INTERAES FRMACO-RECEPTOR: APLICAES DE TCNICAS COMPUTACIONAIS EM AULA PRTICA

SOBRE A EVOLUO DOS INIBIDORES DA ENZIMA CONVERSORA DE ANGIOTENSINA

Maurcio Temotheo Tavaresa, Marina Candido Primia, Michelle Carneiro Pollib, Elizabeth Igne Ferreiraa e Roberto PariseFilhoa,*
a
Departamento de Farmcia, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, Av. Prof. Lineu Prestes n 580,
05508-000 So Paulo SP, Brasil
b
Departamento de Farmcia, Universidade So Francisco, Rua Waldemar Csar da Silveira n 105, 13057-500 Campinas SP, Brasil

Educao

doi number

Quim. Nova, Vol. XY, No. 00, 1-8, 200_

Recebido em 23/02/2015; aceito em 22/05/2015; publicado na web em 02/07/2015

DRUG-RECEPTOR INTERACTIONS: IN SILICO APPROACHES APPLIED TO EXPERIMENTAL CLASSES REGARDING

THE EVOLUTION OF ANGIOTENSIN CONVERTING ENZYME INHIBITORS. Teaching classes and events regarding the
molecular aspects of drug-receptor interactions is not an easy task. The ligand stereochemistry and the spatial arrangement of
the macromolecular targets highly increase the complexity of the process. In this context, the use of alternative and more playful
approaches could allow students to gain a more thorough understanding of this important topic in medicinal chemistry. Herein, we
describe a practical teaching approach that uses computational strategies as a tool for drug-receptor interaction studies performed for
angiotencsin converting enzyme inhibitors (ACEi). Firstly, the students learn how to find the crystallographic structure (enzyme-ligand
complex). Then, they proceed to the treatment of crude crystallographic data. Thereafter, they learn how to analyze the positioning
of the drug on the active site of the enzyme, looking for regions related to the molecular recognition. At the end of the study, students
can summarize the molecular requirements for the interaction and the structure-activity relationships of the studied drugs.
Keywords: medicinal chemistry; ACE inhibitors; drug-receptor interactions; molecular modeling; drug design.

INTRODUO
Contemplar todos os aspectos moleculares envolvidos na interao entre um frmaco e seu receptor biolgico , certamente, um
dos maiores desafios no ensino da Qumica Farmacutica Medicinal
aos graduandos em Farmcia. Conhecer a importncia dos fatores
estereoqumicos e eletrnicos nas interaes frmaco-receptor (F-R)
faz com que o estudante adquira arsenal cognitivo suficiente para
entender e propor relaes entre a estrutura qumica do frmaco e
sua atividade biolgica (REA).1,2 Desenvolver no estudante a habilidade de raciocinar criticamente a respeito da estrutura do frmaco
e a intensidade da resposta biolgica que este provoca no uma
tarefa fcil. Porm, o indivduo que possui tal capacidade capaz
de compreender a importncia de determinados grupos funcionais
para a melhoria da afinidade de um frmaco estruturalmente otimizado por seu receptor biolgico. Neste sentido, estratgias didticas
que fazem uso de recursos tecnolgicos e audiovisuais podem
contribuir para o processo de ensino-aprendizagem, tornando-o
ldico e permitindo ao aluno vivenciar as interaes F-R de forma
totalmente singular.3,4
verdade que o ensino convencional das interaes F-R, que faz
uso de recursos estritamente expositivos, possui extrema importncia
na formao intelectual do indivduo, porm, este tipo de abordagem
nem sempre capaz de atingir o aluno com a mesma intensidade
de uma aplicao experimental.5 A possibilidade de um estudante
explorar tridimensionalmente o bolso de interao de um frmaco
com o provvel receptor eleva a capacidade deste em compreender
todos os aspectos e variveis inerentes formao do complexo F-R.
Como exemplo destas variveis, pode ser citada a necessidade de o
frmaco estar em sua conformao bioativa para exercer sua atividade biolgica.6 Vale mencionar que esta consiste em conformao
de menor energia, como forma de aproximao da que ocorre no
*e-mail: roberto.parise@usp.br

