helicasa, las protenas de precebado, ADN polimerasas-primasas y las protenas auxiliares como la protena
SSB, ARNAsa H, ADN ligasa y topoisomerasa I y topoisomerasa II.
Terminada la duplicacin, los dos cromosomas se separan dividiendo el
mesosoma sobre el que se asientan. La transcripcin de la secuencia de bases
del ADN a una cadena complementaria origina el ARN mensajero. La informacin
dcl ARNm es despus traducida a la secuencia de aminocidos de la protena,
donde radica su especificidad.
15
Mecanismo de Replicacin Eucariota

La replicacin es tambin semiconservativa y bidireccional. Las horquillas
avanzan en ambos sentidos a partir del origen de replicacin. Las ADN
polimerasas eucariticas sintetizan ADN en direccin 5 3 . El extremo en
crecimiento es siempre OH-3. La replicacin del ADN eucaritico necesita
tambin primero de un ARN. La sntesis de una cadena es continua (cadena
adelantada) mientras que la otra (cadena retrazada) se sintetiza en forma de
fragmentos de Okasaki que luego son ligados por accin de la ADN ligasa. Estos
fragmentos tienen 100 a 200 nucletidos (nt). En los procariotas los fragmentos
de Okasaki estn constituidos por 1000 a 2000 nucletidos. Una vez que se inicia
la replicacin de un replicn (aquel tramo de ADN que se replica a partir de un
mismo origen de replicacin), sta contina hasta que se completa. Rara vez se
detiene un proceso de replicacin en marcha.
La replicacin del genoma se lleva a cabo por dos ADN polimerasas que trabajan
sincrnicamente en la horquilla de replicacin mientras que como hemos visto en
los procariotas solo participa una sola enzima. El genoma de los eucariotas est
compuesto de varios cromosomas, en stos existen muchos puntos de origen de
replicacin.
Etapas en el inicio de la replicacin en eucariotas
1.
2.
3.
4.
Unin de la protena iniciadora con su secuencia e reconocimiento.

Formacin del complejo helicasa-protenas de precebado.
Unin de las ADN polimerasas y primasa.
Unin de las protenas SSB (single-strand ADN binding) o de unin al ADN
de cadena nica, y comienzo de la sntesis de la cadena adelantada. La
cadena retrasada se inicia con un retraso equivalente al tamao de un
fragmento de Okasaki de 100 a 200 nucletidos
Despus de la replicacin y antes que ocurra la divisin celular existe un intervalo

de tiempo (fase G2 del ciclo celular) entre el fin de la replicacin (fase S del ciclo
celular) y el comienzo de la mitosis. La fase S no ocurre inmediatamente despus
de la mitosis sino que existe otro intervalo de tiempo (fase G1 ) antes de comenzar
la replicacin.
M (1-3 hs) G1 (6-12 hs) S (8-10 hs) G2 (4-6hs) M (1-3 hs)
REPLICACIN
------------INTERFASE-------------
tiempo horas cls. en cultivo
16
Orgenes de replicacin en eucariotas

Existen regiones llamadas ARS (autonomus replicating sequences) de 200 pb de
longitud. En las levaduras existen unos 400 ARS y de replicones. Las ARS tienen
una secuencia de 11 pb muy conservada que se presenta de 2 a 6 veces y en
distintas posiciones segn el ARS de que se trate. Estas mltiples copias podra
servir de sitio de unin de una protena iniciadora de la replicacin, an no ha sido
identificada. Adems de las ARS tienen un contenido rico en A + T (75% mucho
mayor que el del resto del genoma de Saccharomyces cerevisiae que tiene 60 %)
lo cual facilitara la separacin de cadenas para iniciar la replicacin. Se ha
aislado una protena de levadura, la OBF1, de 123 127 kDa, que se une
especficamente a las ARS y es necesaria para iniciar la replicacin, que podra
por tanto ser una protena iniciadora de la replicacin de levaduras.
En eucariotas superiores se ha propuesto a las secuencias Alu como candidatos a
orgenes de replicacin. Las bandas R de los cromosomas humanos donde se
localizan los Alus humanos se replican antes que el resto del Chr.
ADN polimerasas eucariotas.
Existen cinco ADN polimerasas la , , , y . En todas las ADN
polimerasas (tanto en eucariotas y procariotas) las actividades 53
exonuclesica y 3 5 de exonucleasa residen en la regin N-terminal y la
actividad polimerasa en la regin C-terminal.
- La ADN polimerasa es la mas pequea, con una Mr de 45 kDa, participa en
procesos de regeneracin del ADN de cromosomas nucleares.
- La ADN polimerasa , de 140 kDa, es la encargada de la replicacin del genoma
mitocondrial o de los cromosomas mitocondriales.
- La ADN polimerasa (tambin denominada 2 y ADNpol II en las levaduras),
de 290 kDa. Participa en la replicacin del ADN Cromosomal y tambin en los
procesos de reparacin del ADN daado por radiacin UV. Tiene actividad de
exonucleasa 3 5 pero no es estimulada por la PCNA (proliferating ell nuclear
antigen o antgeno nuclear de clulas en proliferacin) una protena de 37 kDa.
- La ADN polimerasa , es un complejo de aproximadamente 340 kDa, con cuatro
subunidades, cuando la subunidades de 70 kDa est presente no tiene actividad
de exonucleasa 3 5. Otras subunidades son dos polipptidos de 50 y 60 kDA
con actividad de primasa encargados de sintetizar ARN cebador. En la
Escherichia coli la primasa es independiente a la polimerasa. La ltima subunidad
de 160 kDa es la ADN polimerasa propiamente dicha. La ADN polimerasa
replica la cadena retardada o retrasada.
17
- La ADN polimerasa participa en la replicacin de cromosomas nucleares

actuando en las cadenas continuas o adelantadas, tiene actividad exonucleasa
3 5. Presenta dos subunidades una de 125 kDA y la otra de 48 kDa. Utiliza
moldes homopolimricos como poli (dA):poli (dT). Es mas activa en presencia de
la protena PCNA. Es resistente a butilfenil-dGTP y a butilanilin-dATP.
Las polimerasas y participan en la replicacin. En levaduras la ADN
polimerasa es la ADNpol I y la polimerasa equivale funcionalmente a la
ADNpol III. Las polimerasas y son inhibidas por la afidocolina que no inhibe a
las ADN polimerasas y
Se ha propuesto un modelo de replicacin del ADN eucaritico segn el cual el

complejo polimerasa - PCNA (muy procesivo) sintetizara la cadena continua o
adelantada y el complejo de la polimerasa - primasa (poco procesivo y capaz de
sintetizar el ARN cebador) sintetizara los fragmentos de Okasaki de la cadena
retardada o retrasada.
3
CADENA CONTINUA
PCNA
ADNpol
5
ADN
3
HELICASA
ADN pol
CADENA RETRASADA
(Fragmentos de Okasaki)
Fig.9
PRIMASA
Modelo de la replicacin del ADN eucaritico.
ADN polimerasas procariticas

En los microorganismos procariotas se encuentran tres polimerasas: ADN
polimerasa I, ADN polimerasa II y la ADN polimerasa III.
- La ADN polimerasa I (ADNpol I), constituida por una sola cadena de polipptido
con una Mr de 109 kDa, lleva un tomo de zinc por molcula y cataliza solo en la
direccin 53. Al igual que las dems polimerasas muestra actividad
exonucleasa, puede hidrolizar el ADN eliminando los nucletido terminales.
18
Las ADN polimerasas de procariotas tienen dos tipos de actividad exonucleasa:

pueden hidrolizar el ADN de una sola hebra a partir del extremo 3 de la cadena
en la direccin 3 5 (actividad exonucleasa 3 5) , o pueden hidrolizar el ADN
de doble hebra desde el extremo 5 (actividad exonucleasa 5 3). La ADNpol I
es responsable de la reparacin del ADN daado.
- La ADN polimerasa II (ADNpol II), con Mr de 120 kDa. Es una enzima muy
similar a la ADNpol I, pero no tiene actividad exonucleasa 5 3, pero si actividad
exonucleasa 3 5.
- La ADN polimerasa III (ADNpol III), tiene una Mr de mas de 180 kDa. Est
formada por siete unidades: , , , , , 1, . Las siete son esenciales para la
actividad mxima. La unidad tiene una Mr de 140 kDa, la aproximadamente
25 kDa y la con 10kDa. Posee actividad exonucleasa 5 3 y de 3 5. Se ha
determinado que la ADNpol III es la enzima principal de la replicacin en las
bacterias (E. coli) puesto que los mutantes con una ADNpol III termolbil no
pueden replicarse a 42C.
Aunque no son procariotas, sino microorganismos acelulares o subcelulares, pero
dada la importante enzima que poseen, mencionaremos a los retrovirus (grupo
virae) que contienen ARN en vez de ADN como material gentico, y tienen una
ADN polimerasa dependiente del ARN (una transcriptasa inversa). Esta enzima
utiliza ARN como molde para obtener ADN complementario. La transcripcin
inversa del virus de la mieloblastosis avcola (AMV) tiene una Mr de 160 kDa y
contiene dos tomos de zinc por molcula, presentando dos subunidades: la
con 65kDa y la de 95 kDa. No presenta actividad exonucleasa.
Enzimas que afectan al ADN
Se han mencionado en apartados anteriores varias protenas y enzimas que se
combinan o actan sobre el ADN durante la replicacin. A continuacin
detallaremos algunas de ellas.
-Protena N.- Son protenas de reconocimiento, seleccionan las zonas (origen)
sobre el ADN permitiendo que la primasa realice all su funcin.
-Primasa.- Participa en la sntesis de los ARN cebadores. Pueden iniciar el
alargamiento de la cadena de novo. Reconocen secuencias especficas en
cadenas nicas de ADN. Por si sola es inactiva pero forma complejos con otras
enzimas para constituir el primosoma. El primosoma copia al ADN en secciones
cortas de 5 a 10 bases especficas.
-Las Helicasas se requieren para ayudar a desenrollar al ADN progenitor ya que
las dos hebras no se separan espontneamente. Las helicasas requieren de ATP
como cofactor. Utilizan la energa libre de la hidrlisis de ATP para moverse a lo
largo de la cadena de ADN y aumentar la velocidad de separacin de la hebra.
Intervienen dos helicasas:
19
1. Protena rep.- Una helicasa que desenrolla la cadena continua del ADN.
2. Helicasa.- Se requiere para ayudar a desenrollar la cadena retrazada o
rezagada del ADN. Forma un complejo con la primasa para producir el precursor
de ARN.
-Protena de unin de una sola hebra o Protena SSB, aseguran que las
hebras nicas de ADN generadas por las helicasas permanezcan separadas. En
presencia de protena SSB, la cadena de ADN est en posicin rgida, extendida,
ideal para el copiado. Estabiliza el ADN de una sola cadena.
-ADN polimerasa I.- Une nucletidos a la molcula de ADN en crecimiento.
Rellena vacos en el ADN, participa en la reparacin del ADN. Se ha tratado en
apartado anterior.
-ADN polimerasa III.- Sintetiza ADN. Se ha mencionado con anterioridad sobre
estas enzimas.
-ADN topoisomerasa I.- Corta una cadena del ADN, cambiando al ADN
superenrollado a un estado mas relajado. La topoisomerasa I al unirse u corta un
a hebra del ADN permite que la hlice de ADN oscile y disipe la tensin causada
por el enrollamiento. Un residuo tirosina de la topoisomerasa se enlaza con el
fosfato libre en el ADN y el complejo gira, entonces la enzima se disocia del
complejo y se libera del ADN. Las topoisomerasas I pueden intervenir en el
movimiento de la horquilla de replicacin en las bacterias y tambin se encuentran
en las clulas animales.
-ADN topoisomerasa II.- tambin llamada girasa.- Corta ambas cadenas del
ADN, produce superhlices negativas al destorcer el ADN. Las topoisomerasas
tipo II eliminan el ADN concatenado (dos hebras entrelazadas de ADN) generado
cuando se replica ADN circular. En la bacteria E. coli la topoisomerasa II presenta
dos subunidades, una de ellas se une a los extremos rotos del ADN y la otra es
una ATPasa. La utilizacin de ATP proporciona la suficiente energa libre para
desenrollar el ADN:
-ADN ligasas.- Catalizan la formacin de enlaces fosfodister entre los
polinucletidos preformados. Las ADN ligasas intervienen en la sntesis de ADN
discontinuo para unir los extremos de los polinucletidos (fragmentos de Okasaki)
preformados, despus de la sustitucin del precursor de ADN. Tambin
intervienen en la reparacin de ADN daado. El mecanismo de accin de las
enzimas difiere del de la ADN polimerasa en que aqu participa el enlace
+
pirofosfato del NAD . Existe un solo tipo de ADN ligasa en los procariotas, pero
en los eucariotas se encuentran dos enzimas, ambas funcionan en el ncleo.
-Endonucleasa de restriccin.- Enzima que corta el ADN en secuencias de
bases especficas. Destruye al ADN extrao.
-ADN metilasa.- Coloca grupos metilos en las bases del ADN inhibiendo as la
accin de las endonucleasas de restriccin. Modifica al ADN circular para que no
sea afectado por su propia endonucleasa de restriccin.
20
Correccin de pruebas en la sntesis del ADN

La ADN polimerasa copia al ADN con gran exactitud, pudindose insertar una
8
12
base incorrecta slo cada 10 a 10 bases. Si no existiese esa precisin se
producira una mutacin que afectara al microorganismo. Todas las ADN
polimerasas de los procariotas tiene actividad exonucleasa y actan
preferentemente sobre bases con pares incorrectos. Cuando una base incorrecta
es introducida en la nueva cadena de ADN la sntesis de sta es bloqueada hasta
que se elimina la base. Esta actividad se conoce con el nombre de correccin de
pruebas (proofreading).
En los eucariotas la actividad exonucleasa solo la presentan las ADN polimerasas
y , pero la agregacin de bases equivocadas no es mayor que en los
procariotas. El ADN mitocondrial tiene una alta velocidad de mutacin y se
conoce que la ADN polimerasa mitocondrial tambin carece de actividad
exonucleasa.
Reparacin del ADN
El ADN puede daarse ya sea por efecto de la radiacin ultravioleta que puede
hacer que las bases de pirimidina adyacentes formen dmeros. Las timinas
adyacentes se enlazan a travs de los carbones 5 y 6. La enzima fotoliasa utiliza
la luz para catalizar una segunda reaccin fotoqumica que regenera las
pirimidinas individuales. La irradiacin con rayos X o con partculas puede
causar rupturas en el ADN de una sola cadena o en el de dos hebras. La ruptura
en una hebra se reparan por degradacin de una seccin del ADN mediante la
ADN polimerasa. Para unir las hebras despus de la accin de la ADN
polimerasa I (ADNpol I) se requiere la ADN ligasa. La ruptura en las dos hebras
del ADN es irreparable.
Muchos agentes mutgenos son de muy diferentes estructuras qumicas. Una
solo base alterada puede la iniciadora de la produccin de una mutacin. Las
nitrosaminas son capaces de generar electrfilos que se adicionan como grupos
alquilos a las bases del ADN, la guanina es la mas susceptible a la alquilacin. El
dao puede mitigarse mediante la enzima metilguanina metiltransferasa que
transfiere los grupos metilo desde la guanina hasta un aminocido en la enzima.
Si la clula se expone a concentraciones por debajo de la dosis letal del producto
qumico puede producirse un fenmeno de adaptacin al formarse altas
concentraciones celulares de la enzima en la clula.
Cualquier distorsin inducida por lesin del ADN en E.coli se repara por medio de
una endonucleasa que elimina una seccin de 12 nucletidos del ADN en la
regin del dao. Este hueco se llena con la ADNpol I y los extremos del ADN se
unen por actividad de la ligasa. Una sola base daada puede eliminarse por
medio de las glicosilasas. El hueco resultante se llama sitio AP (apurnico o
apirimidinico). El sitio AP se reconoce por medio de una AP endonucleasa que
corta una cadena del ADN y deja un cebador con un grupo OH-3 libre. La ADN
polimerasa I (ADNpol I) y la ligasa llenan entonces el hueco.
21
Tambin pueden producirse mutaciones por desaminacin espontnea de las

bases de purina o pirimidina. La adenina puede, espontneamente o despus de
reaccionar con un carcingeno, desaminarse para producir hipoxantina, que se
aparea con la citosina en vez de hacerlo con la timina. De modo semejante, la
guanina puede convertirse en xantina que se aparea con la citosina. Estos tipos
de errores pueden que no sean reparables y llevar a cambios permanentes en el
ADN. Sin embargo, la desaminacin de la citosina podra formar uracilo. ste se
repara con las acciones concertadas de varias enzimas. La uracil ADN glicosidasa
elimina el uracilo, y entonces una endonucleasa rompe la cadena adyacente al
sitio defectuoso. La ADNpol I inserta una timina sustituta y la ADN ligasa rene la
cadena.
La uracil ADN glicosidasa afortunadamente no elimina los residuos timina, ya que
su grupo metilo acta como una caracterstica molecular que permite que la
enzima distinga entre la timina y la citosina desaminada. Esto explica el por qu
en el ADN se utiliza la timina a pesar de requerirse ms energa metablica para
su sntesis que para la del uracilo.
Estructura y funcin del ARN
El cido ribonucleico (ARN) difiere del ADN en que tiene ribosa como carbohidrato
y en lugar de Timina (T) otra base pirimidnica. El Uracilo (U) que se enlaza con la
Citosina (C). Adems, con excepcin de algunos virus, el ARN es de una cadena.
Tiene muchas funciones importantes para la expresin gentica celular y acta a
dos niveles, el gentico llevando la informacin del ADN (en el ARNm); y el
funcional actuando como macromolcula con funcional estructural en los
ribosomas (ARNr) o como vehculo para transferir aminocidos en a biosntesis
proteica (ARNt).
Se han identificado varios tipos de ARN:
-
ARN mensajero (ARNm), ARN que especfica la estructura primaria de las

protenas.
ARN de transferencia (ARNt), traslada los residuos de aminocidos a su
posicin dentro del pptido segn la secuencia ordenada por el ARNm.
ARN ribosmico (ARNr), componente de los ribosomas, es el mas
abundante, es el 75 % del total de ARN celular. Permite la traduccin de la
informacin gentica codificada en el ARNm.
ARN heterogneo nuclear (ARNhn), en los eucariotas, son molculas de
gran tamao precursoras de los ARN citoplasmticos que contienen
secuencias internas no presentes en el ARNm citoplasmtico.
ARN pequeo nuclear (ARNsn RNPsn), presentes en eucariotas.
Intervienen en el procesamiento del ARN transcripto primario.
ARN pequeo citoplasmtico (ARNsc RNPsc), en los eucariotas. Actan
como partculas de reconocimiento de seales (PRS).
22
ARN ribosmico (ARNr)

