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ESTUDO FOTOQUMICO DA AO
ANTI-RADICALAR DE COMPOSTOS
POLIFENLICOS EMPREGANDO
ESPECTROFOTOMETRIA E HPLC-UV
DISSERTAO DE MESTRADO
por
Dissertao apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de PsGraduao em Qumica, rea de Concentrao em Qumica Analtica,
da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como requisito
parcial para obteno do grau de Mestre em Qumica Analtica
___________________________________________________________________
2010
Todos os direitos autorais reservados a Fernanda Oliveira Lima. A reproduo de
partes ou do todo deste trabalho s poder ser feita com autorizao por escrito do
autor.
Endereo: Rua Dezenove de Outubro, n. 439, apto 206, Bairro Centro, Iju, RS,
98700-000
Fone (0xx)55 33338813; End. Eletr: quimica.fernandalima@gmail.com
___________________________________________________________________
COMISO EXAMINADORA:
Eu amo vocs!
AGRADECIMENTOS
A Deus, pelo qual recebi o dom da vida e que me deu fora e coragem diante
s dificuldades;
A minha me, Carmen Marilia, sempre maravilhosa!!! Pela compreenso,
ensinamentos, apoio, pacincia e amor incondicional, por dedicar a sua vida pela
minha formao, e por sempre me dar o apoio de que precisei, acreditando fielmente
em meus sonhos. Sem voc eu no teria chegado at aqui... Obrigada! AMO VOC,
por certo, a melhor pessoa do mundo;
Universidade Federal de Santa Maria e ao Programa de Ps-Graduao em
Qumica pela oportunidade de realizao do curso.
Ao CNPq pela concesso da bolsa.
Ao professor Dr. Paulo Ccero do Nascimento, pela oportunidade, auxlio,
disponibilidade de tempo, ateno e pacincia.
Ao meu professor orientador, Dr. Leandro Machado de Carvalho, pelo auxlio,
pela disponibilidade de tempo, pela ateno dispensada, pela pacincia e pelo
conhecimento compartilhado durante a realizao deste trabalho.
Ao professore Dr. Marcelo Barcellos da Rosa pela co-orientao, apoio,
transmisso de conhecimentos e pela colaborao neste trabalho e na banca de
qualificao.
Ao professor Dr. Marcos Antonio Villette, membro da banca de qualificao,
pelas contribuies para o aprimoramento deste trabalho.
Aos professores Dr. Maurcio Reis Bogo e Dr. Ricardo Andrade Rebelo,
membro da comisso examinadora, pelas contribuies para o aprimoramento deste
trabalho.
A todos colegas do LACHEM, pelo apoio, incentivo e conselhos. Um
agradecimento especial as colegas e amigas Simoni Da Rs e Ana Paula Moreira,
pelo apoio experimental, e Alice Raabe, pelo carinho.
A Mariele Martini e Luis Ferras, pessoas importantssimas na minha vida
profissional e pessoal, companheiros e conselheiros para todos os momentos sendo
eles de alegria ou tristeza no enfrentamento das dificuldades. Adoro vocs!!!
A minha amiga e irm por afinidade Greice Franciele Fehy dos Santos
Montagner, pelo amor, carinho, dedicao, apoio e conselhos. Adoro voc!!!
A todos os professores e funcionrios que colaboraram indiretamente para o
desenvolvimento deste trabalho. Em especial ao Ademir e a Valeria, pelo incentivo e
disponibilidade sempre que precisei.
E, a todos que me ajudaram, direta ou indiretamente, na concretizao deste
trabalho.
A todos o meu muito obrigado!
"O futuro no um lugar onde estamos indo, mas um lugar que estamos
criando. O caminho para ele no encontrado, mas construdo e o ato de faz-lo
muda tanto o realizador quanto o destino". (Antoine de Saint-Exupery)
RESUMO
Dissertao de Mestrado
Programa de Ps-Graduao em Qumica
Universidade Federal de Santa Maria
no
reino
vegetal,
apresentam
propriedades
antiinflamatrias,
entre radicais HO e extratos de plantas com carter antioxidante pode ser realizado
pelo mtodo proposto.
ABSTRACT
Master Dissertation in Chemistry
Postgraduate in Chemistry
Federal University of Santa Maria
UV radiation and efficient in the fight against HO radical. The flavonoid quercitrin
was the most active compound, followed by rutin, kaempferol, fisetin, quercetin and
myricetin. The proposed methodology allows for quantitative comparison of the
antiradical action of the antioxidants based on the reaction kinetics of the species
with the HO radical. Similarly, the study in vitro the interaction between HO radicals
and plant extracts with antioxidant character can be accomplished by the proposed
method.