organismo. A existncia de bancos de dados de estruturas proteicas

e a disponibilidade de programas de qumica computacional, ambos
gratuitos, permitem que estes recursos e ferramentas sejam explorados
em prol do ensino qumico-farmacutico.5,6
Uma vez determinada a disposio espacial do complexo F-R,
seja por cristalografia de raios-X, por ressonncia magntica nuclear
(RMN) ou crio-microscopia eletrnica (Cryo-EM), possvel identificar pontos de interao, a natureza destas interaes e as regies
que so exploradas pelo ligante (frmaco). Assim, podem ser traadas
correlaes (aos nveis molecular e eletrnico) de diferentes estruturas
que exploram o mesmo ambiente molecular.7,8
Os inibidores da enzima conversora de angiotensina (iECA)
constituem-se em classe teraputica para o tratamento da hipertenso arterial sistmica (HAS). Amplamente estudada e com REA
estabelecida, a classe dos iECA envolve srie de frmacos utilizados
na teraputica, a exemplo tm-se o captopril (1), o enalapril (2) e o
ramipril (3) (Figura 1). A histria do desenvolvimento destes frmacos, abordada extensivamente nos livros didticos da rea de Qumica
Farmacutica Medicinal, ilustra com exatido a importncia de se
explorar as interaes entre o ligante e seu stio de interao, bem
como os benefcios obtidos ao explorar essas interaes.9,10
O mecanismo de ao associado a esta classe de frmacos reside
na habilidade destas molculas em se ligar ao stio cataltico da enzima, impedindo, assim, a converso de angiotensina I em angiotensina
II.12 A enzima conversora de angiotensina (ECA) uma metaloproteinase responsvel por hidrolisar a angiotensina I (um decapeptdeo
inativo), convertendo-a em angiotensina II (um octapeptdeo ativo)
(Figura 2), gerando como principais respostas fisiolgicas o aumento
da resistncia vascular perifrica, a secreo renal de aldosterona e a
reduo dos nveis sricos de bradicinina, que culminam no aumento
da presso arterial do indivduo.13 A atividade cataltica da ECA
dependente de zinco II (Zn2+) e as bases qumicas necessrias ao
reconhecimento molecular de seu substrato esto associadas a uma
sequncia tripeptdica especfica presente na angiotensina I. Esta

Tavares et al.

O
HS
CH 3

O
N
O

OH

OEt

Quim. Nova

H
N

CH 3

O
N
O

OH

OEt
H
N

N
CH 3

captopril (1)
(C9H15NO3S)

enalapril (2)
(C20H28N2O5)

ramipril (3)
(C23H32N2O5)

EC50
230 M

EC50
40 M

EC50
1,0 M

OH

Figura 1. Captopril, enalapril e ramipril, iECAs utilizados na teraputica com seus respectivos valores de concentrao efetiva 50% (EC50)11

sequncia tripeptdica capaz de realizar coordenao com o on Zn2+

e sofrer um ataque nucleoflico, que resulta na clivagem do substrato
decapeptdico (Figura 2A).14
O desenvolvimento dos iECAs, como enalapril (2) e ramipril
(3), cada um a sua poca, ilustra a otimizao estrutural efetuada na
estrutura do captopril (1) e a capacidade de explorao dos bolses
acessrios de interao, o que se reflete nas EC50 reduzidas de ambos,
bem como na reduo dos efeitos adversos associados ao captopril
(1).10,11,15 A Figura 2B apresenta a evoluo estrutural obtida no planejamento destes frmacos, do ponto de vista molecular.
Atualmente, so conhecidas as estruturas cristalogrficas do complexo de cada um desses frmacos com a ECA.16,17 Este fato permite
que a explorao das interaes intermoleculares frmaco-receptor
biolgico seja realizada experimentalmente, fazendo com que o

