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SEROLOGA FORENSE
MANCHAS DE SANGRE
Identifica los instrumentos usados en el ilcito
EN ROPAS,
Localiza los lugares de los hechos y en donde se cometieron los ilcitos.
OBJETOS E
Ayuda a conocer las circunstancias de la comisin de un hecho contra personas.
INSTRUMENTOS
Elimina a sospechosos
Comprueba y verifica coartadas o versiones sospechosas
Si se encuentran en ropa o telas, se embalarn evitando posibles contaminaciones.
Cuando sean de fuentes diferentes en un mismo lugar, se embalarn
COLECCIN DE LA
separadamente
MCULA
Secar las manchas frescas en un medio seco y ventilado sin exposicin al sol o al
calor para evitar la putrefaccin
Ofrecen posibilidades de reconstruccin del mecanismo de los hechos.
Se encuentran por largo tiempo en superficies adherentes como la piel, ropas,
UTILIDAD
muros, madera, pisos, ropas, etctera
Difcilmente permanecen en el metal, cristal, porcelana, superficies pulidas,
enceradas o barnizadas
Con luz rasante u oblicua con filtros que contrastan a la marcha con el soporte.
Luz ultravioleta en la oscuridad es un medio de gran utilidad
Se encontrarn lagos hemticos en zonas en declive, observando que la sangre
ante-mortem se encuentra coagulada entre los 5 a 8 primeros minutos, mientras
que la sangre post-mortem deseca sin coagulacin
RASTREO
La sangre arterial se proyecta en chorro con una fase de dispersin, en tanto que la
sangre venosa escurre; la sangre menstrual contiene placas de la mucosa uterina
evidenciables como lminas planas con ncleo pequeo y redondo ante la tincin
con azul de metileno en la microscopa. Toda sangre proveniente de una lesin,
contendr elementos hsticos de donde proviene
PLANO
HORIZONTAL
PLANO VERTICAL
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Fosfolpidos
Rh D
Protenas
Reaccin de bencidina
Reaccin de la fenoftalena reducida
Reaccin de leuco-malaquita verde
Tcnicas espectroscpicas
Cristales de hemina
Cristales de hemocromgeno
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TCNICAS PARA
DETERMIANAR EL
ORIGEN
DETERMINACIN
DEL GRUPO
DETERMINACIN
DE ENZIMAS Y
PROTENAS
TCNICAS DE ORIENTACIN
REACCIN DE LA BENCIDINA O T CNICA DE ADLER
FUNDAMENTO
PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
FUNDAMENTO
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PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
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TCNICAS CONFIRMATORIAS
CRIST ALES DE T EICHMANN O DE HEMAT INA
FUNDAMENTO
PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
REACCIN
PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
REACCIN DE UHLENHUT H
FUNDAMENTO
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PREPARACIN
PROCEDIMIENTO
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Grupo
Subgrupo
Antgeno eritrocitario
Ninguno
A1
A2
Anti-A1 + A
A
AB
A1 B
A2 B
Anti-A1 + A +B
A+B
Anticuerpo srico
Anti-A1
Anti-A
Anti-B
Anti-B
Anti-A1
Anti-A1
Anti-A
No
Anti-A1
EN CADVERES
EN COGULOS
DETERMINACIN
PRINCIPIO
ABSORCINELUSIN
MATERIAL
En estas circunstancias, los eritrocitos se han roto, por lo que no es posible las
pruebas de aglutinacin directa, sin embargo los antgenos del sistema ABO
conservan cierta capacidad de combinarse con anticuerpos especficos con
formacin de antgeno-anticuerpo usado en la deteccin de antgenos en el
estroma de las clulas rojas en manchas de sangre seca mediante el mtodo de
absorcin-inhibicin o absorcin-elusin
Tiene su fundamento en la absorcin especfica entre la mancha problema y su
anticuerpo homlogo; despus de que la absorcin es completa, el excedente de
anticuerpo se elimina por medio de lavados con solucin salina fra. El complejo
antgeno-anticuerpo se disocia por calentamiento, el anticuerpo eluido se pone en
contacto con eritrocitos lavados de propiedades antignicas conocidas y
finalmente la aglutinacin indica la presencia de un antgeno de la misma
especificidad que el de las clulas usadas como testigo conocido, y es ms