Es el componente de los ribosomas e interviene junto con el ARNt en traducir la
informacin codificada del ARNm. Los ribosomas son los constituyentes mas
abundantes de las clulas que intervienen activamente en la sntesis de las
protenas. El ARNr constituye el 75 % del ARN total. La demanda de ARNr es
considerable en clulas en crecimiento, por ejemplo en los cultivos de E. coli que
se dividen rpidamente constituyen hasta la tercera parte de la masa celular total;
es por ello que los genes del ARNr se encuentran repetidos en el genoma. Los
ribosomas de bacteria y cloroplastos (de eucariotas) tienen un tamao de 70S,
mientras que los de los m.o. eucariotas tienen cerca de 80S. Es preciso sealar
que en las mitocondras (en eucariotas) se encuentran ribosomas de solo 50S.
Existen dos subunidades disociables por ribosoma, las que son distintas tanto en
estructura como en funcin. Asi tenemos que el ribosoma de 80S se disocia en
60S y 40S. La subunidad de 60S tiene tres tipos de ARNr : ARNr 28S ( 5000
bases), ARNr 5.8S (160 bases) y ARNr 5S (120 bases) y aproximadamente 45
protenas ribosmicas (protenas r), en tanto que la subunidad de 40S contiene
una especie de ARNr el ARNr 18S ( 2000 bases) y 33 protenas r. Las
subunidades del ribosoma de 70S contienen ARNr de 50S y 30S, la subunidad
mayor lleva el ARNr 23S ( 3000 bases) y un ARNr 5S ( 120 bases) y la
subunidad menor contiene al ARNr 16S ( 1500 bases) y unas 21 protenas r.
El ribosoma de E. coli (de 70S) ha sido el mas estudiado y se conocen las
secuencias de nucletidos de sus tres ARNr y de sus 54 protenas. Las protenas
de la subunidad menor (30S) se denominan S1 a S21 y las de la subunidad 50S
de L1 a L34. La mayora de las protenas r de E.coli son relativamente pequeas,
con una Mr promedio de 17000 y ricas en aminocidos bsicos. Todas las
protenas tienen diferentes secuencias a excepcin de L7, L12 y L8. Las protenas
L7 y L12 tienen secuencias idnticas, pero L7 es una forma aminoacetilada de
L12, la acetilacin es importante para que se manifiesta la actividad GTPasa en el
complejo en la realizacin de la traduccin. La L8 es un complejo conformado por
L10 unido a L7 y L12.
Uno de los mtodos utilizados para la determinacin de la topologa del ARNr de
E.coli ha sido la utilizacin de imidosteres bifuncionales que enlazan las
protenas ribosmicas vecinas cuyas cadenas laterales de lisina estn libres.
Despus del entrecruzamiento, la protena r se extrae y se fracciona por
electroforesis en gel de poliacrilamida, lo que permite detectar las protenas
entrelazadas. Otra tcnica es mediante la microscopa inmunoelectrnica,
utilizando anticuerpos monoespecficos dirigidos contra protenas ribosmicas
individuales, luego se observan por microscopa electrnica y se determina por
mapeo la posicin particular en se unen los anticuerpos.
Entre las funciones del ribosoma se encuentra la actividad peptidil transferasa, la
unin dirigida por codones de los ARNt aminoacilados, la unin del ARNm, la
actividad de los factores de iniciacin, de alargamiento y de terminacin, y la
actividad GTPasa, asociada con varios de estos factores.
(a)
23
(b)
Fig.10. (a) Topologa del ribosoma de E.coli. (b) Microfotografa electrnica de ribosomas
libres.Tomado de Smith y Wood.Molecular Biology and Biotechnology, University of Leeds,
England.
Con las nuevas tcnicas de la Ingeniera Gentica ha sido posible la clonacin y

secuenciacin del ARNr de varios organismos, aunque el tamao de los ARNr de
estas fuentes difiere considerablemente, sin embargo al confeccionarse mapas de
sus estructuras secundarias muestran similitud en la distribucin de sus tallos en
doble hlice y sus bucles de hebra sencilla. Una estructura secundaria es
importante para el ensamblaje del ribosoma y la mayora de las protenas de E.
coli que se enlazan directamente al ARNr lo hacen en las regiones de las dobles
hlices y no se enlazan con el ARNr desnaturalizado.
Una caractersticas de la estructura primaria del ARNr es la presencia de
nucletidos que se han modificado por metilacin, que se produce posttranscripcionalmente y lo realizan las ARN metilasas que utilizan Sadenosilmetionina (SAM) como donador del metilo. En los procariotes predominan
las bases metiladas (ejm.. 5-metilcitosina), mientras que los ARNr citoplasmticos
de eucariotas muestran metilacin predominante del 2-OH de los residuos de
ribosa (ejm.:2-O-metiladenosina). Las posiciones de los residuos metilados en las
secuencias de ARNr se conservan considerablemente en las diferentes especies
y parece ser que la metilacin tiene una funcin en el procesamiento del transcrito
primario de ARNr.
En todos los organismos, los ARNr de las dos subunidades se derivan por
procesamiento y modificacin de un gran precursor comn de ARN: el pre-ARNr.
El procesamiento del pre-ARNr difiere en detalles entre los microorganismo
procariotas y eucariotas. En los procariotas la secuencia de ARNr 5S es parte de
la misma unidad de transcripcin (opern) que los ARNr 16S y 23S. Adems, los
genes de ARNr procaritico contienen dos o mas secuencias de ARNt. Las
primeras escisiones del pre-ARNr estn catalizadas por la ARNasa III, que es
especfica para el ARN de doble hebra.
Fig.11.
24
Estructura secundaria de la regin 3

del
ARNr 16S de E. coli. Los ciclos
de una sola hebra estn conectados
por fragmentos rectos, denominados
tallos, en doble hlice.
En los eucariotas, el procesamiento se produce en el nuclelo. El pre-ARNr (de

45S que contiene 12000 nucletidos) es el transcrito primario de los genes
ribosmicos que se encuentran aglomerados en la regin del organizador
nucleolar del cromosoma. El pre-ARNr 45S se modifica por la adicin de 110
grupos metilos en residuos especficos de los nucletidos. Las protenas
ribosmicas provienen del citoplasma y se asocian al pre-ARNr a medida que este
se sintetiza. La realizacin de una serie de reacciones endonucleolticos y
exonuleolticos aseguran la gnesis de los precursores intermediarios 32S y 20S
que posteriormente se rompen en 28S y ARNr 5.8 S y ARNr 18S. El ARNr 5S se
deriva de una unidad de transcripcin separada localizada en un cromosoma
diferente, tambin est metilado y es el nico ARN en eucariotas que se sintetiza
a su tamao maduro.
Los tamaos de los transcritos primarios y de los precursores pueden ser
diferentes entre levaduras, protozoarios y otros eucariotas, el procesamiento
parece ser similar. En el protozoarios Tetrahymena thermophila, el procesamiento
tiene una va muy distinta. El transcrito primario de los genes de ARNr es un preARN 35S, con una distribucin 526S18S 3 de los ARNr conservados, siendo
la caracterstica peculiar que la secuencia del ARNr 26S contiene una secuencia
intercalada no conservada o intrn, que es un carcter frecuente en el ARNhn, y
la escisin del intrn de los exones de ARNr 26S que se conservan y que lo
flanquean se realiza por transesterificacin sin que halla requerimiento de
energa metablica. En los hongos Neurospora y Saccharomyces, se ha
detectado que sus pre-ARNr se procesan por un mecanismo autocataltico similar
de eliminacin de intrones y escisin de ARN.
25
Fig.12. Procesamientom del pre-ARNr en los eucariotas.

Biosntesis de las subunidades ribosmicas.
ARN de Transferencia (ARNt)

Pequeas molculas de ARN que funcionan como adaptadores que reaccionan
con los aminocidos orientndolos en el ARNm para ser polimerizados por el
ribosoma y formar protenas. Las molculas de ARN de transferencia se clasifican
segn los aminocidos que se les ha activado, asi por ejemplo el ARNt con
Leu
leucina se denota ARNt , y se llama leucil-ARNt.
Hoy da se conocen las secuencia de varios cientos de ARNt. La estructura
secundaria de ARNt mantenida por uniones de hidrgeno intramoleculares puede
acomodarse en una estructura de hoja de trbol. Las nicas excepciones que se
conocen son algunos ARNt mitocondriales animales que carecen del bucle de
dihidrouracilo.
Los ARNt tienen varias caractersticas en comn. Todas son cadenas nicas que
contienen entre 73 y 93 ribonucletidos con una elevada proporcin de bases
poco comunes, y todas son capaces de plegarse en virtud de las uniones
hidrgeno intramoleculares para producir dominios. Estas bases difieren de las
conocidas comnmente en varias formas, surgen por modificacin posttranscripcional de las bases nitrogenadas comunes. Muchas de estas bases
modificadas no varan e intervienen en mantener la estructura terciaria.
26
Tabla 1. Nuclesidos modificados encontrados en los ARN de transferencia