estudante tenha a oportunidade de conhecer tridimensionalmente a

fase farmacodinmica de ao de frmacos.
A disciplina de Qumica Farmacutica (4 crditos) tem sido
ministrada aos estudantes do quinto semestre do curso de Farmcia
da Universidade So Francisco (USF), em paralelo disciplina de
Planejamento e Sntese de Frmacos (4 crditos). Por todo o quinto
semestre, os temas abordados em ambas as disciplinas so totalmente
integrados, objetivando a melhor fixao dos contedos pelo corpo
discente. Aps anlise criteriosa do processo ensino-aprendizagem
acerca das Interaes Frmaco-Receptor, a estratgia pedaggica
aqui apresentada foi cuidadosamente planejada e inserida no plano de
atividades da disciplina de Qumica Farmacutica da USF e tem sido
aplicada sistematicamente como mtodo alternativo metodologia
puramente expositiva. Esta estratgia pode ser abordada em 4 horas/

Figura 2. (A) Reconhecimento molecular da trade peptdica Phe-His-Leu pela ECA. As linhas tracejadas indicam regies onde h interao entre o substrato
e a enzima. (B) Interao dos frmacos captopril, enalaprilato (forma ativa do enalapril) e ramiprilato (forma ativa do ramipril), respectivamente, com o stio
ativo da ECA. Observa-se o aumento do nmero de interaes em um dos bolses da enzima, exploradas em cada um dos frmacos

Vol. XY, No. 00

Interaes frmaco-receptor: aplicaes de tcnicas computacionais

aula, ou ento dividida em duas aulas de 2 horas cada. De forma

mais especfica, relacionam-se os objetivos a serem alcanados pelos
discentes, com a aplicao desta estratgia:
(i) Entrar em contato com banco de dados de estruturas proteicas,
aprendendo a realizar pesquisa de alvos biolgicos (receptores)
e estruturas descritas na literatura;
(ii) Visualizar tridimensionalmente complexos ligante-biomacromolcula (F-R) e manipular estas estruturas em programas de
qumica computacional;
(iii) Analisar de forma crtica a estrutura do alvo (receptor), bem como
do stio de ligao do frmaco;
(iv) Observar os aspectos estereoqumicos e eletrnicos envolvidos
na interao F-R;
(v) Correlacionar as estruturas qumicas dos frmacos e suas respostas biolgicas.
Sugere-se, inicialmente, introduzir aos alunos a fundamentao
terica sobre o tema Interaes Frmaco-Receptor para, posteriormente, torn-los aptos a avaliar estas interaes experimentalmente.
Os eventos desta atividade prtica esto subdivididos em:
A - pesquisa e aquisio das estruturas cristalogrficas a partir do
Protein Data Bank (PDB);
B - anlise do bolso de interao do frmaco a partir do banco de
dados PDBsum;
C - manipulao e tratamento computacional dos complexos F-R;
D - isolamento das estruturas tridimensionais dos frmacos;
E - anlise das interaes realizadas (por frmaco);
F - anlise comparativa da disposio espacial dos frmacos no
bolso de interao e correlao com suas respectivas respostas
biolgicas;
G - interpretao dos resultados obtidos.
Esta abordagem didtica contempla, de forma significativa, os
aspectos tericos e prticos relevantes ao aprendizado das interaes
F-R, permitindo aos alunos a compreenso do mecanismo de ao
dos frmacos e sua relao com o planejamento de novas molculas
bioativas. Tendo-se em vista que esta rea estreitamente relacionada
inovao, da qual carece o Pas, busca-se aprimorar a formao
dos futuros profissionais farmacuticos que se interessem em atuar
neste campo, no s no mbito acadmico, como, tambm, na rea
de Pesquisa e Desenvolvimento (P&D) de indstrias farmacuticas,
especialmente, as indstrias farmoqumicas nacionais.
PARTE EXPERIMENTAL
Esta abordagem foi planejada de forma a abranger os conceitos
do tema de forma progressiva, de acordo com a evoluo das etapas
prticas aqui descritas. O tutorial completo do procedimento prtico,
descrito neste artigo, segue amplamente detalhado e ilustrado no
material suplementar.
Aquisio, anlise, manipulao e tratamento dos complexos
cristalogrficos
Aquisio
Desenvolvido em 1971, o Protein Data Bank (PDB) consiste
em um repositrio mundial de livre acesso para arquivos sobre a
disposio tridimensional (3D) de macromolculas, como protenas,
enzimas e cadeias de cidos nucleicos. Estas macromolculas podem
estar isoladas ou complexadas a micromolculas, como substratos,
cofatores enzimticos e/ou frmacos.18
A partir do PDB (http://www.rcsb.org), os alunos aprendem a realizar pesquisas de estruturas proteicas, observando o modo de registro
de cada estrutura depositada no banco de dados, denominado cdigo
PDB, geralmente composto por quatro algarismos alfanumricos.