satisfactoria para la determinacin del grupo ABO pero tambin puede usarse en
el sistema MN y para el sistema Rh que son ms difciles por su inespecificidad
Se usa paralelamente para la determinacin del grupo en manchas de sangre o
como mtodo de eleccin para la determinacin de los grupos de saliva, lquido
seminal y fluidos orgnicos en los que el antgeno se encuentra en forma soluble
Sueros clasificadores anti-A, anti-B, anti-AB y lecitina anti-H, metanol, Na2PO4,
KH2PO4, NaCl, Tubos de ensayo , pipetas Pasteur, bulbos de goma, tijeras,
aplicadores de madera, guantes desechables, tela de algodn estril sin apresto,
gradillas, refrigerador, centrfuga, bao Mara a temperatura constante y horno
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REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
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PREPARACIN
(continuacin)
APLICACIN
DET ERMINACIN DEL GRUPO DEL SIST EMA ABO EN MANCHAS DE SANGRE POR
ABSORCION-INHIBICIN
El material antgeno se coloca en contacto con su anticuerpo homlogo a fin de efectuar su absorcin
especfica; el anticuerpo en el sobrenadante se observa con eritrocitos de propiedades antignicas
conocidas por lo que se tendrn siempre testigos del grupo conocido
Solucin buffer:
Solucin a: solucin de fosfato cido de sodio NA2HPO4 1/15 molar (9.47 gr./lt)
Solucin b: NA2HPO4 1/15 molar (9.08 gr./lt)
Buffer final: servir 72 ml de sol. a en un matras volumtrico de 1,000 ml y agregar
28 ml de la sol. b y aforar a 1,000 ml con solucin salina (8.5 gr. de NaCl en 1000
ml de agua destilada); debiendo obtener un pH de 7.2
Sueros:
PREPARACIN
Anti-A: diluir 3.5 ml de suero con 450 ml de buffer pH 7.2
Anti-B: diluir 1.0 ml de suero en 450 ml de buffer pH 7.2
Anti-H: se utiliza sin diluir
Clulas conocidas:
Lavar tres veces con buffer pH 7.2 a los eritrocitos conocidos de los grupos O, A2 y
B, y hacer una suspensin al 2%
PROCEDIMIENTO
INTERPRETACIN
INMUNOLOGA MDICA
La inmunidad es un mecanismo de proteccin del individuo y de la especie mediante el aparato
inmunocompetente constituido por clulas germinales de la mdula sea que originan a las clulas
precursoras que se asientan en el tejido linfoide, encargadas de la maduracin de los linfocitos B, y que se
transforman en clulas plasmticas encargadas de elaborar los anticuerpos dando con esto, la inmunidad
inmediata, mientras que en el timo y se mantienen los linfocitos T, a los que se le debe la inmunidad tarda
o celular, la memoria inmunitaria y la regulacin de la reaccin inmunitaria
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SISTEMA
INMUNITARIO
REACCIN
INMUNITARIA
Ag-Ac Y
COMPLEMENTO
INMUNODEF ICIENCIAS
Es la incapacidad para producir efectores de la reaccin inmunitaria.
Inmunodeficiencia hereditaria: existe la incapacidad de producir efectores de la reaccin inmunitaria por
desarrollo incompleto e inadecuado del sistema inmunitario
Inmunodeficiencia adquirida: es la incapacidad de producir efectores de la reaccin inmunitaria por efectos
de radiaciones, sustancias citotxicas, neoplasias malignas y otros agentes en sujetos con funcionamiento
ptimo del sistema inmunitario
Defectos de linfocitos B en forma hereditaria despus de los 6 meses de edad que
se acompaa de infecciones frecuentes y graves. Microscpicamente no hay
folculos germinales ni clulas plasmticas en ganglios linfticos, bazo, tubo
digestivo y mdula sea
Linfocitos T deficientes por defecto de desarrollo embrionario del tercero y cuarto
HEREDITARIAS
arcos farngeos de los que se forman el timo y las glndulas paratiroides,
observndose ausencia de timo, incapacidad de inmunidad celular, tetania
neonatal, arco artico a la derecha y Tetraloga de Fallot
Defectos mixtos que se transmite como rasgo autosmico recesivo caracterstico
por falta de linfocitos B y T como se observa en la Agamaglobulinemia tipo Suizo.
Por depsito de anticuerpo IgA
Por depsito de anticuerpo (IgE) y antgeno soluble
Por depsito de anticuerpo (Ig), antgeno soluble y complemento.