LISTA DE ILUSTRAES
Figura 12 Reao dos flavonides com os radicais livres peroxil (ROO) e hidroxil
(HO) [DENISOV & AFANASEV, 2005]. ......................................................................... 40
Figura 13 Reao de Fenton [ACKER et al., 1996; DENISOV & AFANASEV,
2005]. ..................................................................................................................................40
Figura 14 Reao do lumino com radicais alquil-peroxilas em meio alcalino para
gerao de luz. ..................................................................................................................43
Figura 15 Reao do DPPH com espcies antioxidantes [MOLYNEUX, 2004]......43
Figura 16 Reao do trolox com espcies antioxidantes [PANNALA, 2001; HUANG
et al., 2005]. .......................................................................................................................44
Figura 17 Representao esquemtica dos sistemas de irradiao UV
desenvolvidos: (A) reator com fonte de radiao lmpada de Hg; (a) lmpada de Hg
(80 W); (b) caixa de madeira revestida com papel alumnio; (c) cooler; (d) suporte
para os tubos de quartzo; (e) tubos de quartzo; (B) reator com fonte de irradiao
lmpada de W; (f) lmpada de W (150 W); (g) projetor; (h) caixa de madeira
revestida com papel alumnio; (i) cooler; (j) suporte para os tubos de quartzo. ......... 47
Figura 18 Lei de velocidade de uma reao de primeira ordem. ..............................50
Figura 19 Determinao da constante cintica aparente dos flavonides frente ao
radical HO. ........................................................................................................................50
Figura 20 Determinao do tempo de meia-vida de uma reao de primeira ordem.
............................................................................................................................................. 51
Figura 21 Reao de fotodecomposio do H2O2 [HALLIWELL; CLEMENTB;
LONG, 2000]......................................................................................................................52
Figura 22 Curva de calibrao do perxido de hidrognio, utilizada para
quantificao da fotodecomposio do H2O2. ................................................................ 53
Figura 23 Quantificao da fotodecomposio do H2O2 frente fotlise nos
reatores fotoqumicos desenvolvidos com fonte radiao de W (150 W) e de Hg (80
W); [H2O2]inicial = 0,29 mmol L-1.........................................................................................53
fase estacionria C18 Dionex (4,6 mm x 150 mm x 5 m), fase mvel acetonitrila
30 % (v/v), pH 4,00, com fluxo de 0,5 ml min-1, injeo de 20 L e presso varivel.
............................................................................................................................................. 62
Figura 33 Constante cintica em funo da concentrao de flavonide em estudo
frente fotlise na presena de H2O2, determinada por HPLC-UV.............................64
Figura 34 Constante cintica em funo da concentrao de flavonide,
determinada por espectrofotometria UV-Vis dos flavonides em estudo frente
fotlise em presena de H2O2. .........................................................................................64
Figura 35 Constante cintica verus concentrao de flavonide, determinada por
HPLC-UV dos flavonides em estudo frente fotlise em presena de H2O2. .......... 65
Figura 36 Regies estrutura com maior atividade antioxidante [AMIC et al., 2003].
............................................................................................................................................. 66
LISTA DE TABELAS
Constantes
cinticas
dos
favonides
determinadas
por
espectrofotometria UV-Vis........................................................................................ 63
LISTA DE ANEXOS
DADOS
CINTICOS
DOS
COMPOSTOS
POLIFENLICOS
LISTA DE ABREVIATURAS
ABTS
cido 2,2-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfnico)
ALA
cido -lipico
Asc-
Ascorbato
CAT
Catalase
DHLA
cido dihidrolipoico
DNA
cido desoxiribonuclico
DPPH
1,1-difenil-2-picrilhidrazil
EDTA
cido etilenodiaminotetractico
EROs
GPx
Glutationa peroxidase
Gred
Glutationa redutase
GSH
Glutationa reduzida
GSSG
Glutationa oxidada
H2O
gua
H2O2
Perxido de hidrognio
HO
Hidroxila
HO2
Hidroperoxila
HPLC
Constante cintica
kOH
Radical lipdico
LDL
LH
LO
Lipdicos alcoxil
LOO
NAD(P)H
O2
Oxignio
O2-
Superxido
ROO
Peroxil
SOD
Superxido dismutase
TO
Vitamina E
T-OH
Vitamina E reduzida
UV
Radiao ultravioleta
Vis
Radiao visvel
SUMRIO
INTRODUO ............................................................................................................................. 23
REVISO BIBLIOGRFICA...................................................................................................... 25
2.1
2.1.1.2
2.1.1.3
2.1.1.4
2.3
Reduo do -caroteno..................................................................................................... 42
2.3.1.2
2.3.2.2
MATERIAL E MTODOS........................................................................................................... 45
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
4
4.1
23
1 INTRODUO
compostos
amplamente
polifenlicos,
distribudos
no
um
reino
grupo
de
vegetal,
metablitos
secundrios,
apresentam
propriedades
onde foi produzido, confirma sua alta reatividade. Assim, se o radical HO for
produzido prximo ao DNA, podero ocorrer modificaes de bases nitrogenadas,
24
radical HO . Uma vez que, quanto mais lenta for a reao (antioxidante + radical),
maior ser a ao antioxidante do composto polifenlico.