Neste momento, os estudantes so orientados a inserir na barra de

pesquisa o cdigo PDB de cada um dos complexos que sero utilizados no decorrer da aula, sendo eles: 1UZF16 (ECA complexada
com o captopril, Figura 3); 1UZE16 (ECA complexada com o enalaprilato); e 2X9217 (ECA complexada com o ramiprilato). Na pgina
principal de cada um dos co-cristais, os estudantes so orientados a
buscar e salvar em seus computadores os arquivos-texto contendo as
coordenadas cartesianas de cada complexo cristalogrfico, clicando
no cone Download Files e, em seguida, sobre PDB File (Text),
como ilustra a Figura 4. Geralmente o arquivo salvo com o nome
CDIGO.pdb, no caso dos arquivos utilizados neste estudo: 1UZF.
pdb, 1UZE.pdb e 2X92.pdb.
Anlise
A anlise dos complexos inicia-se na prpria pgina principal dos
co-cristais no PDB. Nela os alunos movimentam a barra de rolagem
at visualizar o campo Ligand Chemical Component, em que
identificam o subcdigo atribudo a cada micromolcula presente no
co-cristal, momento em que devem anotar a identificao referente
ao frmaco presente no complexo. Os frmacos de cada complexo
utilizado nesta metodologia so identificados pelos subcdigos: MCO
(captopril, Figura 3), EAL (enalaprilato) e X92 (ramiprilato). Esta
identificao importante para a anlise do bolso de interao do
frmaco no PDBsum.
O PDBsum (http://www.ebi.ac.uk/pdbsum/) um banco de dados
ilustrado, que compila informaes de estruturas 3D depositadas
no PDB, tornando mais intuitiva a visualizao e a interpretao
das mesmas.20 Neste possvel que o estudante visualize de forma
bidimensional (2D) quais aminocidos da macromolcula compem
o bolso de ligao do frmaco (ou micromolcula), bem como os
aminocidos deste bolso, que efetivamente estabelecem as interaes
F-R com o ligante. Por meio do PDBsum os alunos podem observar
a natureza dos aminocidos existentes, por exemplo, no bolso cataltico da ECA e avaliar a complementariedade existente entre macro
e micromolcula.
Na pgina inicial do PDBsum, os estudantes so orientados a
inserir o cdigo PDB do co-cristal que desejam analisar, neste caso os
cdigos 1UZF (Figura 4A), 1UZE e 2X92, e ento clicar em Find.
Com a abertura da nova pgina, contendo as informaes grficas do
complexo, os alunos so orientados a clicar sobre o subcdigo referente ao frmaco em questo, neste caso, MCO (captopril, Figura 4B),
EAL (enalaprilato) e X92 (ramiprilato). A prxima janela apresenta
um diagrama 2D LIGPLOT,21 gerado automaticamente a partir das
informaes coletadas do complexo protena-ligante (Figura 4C). No
diagrama LIGPLOT so indicados os pontos de interao entre a micromolcula e todos os aminocidos do seu stio de ligao, a distncia
interatmica de cada interao (apenas para ligaes de hidrognio) e
o tipo de interao realizada, sendo representadas principalmente por:
Ligaes de hidrognio: representadas por uma linha verde tracejada entre os tomos envolvidos na interao;
Ligaes covalentes, interaes inicas, interaes on-dipolo e
coordenao com ons metlicos: todas representadas por uma
linha lils contnua entre os tomos envolvidos na interao;
Interaes hidrofbicas: representadas por arcos com raios de
colorao vermelha, voltados para o grupo que participa da
interao.
Com a visualizao dos diagramas LIGPLOT de cada frmaco
complexado ECA, os estudantes so orientados a observar e anotar
o nmero de cada aminocido presente no diagrama, que juntos constituem o bolso de interao (Tabela 1). Esta atividade necessria
para as etapas subsequentes da aula, alm de se mostrar como valiosa
estratgia pedaggica, que introduz aos alunos as interaes F-R dos
inibidores da ECA, ao nvel molecular.

