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REGULACIN DE LA EXPRESIN GENTICA EN EUCARIONTES

Los organismos eucariotes son aquellos que contienen una estructura llamada
ncleo que se encuentra limitado por una membrana. El ncleo sirve para
localizar el material gentico, el ADN. Las clulas deprocariotes que carecen de
ncleo y generalmente son ms pequeas que las eucariticas. El ADN de las
clulas procariticas est confinado a una o ms regiones nucleares, que a
veces se denominan nucleoides. Los nucleoides no estn limitados por una
membrana independiente.
Especializacin
Diversos tipos celulares especializados de un mismo animal o planta superior, a
menudo aparecen radicalmente distintos. Esto puede parecer paradjico, ya que todas
las clulas de un organismo pluricelular estn estrechamente relacionadas al haberse
formado a partir de una misma clula precursora (clula totipotente). Un origen comn
implica genes similares; cmo aparecen, entonces, las diferencias? En algunos
casos, la especializacin celular implica la prdida de material gentico: un ejemplo lo
constituyen los eritrocitos de los mamferos, que en el transcurso de la diferenciacin
pierden por completo el ncleo. Pero la inmensa mayora de las clulas de una gran
parte de especies animales y vegetales conservan toda la informacin gentica
contenida en la clula precursora. La especializacin no depende de la prdida o
ganancia de genes, sino de alteraciones de la expresin gnica, es decir del hecho de
que algunos genes se expresen en algunas clulas y otros en otras, a esto se le
conoce como restriccin genmica.
Es esencial que exista un mecanismo de regulacin de la expresin gnica, de manera
que los genes se expresen cuando sea necesario.

En los organismos pluricelulares donde el medio intercelular es relativamente


constante, el control gnico est al servicio de la especializacin celular. As,
nos encontramos con genes que no responden a cambios fisiolgicos y otros
que sufren un fuerte control como consecuencia del desarrollo, de la
organizacin de clulas en tejidos, y de los tejidos en organismos completos.

Por eso, la complejidad de los organismos emerge de una regulacin de la


expresin gnica cada vez ms elaborada y no de cambios o mutaciones en
los genes estructurales o enzimticos: la secuencia de las protenas se
conserva mucho a travs de distintas especies, sin cambios importantes
mientras que los cambios en el orden de los elementos del promotor o de sus
elementos reguladores provocan alteraciones drsticas. As, los mamferos son
muy diferentes, pero sus ORF son parecidas; en cambio, la divergencia de
secuencia en las ranas es muy alta a pesar de que forman un grupo bastante
homogneo.
Las diferentes posibilidades de regulacin de la expresin gnica en
organismos eucariotas son:
1._Nivel de cromatina.
La cromatina est constituida por el DNA enrollado alrededor de una serie de
nucleosomas, empaquetada ms relajada en las regiones que contienen genes
activos. Adems de los cambios generales que ocurren en las regiones activas
o potencialmente activas, ocurren cambios estructurales en sitios especficos
asociados con la iniciacin de la transcripcin o con determinadas
caractersticas estructurales del DNA. Estos cambios se detectaron por primera
vez gracias a los efectos de la digestin con concentraciones muy dbiles de la
enzima DNAsa I.

Muchos de los sitios hipersensibles estn relacionados con la expresin gnica.


Cada gen activo tiene su sitio en la regin del promotor y a veces ms de un
sitio. La mayora de los sitios hipersensibles se encuentran solamente en la
cromatina de las clulas en las cuales se est expresando el gen asociado; no
se encuentran cuando el gen est inactivo. Se asume que un sitio hipersensible
es el resultado de la unin de protenas reguladoras especficas que excluyen
los nucleosomas. Los factores de transcripcin pueden generar sitios
hipersensibles asociados a la transcripcin.

2._Nivel transcripcional.
La transcripcin de un gen en estado activo est controlada en la iniciacin por
la interaccin de la RNA polimerasa con su promotor. En la mayora de los
genes, ste es el punto de control ms importante. Probablemente sea el nivel
ms comn de regulacin. Hasta el momento no existen evidencias de control
en otras etapas de la transcripcin en las clulas eucariotas, como por ejemplo,
mediante mecanismos de antiterminacin. La regulacin de la transcripcin de
un gen especfico de tejido es la base de la diferenciacin eucariota, como por
ejemplo, las protenas que regulan el desarrollo embrionario que no son ms
que factores de transcripcin.
3._Nivel postranscripcional.
A nivel postranscripcional, la regulacin de la expresin de los genes eucariotas
se subdivide en:
Splicing diferencial.
Diferentes sitios de poliadenilacin.
Estabilidad de los mRNA.