As constantes cinticas obtidas da reao de compostos polifenlicos +
(antioxidante)
dos
compostos
polifenlicos
canferol,
fisetina,
25
2 REVISO BIBLIOGRFICA
2.1
26
leses
isqumicas,
oxidao
de
LDL
colesterol,
reaes
27
O2 ( O O )
e
(H O O ) HO-2
O-2 ( O O )2H+
e-
H2O2 (H O O H)
H+
H2O
OH ( O H)
H2O (H O H)
Figura 1 Reduo tetravalente do oxignio molecular (O2) na mitocndria at a formao de gua
(H2O). Vrias espcies reativas de O2 so formadas no processo [FERREIRA & MATSUBARA, 1997].
ocorre de forma
28
29
30
HO + AntH H 2 O + Ant
ROO + AntH ROOH + Ant
Figura 2 Reao direta dos antioxidantes com os radicais livres hidroxil (HO ) e peroxil (ROO )
[DENISOV & AFANASEV, 2005].
31
HO
CH(OH)CH2OH
OH
AH 2 + R AH + RH
AH 2 + Fe 3+ AH + Fe 2+ + H +
Figura 4 Reao entre um antioxidante e com radicais livres e com on frrico [DENISOV &
AFANASEV, 2005].
32
O -tocoferol, tambm conhecido como vitamina E, (Figura 5) um derivado
fenlico lipossolvel, que apresenta um grupo hidroxila muito ativo que
responsvel pela grande capacidade antioxidante desta vitamina [PIETTA, 2000;
DENISOV & AFANASEV, 2005].
Me
HO
Me
Me
Me
O
3
Me
Figura 5 Estrutura qumica do -tocoferol [LEHNINGER, 2005].
33
de
GSH
pode
contribuir
para
patognese
de
doenas
Antioxidantes
Endgenos
Exgenos
Superxido dismutase (SOD): Vitaminas, zinco, cobre,
Superxido (O2-)
a) citoplasmtica: Zinco-Cobre mangans, picnogenol,
b) mitocondrial: Mangans
EDTA
Glutationa peroxidase, selnio,
Vitamina E, selnio
Radical peroxil (ROO)
cistena
Vitamina C, picnogenol,
dimetil sulfxido, EDTA,
34
35
reao (8), o LOO reduzido dentro da membrana pela forma reduzida da vitamina
E (T-OH), resultando na formao de um hidroperxido lipdico e um radical da
vitamina E (TO). Na reao (9), ocorre a regenerao da vitamina E pela vitamina C:
Na reao (10), a regenerao da vitamina E por GSH. Na reao (11), a glutationa
oxidada (GSSG) e do radical ascorbil (Asc-) so reduzidos de volta para GSH e
ascorbato mononion, Asch, respectivamente, pelo cido dihidrolipico (DHLA), que
convertido ao cido -lipico (ALA). Na reao (12), ocorre a regenerao da
DHLA da ALA usando NADPH. Na reao (13), os hidroperxidos lipdicos so
reduzidos a lcoois e dioxignio pela GPx usando GSH como doador de eltrons. Na
reao (14), radicais hidroperxidos lipdicos podem reagir rapidamente com Fe2+
para formar os radicais lipdicos alcoxil (LO), ou muito mais lento com Fe3+ para
formar os radicais lipdicos peroxil, ocorrendo, por fim, o processo de peroxidao
lipdica. [VALKO et al., 2007].
2.2
36
3'
8
7
1
O
2'
1'
2
4'
B
5'
6'
Figura 9 Estrutura bsica dos flavonides [ACKER ET al., 1996; PIETTA, 2000; HEIM,
TAGLIAFERRO & BOBILYA, 2002; HAVSTEEN, 2002; DENISOV & AFANASEV, 2005].
como:
flavonas,
flavanis,
flavonis,
diidroflavonis,
antocianidinas
37
38
.
Figura 10 Principais rotas biossintticas dos flavanides [ACKER ET al., 1996; PIETTA, 2000;
FORKMANN & MARTENS, 2001; HEIM, TAGLIAFERRO & BOBILYA, 2002; HAVSTEEN, 2002;
DENISOV & AFANASEV, 2005].