Tavares et al.

Quim. Nova

Figura 3. Pgina principal do co-cristal captopril-ECA (cdigo PDB: 1UZF). As setas indicam o cdigo PDB, o arquivo texto das coordenadas cartesianas
do complexo e a identificao do ligante captopril, respectivamente19

Figura 4. Anlise dos complexos no PDBsum. (A) pgina inicial. (B) pgina contendo os dados do complexo captopril-ECA (cdigo PDB: 1UZF). (C) diagrama LIGPLOT gerado para o complexo captopril-ECA. As setas vermelhas indicam, respectivamente, o local para insero do cdigo PDB e o subcdigo
do frmaco captopril (MCO) que, ao ser selecionado, gera o diagrama representativo da interao2224

Interaes frmaco-receptor: aplicaes de tcnicas computacionais

Vol. XY, No. 00

Tabela 1. Aminocidos que constituem o bolso de interao de cada frmaco

estudado na aula
Cdigo PDB de cada co-cristal
1UZF

1UZE16

2X9217

captopril

enalaprilatoa

ramiprilatoa,b

Gln281
His 353
Ala 354
His 383
Glu 384
His 387
Phe 457
Lys511
His 513
Tyr 520
Tyr 523

Gln281
His 353
Ala 354
Ser 355
His 383
Glu 384
His 387
Glu 411
Phe 457
Lys511
Phe 512
His 513
Val 518
Tyr 520
Tyr 523

Gln 265
His 337
Ala 338
Ser 339
His 367
Glu 368
His 371
Glu 395
Asp 399
Phe 441
Lys 495
Tyr 496c
His 497
Asp 501
Val 502
Tyr 504
Tyr 507

16

Frmaco

Aminocidos

Os aminocidos sublinhados correspondem queles que se diferenciam entre

um e outro frmaco; b A numerao dos aminocidos do co-cristal 2X92 est
distinta dos anteriores por se tratar de um estudo realizado na enzima ECA
proveniente de Drosophila melanogaster.17 Em casos de estruturas homlogas,
comum que os resduos no tenham a mesma numerao, em funo de
inseres e/ou delees na cadeia polipeptdica, porm, possvel observar
que a sequncia dos aminocidos que compem o bolso cataltico, bem
como a identidade deste bolso, so mantidas; c Apesar do cristal apresentar
uma tirosina na posio 496, este aminocido corresponde fenilalanina 512
do cristal com o enalaprilato (complexado enzima humana). Mesmo com a
substituio deste aminocido, a natureza hidrofbica da interao do mesmo
mantida. Essa alterao se deve ao fato de a enzima homloga, aqui utilizada,
ser de Drosophila melanogaster,17 sendo vlido ressaltar que, tal modificao,
no altera de forma substancial a funcionalidade do bolso cataltico,25 o qual
mantm 93% de identidade com a enzima humana, de forma que os resultados
de inibio enzimtica obtidos em ambas as enzimas podem ser comparados.
a