SIMBOLO
DENOMINACION
SIMBOLO
DENOMINACION
Inosina
s4U
m1I
1- metil inosina
s2m5U
2-tio-5-metil uridina
m1A
1- metil adenosina
uridina acido 5-oxiacetico
m2A
2 -metil adenosina
s2am5U
2-tio-5-acido acetico ester uridina
m6A
N6
- metil adenosina
s2cm5U
2-tio-5-carboximetil uridina
i6A
N6
-isopentenil adenosina
cmm5U
5-carboximetil uridina metil ester
ms2i6a
2 -metiltio -N6 -isopentenil adenosina
cm5U
5-carboximetil uridina
t6A
N6 -(N-teonilcarbonil) adenosina
Um
2'-o-metil uridina
m1G
1-metil guanosina
2'-o-metil pseudouridina
mam5s2U
5-metilaminometil-2-tiouridina
guanosina
4-tiouridina
m2G
N2-metil
3-(3-amino-3-carboxipropil)uridina
m2G2
N2-dimetilguanosina
s2m5C
2-tio-5-metil citidina
m7G
N7-metil guanosina
s2C
2-tiocitidina
Gm
2'-o-metil guanosina
Cm
2'-O-metil citidina
(ribo) timidina
ac4C
N4-acetil citidina
pseudouridina (5-ribofuranosil uracilo) m3C
N3-metil citidina
D o hU
5,6-dihidrouridina
5-metil citidina
m5C
Aunque la estructura secundaria es monocatenaria existen zonas bicatenarias

debido a los pliegues de la molcula sobre si misma, aproximadamente la mitad
de los nucletidos se aparean entre si con bases complementarias formando los
denominados tallos (Tallo D, Tallo T, Tallo AC, Tallo AA) regiones de doble
hlice de los que salen los denominados bucles, brazos o asas con bases sin
aparear.
Los brazos, asas o bucles se denominan de acuerdo a las bases que contienen o
a la funcin que realizan, asi tenemos:
- El Asa TC (de la secuencia timidina-pseudouridina-citosina) o Brazo T
que interacta con el ribosoma, en el extremo del Tallo T.
- El Asa o Brazo AC (del anticodn) que interacta con un codn del ARNm,
en el extremo del Tallo AC.
- El Asa DHU2 o Brazo D (de dihidrouridina) puede participar en la unin con
la enzima,en el extremeo del Tallo D.
- Tambin se presenta una pequea asa el Bucle o Brazo V (con pirimidina
generalmente dihidrouridina).
En el Tallo AA (del aceptor del aminocido) se encuentra el extremo 3 donde
estn presentes bases sin aparear y la secuencia de las tres ltimas es siempre
CCA-OH-3. El aminocido se esterifica en el OH-3 de la adenosina terminal.
Los resultados del anlisis con difraccin con rayos X de cristales (cristalografa
de RX) de ARNt muestran que las molculas de ARNt tiene una forma en L. Los
brazos o bucles TC y DHU2 se aproximan al vrtice de la L y los tallos AA y del
AC se proyectan hacia fuera.
27
Fig.13. Estructura de hoja de trbol del ARNt-Ala de

un a levadura. Se muestran nucletidos pocos
comunes, los tallos y bucles.
Fig.14. Estructura en Forma L del ARNt
Las enzimas que permiten la activacin del aminocido son especficas que
aseguran que un ARNt determinado reciba sus aminocidos correctos, estas
enzimas se han denominado enzimas activadoras de aminocidos o
aminoacil-ARNt sintetasas, reconocen tanto al aminocido como al ARNt
especfico. Como en la clula existen mas de una especie de ARNt para la
mayora de los aminocidos a stos se les conoce como ARNt isoaceptores.
Las reacciones catalizadas por las aminoacil-ARNt sintetasas son esencialmente
las mismas, pero existen diferencias casi imperceptibles segn la lnea de
especializacin y adaptabilidad de sus especificidades. Estas enzimas permiten
una reaccin en dos pasos en la unin de aminocidos y ARNt. El grupo
carboxilo del aminocido es activado primero por la formacin del
28
aminoaciladenilato y luego el aminocido es transferido al ARNt para formar una

unin ster con uno de los tres grupos OH libre del nucletido de adenina 3
terminal (del denominado tallo AA). La reaccin es la siguiente:
Enz + ATP + aminocido Enz-aminoacil-AMP + PPi
Enz-aminoacil-AMP + ARNt aminoacil-ARNt + AMP + Enz
Muchas aminoacil-ARNt sintetasas promueven la activacin de aminocidos en
ausencia de ARNt, otras deben unirse a su ARNt anlogo para llevar a cabo esta
reaccin, como en el caso de la glutamil-ARNt sintetasa. Es necesario mencionar
que las uniones peptdicas entre el aminocido y el ARNt puede formarse en el 3OH del ARNt o en el 2-OH. Algunas aminoacil-ARNt sintetasas esterifican solo el
3-OH, otras solo el 2-OH y otras el 3-OH o el 2-OH. Algunas a veces ocurren
errores, a pesar de la alta especificidad, en la transferencia de aminocidos, pero
la actividad de deacilasa de las aminoacil-ARNt sintetasas que hidroliza
molculas de ARNt mal cargadas, ayuda a impedir la incorporacin equivocada
de aminocidos por ests uniones erradas. Esta reaccin no es una reversin de
las reacciones de sintetasa porque ocurre en ausencia de AMP y de pirofosfato
inorgnico (PPi). La estructura de las aminoacil-ARNt sintetasas es ampliamente
variable en la Tabla 2 se anotan algunos ejemplos de la variacin estructural de
las aminoacil-ARNt sintetasas de E. coli.
Tabla 2. Algunas aminoacil-ARNt sintetasas de E.coli
Subestructura
alfa
alfa2
alfa4
alfabeta
alfa2beta2
Aminoacil-ARNt
Sintetasa
Glutaminil
Isoleucil
Histinidil
Triptofanil
Alanil
Glutamil
Fenilalanil
Peso molecular de las cadenas

polipeptdicas constituyentes
69,000
112,000
84,000
37,000
95,000
(56,000)
(39,000)
(46,000)
(94,000)
Existen unos 60 ARNt diferentes en las bacterias, mientras que en los organismos
superiores como mamferos hay entre 100 a 110 ARNt diferentes. Tanto en
procariotas como en los eucariotas los ARNt derivan de molculas precursoras
mas largas que sufren un fenmeno de procesamiento. Por ejm., en la E.coli los
genes de ARNt se encuentran con frecuencia en operones mixtos que codifican
varios ARNt (hasta 7 ARNt), protenas y ARNr. As tenemos que el opern tyrU
codifica cuatro ARNt y el ARNm para el factor Tu en la sntesis proteica. La
primera escisin endonucletida es realizada por la ARNasa P que da lugar a los
extremos 5 de las molculas de ARNt. La ARNasa P es una enzima formada por
ARN y una protena con una Mr de 20000. En condiciones normales fisiolgicas
ambos componentes son necesarios para que muestre actividad, pero cuando
2+
hay elevada concentracin de Mg , el componente ARN por s solo tiene
actividad cataltica. Despus de esto una serie de fenmenos nucleolticos y
modificaciones en las bases generaran el ARNt maduro.
29
En los eucariotas muchos genes se encuentran aglomerados en el genoma y sus