39
O
H
O
H
Canferol
Fisetina
H
O
H
O H
H
O
H
O
O
Miricetina
Quercetina
H
O
O H
O H
H
O
H
O
H
O
O
Quercitrina
Figura 11 Estrutura qumica dos flavonides estudados neste trabalho.
Rutina
40
Figura 12 Reao dos flavonides com os radicais livres peroxil (ROO ) e hidroxil (HO ) [DENISOV
& AFANASEV, 2005].
O2 + Fe 3 + O2 + Fe 2 +
Fe 2 + + H 2 O2 Fe 3 + + HO + HO
Figura 13 Reao de Fenton [ACKER et al., 1996; DENISOV & AFANASEV, 2005].
41
2.3
42
43
O
C
ROO
+
C
O
NH pH>9
NH
C
C
NH2 O
OO-
NH2 O
OO-
+ Luz
NH2 O
Figura 14 Reao do lumino com radicais alquil-peroxilas em meio alcalino para gerao de luz.
N
O2N
NO2
NO2
DPPH (max=517nm)
NH
A-H
O2N
NO2
NO2
DPPH-H (incolor)
44
-O S
3
N*
H5 C2
C2 H5
(max=734nm)
N
+ antioxidante
-K2SO5
SO3-
ABTS
-O S
3
*+
SO3-
H5C2
C2 H5
ABTS (incolor)
Figura 16 Reao do trolox com espcies antioxidantes [PANNALA, 2001; HUANG et al., 2005].
45
3 MATERIAL E MTODOS
3.1
Reagentes e solues
3.2
Reatores fotoqumicos
46
que empregam lmpadas de alta potncia que provocam uma alta velocidade
reacional de formao do radical OH, alm de degradar o antioxidante em pouco
segundos por fotlise direta e por reaes secundrias.
Portanto, neste trabalho foram construdos dois sistemas de irradiao,
denominados
reatores
fotoqumicos,
diferenciados
pela
fonte
de
radiao
47
48
3.3
3.4
49
3.5
radical HO .
3.6
50
M).
[A]
= kt
ln
[A0 ]
Figura 18 Lei de velocidade de uma reao de primeira ordem.
determinao
da
constante
cintica
aparente
dos
compostos
kOH + h k h = kOH
51
Aps
determinao
da
constante
cintica
aparente
dos
compostos
t1 / 2 =
ln 2
k OH
52
4 RESULTADOS E DISCUSSO
4.1
uv
H 2 O2 2 HO
Figura 21 Reao de fotodecomposio do H2O2 [HALLIWELL; CLEMENTB; LONG, 2000].
formada durante os
53
radical HO que o reator fotoqumico (B) com fonte de radiao W (150 W), conforme
Figura 23.
1,8
220nm
230nm
240nm
1,6
r=0,99841
1,4
Abs (uA)
1,2
1,0
r=0,99990
0,8
0,6
r=0,99992
0,4
0,2
0,0
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
0,45
0,50
Concentrao (mM)
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
ReatorA - Lmpada de Hg (80 W)
ReatorB - Lmpada de W (150 W)
0,00
0
10
20
30
40
50
60
Tempo (min)
54
a partir da
0,60
Perxido de Hidrognio (H2O2)
0,55
Radical OH
0,50
Concentrao (mM)
0,45
0,40
0,35
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0
10
20
30
40
50
60
Tempo (min)
55
56
0,0
-0,5
-1,0
ln (A/A0)
-1,5
-2,0
-2,5
-3,0
Rutina - 18,1 M
Fisetina - 38,4 M
Quercetina - 9,8 M
-3,5
-4,0
0
10
20
30
40
50
60
Tempo (min)
Figura 25 Estudo do decaimento do sinal dos flavonides fisetina, quercetina e rutina frente
fotlise direta no reator fotoqumico (A) com fonte radiao de Hg (80 W).
0,0
-0,5
-1,0
ln(A/A0)
-1,5
-2,0
-2,5
-3,0
Rutina - 15,9 M
Fisetina - 34,9 M
Quercetina - 29,8 M
-3,5
-4,0
0
10
20
30
40
50
60
Tempo (min)
Figura 26 Estudo do decaimento do sinal dos flavonides fisetina, quercetina e rutina frente
fotlise direta no reator fotoqumico (B) com fonte radiao de W (150 W).
57
4.2
radical HO .