Almacenamiento de los mRNA.


Existen varias formas alternas de splicing mediante las cuales, a partir de un
mismo gen, se obtiene una variedad de productos proteicos. Un sitio de splicing
puede permanecer constante y el otro variar.
4._Nivel traduccional.
Este nivel de regulacin es el menos conocido de todos. Parece ser que los
mecanismos que lo rigen juegan un papel importante en el almacenamiento
recin estudiado, ya que la traduccin depende de la liberacin de los mRNAs,
an cuando el almacenamiento sea breve. Tampoco todos los mRNAs que
llegan al citoplasma se traducen en protenas. A veces se encuentran mRNAs
que dirigen la sntesis proteica in vitro, aunque sus protenas correspondientes
no se sintetizan en las clulas de las cuales se obtuvo el mRNA. La posibilidad
de que un mRNA sea traducido en autnticas protenas in vitro, demuestra que
ste es capaz de funcionar como molde. De esta manera, su incapacidad de
ser traducido in vivo puede tomarse como evidencia del control traduccional.
Debe haber algunos mecanismos in vivo que eviten la traduccin.
5.-Nivel postraduccional.
Las

protenas

recin

sintetizadas

pueden

sufrir

modificaciones

postraduccionales que son, a su vez, una manera de controlar la expresin de


los genes en eucariontes. Esta regulacin puede ser cuantitativa o cualitativa.
Se trata de glicosilaciones, fosforilaciones, acetilaciones, ribosilaciones, etc. Se
puede dar el caso de poliprotenas que sufren cortes, mecanismo que es
comn en la sntesis de hormonas peptdicas como la insulina. La insulina est
formada por dos cadenas polipeptdicas. Primeramente se sintetiza una cadena
de 86 aminocidos que es la preproinsulina. Se elimina el pptido seal y
queda

la

proinsulina

con

62

aminocidos.

Sucede

un

plegamiento

tridimensional de la proinsulina que est estabilizado por enlaces disulfuros. A


continuacin se eliminan 31 aminocidos por cortes internos dando la insulina
activa.
Otra va de control es la activacin de enzimas por cortes proteolticos. La
forma precursora de muchas enzimas es inactiva. Se activan despus de ser
cortadas en puntos especficos como por ejemplo la quimotripsina. La unin de

grupos prostticos a glicoprotenas y lipoprotenas es otra forma de regulacin


de la expresin de los genes en eucariontes a nivel postraduccional.
Procurando el entendimiento del concepto de diferenciacin se hace
indispensable la mencin de conceptos como clula totipotente y clula
diferenciada:
Clula totipotente: son aquellas que contienen toda la informacin gentica
necesaria para desarollarse normalmente, esta no pierde su material
gentico como consecuencia de su desarrollo y diferenciacin.
Clula diferenciada: son clulas que pueden convertirse en cualquier otro
tipo de clula para realizar una funcin especializada.
A medida que los organismos se vuelven ms complejos, es necesaria la
distribucin del trabajo entre distintos tipos de clulas, y stas a su vez
deben especializarse para realizar con mayor eficiencia las distintas
funciones en todo el organismo.
Durante las divisiones sucesivas de la clula totipotente, clula de la que
provienen todas las clulas, ella experimenta cambios que vienen
programados en el ADN, que dan lugar a modificaciones en la forma,
elcomportamiento y la bioqumica de los distintos tipos celulares. Estos
cambios dan lugar a ventajas en la asociacin de distintos tipos de clulas
para su especializacin.
Por ejemplo: Una Clula muscular difiere de una clula nerviosa tanto en
estructura y funcin. Al compararlas con respecto al grado de
especializacin, las neuronas representan el mximo nivel de
especializacin ya que se encargan fundamentalmente de transmitir y
modular la transmisin de los impulsos nerviosos incluyendo impulsos
musculares. Otras clulas como las clulas sensoriales tambin tienen su
especializacin, pero en realidad son parte del sistema nervioso y pueden
considerarse como neuronas modificadas para la funcin que requiere el
organismo.
Partiendo de este mecanismo se puede comenzar a comprender algunos
aspectos de la regulacin de la expresin gentica en eucariotas.