transcritos pre-ARNt, pueden contener una o mas molculas de ARNt. En
levaduras los extremos 5 son originados por una enzima similar a la ARNasa P,
pero muchos pre-ARNt contienen intrones de 10 a 30 bases los cules son
eliminados y las dos mitades de ARNt son ligadas posteriormente. Asimismo se
elimina un dinucletido UU-OH en el extremo 3 del precursor y el triplete CCA se
adiciona por accin de una nucleotidil transferasa de ARNt.
La funcin primordial del ARNt es su actuacin en la sntesis de las protenas
adems interacta con una gran variedad de otras molculas llevando a cabo
reacciones tales como aminoacilacin, formilacin del ARNt iniciador (en
procariotas), unin de factores de alargamiento, unin de ribosomas,
reconocimiento codn-anticodn.
Los ARNsn y ARNsc
Los ARN pequeo nuclear (ARNsn) ribonucleoprotena nuclear pequea
(RNPsn = ribonucleoprotein small nuclear), presentes en eucariotas. Confinados
en los ncleos de los m.o. eucariotas. Molculas ricas en Uridinas. Sintetizados
por la ARNpol II. Hay varios denotadas por la letra U : U1, U2, U4, U5, U6; U11;
U7; U3, U8, U13. Tiene roles salientes e intervienen en el procesamiento del ARN
transcripto primario. El U1 y U2 tienen secuencias que son complementarias con
las secuencias consenso a la izquierda y a la derecha de las uniones que se
cortan en el ARN (precursor del ARNm) y se piensa intervienen en el corte. U3 se
encuentra en el nuclelo y puede participar en el procesamiento del pre-ARN
ribosmico (pre-ARNr). El U11 en la poliadenilacin del 3-OH del ARNm. El
U3,U8 y U13 en el procesamiento del ARNr45S. Actan como Ribozimas.
Los ARN pequeo citoplasmtico (ARNsc) ribonucleoprotenas pequeas
citoplasmticas (RNPsc = ribonuceloprotein small cytoplasmatic), son molculas
pequeas de ARN del citosol de los eucariotas, distintas de los ARN de
transferencia. Se supone que son codificados por ADN repetitivo de la familia de
los Alu. Actan como partculas de reconocimiento de seales (PRS). La PRS,
ARNsc 7S, interacta especficamente con las secuencias de seales de
protenas nacientes de secrecin y de protenas integrales de membrana, y
detiene la traduccin hasta que el ribosoma hace contacto con la membrana del
retculo endoplasmtico. La PRS es cortada por una nucleasa microccica (de
Micrococcus) len dos fragmentos, el mayor de los cules todava puede unirse al
complejo protena naciente/ribosoma, pero ya no detiene la traduccin.
ARN mensajero (ARNm) y El Cdigo Gentico
El ARNm es un ARN complementario, copia de una sola hebra de la secuencia
del ADN que constituye un gen. El proceso por el cual se copia el ARN se conoce
como transcripcin. Es el que lleva la informacin gentica para la sntesis de
protenas especficas. El ARNm acta en el ordenamiento de aminocidos para
ser polimerizados en protenas, segn la secuencia de sus nucletidos. Es decir
que el ARNm traduce de un lenguaje de nucletidos a otro de aminocidos.
30
La informacin del ADN est recopilada en el ARNm, en donde cada tres bases
forman un Codn o Triplete que es definido para un aminocido en particular, la
secuencia de tripletes sobre el ARNm determina un polipptido especfico.
La informacin en el ARNm est en clave o codificada El orden de agrupacin de
las bases del ARNm determinar cada uno de los 20 aminocidos esenciales. Las
cuatro bases (Adenina, Citosina, Guanina, Uracilo) se ensamblan de 3 en 3 con lo
3
que se obtiene 64 combinaciones (4 ), de las cules 61 codifican cada una para
un aminocido, esto se denomina "clave de tripletes", cada triplete se denomina
codn o clave para un aminocido. El llamado anticodn es el triplete de bases
del ARNt complementario al del codn. El cdigo gentico no es ambiguo ya que
un codn designa solamente a un aminocido, pero se dice que es degenerado
porque un aminocido puede ser codificado por dos o mas tripletes de bases
diferentes, teniendo desigual solo la tercera base, mientras que otros aminocidos
son codificados por un solo triplete de bases (metionina y triptfano). El patrn de
degeneracin no es uniforme, as tenemos por ejemplo que para tirosina y lisina
existen dos codones, mientras que para la arginina y serina hay seis codones. Las
otras tres combinaciones o codones restantes no codifican aminocido alguno y
funcionan como "signos" para la terminacin de la biosntesis de una cadena de
los polipptido especfica por parte de un cistrn o gen. Estos tres tripletes se
denominan codones sin sentido o de terminacin y sealan el termino de la
codificacin : UAA o triplete ocre , UAG o triplete mbar, y UGA o triplete palo.
La clave o cdigo gentico es universal, el mismo cdigo funciona en el citosol de
todos los procariotas y eucariotas. La nica variacin del estndar conocida se
produce en las mitocondrias que contienen su propio sistema gentico, habiendo
incluso diferencias en las asignaciones de codones entre las mitocondrias de
hongos y animales.
Tabla 3. Secuencias de codones de ARNm que constituyen el Cdigo Gentico.
U
U
UUU
Phe
UUC
Phe
UUA
Leu
AAG
Leu
CUU
Leu
CUC
Leu
CUA
Leu
CUG
Leu
PAUU
Ile
AUC
Ile
AUA
Ile
AUG Met
GUU Val
GUC Val
GUA Val
GUG Val
C
UCU
UCC
UCA
UCG
CCU
CCC
CCA
CCG
ACU
ACC
ACA
ACG
GCU
GCC
GCA
GCU
Ser
Ser
Ser
Ser
Pro
Pro
Pro
Pro
Thr
Thr
Thr
Thr
Ala
Ala
Ala
Ala
UAU Tyr
UAC Tyr
UAA Ocre
UAG..Ambar
CAU His
CAC His
CAA Gln
CAG Gln
AAU Asn
AAC Asn
AAA Lys
AAG Lys
GAU Asp
GAC Asp
GAA Glu
GAG Glu
UGA Cys
UGC Cys
UGA Opalo
UGG Trp
CGU Arg
CGC Arg
CGA Arg
CGG Arg
AGU Ser
AGC Ser
AGA Arg
AGG Arg
GGU Gly
GGC Gly
GGA Gly
GGG Gly
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
El mensaje del ARNm es una secuencia lineal de bases. Parte de la secuencia

est formada por la regin de codificacin del ARNm que contienen los tripletes
que corresponden a la secuencia de aminocidos de la protena. Esta secuencia
se lee en direccin 5 3. El principio de la secuencia es el codn iniciador
(casi siempre AUG), y el final de la secuencia, como ya se menciono, es un
31
codn de terminacin (UAA, UAG o UGA). La molcula del ARNm termina

(extremo 3-OH) en una secuencia no codificadora, asimismo existe una
secuencia sin codificacin en el extremo 5 que con frecuencia se conoce como
secuencia gua o secuencias de Shine-Dalgarno, y esa secuencia es la
responsable de la unin de ribosomas con ARNm. Las secuencias guas son
largas en los eucariotas y bastantes cortas en procariotas (3 - 9 nt antes del
AUG). Las secuencias no codificadoras tambin se llaman regiones no
traducidas y se abrevian UTR .
En los eucariotas adems de las UTR poseen una estructura cap 5 (caperuza 5),
con 7-metilguanosina-trifosfato (7mGppp). Las secuencias no traducidas del
extremo 3 tienen longitud variable. La mayora de ARNm eucariotas tambin
contienen una secuencia de 100 a 200 unidades de adenilato en el extremo OH-3
(Poli A), que se adicionan despus de la transcripcin, aun no est claro cual es
la funcin del poli A aunque se cree que protege al ARNm de la degradacin
nuclesida y puede ayudar a la iniciacin de la transcripcin pero no es esencial
en la traduccin del ARNm.
El Proceso de Transcripcin
La transcripcin por el cual se forma una copia de ARN se realiza por accin de la
enzima ARN polimerasa dependiente del ADN que frecuentemente se abrevia
como ARN polimerasa (ARNpol), que cataliza la formacin de enlaces fosfodister
entre los ribonucletidos. Las seales codificadas en el ADN instruye a la enzima
sobre cules secuencias debe transcribir y dnde debe iniciar y terminar la
transcripcin.
En la mayora de los casos la matriz para la ARNpol es una molcula de ADN
bicatenaria pero solamente una de las dos cadenas se transcribe para cualquier
gen dado. La ARNpol tiene una alta afinidad hacia varias secuencias en el ADN
conocidas como Promotores que con frecuencia se encuentran muy cerca y hacia
arriba (upstream) del punto en que se inicia la transcripcin. La ARNpol provoca
una fusin de la doble hlice del ADN que induce la ruptura de los enlaces de
hidrgeno entre los pares de bases. La ARNpol difiere marcadamente entre
arqueobacterias, bacterias y eucariotas.
Transcripcin en Bacteria.
La enzima ARN polimerasa es una protena compleja de cinco componentes o
subunidades (140 kDA), (95 kDa), y (cada una con 160 kDa),
apareciendo en dos copias cada una con funcin especfica. El componente
(sigma) no est unido ntimamente a los otros y se disocia, formando el
denominado ncleo de la enzima (2), este ncleo puede por si solo catalizar
la formacin de ARN y la funcin de es reconocer el sitio apropiado en el ADN
para la Iniciacin de la sntesis de ARN es decir que el factor de Iniciacin lo
constituye la subunidad (sigma).
32
La ARNpol entra en contacto con el ADN. La asociacin de ARNpol-ADN se

efecta en los sitios promotores. Una sola cadena de ADN se transcribe. La
secuencia del promotor determina la orienta de la transcripcin y cul de las
cadenas se transcribe. La ARNpol se aleja del promotor sintetizando ARN al
moverse. La primera base del ARN sintetizado es siempre una purina (A G). Los
bloques de construccin del ARN son nuclesidos trifosfatos. Los trifosfatos del
nuclesido inicial permanecen intactos adicionando nucletidos posteriores en el
OH-3 de la ribosa. As la sntesis de ARN se efecta en direccin 5 3. Una
vez formada una pequea porcin de ARNm se disocia el componente y la
mayor parte del alargamiento lo lleva el ncleo de la enzima, gracias a los
factores de Elongacin que se incorporan a la ARNpol tras la liberacin de y
sirven para el alargamiento y terminacin de ARN. Tenemos a los factores SII y
SIII Elongina con tres subunidades: A, 110 kDa; B, 18 kDa y C, 15 kDa. As
participa solamente en la formacin del complejo inicial ARNpol-ADN. Al
sintetizarse el nuevo ARN se disocia del ADN y se cierra el ADN abierto en la
doble hlice original.
El Promotor o sitio de iniciacin es una regin del gen con unos 80 nucletidos
donde se une el factor . Hay diferentes factores y distintos promotores. Se
han identificado y secuenciado mas de 100 promotores. El ADN promotor consta
de 2 secuencias denominadas secuencias de consenso ambas en sentido
contrario al del inicio de la transcripcin. Una de ellas es la regin de al menos 10
bases llamada Secuencia Pribnow, (regin 10), con la secuencia T(G)AT_ _T
(los guiones indican cualquier base), generalmente esta secuencia es TATGTTG
y situada entre 6 a 12 nucletidos del sitio de comienzo de la transcripcin (+1) y
presente en todos los promotores. Una segunda parte del sitio de reconocimiento
est a 35 bases del inicio de la transcripcin, designada regin 35. Las
secuencias 10 y 35 son importantes por el efecto de las mutaciones puntuales,
sobre la transcripcin a partir de los promotores.
Son pocos los promotores en E.coli que conforman exactamente una secuencia
consenso ideal, esto se debe a que los diferentes promotores varan
considerablemente en su actividad o frecuencia de iniciacin de ARN. Asi por
ejemplo existen solamente por clula de E, coli 12 molculas de represor lac y su
gen se transcribe slo una vez cada 30 minutos. En cada generacin (unos 20
minutos) se sintetizan unos 10 000 ribosomas por lo que el ARNr se requiere en
grandes cantidades. Cada gen de ARNr se transcribe aproximadamente una vez
por segundo. Todas estas diferencias se deben a variaciones del promotor. En
bacteria, E. coli, la mayora de las molculas de ARNm tienen vidas medias muy
cortas (unos minutos solamente) rpidamente se degradan por accin de
endonucleasas y exonucleasas.
Las cadenas de ARNm estn unidas al complejo ADN molde-ARNpol. En
procariotas la transcripcin y la traduccin estn muy acopladas y permiten un
control transcripcional llamado atenuacin.
33
ARNpol
CCAG GCTTTACAC TTTATGCTTCCGCCTCG TATGTTG T GCTUA A