58
0,0
-0,5
-1,0
ln(A/A0)
-1,5
-2,0
-2,5
-3,0
Rutin - 18,1 M
Fisetin - 38,4 M
Quercetin - 9,8 M
-3,5
-4,0
0
10
20
30
40
50
60
Tempo (min)
Figura 27 Estudo do decaimento do sinal dos flavonides fisetina, quercetina e rutina frente a
fotlise na presena de H2O2 no reator fotoqumico (A) com fonte radiao de Hg (80 W); [H2O2] =
-1
0,29 a 2,90 mmol L .
0,0
-0,5
-1,0
ln(A/A0)
-1,5
-2,0
-2,5
-3,0
Rutin - 15,9 M
Fisetin - 34,9 M
Quercetin - 29,8 M
-3,5
-4,0
0
10
20
30
40
50
60
Tempo (min)
Figura 28 Estudo do decaimento do sinal dos flavonides fisetina, quercetina e rutina frente a
fotlise na presena de H2O2. Reator fotoqumico (B) com fonte radiao de W (150 W); [H2O2] =
0,29 a 2,90 mmol L-1.
59
Como pode ser observado na Figura 27, no reator fotoqumico (A) com a fonte
de radiao lmpada de Hg o decaimento do sinal de absorvncia foi mais
acentuado do que no reator com fonte de radiao lmpada de W (Figura 28). Isto
pode ser explicado pelo fato de que a lmpada de Hg apresenta uma eficincia
maior na fotodecomposio do H2O2 do que a lmpada de W, como discutido
anteriormente no item 4.1.1.
Com isso, a concentrao de H2O2 adicionada foi fixada em 0,29 mmol.L-1, j
que o decaimento das espcies antioxidantes independe da concentrao de H2O2
adicionada (Figura 27 e 28) nos reatores fotoqumicos.
60
0,0
0,0
Quercitrina
-0,2
-0,4
-0,2
-0,6
-0,4
Rutina
ln(A/A0)
-0,8
-1,0
-1,2
-1,4
-1,6
-0,6
-1,8
(A)
-2,0
-2,2
ln(A/A0)
-0,8
10
20
Canferol
30
40
50
60
Tempo (min)
-1,0
-1,2
-1,4
Fisetina
-1,6
Quercetina
-1,8
-2,0
(B)
Miricetina
-2,2
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100 110
Tempo (min)
Figura 29 Decaimento cintico dos flavonides quercitrina, rutina, canferol, fisetina, quercetina e
miricetina frente fotlise na presena de H2O2, no reator com fonte de radiao lmpada de Hg (80
-1
-1
W); anlise por espectrofotometria UV-Vis; [H2O2] = 0,29 mmol.L ; [flavonides] = 50 mol.L . (A)
fotlise direta e (B) fotlise na presena de H2O2.
0,0
0,0
-0,2
-0,4
Quercitrina
-0,2
-0,6
ln(A/A0)
-0,8
-0,4
-1,2
-1,4
Rutina
-0,6
-1,0
-1,6
-1,8
(A)
-2,0
-2,2
ln(A/A0)
-0,8
10
20
Canferol
30
40
50
60
Tempo (min)
-1,0
-1,2
-1,4
Fisetina
-1,6
Quercetina
-1,8
-2,0
(B)
Miricetina
-2,2
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100 110
Tempo (min)
Figura 30 Decaimento cintico dos compostos polifenlicos rutina, quercitrina, canferol, fisetina,
quercetina e miricetina frente fotlise na presena de H2O2, no reator com fonte de radiao
-1
-1
lmpada de Hg (80 W); anlise por HPLC; [H2O2] = 0,29 mmol.L ; [flavonides] = 50 mol.L . (A)
fotlise direta e (B) fotlise na presena de H2O2.
61
Na
Figura
31
32
so
apresentados,
respectivamente,
os
1,50
1,50
-1
L*mol *cm )
1,25
-1
1,00
/ (10
0,75
0,50
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
1,25
Absorvncia / a.u.