Embriognesis
Se entiende que durante el desarrollo embrionario, diferentes grupos de
genes se activan o inactivan en diferentes tipos de clulas. Esta activacin o
desactivacin de la expresin gentica esta correlacionada con el grado de
condensacin de la cromatina, la cual puede tomar la forma de
eucromatina, que esta empaquetada dbilmente, o de heterocromatina, que
esta fuertemente empaquetada.
En los eucariotas multicelulares complejas, la secuencia codificadora de la
mayora de los genes estructurales no es continua, sino que contiene
intrones, que tambin se conocen como secuencias que se transcriben a
ARN en el ncleo, sin embargo no estn presentes en el ARNm del
citoplasma y as no se traducen a protenas. Los segmentos que estn

presentes en el ARNm citoplasmtico y que se transcriben a protena se


conocen como exones.
Un elemento de regulacin eucaritica lo constituyen los transposones
eucariticos que se asemejan a los de las procariotas en que, al insertarse
en el ADN activan o inactivan genes, ya sea interrumpiendo las secuencias
codificadoras o interfiriendo con la regulacin, en esta ltima lo hace por
ejemplo, generando una copia que se integra en otro lugar del genoma.
Tambin muchos transposones eucariticos difieren de
los de las procariotas en que los transposones primero
se transcriben a ARN y luego nuevamente a ADN, antes
de insertarse en otro sitio del cromosoma.
La diferenciacin celular se da bsicamente en 4 mecanismos:
Divisin celular asimtrica
Transcripcin selectiva
Translacin selectiva
Interaccin con el medio
La divisin celular asimtrica:
Cuando la clula realiza su primera fertilizacin celular. La clula madre
tiene elementos (protenas) de regulacin que no se duplican y es repartida
a la clula hija de manera desigual; cada clula hija recibe una copia
idntica de genoma y una dotacin distinta de protenas reguladora que
pueden detener o realizar la transcripcin, a esta se le llama protena
maestra, es por ello que cada clula sintetiza o degrada las protenas que se
necesita llevndose a cabo la diferenciacin celular.
Trascripcin Selectiva:
En las clulas eucariotas existen diferentes tipos de ARNm y es por ello que
el control de la informacin gentica en eucariotas se establece a nivel de la
trascripcin.
El proceso de trascripcin en los eucariotas es similar a los de los
procariotas. Existen sin embargo algunas diferencias. Los genes eucariotas
no se agrupan en operones como los de los procariotas. Cada gen eucariota
se transcribe separadamente, con un control transcripcional independiente
para cada gen. Luego que en el ncleo de la clula eucariota se transcribe
un ARN, el ARN transcripto es extensamente modificado antes de ser
exportado al citoplasma, etc.
Existen tres factores que participar en la regulacin de la transcripcin de
un gen especifico, los cuales son:
La estructura de la cromatina
Grado de metilacin del ADN.
Actividad de la maquinaria de la transcripcin

Estructura de la cromatina.
La cromatina, en el ADN de eucariotas, es un complejo en donde esta
empaquetado el ADN; las histonas constituyen una parte importante de este
complejo ya que forman las estructuras conocidas como nucleosomas. Los
genes que se transcriben estn dispuestos en estructuras poco
empaquetadas (cromatina activa) por lo que son ms sensibles a la accin
de las ADNasas, y en algunos casos algunas de las protenas de la cromatina
(histonas) influye sobre la actividad transcripcional de un gen especifico.
Grado de metilacin del ADN.
El grado de metilacin del gen parece afectar a su actividad, debido a que la
funcin celular especifica depende de cmo se expresen unos genes de
forma diferente a otros y el hecho de que unos estn ms metilados que
otros explica en parte su actividad diferenciada. Por ejemplo, el gen de la
globina esta muy metilado en tejidos que no sintetizan estas protenas,
como el hgado, mientras que en las clulas del sistema hematopoytico
que sintetizan hemoglobina se encuentra en niveles bajos de metilacin.
Esto afecta a la transcripcin por que al estar los genes mas metilados se
van a transcribir poder de manera especfica.
Actividad de la maquinaria de la transcripcin.
En el proceso de transcripcin existen protenas activadoras (elementos
trans) que regulan la actividad de algunos genes especficos y reprimen a
otros simultneamente. Estas protenas se unen a secuencias especficas
del ADN (elementos cis) que van activar la transcripcin de los genes que se
encuentran en esa secuencia del ADN.
Por ejemplo, la hormona tiroidea entra al citoplasma y se une con su
receptor cerca del ncleo formando el complejo hormona -receptor, los
llamados elementos de respuesta hormonal, favoreciendo la transcripcin
de los genes que en sus zonas reguladoras poseen una secuencia
HRE( Elemento de Respuesta Hormonal) adecuada, estos receptores son
factores de transcripcin que presentan un sitio de unin a su hormona y
otro especifico hacia el HRE en el ADN. ( Ver Esquema 6) Sexto Esquema:
Actividad de la maquinaria de la trascripcin
Post- Transcripcional :
Algunos genes eucariotas no tienen regulacin Post transcripcional, por lo
que forman parte de unidades sencillas que solo pasan por un nico
procesamiento (trascripcin), otros genes pertenecen a unidades de
trascripcin compleja en los que a partir de un transcrito primario se forman
diferentes ARNm, lo que origina protenas relacionadas pero diferentes,
como resultado que en estas unidades complejas existen varias seales de
poliadenilacion que permiten un procesamiento alternativo del ARN
primario. La variacin en el proceso de reconocimiento de sitios metilados
(splicing) da lugar a protenas diferentes pero con iguales secuencias de Nterminal. Un ejemplo, es la hormona calcitonina secretada por la tiroides y
en la hipofisis se sintetiza un peptido relacionado con el gen de calcitonina
(CGR)