Sec 35
(18)
(7)
R. Pribnow
(7)
Fig.15. Secuencias de consenso en el inicio de la transcripcin
La terminacin de la sntesis de ARN, es tan importante como la iniciacin, se

efecta en una secuencia de bases especfica del ADN. Una secuencia comn de
terminacin en el ADN es la que contenga una repeticin inversa con un
segmento central de repeticin, estas secuencias pueden aparearse provocando
una configuracin tallo-rizo, cuando se copia esta secuencia el ARN puede formar
una horquilla seguida de Uridinas que ayudan a la terminacin del evento. Otros
sitios de terminacin son regiones ricas en G - C seguidas de secuencias ricas en
A -T. Otra terminacin es la protena (rho), que no se une a la ARNpol ni al
ADN, pero si se asocia fuertemente al ARN naciente haciendo que el ARN y
ARNpol abandonen el ADN.
ADN con
repeticiones
invertidas
TAA GGTCGACTG CAT CAGTCGACC CGA

ATT CCAGCTGAC GTA GTCAGCTGG GCT
Transcripcin
de una sola
cadena
UAA GGUCGACUG CAU CAGUCGACC CGA
Replique en horquilla
lleva a la terminacin
de la transcripcin
UAA
CGA
G|C
G|C
U|A
C|G
G|C
A|U
C|G
U|A
G|C
C U
A
Fig.16. Esquema de un segmento de ADN con repeticiones invertidas que dan

lugar a la terminacin de la transcripcin por la formacin de una horquilla.
Transcripcin en Eucarya.
La maquinaria transcripcional de los eucariotas es mas compleja que la de los
procariotas. Solo una pequea porcin del genoma (un 10 %) se expresa en
forma de secuencia de ARN. Las secuencias transcritas se localizan en la
34
eucromatina. Se requieren protenas accesorias denominadas factores de

transcripcin para que este proceso sea eficiente. Los factores de transcripcin
eucarionte no interaccionan con la ARN polimerasa, forman complejos estables
con la cromatina antes de la iniciacin o la transcripcin y actan como
reguladores positivos.
Los ncleos eucariotas contienen tres tipos de ARN polimerasas, se denominan
polimerasa I, II y III, segn su orden de elusin. Tienen propiedades diferentes
segn su ubicacin nuclear, de los tipos de genes que transcriben y de las
composiciones de polipptidos de sus subunidades, tienen diferentes grados de
susceptibilidad frente a la -amanitina, un compuesto octapptido proveniente del
hongo Amanita phalloides.
La ARNpol I se localiza ene l nuclelo y transcribe los genes ribosmicos del
ARN que se repiten en conjunto (tndem) y que estn presentes en el organizador
del nuclelo. El transcrito primario es el pre-ARNr. Los genes de ARN ribosmico
son transcriptos por la ARNpol I, se transcriben activamente por la demanda
celular de ARNr. Las secuencias de genes de ARNr transcritos se conservan
entre las especies. El promotor es una secuencia de 150 pb ubicada entre las
posiciones 132 y +6, adems entre las posiciones 1200 y 2300 en la regin
espaciadora se repiten copias imperfectas que llevan copias de una secuencia de
60 y 81 pb que se presentan dentro del promotor y estimulan la transcripcin y
pueden permitir la unin de un factor presente en cantidades limitantes.
La ARNpol III, tambin en el nucleoplasma, transcribe genes del ARNr 5S y los
genes del ARNt. Es moderadamente sensible a la inhibicin por -amanitina. Los
genes transcriptos por la ARNpol III, los de ARNr 5S, ARNt y varios ARNsn y
ARNsc, son todos relativamente cortos, pues casi siempre contienen menos de
300 nt.Los genes de ArNr 5S no contienen intrones, los ARNt poseen pequeos
intrones. La secuencia promotora est dentro de su secuencia transcrita entre las
posiciones +50 y +84.
La ARNpol II, que se encuentra en el nucleoplasma, es muy sensible a la amanitina, transcribe genes que codifican las protenas y el transcripto primario es
el ARNhn, el precursor del ARNm citoplasmtico. Los genes transcritos por la
ARNpol II para producir ARN son mucho mas variados que los genes
homogneos transcritos por la polimerasa I. Estos genes incluyen los
codificadores de protenas y los regulados por el desarrollo o por la presencia o
ausencia de un sustrato en particular o estmulo qumico interno o ambiental. Los
promotores de la ARNpol II se localizan en el extremo 5 del sitio de inicio de la
transcripcin y existen tres secuencias que son importantes en la funcin de los
promotores. La secuencia TATA o secuencia de Hogness, con una secuencia
consenso TATAAAT localizada aproximadamente a 25 pb corriente arriba (regin
25, upstream) del inicio de transcripcin, estn flanqueadas por secuencias ricas
en GC importantes en la seleccin del sitio inicial de transcripcin. Otra secuencia
es la secuencia CAAT, aproximadamente a unas 80 pb (regin 80, upstream) del
inicio de la transcripcin, con secuencia consenso GGCAATCT. Y la secuencia
35
GC, frecuente en los genes de mantenimiento, de ubicacin variable, tiene una

secuencia consenso GGGCCGG.
Los transcritos primarios de la ARNpol II se conocen como ARN heterogneos
nucleares (ARNhn), pueden ser molculas muy grandes al contener intrones
presentes en la molcula de ADN. El ARNhn o ARN precursor, tiene 8,000 a
20,000 nt. La mayora de los transcritos contienen dos seales particulares (1) la
caperuza 5 constituida por Guanina metilada (7 metilguanosina). Un trifosfato se
aade cuando se llevan sintetizados unos 3 ms nucletidos, sirve para que la
subunidad menor del ribosoma reconozca al ARNm. (2) En el extremo 3-OH
existe una cadena de 200 residuos poliadenilados o poli A, el transcripto es
cortado a 10 a 30 nucletidos de esta secuencia (AAUAAA). Esta secuencia es
importante porque es reconocida por una endonucleasa especfica que separa la
cadena de ARN naciente de la ARN polimerasa y adems es la seal reconocida
por la poliA polimerasa que adiciona una cola de 3-OH poli(A) al ARN.
Las molculas de ARNm experimentan cortes y empalmes (splicing) por accin de
las ARNsn y RNPsn. Cada uno de los cules est compuesto de un pequeo
ARN nuclear rico en Uridinas (250 nt o menos) y varias protenas. Los ARN de los
RNPsn se sintetizan bajo la direccin de la ARNpol II. El transcripto primario
contiene una serie de marcas particulares que sealan donde ha de cortarse la
molcula. La ARNpol II, agrega 50 nt por segundo al ARN. Para una protena de
300 a 400 aminocidos se necesita una ARNm de 900 a 1,200 bases. Una clula
puede sintetizar 10,000 y 20,000 protenas diferentes.
Punto de
replicacin
Punto de corte 3
3
5
5
AG GURAGO
YNYURAY

Tramo de
pirimidinas
Punto de corte 5
3
(U/C)n
5
AG G
Y pirimidina (C,T U)
R purina (G,A)
N cualquiera de los 4 nucletidos
Fig. 16.
Secuencia de nucletidos en los intrones

y exones responsables de los procesos de
cortes y empalmes en el transcripto primario
Factores de transcripcin
Asimismo en eucariotas existen factores que participan activamente en la
transcripcin. Son protenas que se unen al ADN promotor convirtindolo en ADN
promotor funcional que atrae las polimerasas. Para cada tipo de ARN existen
factores que intervienen en su transcripcin.
36
En el ARNm : La ARNpol II que se une en el ADN promotor con Caja TATA

a 25 nt del inicio. Los factores de transcripcin son 8, denominados del
TFII-A hasta TFII-H, el mas importante es el TFII-D o factor TATA.
En el ARN45S : La ARN pol I con dos (2) factores de transcripcin, SL1