Manipulao e tratamento dos co-cristais

O objetivo desta etapa da atividade apresentar aos estudantes os
aspectos tridimensionais relevantes para que ocorra interao entre a
macromolcula e o ligante em questo.
A manipulao dos arquivos texto dos cristais (arquivo CDIGO.
pdb, salvo no computador pelos alunos anteriormente) inicia-se no
programa WebLabViewer Lite 4.2,26 um programa de livre acesso e
disponvel para o uso acadmico-educacional (http://www.scalacs.
org/TeacherResources/). O WebLabViewer Lite possui uma interface
bastante intuitiva, de fcil manuseio, e pode ser utilizado em determinados estudos de qumica terica. Fazendo-se uso deste programa,
possvel realizar diversas anlises como a visualizao espacial de micro
e macromolculas, gerar mapas de superfcie molecular, determinar a
estereoqumica de compostos, alm de medir ngulos e distncias interatmicas entre regies da mesma molcula, ou de molculas distintas.
Neste momento, recomenda-se que, por meio de um dos cristais
(sugerimos o co-cristal do captopril, 1UZF), seja demonstrado aos
alunos as diferenas existentes entre micro e macromolcula, destacando as formas de representao dos ligantes (linhas, modelo de
Corey-Pauling-Koltun (CPK) e bastes), das estruturas proteicas
(folhas, hlices, tubos e pranchas), bem como a estereoqumica do
frmaco e a superfcie de potencial eletrosttico, tanto da enzima
quanto do ligante. Esta abordagem segue amplamente descrita no
material suplementar.
Ao abrir o arquivo no programa, os estudantes podem visualizar a
disposio de todos os tomos presentes no cristal, os que compem a

enzima, aqueles que compem os ligantes (frmaco, on Zn2+ e demais

molculas artefatos de cristalizao), e tambm molculas de gua
(indicadas por pontos vermelhos). Aps as demonstraes preliminares sugeridas anteriormente, e para melhor visualizao do bolso
de interao, os alunos so orientados a limpar a estrutura dos trs
arquivos salvos (1UZF.pdb, IUZE.pdb e 2X92.pdb), ou seja, excluir
todos os aminocidos que no realizam interao com os ligantes,
os artefatos de cristalizao (tomando cuidado para no se excluir o
on Zn2+) e as molculas de gua. vlido ressaltar que, para estes
cristais, no h a participao de molculas de gua intermediando
ligaes de hidrognio entre ligante e macromolcula, de forma
que todas podem ser removidas sem causar prejuzos conduo
do estudo. Em situaes em que h o recrutamento de molculas de
gua para a formao do complexo frmaco-receptor, este pode ser
verificado no diagrama LIGPLOT, previamente utilizado na etapa de
Anlise dos co-cristais.
Aps este tratamento, possvel visualizar os frmacos juntamente aos aminocidos que compem o bolso cataltico e que,
efetivamente, realizam algum tipo de interao com os mesmos
(listados na Tabela 1). A Figura 5 apresenta as estruturas tratadas, que
podero ser encaminhadas aos estudos de correlao das interaes
entre frmaco e receptor biolgico.
Estudos de correlao das interaes dos frmacos com a
macromolcula
Uma vez as estruturas tratadas, os estudantes so orientados a
avaliar as distncias interatmicas entre as regies de cada frmaco
que interagem com a enzima, sendo estas interaes do tipo:
A - Ligao de hidrognio;
B - Interao on-dipolo;
C - Coordenao com o on Zn2+.
A Figura 6A apresenta as medidas de distncia interatmica em
cada regio de interao do captopril com os resduos de aminocidos
da ECA (de acordo com o diagrama LIGPLOT). Subsequentemente,
os alunos so instrudos a gerar o mapa de potencial eletrosttico dos
aminocidos que compem o bolso cataltico da ECA e incentivados
a rotacionar a estrutura, identificando as regies de maior e menor
densidade eletrnica (Figura 6B). Neste momento, o docente pode
discorrer sobre a natureza destes resduos de aminocidos e as consequncias que os mesmos causam na distribuio eletrnica do bolso.
Em seguida, os estudantes so orientados a gerar os mapas de
potencial eletrosttico para cada frmaco e sobrep-los queles
gerados previamente para os respectivos bolses (Figura 6C). Tendo
sido gerados os mapas, o professor pode ento apontar os aspectos
relevantes sobre a afinidade e complementariedade existente entre
micro e macromolcula, para que assim possa ser formado o complexo F-R, havendo a interao e por sua vez, o efeito biolgico
esperado.
vlido ressaltar aos estudantes que a fase farmacodinmica de
frmacos, como o prprio nome indica, se trata de um evento biolgico, dependente de diversos fatores como, por exemplo, fatores
termodinmicos e estado de solvatao. Os estudantes devem estar
cientes de que estas variveis no so consideradas em visualizaes
de estruturas estticas, como as co-cristalografadas, mas que se fazem
presentes em sistemas biolgicos.
Anlise comparativa entre os complexos e interpretao dos
resultados
Com os mapas gerados, possvel observar que os frmacos
enalaprilato e ramiprilato so capazes de interagir com bolses
acessrios no envolvidos na interao com o captopril (Figura7).
Esta habilidade pode ser diretamente associada afinidade que
estas molculas possuem pelo bolso cataltico da enzima. Como o

Tavares et al.