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
0,25
1,00
0,75
0,50
0,25
Canferol 49,98 M
Fisetina 50,32 M
0,00
0,00
250
300
350
400
450
250
300
/ nm
1,50
-1
1,00
-1
-1
0,75
/ (10
0,75
L*mol *cm )
-1
L*mol *cm )
1,00
/ (10
450
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
1,25
0,50
0,25
0,50
0,25
Miricetina 50,05 M
Quercetina 50,01 M
0,00
0,00
250
300
350
400
450
250
300
/ nm
350
400
450
/ nm
1,50
1,50
-1
0,75
/ (10
0,75
1,00
-1
-1
-1
1,00
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
1,25
L*mol *cm )
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
1,25
L*mol *cm )
400
1,50
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
1,25
/ (10
350
/ nm
0,50
0,25
0,50
0,25
Quercitrina 50,10 M
Rutina 49,99 M
0,00
0,00
250
300
350
/ nm
400
450
250
300
350
400
450
/ nm
62
120
35
Fisetina 49,94 M
Canferol 49,98 M
30
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
20
15
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
80
Abs (mAU)
Abs (mAU)
25
100
60
40
10
20
0
0
12
15
18
21 24
27
30
33 36
39
1
0,5
0,0
42
2
1,0
3
1,5
5
2,5
2,0
4
6
3,0
7
3,5
8
4,0
4,5
9
10
5,0
11
5,5
Tempo (min)
Tempo (min)
100
Miricetina 50,05 M
100
60
40
60
40
20
20
0
0
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
80
Abs (mAU)
80
Abs (mAU)
Quercetina 50,01 M
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
10
Tempo (min)
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Tempo (min)
180
Quercitrina 50,10 M
160
Abs (mAU)
120
100
80
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
80
Abs (mAU)
140
Rutina 49,99 M
100
0min
10min
20min
30min
40min
50min
60min
60
40
60
40
20
20
0
0
0
Tempo (min)
Tempo (min)
63
Flavonides
Quercitrina
Rutina
Canferol
Fisetina
Quercetina
Miricetina
HPLC-UV
Concentrao Espectrofotometria UV-Vis
-1
(M)
kOH (min )
tOH (min)
kOH (min-1)
tOH (min)
-3
-3
25,05
3,13 x10
221,45
4,65 x10
149,06
-3
-3
50,10
2,07 x10
334,85
2,72 x10
254,83
-3
-3
0,98 x10
707,29
1,43 x10
484,72
75,15
-3
-3
24,97
7,14 x10
97,08
13,80 x10
50,23
-3
-3
49,99
4,11 x10
168,65
5,81 x10
119,30
-3
-3
1,02 x10
679,56
2,67 x10
259,61
70,93
-3
-3
24,99
11,58 x10
59,86
16,77 x10
41,33
-3
-3
49,98
8,55 x10
81,07
11,28 x10
61,45
-3
-3
8,08 x10
85,79
5,96 x10
116,30
74,97
-3
-3
25,00
31,04 x10
22,33
39,78 x10
17,42
-3
-3
49,94
19,06 x10
36,37
18,56 x10
37,35
-3
-3
10,46 x10
66,27
12,77 x10
54,28
75,04
-3
-3
25,00
40,88 x10
16,96
54,94 x10
12,62
-3
-3
50,01
21,63 x10
32,05
24,09 x10
28,77
-3
-3
9,930 x10
69,80
10,97 x10
63,19
75,06
-3
-3
25,03
48,86 x10
14,19
102,04 x10
6,79
-3
-3
50,05
23,64 x10
29,32
41,00 x10
16,91
-3
-3
9,120 x10
76,00
16,76 x10
41,36
75,03
64
Quercitrina
Rutina
Canferol
Fisetina
Quercetina
Miricetina
-1
0,10
0,08
0,06
0,04
0,02
0,00
25
50
75
M para cada
Miricetina (r=0,9858)
Quercetina (r=0,9910)
Fisetina (r=0,9944)
Canferol (r=0,9628)
Rutina (r=0,9990)
Quercitrina (r=0,9987)
0,06
-1
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0,00
20
30
40
50
60
70
80
65
Miricetina (r=0,9858)
Quercetina (r=0,9910)
Fisetina (r=0,9944)
Canferol (r=0,9999)
Rutina (r=0,9990)
Quercitrina (r=0,9987)
0,06
-1
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0,00
20
30
40
50
60
70
80
Figura 35 Constante cintica verus concentrao de flavonide, determinada por HPLC-UV dos
flavonides em estudo frente fotlise em presena de H2O2.
66
2001; BURDA & OLESZEK, 2001; TAGLIAFERRO & BOBILYA, 2002; HAVSTEEN,
2002; AMIC et al. 2003; DENISOV, 2005; SEYOUM et al., 2006].
Os flavonides hidroxilados estudados se diferem pela localizao dos grupos
a fisetina que possui um grupo HO na posio 7 (anel A). Este resultado corrobora
com publicaes que afirmam a diminuio da atividade antioxidante em flavonides
que apresentam grupos hidroxila nas posies 5 e/ou 6 do anel [PIETTA, 2000;
PANNALA et al., 2001]
Alm disso, quando comparamos o caso do canferol com o da fisetina,
Figura 36 Regies estrutura com maior atividade antioxidante [AMIC et al., 2003].
67
radicais HO .
Neste trabalho foram estudados dois flavonides glicosilados, a quercitrina e
a rutina. A nica diferena entre estes flavonides o grupamento glicosdico, em
que a quercitrina possui um ramnopiranosil e a rutina um rutinosdeo-quercetina.