ADQUIRIDAS
Por depsito de anticuerpo (Ig), antgeno soluble, complemento y leucocitos
polimorfonucleares
Por depsito de anticuerpo (Ig), antgeno celular y complemento
Depsito de partes de complemento o de complemento activado por va alternativa
Se presenta alteracin en el mecanismo de inmunidad mediada por clulas, por lo
que en vez de proteger, causa dao tisular en las que intervienen los linfocitos T y
macrfagos A, que se verifica directamente entre los linfocitos T y la clula blanco
e indirectamente porque el linfocito T libera linfocinas que actan como factor
HIPERSENSIBILIDAD
quimiotctico para los macrfagos, factor inhibidor de la migracin de los
CELULAR
macrfagos, el factor de la metaplasia epitelioide de los macrfagos, el ipso de
fusin de macrfagos que forman clulas gigantes multinucleadas, factor
blastgeno-mitgeno que transforma la blastognesis y mitognesis de los
linfocitos T no-sensibilizados y sustancias txicas inespecficas para las clulas
vivas o citotoxina
Jus Mdica: Medicina Legal y Forense
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TOLERANCIA
INMUNITARIA
AUTOINMUNIDAD
SIDA
FUNDAMENTO
MARCADORES
GENTICOS
Existen una serie de enzimas en los eritrocitos que permiten individualizar las
manchas de sangre que cuando son separadas en los componentes protenicos,
se llaman isoenzimas, siendo las ms importantes hasta el momento la
fosfoglucomutasa (PGM), adenilatokinasa (AK), fosfatasa cida eritroctica (EAP),
esterasa D (EsD), y que cobra particular inters la protena heptoglobina (Hp)
especialmente porque sobrevive un tiempo razonable en manchas de sangre
seca.
La fosfoglucomutasa y la heptoglobina son la que frecuentemente se utilizan para la
individualizacin ya que todas las personas no tienen exactamente las mismas
variantes y que pueden separarse eficientemente por procedimientos
electroforticos, siendo las variedades ms comunes de la fosfoglucomutasa la
PGM 1-1, la PGM 2-1 y la PGM 2-2, mientras ms frecuentes de las heptoglobina
son la Hp 1-1, la Hp 2-1 y la Hp 2-2
Los resultados inmunolgicos junto con la combinacin de estas protenas, dan pie
a las tablas de distribucin en la poblacin para aumentar las probabilidades de
exclusin de los diferentes grupos tnicos
El procedimiento electrofortico se realiza sobre capas de gel de almidn, pero las
posibilidades se van reduciendo a medida que la desecacin de la mancha se va
dando con el tiempo en el siguiente orden: sistema ABO, sistema Rh, Hp y PGM
esto es, que los antgenos del primer sistema pueden durar aos en condiciones
de ser evidenciados, mientras que el sistema Rh algunos meses, las Hp
semanas, y las PGM solamente algunos das
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Para la exclusin de los subgrupos se incluyeron cuatro grupos allicos A1, A2, B y O, para explicar la
presencia del aglutingeno raro A3, por lo se tiene que pensar en el alelo A3, y otras ampliaciones para
explicar los ltimos descubrimientos como los sistemas MN, Rh-Hr, etctera
Los antgenos se comportan de acuerdo a las leyes de la herencia mendelianas, as que los resultados de
exclusin de paternidad siguen el postulado Un gen del grupo no pueden aparecer en un nio, a menos
que est presente en el padre, en la madre o en ambos progenitores con se ve a continuacin
Si existe uno u otro grupo sanguneo, su producto deber aparecer en la sangre del
hijo
Ninguno de estos padres podra tener un hijo con el grupo abajo sealado. Esta es
la regla de exclusin de primer orden
Un padre CC, no podr tener un hijo cc, necesariamente deber tener un antgeno
C proveniente del progenitor, aunque puede haber alelos paralelos raros en el
nio, por lo que se deber ser muy cauto en la aplicacin del postulado.
