INTRODUCCIÓN

Existen muchos mecanismos utilizados en el proceso de purificación del DNA,

en este trabajo mencionaremos algunos que utilizamos durante la práctica en el
laboratorio, entre los cuales está la electroforesis, que es una de las técnicas
más empleada en biología molecular y celular, usada para separar, y a veces
para purificar macromoléculas, especialmente proteínas y ácidos nucleicos.
 EXTRACCIÓN SALINA DE ADN DE SANGRE PERIFÉRICA TOTAL

Materiales y Reactivos:

NaCl 6M
Etanol absoluto
Etanol al 70%
SDS 10%

Buffer de Resuspensión Celular

Tris HCl 10 mM pH 8, 2
NaCl 400 mM
Na2 EDTA 2 mM
Proteinasa K 1 mg/mL

Buffer de Resuspensión de ADN (TE)

Tris HCl 10 mM pH 7,5
EDTA 1 mM pH 7,5

1. Se le agrega a un tubo, gotas anticoagulantes (de fooga).

2. Se separa el plasma y la sangre junto con la capa de glóbulos blancos.

3. Después de la separación de la sangre y el plasma, a este último se le

agrega una cantidad de buffer de lisis, el cual se encarga de romper las
células.
 CUESTIONARIO

1. ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA DEL DNA EN LA CÉLULA?

La importancia que tiene el DNA en la célula, es que este es el componente

principal del material genético de gran parte de los organismos, junto con el
RNA. También es el componente químico primario de los cromosomas y el
material en el que los genes están codificados. A partir de el podemos
sintetizar las proteínas requeridas para todas las funciones vitales de nuestro
cuerpo.

2. ¿QUÉ FUNCIÓN TIENE EL SDS EN EL PROCESO DE PURIFICACIÓN

DEL DNA?

La purificación del DNA consiste en homogenizar las células y separar los

núcleos de los cuales se extrae el DNA. El medio de extracción de ordinario
contiene el SDS, el cual es un detergente que ayuda a romper membranas de
las células, sirve para lisar los núcleos y liberar el DNA, y esto aumenta
notablemente la viscosidad de la solución.

Este detergente inhibe también cualquier actividad nucleasa en la preparación,

forma un complejo con las proteínas y las separa del DNA.

3. ¿CUÁL ES EL OBJETIVO DE AGREGAR NACL 6 MOLAR?

Con este conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden
libres las fibras de cromatina y además nos permite quitar el agua y dejar libres
las proteínas.
4. ¿POR QUÉ RAZÓN HAY QUE CENTRIFUGAR EN LOS DIFERENTES
PASOS DEL DNA?

Se requiere centrifugar la suspensión en los pasos del DNA para separar las
bases, permaneciendo el DNA en la solución dentro de la fase acuosa de arriba
y la proteína presente como un precipitado concentrado en la interfase.

5. ¿CUÁL ES EL PAPEL DEL ETANOL EN LA EXTRACCIÓN DEL DNA?

El papel que desempeña el Etanol en la extracción del DNA es que forma una
capa arriba de la solución acuosa del DNA, el cual, se enrolla conforme sale de
la solución y también se utiliza para precipitar la solución del ADN.

6. PARA LA ELECTROFORESIS DEL DNA, ¿PARA QUÉ SE UTILIZA

AGAROSA AL 1%, Y NO MÁS CONCENTRADA?

La electroforesis es el movimiento de partículas eléctricamente cargadas a

través de un gel de agarosa como resultado de un campo eléctrico formado
entre unos electrodos sumergidos en el medio, este procedimiento permite la
separación de moléculas como consecuencia de su diferente movilidad en un
campo eléctrico.

No resulta práctico emplear concentraciones superiores de agarosa ya que los

geles resultan poco elásticos y difícilmente manejables y se sustituyen con
ventaja por los geles de poliacrilamida. Sin embargo, para la electroforesis de
ácidos nucleicos los geles de agarosa son absolutamente insustituibles.

7. ¿CUÁL ES EL PAPEL DEL BROMURO DE ETIDIO?

El bromuro de etidio es el reactivo fundamental para la detección por tinción de

fluorescencia y observación bajo luz ultravioleta.

8. ¿CUÁLES SON LAS CÉLULAS EN LAS CUALES SE PURIFICA EL

DNA?
Las células de las cuales se purifico el ADN, fueron los leucocitos gracias a que
estas son una de las células nucleadas de la sangre.

9. INVESTIGUE OTROS MÉTODOS PARA LA PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS

NUCLEICOS.

• Técnica de extracción de DNA de leucocitos (técnica de miller)

• Método wizard (promega, usa)
• PCR
• Ultra centrifugación
• Espectrofotometría
• Técnica de sedimentación de ácidos nucleicos.
• Separación del ADN mediante electroforesis en gel.
• Tecnica de millar
• Matriz de sílice
• Bioclean columns
• Resinas de intercambio inico
• Tecnica de millar
• Kit de purificación genómica del DNA
• Columnas de biolimpieza
 CONCLUSION

Con la elaboración de este trabajo hemos aprendido detalles importantes

concernientes al ADN, ahora conocemos su importancia y la manera en la cual
se analiza. Así también la función de algunas sustancias químicas
mencionadas en el trabajo, y la definición de electroforesis, que permite
afianzar mucho más nuestros conocimientos.