Translacin selectiva:
Se da por medio de la poliadenilacin en el extremo 3 y metil-guanosina en
el extremo 5 (encasquetamiento), cuya finalidad es proteger los extremos
de la cadena de las endonucleasas y exonucleasas respectivamente, esto
genera selectividad ribosmica. As mismo, los pre-ARNm (inmaduro) que
son transcrito sin casquete no son funcionales y, por lo tanto, son memos
estables.
Los ARNm que tienen el casquete son ARNm estables ejerciendo gran
control sobre la translacin provocando as la sntesis continua de protenas
ya que estos ARNm actan ms rpido sobre los procesos de translacin.
Interaccin con el medio:
Consisten en la interaccin de una clulas en proceso de diferenciacin con
otras que le circundan. Uno de los tipos de interaccin celular se le llama
Interaccin con la Matriz extracelular que acta como reservorio de factores
de crecimiento que son sustancias que estimulan el crecimiento y la
diferenciacin de la clula en una direccindeterminada. A partir de unas
clulas previamente diferenciadas que liberan factores de crecimiento para
determinada clula o tejido, las nuevas clulas (predeterminadas) al hacer
contacto con un medio circundante sern atradas por las clulas viejas a las
cuales van a sustituir. A esto se le conoce como efecto de vecindad o
interaccin con el medio ambiente qumico.

Implicancias mdicas
Los organismos eucariotas disponen de un repertorio variado de transcritos
pequeos no codificantes (RNA que no codifican para protenas) de
aproximadamente 21-25 nucletidos (nt);1 cuyo papel como reguladores de
la expresin gnica es determinante en procesos de diferenciacin celular y
desarrollo, proliferacin, adquisicin y mantenimiento de un fenotipo dado,
entre muchos otros. Estos RNA pequeos asociados a complejos
multienzimticos son guiados para el reconocimiento de secuencias
complementarias en RNA mensajeros blanco (RNAm). La interaccin
funcional entre ambos deriva en la degradacin del RNAm y en la represin
traduccional y, en algunos casos, pueden causar modificaciones
epigenticas.
En funcin de su origen y tamao, los RNA pequeos se clasifican en varios
grupos. Recientemente, un grupo de estos RNA, llamados microRNA
(miRNA), ha cobrado gran importancia en el estudio de la regulacin gnica.
El primer miRNA descrito fue lin-4 que regula los diferentes estadios del
desarrollo de la larva C elegans. Desde entonces un gran nmero de miRNA
han sido identificados en el genoma de varias especies incluyendo al
humano, y el nmero de miRNAs sigue incrementndose debido a los
esfuerzos combinados de la biologa molecular y la prediccin
bioinformtica. Estos miRNA regulan la expresin gnica pos-transcripcional
al unirse por apareamiento imperfecto a sus RNAm blanco, generalmente en
la regin 3-no traducible, bloqueando la sntesis de protenas por
desestabilizacin del RNAm y represin traduccional.11 Se sabe, adems,
que juegan un papel importante en la regulacin de una variedad de