Los grupos sanguneos utilizados incluyen los sistemas ABO, Ss, Rh (D, C, Cw, E, c y c),
REGLAS
y si fuese necesario se podrn determinar el Fya, K, Lua, JKa, que permite un 60%
de posibilidades de exclusin de paternidad, pero adems se tiene la posibilidad del
estudio electrofortico de las protenas sricas Hp, Gc, y las de las enzimas de los
eritrocitos EAP (fosfatasa cida eritroctica), PGM (fosfoglucomutasa), ESD9 (estearasa D), AK
(adelinatokinasa), ADA (adenosindeaminasa), y 6PGD (6-fosfogluconatodehidrogenasa), con las que
se eleva a un 90%, y si se tiene posibilidad de detectar antgenos del sistema HLA,
el porcentaje aumenta hasta un 98.62% y con DNA Finger Print hasta el 100% (no
contando a los gemelos monocigotos)
PADRES
O/O O/O
A
A/O O/O
B
B/O O/O
A
A/B A/O
O
A/B A/B
O
O/O O/O
B
TCNICAS DE ORIENTACIN
FLUORESCENCIA A
LA LUZ
ULTRAVIOLETA
FOSFATASA CIDA
El lquido espermtico contiene alta concentracin de flavinas que son las que dan
una fluorescencia blanco-verdosa cuando son observadas con Luz de Wood, y
que permite su localizacin topogrfica de posibles huellas espermticas, tanto en
el lugar de los hechos como sobre las prendas y ola vctima
Enzima que hidroliza a los esteres alifticos y aromticos del cido ortofosfrico.
En los humanos se ha encontrado en concentraciones de 20 a 400 veces ms que
en otros fluidos, por lo tanto, su deteccin hace sospechoso al hallazgo, por lo
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FOSFATASA CIDA
(contina)
INHIBICIN DE LA
FOSFATASA CIDA
CON CIDO
L-TARTRICO
que se debern ajustar los reactivos para su deteccin, de manera que solamente
se obtenga reaccin positiva cuando la enzima precipitada se encuentre por
arriba de 20 unidades
La fosfatasa cida reacciona con el reactivo 1-naftilfosfato de calcio quedando libre
el naftol; ste reacciona con sulfato de dianilsiltetrazonio en forma de un colorante
azoico violeta intenso
La formacin de precipitado violeta intenso de partcula grande procedente de la
fosfatasa cida seminal, es diferente al precipitado caf rojizo de menor partcula
de origen no prosttico, ya que la fosfatasa cida puede hidrolizar ciertos fosfatos
orgnicos en medio ligeramente cido; el sustrato en este procedimiento es el naftil fosfato de calcio, en donde la fosfatasa rompe el radical fosfato, liberando al
grupo -naftol, el cual reacciona con el azul diazo, formando el complejo violeta
TCNICAS DE CONFIRMACIN
ESPERMATOSCOPA
DET ERMINACIN DEL GRUPO DEL SIST EMA ABO EN SEMEN Y SAL IVA
FUNDAMENTO
PREPARACIN
INTERPRETACIN
Las sustancias del grupo ABO son solubles en agua y se encuentran en el lquido
seminal y saliva por lo que puede determinarse por el mtodo de absorcininhibicin
1. Diluir 3.5 ml de antisuero anti-A en 450 ml de buffer salino; 1 ml de anti-B en 450
ml de buffer salino; anti-H se usa tal y como lo presenta el distribuidor comercial.
2. Buffer salino:
a) Na2PO4 anhidro 1/15 molar (4.47 gr./lt)
b) KH2PO4 anhidro 1/15 molar (9,09 gr./lt)
3. Solucin final: 72 ml de solucin a, ms 28 ml de solucin b, ms 8.5 gr. de NaCl
disueltos en 1,000 ml de agua destilada. (pH 7.2)
4. Se prepara una suspensin al 2% de eritrocitos O, A1 y B en buffer salino
5. Se impregnan fragmentos de tela de 1 X 1 mm. con la muestra problema y con
los testigos para colocarse en los tubos correspondientes en donde se les
colocan tres gotas de anti-A a la hilera anti-A; tres gotas de anti-B en su hilera y
tres gotas de anti-H en la hilera anti-H
6. Se agitan vigorosamente y se dejan para que se efecte la absorcin durante
toda la noche en refrigeracin a 4.C; se centrifugan y se remueve el
sobrenadante sobre una laminilla clasificadora
7. Se agrega una gota de suspensin de eritrocitos al 2% y se agita
mecnicamente 12 minutos, se espera 9 minutos ms y se leen los resultados en
el microscopio
O = aglutinacin con anti-A y anti-B pero no con anti-H
A = aglutinacin en anti-B y anti-H pero no en anti-A
B = aglutinacin en anti-A y anti-H pero no con anti-B
AB = si no aglutina con anti-A ni con anti-B pero si con anti-H
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