PontificiaUniversidadCatlicadeChile

FacultaddeCienciasBiolgicas
DepartamentodeBiologaCelularyMolecular
LaboratorioBioqumicaI:Biologacelular
BIO266D

Informen1
Anlisisdeprecisinyexactitudde
micropipetas,ydeterminacindeladensidad
deisopropanolyglicerol

Introduccin

En lavidacotidianaescomnescucharutilizarlaspalabrasexactitudyprecisin comosinnimos,sin
embargo, enciencia,al usarlas comoparmetrosestadsticos, tienendistintossignificados: Exactitud
hacereferencia ala proximidaddeun valormedidoocalculadoconsuverdaderovalor,mientrasque
precisinsedefinecomolaproximidaddemedidasrepetidasdelamismacantidad[1].
Las medidasde precisinyla exactitud comnmentevaran de acuerdoa lacalidad delinstrumento
demediday de lapericiadel operatorio[2]. Asquealmomentodeutilizar instrumentosparamedir
masas(balanzas)ovolmenes(pipetas)sonunfactoraconsiderar.
En eltrabajo de una laboratoriodebiologacelularesnecesario poder medircantidades pequeasde
forma precisa y exacta por lo que pararealizar lasmediciones de masas existenla balanzaanaltica
queson capacesdemedirmasaspequeasconunaaltasensibilidad(percibefcilmenteloscambiosde
masa),alordende0,1mg[3].
Por otra parte tambinseencuentran las micropipetas las cualesson utensiliosde laboratoriopreciso
que se emplea para verter volmenes pequeos (microlitros) con exactitud [4]. Existiendo
micropipetas que tienen distintas capacidades que pueden oscilar entre 1uL a 5000 uL. Siendo
importanteusarlasdentrodelrangoqueposeelamicropipeta,delocontrariosedescalibran.[5]
Las micropipetassepueden clasificardedos formas.Deacuerdoasu capacidaddemedirvolmenes
fijo ovariables[6], siendolasmicropipetasquemiden unvolumenfijode unautilidadmslimitada
quelasdevolmenesvariables[7].
Por otra parte de acuerdo a si son manuales o automticas, esta ltima se diferencia por ser ms
moderna y exacta que la primera. En ambas el volumen deseado se selecciona haciendo girar una
rueda que se encuentra en el extremo superior [5] Yse llenasuccionandoy ellquido sealojaenla
punta de plstico desechable, para evitar contaminaciones, que son estables a la mayora de las
disolucionesacuosasydemuchosdisolventesorgnicos,exceptoelcloroformo[8].
En el prctico se usarn los dos instrumentos mencionados anteriormente y agua destilada con el
objetivo de lograr conocer y determinar la exactitud yprecisin que poseen las micropipetas que se
utilizaran,haciendouso delaspropiedadesfsicasdel agua.Porotrapartese buscaobtenerunamayor
familiarizacinconla micropipeta,alusarlamicropipetaconfluidos de distinta densidadesparaello
se determinar se utilizar aguadestilada cuyadensidades a25 Ces de0,9971g/L[9],Isopropanol
el cuales unalcoholincoloro, inflamable,conunfuerteolor ymuymiscible conel agua, poseeuna
densidad de 0,79 g/mL[10] yporltimoglicerolqueesunlquido viscoso,higroscpico eincoloro,
queposeeunadensidadde1,26g/mL[11].
Finalmentese deseadeterminar deformaexperimental ymatemticaexactitudyprecisinladensidad
deloscompuestosmencionadosconanterioridad.

Materialesymtodos

MaterialesyReactivos
Micropipetas(20uL,200uLy1000uL)
Puntasdemicropipetas
Aguadestilada
Isopropanol
Glicerol
Balanzaanaltica
Tubosdeensayo
Tuboseppendorf
Gradilla
Tijeras
Papeladsorbente
Etanol

Mtodos
Eldesarrollodel prcticosedividi endospartes:UsodemicropipetasyDeterminacindedensidad
dediferentescompuesto y sesiguieron los procedimientosdescritosenLaboratoriodeBioqumicaI:
Biologa celular.BIO266D para el prctico1:Introduccin,usodemicropipetas[12]
,
describiendoa
continuacinloscambioseinstruccionesquefueronomitidas:

Parte1:Usodemicropipetas.
Serotularonypesaronenunabalanzaanalticalostubos eppendorfqueibanaserutilizados,anotando
losvalores obtenidos.Luego seregulelvolumenquesedeseabatomargirandoelbotnsuperioryse
tom unvolumendeaguapresionando hasta elprimertope delamicropipeta, elcual fuedepositado
enun tubo eppendorfpresionandonuevamenteelbotnhastaelsegundotope.Despussepesaronlos
tuboseppendorf con los volmenesdeaguaaadido,estosserestaronconelvalordeltuboeppendorf
vaco y se realizaron los respectivos clculos haciendo uso de la frmula I. No se realizaron las
medicionesparalosvolmenesde10uLusandolaP200yde50uLparalaP1000.

V = md

Parte2:Determinacindedensidaddediferentescompuestos
Se pesaron y rotularon los tubos eppendorf. Al intentar sacar con la micropipeta los volmenes
requeridosdeglicerolynolograrsesatisfactoriamente,serecurri acortarparcialmente, utilizandolas
tijeras,lapuntadeplsticodesechablequeposeelamicropipeta.

Resultados

Para la determinacin de la precisin y la exactitud de las micropipetas, se tomaron volmenes de

agua destilada con algunas de estas, de distintas capacidades segn correspondiera (P20, P200 y
P1000),y se pesaron las muestras tomadas [12]. Enla
Tabla1
sepresentanlosdatosobtenidos.Cabe
destacar que las mediciones fueron realizadas por triplicado, por lo que de las masas obtenidas se
calcul el promedio, y con estos valores se procedi a analizar la precisin y la exactitud del
instrumento.

Tabla1.
Masaspromediodelosvolmenesmedidosdeaguadestilada.

Volumen(L)

Masapromedio(gr)

Desviacinestndar(gr)

Errorrelativo(%)

0,0051

4
3,6055x10

2,2967

10

0,0092

3
1,7578x10

7,7324

50

0,0500

3
1,2503x10

0,2908

500

0,5039

3
1,0149x10

1,0731

Como se observa en la
Tabla 1
, los mayores valores de desviacin estndar y de error relativo se
presentaronenlos10L,medidosconlamicropipetaP20.

En lasegundaexperiencia,se tomaron distintosvolmenesportriplicadodeisopropanolydeglicerol

con las micropipetas correspondientes, ysepesaron,obteniendolosvalorespresentadosenla
Tabla2.
Del mismo modo que para los volmenes de agua, se calcul el promedio de las masas de cada
sustanciaparacadavolumen.

Tabla2.
Masaspromediodelosvolmenesmedidosdeisopropanolyglicerol.
Muestra

Volumen
(L)

Masapromedio(gr)

Desviacinestndar(gr)

Isopropanol

10

0,0068

4
7,0946x10

50

0,0375

4
5,5076x10

200

0,1491

3
3,6501x10

500

0,3918

3
8,4346x10

1000

0,7444

2
1,1937x10

10

0,0240

3
8,7709x10

50

0,0739

4
9,5394x10

200

0,2522

2
3,1560x10

500

0,6548

2
3,5002x10

1000

1,2386

2
1,8721x10

Glicerol

Comoesposibleobservar, losmayoresvaloresdedesviacinestndarseobtuvieronenlasmediciones
deglicerol,siendolamsaltalacorrespondientealos500L.

Los datos presentes en la

Tabla 2 se graficaron por separado para cada solucin, obteniendo las
Figuras 1y 2
, demodo de obtenerlapendienteparacadacurva,yas,determinarladensidaddecada
disolucin.

Figura 1.
Masapromedio decadavolumen tomadodeisopropanol,dondeseobservaqueladensidad
experimental del isopropanol fue de 0,7489 gr/mL. Los valores representados corresponden a tres
rplicas
+
SD.

Figura 2.
Masapromedio para losvolmenesmedidosdeglicerol.Dondeseobservaqueladensidad
experimental del glicerol fuede1,2341gr/mL.Losvaloresrepresentadoscorrespondenatresrplicas
+
SD.