Com relao capacidade anti-radicalar, a quercitrina apresentou maior eficincia
do que a rutina. Este fato leva deduo de que a rutina, em relao quercitrina,
sofre um maior impedimento estereoqumico, e por isso foi menos eficiente no
combate ao radical livre. importante destacar, no entanto, que estudos sobre a
relao estrutura-atividade antioxidante de flavonides glicosdicos so ainda
bastante controversos [HOPIA & HEINONEN, 1999].
68
CONCLUSES
HO e extratos de plantas com carter antioxidante pode ser realizado pelo mtodo
proposto.
69
70
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
71
antioxidant
activity.
Songklanakarin
Journal
of
Science
and
72
73
ANEXOS
74
Canferol
286,24
C15H10O6
3,5,7-trihidroxi-2-(4hidroxifenil)cromen-4-one
6,93 0.60
Fisetina
286,24
C15H10O6
2-(3,4-dihidroxifenil)-3,7dihidroxicromen-4-one
()
Miricetina
318,24
C15H10O8
3,5,7-trihidroxi-2-(3,4,5trihidroxiphenil)cromen-4-one
6,88 0.60
Quercetina
302,24
C15H10O7
2-(3,4-dihidroxifenil)-3,5,7trihidroxicromen-4-one
6,89 0.60
C21H20O11
2-(3,4-dihidroxifenil)-5,7-dihidroxi3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5trihidroxi-6-metiloxan-2il]oxicromen-4-one
()
C27H30O16
2-(3,4-dihidrofenil)-5,7-dihidroxi-3[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihidroxi6-[[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,56,83 0.60
trihidroxi-6-metiloxan-2il]oximetil]oxan-2-il]oxicromen-4one
Quercitrina
Rutina
448,38
610,52
() No encontrado na literatura.
Fonte: PubChem Publi Chemical Database.
Estrutura qumica
75
30
30
O
25
267
367
20
25
H
/ (10
10
249
15
10
Fisetina
0
250
300
350
400
250
300
350
/ nm
30
O
49,8 M
pH6,32
2
T=303K
376 pKa=6,88
H
O
-1
L*mol *cm )
1
20
255
O
O H
256
H
375
50,5 M
pH6,32
T=303K
pKa=6,89
20
H
-1
-1
D)
25
-1
25
L*mol *cm )
C)
15
/ (10
15
/ (10
400
/ nm
30
10
10
Miricetina
Quercetina
0
250
300
350
400
250
300
350
/ nm
30
48,8 M
pH6,32
T=303K
O
O H
O
O
O
-1
15
O
O
H
20
354
360
O
O
H
15
O
H
/ (10
1
258
-1
-1
257
50,0 M
pH6,32
T=303K
pKa=6,83
O
O H
25
-1
25
F)
L*mol *cm )
E)
20
400
/ nm
30
L*mol *cm )
364
Canferol
/ (10
20
50,3 M
pH6,32
T=303K
15
/ (10
B)
-1
-1
44,0 M
pH6,32
T=303K
pKa=6,93
-1
-1
L*mol *cm )
L*mol *cm )
A)
10
10
Rutina
Quercitrina
0
0
250
300
350
/ nm
400
250
300
350
/ nm
400
450
76
Flavonide
Lmpada Conc.
do reator (M)
W (150 W)
Hg (80 W)
W (150 W)
Fisetina
Hg (80 W)
W (150 W)
Quercetina
Hg (80 W)
Rutina
15,87
18,05
34,94
38,43
28,97
29,55
kOH
(min-1)
k h
(min-1)
kh+OH
(min-1)
0,64x10-3
3,38x10-3
2,59x10-3
3,51x10-3
1,08x10-3
3,82x10-3
3,05x10-3
29,92x10-3
9,50x10-3
45,12x10-3
10,58x10-3
48,96x10-3
th
(min)
2,41x10-3 1083,04
26,54x10-3 205,07
6,910x10-3 267,62
41,61x10-3 197,48
9,50x10-3 641,80
45,14x10-3 181,45
th+OH tOH
(min) (min)
227,26
234,05
72,96
8,66
65,51
13,05
287,61
307,33
100,31
9,55
72,96
14,34
Tabela 2 Dados cinticos dos compostos polifenlicos estudados frente a fotlise e ao radical HO ;
determinados por espectrofotometria UV-Vis; [H2O2] = 0,29 mmol L-1.
Flavonide
Quercitrina
Rutina
Canferol
Fisetina
Quercetina
Miricetina
Conc.