Quim. Nova

Figura 5. Em basto as estruturas do captopril (A), enalaprilato (B) e ramiprilato (C), com seus respectivos aminocidos do bolso cataltico (representados
em linhas), aps o tratamento das estruturas cristalogrficas. Em magenta
est representado o on Zn2+. Em preto os aminocidos do bolso. Em vermelho os aminocidos que se diferenciam nas interaes com cada frmaco

Figura 6. (A) Distncias interatmicas em das regies de interao do

captopril com a ECA. (B) As setas indicam as regies com elevada densidade
eletrnica (em vermelho) e com baixa densidade eletrnica (em azul) da ECA.
(C) As setas indicam a complementariedade eletrnica existente entre o captopril e o bolso cataltico da ECA. Em magenta est representado o on Zn2+

incremento de afinidade diretamente proporcional potncia dos

frmacos, o fato de o enalaprilato e o ramiprilato interagirem em
loci adicionais da macromolcula justifica a habilidade destes em
produzir a ao esperada em concentraes reduzidas, se comparadas
s concentraes teraputicas do captopril. Isso pode ser comprovado

pelos valores de EC50 de cada um desses frmacos. Na medida em

que o captopril possui EC50 = 230 mol L-1, o enalapril (convertido a
enalaprilato in vivo) apresenta potncia quase 6 vezes superior (EC50 =
40 mol L-1), enquanto o ramiprilato (bioativado a partir do ramipril),
potncia 40 vezes superior (EC50 = 1 mol L-1).11

Vol. XY, No. 00

Interaes frmaco-receptor: aplicaes de tcnicas computacionais

Figura 7. Disposio do captopril no stio ativo da ECA (A1) e a complementariedade existente entre as superfcies de potencial eletrosttico do mesmo com
o stio cataltico (A2). Disposio do enalaprilato no stio ativo da ECA (B1) e a complementariedade existente entre as superfcies de potencial eletrosttico
do complexo (B2). O crculo amarelo indica uma nova regio de interao, explorada pelo enalaprilato. Disposio do ramiprilato no stio ativo da ECA (C1)
e a complementariedade existente entre as superfcies de potencial eletrosttico do complexo (C2). O crculo amarelo indica a regio adicional de interao j
explorada pelo enalaprilato. O crculo verde indica a nova regio de interao, explorada apenas pelo ramiprilato. O on Zn2+ est representado em magenta

Com o perfil comparativo apresentado na Figura 7, pode-se

discutir durante a aula os aspectos positivos que determinadas modificaes moleculares conferem a arcabouos bioativos. Neste exemplo,
a introduo do grupo feniletil estrutura do enalaprilato permitiu
que ele realizasse interaes de Van der Waals e hidrofbicas com a
Serina-355, com a Fenilalanina-512 e, tambm, com a Valina-518,
aminocidos no envolvidos na interao com o captopril. O mesmo
raciocnio se aplica ao sistema bicclico inserido na estrutura do ramiprilato. Esta estratgia permitiu a interao deste frmaco com a
cadeia lateral do Aspartato-399 da enzima, aumentando ainda mais a
afinidade do ramiprilato pela enzima. Merece ser realado, em relao REA dos iECA, o fato de o enalaprilato e o ramiprilato serem
pr-frmacos27 convertidos em suas estruturas ativas no organismo
do paciente, e que so pertencentes subclasse dos iECA dicarboxlicos. Esta subclasse dos iECA possui caracterstica bem peculiar,
que responsvel por conferir grande aumento de afinidade aos seus
representantes. A funo carboxlica destes frmacos, inserida em
substituio ao grupo sulfidrila do captopril, mimetiza o estado de
transio do substrato da enzima quando este sofre o ataque nucleoflico. Vale mencionar que a funo carboxilato bioisiostrica do
intermedirio tetradrico peptdico.10
A natureza multidisciplinar desta abordagem prtica permite
que os alunos tenham contato com temas que, por ventura, possam ser abordados ao longo do semestre letivo, de maneira que
Latenciao de Frmacos, Modificaes Moleculares, Inibidores
Enzimticos, Anlogos do Estado de Transio e Estereoqumica
so assuntos intimamente correlacionados com os temas aqui apresentados, e que podem ser apontados durante a execuo desta atividade,
enriquecendo ainda mais o contedo da aula.
CONCLUSES
As atividades prticas de anlise das interaes F-R, envolvendo prticas computacionais, tm sido executadas com xito
pelos alunos. A abordagem aqui apresentada revela-se estratgia