Discusin

Para determinar si las micropipetas son precisas y exactas al momento de extraer volmenes, es
necesario evaluar cun cercanos son los valores obtenidos experimentalmente respecto a los
esperados, esdecir,la exactituddelasmicropipeta,paraesto debemosapoyarnosenel errorrelativo
[13]. En la
Tabla 1 se aprecia que la micropipeta ms exacta es aquella de menor error relativo,
siendo la P200, con un 0,2908% deerror,encambiola p20 present un7,7324% deerror, siendo
esta la menos exacta. Estos valores estn indicando que para realizar mediciones ms exactas, es
conveniente utilizar una p200, ya que se tendr mayor certeza de los volmenes que se estn
adicionando. Para saber si las micropipetas tienen la capacidad de extraer volmenes que sean
reproducibles[10],esdecir,precisos,seanaliz ladesviacin estndardela
Tabla1
.LaP20eslaque
4
presentun menorvalordedesviacin estndar,siendo de3,6055 x10
grenla medicinde5Lde
agua destilada, resultando ser la ms precisa, aunque esta misma micropipeta tambin present la
3
desviacinestndar ms grandeobtenida, con unvalorde 1,7578x 10
paralamedicinde10Ldel
mismolquido.Esdecir,fue lamenos precisa.Adems,siseconsideraqueladiferenciaentreelerror
relativo de ambasmedicionesesde10,0291%, se podraconsiderarqueestamicropipetaesaquella
que entrega datos ms incongruentes y menos certeros a la hora de hacer mediciones exactas y
precisas.Por estasrazones seconsideraquelaP20 esunamicropipetaquenoestbiencalibrada.En
contra, estn lap200 yla p1000quepresentaron unerror relativo bastante pequeoyunadesviacin
estndarpequea,porquelosepodradeducirquesiestncorrectamentecalibradas.
Posteriormenteserealizaladeterminacin de densidades de doscompuestos,isopropanolyglicerol.
De la
Figura 1 y la
Figura 2 se puede extraer que sus densidades son 0,7489g/ml y 1,2341g/ml
respectivamente,siendo muy cercanasa las densidadestericasde0,79g/ml[10]y1,26g/ml[11],cabe
mencionar que los porcentajes deerror obtenidos fueron de 5,203% para elisopropanol,y 2,055%
para el glicerol. Es importante destacar que ambos errores son negativo, puesto que ambos casos
quedan residuos del lquido en las punta de la micropipeta. Esto se puede deber a las propiedades
moleculares del compuesto, ya queel isopropanolpresenta un grupo hidroxiloy elglicerolpresenta
tres,comosepuedeobservar.

IsopropanolGlicerol

Figura 3
. Estructura del isopropanol y glicerol. aca se observan los grupos hidroxilos de las
molculas.

Estopermitequeseformen puentesdehidrgeno,aumentando lafuerzadeatraccin delasmolculas

y porconsiguientemejorandolaviscosidaddelcompuesto[14], yesestapropiedadlaqueimpidique
ellquidofluyeraconnaturalidadpor lapunta delamicropipeta, loqueinterfiriconunanlisisms
preciso yexactoenlo que respecta aestos compuesto. Apesardequelaspuntasdelasmicropipetas
fueron cortadaspara mejorarlasalidadel lquido,estonofuesuficienteparareducirelerror.Tambin
cabe destacar que es probable quesehayancometido erroreshumanosenla prctica. Esto sepuede
deber apocaexperiencia oatener pococuidado almomento deextraerlosvolmenes.Debidoaesto
se explica que los resultados pueden variar de persona en persona[15]. Adems no se determin

correctamente la temperatura alacualse trabajabaal momentoderealizarla prctica, todo estoson

factoresqueinfluyenengenerarposibleserroresenlasmediciones.
Finalmente,esnecesario mencionarque la
Tabla2 incluye lasdesviacionesestndardebidoaqueen
elgrficonosonnotorias.

Conclusiones

Al finalizar la prctica se puede concluir que las micropipetas presentan una buena exactitud y
precisina excepcindelap20,quefueaquellaquearrojdatosmenosconcordantesconlostericos.
Respectoa las densidadesobtenidas,sepuededecirquese obtuvieronvalorescercanosalostericos,
perodebidoalaspropiedades fsicasdelamolcula,comolaviscosidadsegeneranerrorestalescomo
que ellquido quede dentrode la puntade lamicropipeta.Medianteestos pasosse pudo adquirirlos
conocimientos prcticos de cmo utilizar una herramienta hecha para medir volmenes dentro del
ordendelosmicrolitroscomoloeslamicropipeta.

Bibliografa
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