funciones celulares, as como en varias enfermedades incluyendo cncer y


diabetes mellitus.
El descubrimiento de los mecanismos de regulacin de la expresin gnica
ha permitido la generacin de nuevas alternativas para el estudio,
diagnstico y tratamiento de diversas enfermedades. Desde la primera
descripcin de miRNA en mamferos, se han efectuado diversos estudios con
enfoque teraputico; sin embargo, solamente son aplicables en aquellos
padecimientos en los que el mecanismo patognico de la enfermedad
implica alteraciones en la expresin gnica.
El miR-375, el cual es expresado en altos niveles en los islotes pancreticos,
es requerido para la homeostasis normal de la glucosa. Los modelos
animales carentes de este miRNA muestran un fenotipo hiperglicmico;
mientras que en los modelos animales obesos carentes del mismo miRNA
disminuye dramticamente la capacidad endocrina del pncreas, dando
como resultado un estado diabtico severo.51 Tambin, se ha reportado que
la sobre expresin de miR-30d incrementa la expresin de insulina, mientras
que su inhibicin bloquea la transcripcin del gen de insulina estimulada por
glucosa.52 Estos hallazgos aportan bases para continuar el estudio del
papel de los miRNAs en el desarrollo patognico de la diabetes mellitus, as
como en el desarrollo de esquemas teraputicos basados en miRNA.
Por otra parte, estudios de anlisis de perfiles de expresin en leucemias
agudas han revelado similitudes en el agrupamiento basado en riesgo o en
respuesta al tratamiento, o de acuerdo con su linaje, al comparar los perfiles
de expresin basados en genes codificantes y en miRNAs. Resultados
similares se han reportado para cncer de cabeza y cuello, tumores
cerebrales, cncer de colon y cncer de pulmn, por mencionar slo
algunos.
La importancia de este hallazgo radica en el potencial diagnstico que tiene
determinar la firma gentica basada en miRNA, ya que analizando un
menor nmero de transcritos no codificantes (miRNA) se obtiene el mismo
agrupamiento que analizando una gran cantidad de transcritos codificantes
(microarreglos de expresin).
Con estos ejemplos se demuestra el potencial diagnstico y pronstico que
se obtiene al analizar el perfil de expresin de miRNA.
Una propuesta teraputica reciente es el empleo del miR-203 en
procedimientos de terapia gnica para el tratamiento de enfermedades
oncognicas en las que la expresin del gen ABL juega un papel
fundamental en el mantenimiento y progresin de la enfermedad (linfomas
ABL+, y leucemias BCR-ABL +). Esta propuesta surge despus de un
extenso estudio en el que finalmente validan al gen ABL como diana de la
represin ejercida por miR-203.50
El bloqueo en la sntesis de algunos miRNA ha demostrado ser un potencial
blanco farmacolgico; tal es el caso de la molcula diazobenzona 2 que
bloquea la sntesis del miR-21, el cual est implicado en varios tipos de
cncer como los de cerebro, pulmn, colon, mama y ovario. Se espera que
en un futuro los tratamientos teraputicos con miRNA sintticos o

bloqueadores de la sntesis de miRNA provean terapias ms selectivas que


las drogas quimioteraputicas convencionales, y con menores efectos
adversos. Sin embargo, una regulacin errnea puede desencadenar la
sobre- o sub-expresin de genes que promuevan el desarrollo de algn tipo
de cncer u otra enfermedad, por lo que el estudio del papel de los miRNA
en la regulacin de la expresin gnica y la identificacin de todos sus
genes blanco permitir el diseo de drogas que bloqueen especficamente la
va patognica de padecimientos en los que la desregulacin de la expresin
gnica juegue un papel central.
El reciente descubrimiento de miRNA en suero y plasma en una forma
estable y protegidos de la actividad de RNAsas endgenas, abre la
posibilidad de emplearlos como biomarcadores en varios tipos de cncer y
otras enfermedades.12 Resultados in vitro revelan el potencial teraputico
de algunos miRNA que actan bloqueando la replicacin del virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH-1).59 Resultados similares han sido
obtenidos contra el virus de la hepatitis C (VHC) al sobre-expresar in vitro a
miR-199a, mostrando inhibicin de la replicacin viral.
Lo que sugiere que miR-199a regula negativamente la replicacin del VHC,
por lo que podra emplearse como una nueva terapia antiviral.
Conclusin
Desde su descubrimiento los miRNA han revolucionado y cambiado la
concepcin tradicional de los mecanismos de regulacin de la expresin
gnica. El estudio de los mecanismos de regulacin mediados por miRNA e
identificacin de sus genes blanco en enfermedades como cncer, diabetes
mellitus e infecciones virales, por mencionar slo algunas, han arrojado
resultados alentadores que aportan las bases para la aplicacin de los
miRNA en el diagnstico y pronstico de enfermedades, as como en el
desarrollo de nuevas opciones teraputicas ms selectivas y con menores o
nulos efectos adversos. En resumen, el estudio de los miRNA representa un
rea de oportunidad importante en la investigacin biomdica.

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