(M)
25,05
50,10
75,15
24,97
49,99
70,93
24,99
49,98
74,97
25,00
49,94
75,04
25,00
50,01
75,06
25,03
50,05
75,03
k h
th
-1
(min )
(min)
0,98 x10-3 707,29
0,39 x10-3 1777,30
0,10 x10-3 6931,47
1,38 x10-3 502,28
1,09 x10-3 635,91
0,93 x10-3 745,32
2,24 x10-3 309,44
1,79 x10-3 387,23
1,01 x10-3 686,28
4,82 x10-3 143,81
2,91 x10-3 238,19
1,86 x10-3 372,66
4,05 x10-3 171,15
2,95 x10-3 234,97
1,99 x10-3 348,32
7,65 x10-3 90,61
4,10 x10-3 169,06
2,98 x10-3 232,60
r
0,9768
0,9871
0,9990
0,9904
0,9956
0,9903
0,9940
0,9973
0,9971
0,9947
0,9910
0,9997
0,9865
0,9891
0,9972
0,9971
0,9995
0,9943
kh+OH
(min-1)
4,11 x10-3
2,46 x10-3
1,08 x10-3
8,52 x10-3
5,20 x10-3
1,95 x10-3
13,82 x10-3
10,34 x10-3
90,90 x10-3
35,86 x10-3
21,97 x10-3
12,32 x10-3
44,93 x10-3
24,58 x10-3
11,92 x10-3
56,51 x10-3
27,74 x10-3
12,10 x10-3
th+OH
(min)
168,65
281,77
641,80
81,36
133,30
355,46
50,16
67,04
76,25
19,33
31,55
56,26
15,43
28,20
58,15
12,27
24,99
57,28
kOH/kh
0,9701
0,9820
0,9994
0,9842
0,9936
0,9989
0,9964
0,9951
0,9954
0,9893
0,9949
0,9992
0,9841
0,9972
0,9887
0,9993
0,9974
0,9891
4,19
6,31
10,80
6,17
4,77
2,10
6,17
5,78
9,00
7,44
7,55
6,62
11,09
8,33
5,99
7,39
6,77
4,06
-1
Miricetina
Quercetina
Fisetina
Canferol
Rutina
Quercitrina
Flavonide
Conc. (M)
25,05
50,10
75,15
24,97
49,99
70,93
24,99
49,98
74,97
25,00
49,94
75,04
25,00
50,01
75,06
25,03
50,05
75,03
kh (min-1)
(1,680,07) x10-3
(1,260,04) x10-3
(0,960,02) x10-3
(2,020,05) x10-3
(1,670,03) x10-3
(0,960,03) x10-3
(1,940,10) x10-3
(1,550,06) x10-3
(0,860,05) x10-3
(4,940,17) x10-3
(3,280,12) x10-3
(1,950,09) x10-3
(5,790,08) x10-3
(3,580,05) x10-3
(2,240,03) x10-3
(10,140,17) x10-3
(4,120,09) x10-3
(2,940,06) x10-3
th (min)
412,59
550,12
722,03
343,14
415,06
722,03
357,29
447,19
805,99
140,31
211,33
355,46
119,71
193,62
309,44
68,36
168,24
235,76
r
0,9966
0,9863
0,9982
0,9990
0,9966
0,9972
0,9833
0,9885
0,9955
0,9818
0,9929
0,9921
0,9959
0,9986
0,9984
0,9980
0,9999
0,9846
kh+OH (min-1)
(6,330,64) x10-3
(3,980,41) x10-3
(2,390,37) x10-3
(15,820,78) x10-3
(7,480,53) x10-3
(3,630,46) x10-3
(18,710,52) x10-3
(12,830,37) x10-3
(6,820,28) x10-3
(44,720,32) x10-3
(21,840,26) x10-3
(14,720,20) x10-3
(60,730,80) x10-3
(27,671,07) x10-3
(13,211,16) x10-3
(112,180,09) x10-3
(45,120,86) x10-3
(19,700,69) x10-3
th+OH (min)
109,50
174,16
290,02
43,81
92,67
190,95
37,05
54,03
101,63
15,50
31,74
47,09
11,41
25,05
52,47
6,18
15,36
35,19
r
0,9864
0,9906
0,9896
0,9985
0,9991
0,9947
0,9981
0,9938
0,9955
0,9858
0,9964
0,9560
0,9944
0,9986
0,9991
0,9892
0,9996
0,9861
Tabela 3 Dados cinticos dos compostos polifenlicos estudados frente ao radical HO ; determinados por HPLC; [H2O2] = 0,29 mmol L .
kOH/kh
3,77
3,16
2,49
7,83
4,48
3,78
9,64
8,28
7,93
9,05
6,66
7,55
10,49
7,73
5,90
11,06
10,95
6,70
77