RESULTADOS

En el anlisis de la separacin de aminocidos o de biomolculas mediante cromatografa, este anlisis

bioqumico clsico incluye una amplia gama de tcnicas que se diferencian de acuerdo a sus propiedades
fisicoqumias como lo es el caso de la cromatografa en papel, tcnica empleada en esta separacin de
diferentes aminocidos.2
Estas tcnicas de separacin intentan utilizar las diferencias fsicas, biolgicas y qumicas de las biomolculas
a analizar, es importante destacar algunas propiedades que ayudan a dicha separacin, entren las cuales se
encuentran; La diferencia de solubilidad de las biomolculas con solventes orgnicos o acuosos, la diferencia
entre tamao y forma de los aminocidos, las diferencias de carga, entre otras. La separacin de diferentes
biomolculas estn influenciados por diferentes condiciones del medio en donde se encuentran tales como
Temperatura, pH, Fuerza ionica.2
Las biomolculas utilizadas para esta separacin se muestran en la tabla 1. Adems se utiliz una mezcla de
estos aminocidos para su separacin, tambin se muestra el pH tomado en las soluciones al 1% de cada
uno de los aminocidos, estos pH son aproximados ya que fueron tomados con un papel tornasol.
Tabla 1. Aminocidos empleados en la separacin mediante cromatografa de papel y su pH aproximado.
NOMBRE
Alanina

ESTRUCTURA

pH
5-6

cido
asprtico

4-5

Leucina

6-7

El cido asprtico tiene un carcter un poco ms cido debido a sus dos grupos COOH en la cadena, por lo
tanto el pH de este aminocido dio como resultado entre 4-5.
En la figura 1. Se muestra en cromatograma de la separacin de aminocidos y la mezcla.

Figura 1. Cromatograma obtenido en la separacin de aminocidos.

Para el clculo del Rf es necesario utilizar la ecuacin nmero 1.

Rf =

distanciadesde el punto de aplicacin hastael centro de lamancha

dostancia delrecorrido del solvente

Donde la distancia del recorrido del solvente es de 9,4 cm y los resultados del Rf para cada uno de los
aminocidos se muestra en la tabla 2.
Tabla 2. Calculado del factor de retencin para cada uno de los aminocidos empleados en la separacin.
Aminocido
al 1%
Alanina
cido
asprtico
Leucina

Distancia al
centro (cm)
1,5
0,5

Rf calculado

3,8

0,5106

0,1595
0,0532

Estos aminocidos fueron tomados como estndares para el anlisis de la separacin de una mezcla que
contiene los mismos componentes o aminocidos. En la tabla 3. Se muestra las distancias de las tres
manchas obtenidas en la separacin cromatografica de la mezcla analizada con su respectivo factor de
retencin.
Tabla 3. Calculo del factor de retencin de la mezcla de aminocidos.

Nmero de
manchas
1
2
3

Mezcla
de
aminocidos
distancia
1,3
2,5
4,3

Facto de
retencin
0,1383
0,2659
0,4574

Segn los valores de Rf calculados con los aminocidos estndares que se presentan en la tabla 2. Se puede
concluir que la mancha 1 obtenido en la mezcla de aminocidos corresponde al cido asprtico, la mancha
nmero 2 a la Alanina y la mancha nmero 3 corresponde a la Leucina.
Por otra parte se realizaron anlisis cualitativos para aminocidos, los aminocidos que conforman los
organismos vivos son en su totalidad levogilos es decir orientan la luz hacia la izquierda.
Uno de los anlisis cualitativos de aminocidos es la reaccin con ninhidrina, esta tcnica utilizada para la
identificacin y determinacin cuantitativa de aminocidos da una reaccin coloreada. La ninhidrina
descarboxila y desamina al aminocido gracias a su fuerte poder oxidante. La ninhidrina reducida formada
reacciona con una molcula de ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de la desanimacin para
formar un compuesto complejo que presenta un color violeta. De esta forma se puede determinar
cuantitativamente los aminocidos. La coloracin violeta es sensible para todos los aminocidos, su espectro
de absorcin representa un mximo en 570 nm, algunos aminocidos como la prolina y la hidroxiprolina en
reaccin con la ninhidrina reflejan un color amarillo y su espectro esta alrededor de 440 nm. 3 En la figura 2.
Se muestra la reaccin general de los aminocidos con ninhidrina.

Figura 2. Reaccin general de los aminocidos mediante la prueba con ninhidrina.

Siendo esta prueba una prueba general para el anlisis cualitativo de aminocidos.
En la Reaccin Xantoproteica, el sistema de anillos presentes en la fenilalanina, fenol y triptfano sufren
nitracin al tratarlos con cido ntrico concentrado, produciendo una coloracin amarilla en medio acido,
cambiando a anaranjado en solucin alcalina.4 siendo as prueba positiva para los aminocidos que presentan
anillos aromticos en su cadena. El resultado del cambio de color se muestra en la figura 3.

Figura 3. Prueba positiva para triptfano, fenol y fenilalanina en la reaccin Xantoproteica.

En la reaccin con nitroprusiato de sodio los aminocidos que poseen grupos sulfhidrilos que estn libres,
producen una reaccin roja con el nitroprusiato sdico en solucin amoniacal diluida. Muchas protenas dan
una reaccin negativa en su estado nativo; pero cuando son desnaturalizadas, la reaccin es positiva. 4 Esto
significa que esta prueba es una prueba especfica para ciertos aminocidos como la cisteina. En la figura 4
se muestra la estructura qumica de la cistena mostrando el grupo sulfhidrilo de este aminocido.

Figura 4. Estructura qumica de la cistena.

La reaccin de cido glioxlico dio positivo para la reaccin con triptofano debido a que el grupo indlico del
triptfano reacciona con cido glioxilico presente en cido actico expuesto a la luz y en presencia de cido
sulfrico concentrado dando un complejo de color morado, la reaccin se muestra en la figura 5.

Figura 5. Reaccin de triptfano con cido glioxlico.