de baixo custo agregado, capaz de ser aplicada disciplina de

Qumica Farmacutica Medicinal nos diferentes cursos de Farmcia
oferecidos pelas universidades. importante ressaltar que esta
estratgia didtica pode ser aplicada para frmacos de diferentes
classes teraputicas, bastando para isso que existam os co-critais
dos mesmos, com seus respectivos alvos biolgicos. Como sugesto,
esta abordagem pode ser adaptada aos antagonistas de receptores
adrenrgicos beta-2, como o alprenolol (cdigo PDB: 3NYA),28
comparando-os frente ao complexo do receptor junto epinefrina,
seu agonista endgeno (cdigo PDB: 4LDO).29
A estratgia descrita neste trabalho inclui diversas etapas, como
a aquisio dos complexos proteicos co-cristalografados, anlise
preliminar do bolso de interao, anlise das interaes realizadas e anlise comparativa da disposio espacial dos frmacos,
correlacionando-as com suas respectivas repostas biolgicas. Em
geral, a primeira reao dos estudantes ao visualizar os complexos
tridimensionais no programa WebLabViewer Lite 4.226 revela certo
receio dos mesmos em utilizar a ferramenta. Porm, com a conduo
das etapas iniciais, estes mesmos estudantes desenvolvem rpida intimidade com os recursos do programa e passam a efetuar as tarefas
de forma intuitiva e bastante eficiente.
Os relatrios elaborados pelos alunos aps a aplicao da estratgia aqui apresentada revelam a capacidade desta abordagem em
agregar conhecimento aos mesmos de forma ldica, sendo comuns
relatos que enaltecem a capacidade do mtodo em transferir uma viso
mais abrangente sobre o mecanismo de ao e interao de frmacos
em nvel molecular. Ressalte-se a capacidade do experimento de
permitir aos estudantes a visualizao tridimensional do complexo
micro-macro molcula.
As avaliaes aplicadas no trmino do semestre letivo da disciplina revelam que, em mdia, 91% dos alunos consideram a estratgia
efetiva para o seu aprendizado, sendo que 88% deles gostariam que
esta abordagem fosse aplicada em outras oportunidades e 65% dos
estudantes consideram o programa utilizado bastante intuitivo e de
fcil manuseio. Apenas 9% dos alunos consideram que a estratgia

Tavares et al.

atingiu parcialmente ou no foi capaz de contribuir para com o seu

aprendizado.
Dessa forma, observa-se que a integrao das tcnicas experimentais, que fazem uso de recursos tecnolgicos e audiovisuais, ao ensino
convencional da Qumica Farmacutica Medicinal traz diversos
benefcios. A aplicao dessas tcnicas como instrumento didtico
aprimora a compreenso dos aspectos inerentes formao do complexo F-R pelo estudante, tornando o ensino atrativo e interessante.
MATERIAL SUPLEMENTAR
O tutorial completo do procedimento prtico descrito neste trabalho segue amplamente detalhado e ilustrado no material suplementar,
disponvel em http://quimicanova.sbq.org.br, na forma de arquivo
PDF, com acesso livre.
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