(selectivity factor) y el UBK (upstream binding factor). El factor de
selectividad SL1 es similar a la subunidad TBP (TATA binding protein) del
factor TFII-D.
En ARNt : La transcripcin dirigida por ARN polimerasa III (ARNpol III). Con
los factores de transcripcin TFIII-B (que porta la subunidad TBP) y el
factor TFII-C.
En ARN5S : Transcripcin dirigida por ARN polimerasa III (ARNpol III), con
los factores de transcripcin TFIII-A, TFIII-B (con subunidades TBP y
TAFs), TFIII-C. Apenas es sintetizado debe ingresar al nuclelo para
asociarse a las protenas ribosmicas e incorporarse a la subunidad mayor
ribosmica.
Es necesario recordar que los factores de transcripcin son requeridos por la

secuencia TATA del promotor para que de comienzo a la sntesis del ARNm.
Los factores TFII-D, TFII-B, TFII-F, TFIIE, TFIIH, etc. Actan de forma secuencial
en el orden en que fueron descritos.
El factor TFII-D. Est constituidos por las subunidades TBP y por TAFs (TBP
associated factors).
Para que un gen se transcriba existe un mecanismo de regulacin gnica
constituido de protenas activadoras y represoras, el Opern.
Regulador
ADN
-
Promotor
CAAT
75
TATA
25
Intron 1
Intron 2
GT AG Exon 2 GT AG Exon 3 AATAAA
Exon 1
+1
TRANSCRIPTO PRIMARIO
Exon 1
GT AG
Exon 2
GT AG
Exon 3 AATAAA
Cortes y empalmes
AUG
Exn 1 Exn 2 Exn 3
Poli
UAA
A
ARN
mensajero
Traduccin
7mGppp
3
5 Cap
Comienzo
PROTEINA
Terminacin

NH2
COOH
Fig.17. Procesamiento del Transcripto Primario (Espleciosoma)
Traduccin : Proceso de la sntesis proteica

37
La ltima etapa de la expresin de la informacin gentica se produce cuando la

informacin codificada en el ARNm se traduce a la secuencia correspondiente de
aminocidos que constituyen el polipptido. La traduccin ocurre en los ribosomas
completos (con subunidad grande y pequea) y requiere tambin de la presencia
de ARNt y una serie de factores de naturaleza proteica. El proceso es mas
complejo en los eucariotas, aunque la mayor parte de la sntesis de protenas en
los eucariotas se realiza en el citoplasma, los cloroplastos y mitocondrias tambin
tienen su propio sistema de traduccin para la sntesis de protenas codificadas
por el ADN mitocondrial y de los cloroplastos.
Etapas de la sntesis de protenas
1.- INICIACION.- En las bacterias (procariotas) comienza con la disociacin del
ribosoma 70S en sus subunidades 30S y 50S. La subunidad 30S se une con el
ARNm policistrnico, por reconocimiento de la secuencia Shine-Dalgarno, este
complejo binario inicial se une al ARNt-fMet (ARNt de formil-Metionina), el ARNt
iniciador, esta unin es mediada por IF-2 (factor de iniciacin 2) junto con GTP
y por supuesto la enzima ARNt sintetasa. El complejo IF2-GTP se une al ARNtfMet para formar un complejo ternario que se une con el ARNm-30S, este paso es
facilitado por el IF-1 y se verifica liberacin del IF-3 para evitar la inhibicin del
complejo de iniciacin ya que el IF-3 funciona disociando subunidades
ribosomales a fin de que no se formen espontneamente ribosomas 70S inertes
en la iniciacin. El aminocido que comienza la sntesis es el Formil-Metionina
(triplete AUG), que se une con su correspondiente ARNt. A veces el triplete de
inicio es el GUG, muy relacionado con el primero. En casos muy raros otros
codones (AUU, UUG) pueden actuar como seales de inicio. Luego se agrega la
subunidad 50S con el paso de GTP a GDP mas Pi y la liberacin de IF-2 e IF-1,
culminando la formacin del complejo de iniciacin.
Fig.18. Etapa de inicio de la biosntesis proteca en procariotas
En los eucariotas es un poco diferente la iniciacin, los ARNm son

monocistrnicos, es decir con una sola secuencia de codificacin y la iniciacin
generalmente ocurre en el primer AUG del ARNm, se dice que se sigue un
modelo de seleccin, la unin del ARNm y la subunidad 40S involucra a la cap
5 y gasto de ATP. Las bases adyacentes a ambos del AUG influyen para que
este sea o no usado como iniciador, esto se denomina contexto, si el primer AUG
no esta en buen contexto, se pasa por alto y se busca otro. Adems participan 10
factores de iniciacin (ver Tabla 3), los factores eIF-4 son conocidos como
38
protenas de unin al cap. Las s secuencias Shine-Dalgarnoson bastantes

largas de varios cientos de bases y formar bucles al aparear sus regiones
complementarias.
Fig. 19. Iniciacin en eucariotas
Tabla 3.Factores de iniciacin en m.o. pocariotas y en m.o. eucariotas

Funcin
Factor en Factor en
procariotas eucariotas
IF-1
eIF-1
Su funcin no est an clara. Permite unin IF-2-GTP con ARNt-fMet30S.
IF-2
eIF-2
Enlaza al fMet-ARNt ( Met-ARNt) al ribosoma en un complejo con
GPT.
IF-3
eIF-3
Evita la reasociacin de las subunidades ribosomales.
eIF-4A
Grupo de factores relacionados responsables de unirse al cap 5 del
eIF-4B
ARNm y desenrollar cualquier estructura secundaria para permitir que
eIF-4E
el ribosoma localice el codn iniciador.
eIF-4F
eIF-5
Libera el IF-2 y el IF-3 del ribosoma y permite que se una la subunidad
60S.
eIF-6
Interviene en la disociacin del ribosoma en sus subunidades.
GEF
Factor de intercambio del nucletido de guanina: recicla el eIF-2 al
mediar el intercambio de GDP por GTP en un proceso anlogo al
reciclado de EF-Tu por EF-Ts
2.- PROLONGACION O ELONGACION.- Formado el complejo de inicio ocurre la

descodificacin del ARNm por una serie de fases repetitivas:
a.- Reconocimiento: el ribosoma activo 70S, estando con f-Met- ARNt o PeptidilARNt en el lugar de donde se transfiere conocido como sitio Dador o sitio P, se
une a un nuevo aminoacil-ARNt entrante (el segundo ARNt-aminoacil especfico)
en el lugar Aceptor o sitio A que est vaco determinado por el codn del ARNm.
39
En ello participa el factor de elongacin EF-Tu (procariotas) o EF-1

(eucariotas) junto con GTP.
b.- Transferencia: despus de la unin del complejo al sitio A el GTP se degrada
en GDP y Pi liberndose del ribosoma unido al factor de elongacin anterior como
EF-Tu-GDP (procariotas) o EF-1-GDP (eucariotas). Para que nuevamente el
factor EF-Tu o EF-1 pueda funcionar es necesario que se reestablezca el GTP,
requirindose del factor EF-Ts o EF-1 que median el intercambio de GDP/GTP.
El primer aminocido, f-Met en el sitio P, se une al segundo en el sitio A y se inicia
la cadena peptdica. Esta reaccin es catalizada por la enzima peptidiltransferasa, que es parte del ribosoma 50S o 60S. El ARNt en el sitio P se
queda sin resduo aminocido y se dice que no est cargado.
c.- Translocacin: requiere de otro factor diferente el EF-G (procariotas) o EF-2
(eucariotas) y GTP que pasa a GDP y Pi. El ribosoma se mueve para leer el
mensaje de otro codn, el peptidil-ARNt con la cadena peptdica pasa del sitio A
al sitio P, eliminndose el ARNt que transportaba la F-Met, y el lugar A queda
vacante para ser ocupado por otro ARNt con su aminocido.
Estos pasos se repiten sucesivamente hasta completar la sntesis.
Fig. 20. Esquematizacin de la etapa de Alargamiento
3.- TERMINACION.- el proceso termina cuando en el ARNm existe un codn sin

sentido, UAA,UAG UGA, para los cules no existe ARNt y tambin gracias a la
intervencin de factores de terminacin, en procariotas el RF-1 (acta con UAA
y UAG), RF-2 (acta con UAA y UGA) y RF-3 (acta junto con RF-1 y RF-2) y en
eucariotas solamente un factor, el eRF. Adems se requiere de un factor de
liberacin del ribosoma (RRF). La liberacin de la cadena peptdica implica la
40
hidrlisis del enlace que une el aminocido final con el ltimo ARNt, se cree que
en esta reaccin participa la peptidil-transferasa del ribosoma requirindose de
GTP. As quedan libres el polipptido, el ltimo ARNt, el ribosoma 70S que se
disocia en sus subunidades y el ARNm queda libre tambin.
Fig.21. Terminacin de la biosntesis proteca
Control de la Transcripcin
- Regulacin de la expresin gentica
La sntesis de protenas y de otros elementos que la bacteria necesita se
producen por un mecanismo de autorregulacin que determina la concentracin
de protenas intracelulares merced a metabolitos que favorecen el incremento
(protenas activadoras) o la disminucin (protenas represoras). Es un sistema
bifuncional que evita la acumulacin o un gasto de enrga muy grande. Este
mecanismo se representa por la inhibicin de la sntesis del ARNm por accin de
protenas represoras, que se encuentran a su vez reguladas por pequeas
molculas especficas, conocidas como inductores y represores. Se da el
nombre de OPERON a un grupo de genes controlados por el mismo operador y
que intervienen en el metabolismo de un determinado producto. Por ejm. en el
caso del Opern LAC o de la -galactosidasa que degrada la lactosa, tiene ste
cuatro componentes:
a.Genes estructurales: -galactosidasa, permeasas y transacetilasa que
degradan la lactosa y transportan a sta a travs de la membrana.
b.Operador: que controla la transcripcin de los genes estructurales. Cuando
la lactosa no se halla presente en el medio, no es preciso su utilizacin, y en
consecuencia se produce la represin de los genes estructurales debido a la
unin de la protena represora con el operador.
c.Promotor: necesario para la iniciacin de la transcripcin, se sita por
fuera del operador y es la zona de asiento de la ARN-polimerasa y de un
catabolito activador proteco que estimula la formacin de ARNm.
41
d.Regulador: situado lejos de la zona de influencia del opern y es el

portador de la informacin para la produccin de la protena represora.
En ausencia de lactosa en el medio se sintetiza la protena represora, que
neutraliza al operador, y no se produce transcripcin de genes estructurales. En
presencia de lactosa, el represor se inactiva y se produce la transcripcin y
catabolizacin de la lactosa.
Fig.22. Componentes del Opern Lac
ADN EXTRACROMOSOMICO : PLASMIDOS

Los PLASMIDOS son molculas facultativas de ADN circular, no esenciales para
la bacteria, que se replican independientemente del ADN cromosmico. Son 100
a 1000 veces ms pequeos que el cromosoma, de PM de 3 a 100 x 106 daltons.
Con estructura helicoidal y superenrrollada, llamada CCC circular cerrado
covalente de ADN. Son autorreplicables o replicones, dan lugar a varias copias
de plsmidos. Los que sobrepasan los 20 Megadaltons transportan genes que
facilitan su transferencia por conjugacin entre bacterias. Pueden recombinarse
con el cromosoma (crosing-over) o con otros plsmidos, esto est regulada por
enzimas tipo recombinasas e integrasas. Entre los diferentes tipos de plsmidos
tenemos a:
- Plsmidos F o Factores Sexuales, responsables de la transferencia de genes.
Existen bacterias F+ que portan el plsmido que puede estar libre o integrado al
cromaosoma como Hfr y de all separarse con un segmento del cromosoma, el F'.
- Plsmidos de Resistencia o R, responsables de la resistencia a las drogas.
- Plsmidos de patogenicidad, responsbales de la elaboracin de toxinas,
hemolisinas, dar capacidad de invasin (ejm. Ent, Inv, Hly, K).
- Plsmidos colicinognicos, productores de bacteriocinas (Col B, Col E, etc).
- Plsmidos degradantes, dan capacidad de utilizar sustratos no comunes como
tolueno (Tol), alcanfor (Alc) y salicilato (Sal), sales mercuriales (Hg), etc.
- Plsmidos crpticos, que no se conoce su expresin fenotpica.
42
Fig.23.
Modelo de un Plsmido
de
resistencia
MUTACIONES
En gentica se utilizan las CLONAS, bacterias genticamente idnticas. Una
mutacin se observa como un cambio sbito, que se hereda en el fenotipo de la
bacteria. Una cepa aislada en la naturaleza se le denomina tipo natural o
salvaje (wild type) y a la cepas aisladas a partir de ella como mutantes. Se
pueden diferenciar las mutaciones selectivas y las no selectivas. En las no
selectivas la bacteria puede perder una caracterstica que puede traer ventajas o
desventajas sobre las bacterias originales al cultivarlas in vitro. Una mutacin
selectiva confiere a la bacteria mutante una ventaja bajo cierto tipo de condiciones
ambientales, de manera que su descendencia es capaz de superar el crecimiento
de la cepa natural y sustituirla.
Existen mutantes nutricionales, que tienen requerimiento para un factor de
crecimiento, se denominan AUXOTROFAS, mientras que la cepa original de tipo
natural es una PROTOTROFA.
Las mutaciones pueden originarse
espontneamente, como tambin pueden acelararse al aplicar agentes
mutagnicos en manipulaciones in vitro.
- MUTACIONES PUNTUALES.Cambio que se verifica en una sola base. La consecuencia depender del lugar
donde ocurra la mutacin. En un aminocido con varios codones que lo codifican
43
(fenmeno de degeneracin), ocurre una mutacin silenciosa, pues no se

detecta, siempre que cambie la 3 base del triplete, cambios en la 1 y 2 base
pueden traer consecuencias significativas. Si el aminocido posee un solo triplete
que lo codifica, la mutacin se detectara.
- DELECCIONES E INSERCIONES.Las delecciones o prdidas se deben a la eliminacin de porciones de ADN de
un gen. Se eliminan de una a cientos de bases. Inserciones tienen lugar al
agregarse nuevas bases al ADN del gen. Las secuencias de insercin pueden
tener de 700 a 1 400 bases. Estas se utilizan en la ingeniera gentica.
- MODIFICACIONES EN EL MARCO DE LECTURA.Cualquier deleccin o insercin de una nueva base trae como consecuencia una
modificacin en su lectura y la traduccin del gen queda completamente
modificado.
- POLARIDAD.Si hay mutaciones sin sentido cerca del inicio de la traduccin, se bloquear
completamente la traduccin de todos los genes sucesivos, mientras si dicha
mutacin ocurre, lejos de este sitio tendr efectos menores. Se origina gradientes
de polaridad cuando un ribosoma alcanza un codn sin sentido para terminar la
cadena y se libera un polipptido incompleto; el ribosoma se separa de su molde
y los genes que se encuentran ms adelante no son traducidos. Mutaciones sin
sentido en el extremo 3' no tienen efecto sobre genes transcritos en el extremo 5'.
- INVERSIONES O REVERSIONES.Muchas mutaciones son reversibles. Una cepa "revertida" se define como a la que
se ha restaurado su fenotipo natural que perdi en una mutante. Pueden ser de
dos tipos: Las del primer sitio, cuando las mutacin restablece la actividad en el
sitio donde ocurri la mutacin original. Las del segundo sitio, pueden se : en un
sitio diferente del gen, que restablece la funcin enzimtica; o en otro gen que
restablece el fenotipo del tipo natural (mutacin represora) o puede dar lugar a
la produccin de otra enzima que sustituya la prdida utilizando otra va
metablica.
44
BIBLIOGRAFA
ASENSIO C., F.JIMENEZ, 1987. Gentica Microbiana, Editorial Alambra S.A.,
Madrid, Espaa.
BRODA , P. 1981. Plasmid, W.H.Freeman and Company Limited, Oxford and San
Francisco, U.S.A.
GARCIA-RODRIGUEZ, J.A. y J.J.PIZAZO, 1997. Microbiologa Mdica, Mosby,
Barcelona, Espaa.
JIMENEZ, A. y R. GUERRERO, 1982, Gentica Molecular Bacteriana, Editorial
Revert S.A., Barcelona, Espaa.
LEWIN, B. , 1997. Genes. Editorial Revert S.A., Barcelona, Espaa.
STAINER, R.,J.I.INGRAHAM, M.WHEELIS, P.PAINTER, 1992. Microbiologa,
Editorial Recert S.A., Barcelona, Espaa.
HARDY,K.1991, Bacterial Plasmids, Aspects of Microbiolgy 4, American Society
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PRINCIPIOS MOLECULARES DE GENETICA MICROBIANA

Los microorganismos procariotas tienen sistemas genticos relativamente

Fig. 1. Modelo del ADN en doble hlice

Fig. 2. Secuencia y apareamiento de bases del ADN

PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

la secuencia sigue formando una repeticin invertida, pero el eje de simetra se ha

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eucaritico. Cada cromosoma (Chr) eucaritico contiene una molcula de ADN,

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central de aproximadamente 11 x 11 x 5.7 nm, con 146 pb del ADN enrollados

Fig. 3. Esquema representativo del nucleosoma

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

desespiralizada, tal como se encuentra en el momento de actividad funcional

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Cada cromosoma metafsico contiene 2 molculas de ADN cada uno de de 30

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Fig.4. Esquema de un cromosoma eucaritico

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

se encuentra en unas cuantas o relativamente grande nmero de copias y que

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

copiando se denomina matriz pero la nueva molcula de ADN no est unida

Replicacin del ADN. a). El cromosoma se une al mesosoma de la

En los procariotas la enzima que cataliza la adicin de nucletidos a la cadena en

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

En el extremo en crecimiento del ARN-cebador hay un grupo oxhidrilo en 3 al

ADN (Cadena nueva)

Fig. 6. Esquema del inicio de la sntesis de ADN con el ARN cebador

El lugar donde se inicia la sntesis de ADN es el origen de la replicacin que es

Fig. 6. La iniciacin de la sntesis ocurre en el interior del ADN a

PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

El ADN se desenrolla por accin de la enzima helicasa dependiente de ATP. La

Fig 7. Horquilla de replicacin del ADN. Enzimas desestabilizadoras de la hlice

PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Hebra sintetizada sobre

La replicacin es bidireccional, en el ADN circular como en el de las bacterias, da

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Mecanismo de Replicacin Eucariota

Unin de la protena iniciadora con su secuencia e reconocimiento.

Despus de la replicacin y antes que ocurra la divisin celular existe un intervalo

PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Orgenes de replicacin en eucariotas

PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

- La ADN polimerasa participa en la replicacin de cromosomas nucleares

Se ha propuesto un modelo de replicacin del ADN eucaritico segn el cual el

Modelo de la replicacin del ADN eucaritico.

ADN polimerasas procariticas

PRINCIPIOS BSICOS DE MICROBIOLOGIA

Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Las ADN polimerasas de procariotas tienen dos tipos de actividad exonucleasa:

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Mcblgo.Dr.Sc.Btcnlgo.CSAR SAMUEL LOPEZ LPEZ.

Correccin de pruebas en la sntesis del ADN

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Tambin pueden producirse mutaciones por desaminacin espontnea de las

ARN mensajero (ARNm), ARN que especfica la estructura primaria de las

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