UNIDAD: 1 EL LABORATORIO DE AP/C

UNIDAD:1
El LABORATORIO DE A.P./C
1-ESTRUCTURA:
La estructura de un servicio hospitalario de Anatoma Patolgica/Citologa depende del
tipo de hospital de que se trate.
El laboratorio de AP/C, de un hospital, garantiza la realizacin de estudios
anatomopatolgicos de tejidos y clulas en tiempo pre, intra y postoperatorios, as como
estudios postmortem.
Se denomina material histolgico o citolgico a toda muestra de tejido o clula
obtenida de un individuo sano con la finalidad de investigar su estructura y composicin
Se denomina material anatomopatolgico, las muestras procedentes de individuos
enfermos utilizados para el diagnstico o investigacin etiolgica de la enfermedad.
El estudio de los tejidos/clulas enfermos se realiza a partir de material
anatomopatolgico procedentes de: necropsias, biopsias, extensiones citolgicas o
patologa experimental.
Una biopsia es una porcin de tejido, obtenida de un individuo vivo para su estudio
anatomopatolgico. Segn el objetivo perseguido, existen dos tipos de biopsias:
-Las biopsias de diagnstico tienen como objetivo concretar el diagnstico
histopatolgico de una enfermedad, solo comprenden una parte de la lesin.
-Las piezas quirrgicas son de mayor tamao, a menudo comprenden rganos enteros
e incluyen toda la lesin. Son obtenidas por el cirujano para realizar el tratamiento de la
enfermedad.
Una extensin citolgica es un conjunto de clulas independientes procedentes de un
tejido y extendidas sobre un portaobjeto que permite su observacin microscpica.
El Servicio de Anatoma Patolgica/Citologa de un hospital suele dividirse en varias
secciones: Citopatologa, Anatoma clnica y biopsias. En un hospital podemos
encontrarnos las siguientes secciones:
- Laboratorio General: Donde se procesan autopsias y biopsias.
- Inmunohistoqumica: Donde se realizan las tcnicas inmunohistoqumicas con
anticuerpos monoclonales y policlonales.
-

Microscopa electrnica:
ultramicrotmos.

Necesita

inclusin

en

resina

cortes

con

- Citologa: Aqu se procesa el material de puncin, lquidos orgnicos y citologa

exfoliativa.
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- Cultivos: Cultivos de rganos, primocultivos y lneas celulares.

- Biologa molecular: Hibridacin in situ.
En la recepcin de muestras se le asigna un nmero a las muestras que lleguen al
laboratorio, as como un cdigo que permita su identificacin y distribucin a las
diferentes secciones.
A las Biopsias se les suele asignar la letra B, a las citologa la letra C, y a las autopsias la
letra A. A esta letra se le aade un nmero de seis dgitos. Los dos primeros
corresponden al ao en curso y los cuatro restantes al orden de llegada de las muestras.
Las muestras suelen llegar previamente fijadas y con su historial, que incluye todos los
datos del enfermo, mdico que solicita el informe, tipo de tejido, peticin de tecnicas
especiales, orientacin diagnstica y otros datos de inters.
Las muestras que llegan al laboratorio se suelen guardar un tiempo, generalmente unos
seis meses, excepto aquellos casos que pueden ser de inters, que se guardarn mas
tiempo. Tambin se archivan los informes, fotografas, bloques, preparaciones
histolgicas y extensiones citolgicas.

2.-MATERIAL Y APARATOS:
1- MATERIAL DE VIDRIO

A: Volumtrico.
A1: De precisin: Se forma un menisco en la superficie liquida.
-Matraz aforado: Recipiente de vidrio para medir volmenes con gran precisin.
Se utilizan para preparar disoluciones.
Cuando se trate de un slido, previamente lo disolveremos en un vaso de precipitado con
una parte del disolvente y una vez diluido lo pasaremos al matraz y aadimos disolvente
hasta enrasar.
-Pipetas: Las podemos clasificar en:
-Graduadas: Tubo de vidrio terminado en punta. Se utilizan para dispensar
volmenes exactos.
Las podemos distinguir segn el color que tengan en su parte superior.
-Aforadas: Tubo de vidrio con un ensanchamiento en su parte media. Las hay de uno
o de doble aforo, segn lleve una sola marca de enrase en su parte superior o una en la
parte superior y otra en la inferior.
-Automticas: Las clasificamos aqu por dispensar volmenes exactos. Unas utilizan
unos pequeos tubos de vidrio y otras puntas de plstico desechables.
Buretas: Tubo de vidrio con un grifo cercano al extremo inferior y un ensanchamiento
en forma de embudo en el superior. Se utilizan para las valoraciones cido-base. Se
colocan en un soporte y se sujetan a este mediante nueces y pinzas.
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A2: Mediciones no precisas: No se forma menisco en la superficie.

-Matraz Erlenmeyer: Recipiente de vidrio con un cuerpo en forma de cono y un cuello
estrecho. Se utilizan para preparar y calentar disoluciones y junto a las buretas en las
valoraciones cido-base.
-Vaso de precipitado: Material de vidrio utilizado para preparar y contener disoluciones.
-Matraz esfrico: Parecido al matraz esfrico pero no tiene base.
- Matraz Kitasato: Parecido al matraz Erlenmeyer pero con una salida en el cuello.
Se utiliza para hacer el vaco.
-Copas graduadas: Recipiente de vidrio en forma de copa. Se utiliza para volmenes
no exactos.
-Probetas: Tubo de vidrio con la boca terminada en pico, y una base para mantenerla
vertical. Se utiliza para volmenes no precisos.

B: No volumtrico:
-Tubos: Recipientes de vidrio, los podemos clasificar en: tubos de ensayo y en tubos
de centrifuga. Los primeros se distinguen por ser mas largos y estrechos.
-Embudos: Se emplean para trasvasar lquidos de un recipiente a otro, o para filtrar.
-Embudo de decantacin o ampolla de decantacin: Material de vidrio con un
grifo en su parte inferior. Se utiliza para separar sustancias no miscibles con distintas
densidades.
-Vidrio de reloj: Material de vidrio en forma circular cncava, se utiliza para pesar
slidos.
-Mortero: Material de vidrio o de porcelana, que se utiliza para triturar slidos.
-Varilla de vidrio: Barra de vidrio macizo, que se utiliza para agitar disoluciones.

-Puente o paralela: Consiste en dos varillas de vidrio unidas por una goma. Se
utiliza en las tinciones.
-Cristalizadores: Recipientes de vidrio que se utilizan para cristalizar lquidos y para
las tinciones.
-Cubetas de tincin con tapadera: Material de vidrio en forma de cubo. Se
utilizan para las tinciones junto con el cestillo
-Cestillo de tincin: Recipiente de vidrio que lleva en su interior unas ranuras para
colocar los cortes o extensiones para su tincin.
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-Cubeta de Schiefferdecker: Parecida a la cubeta con tapadera, pero en su interior

lleva unas ranuras para introducir los portas.
-Cubeta Hellendahl: Cubeta de vidrio con tapadera, la parte superior mas ancha
que la base, lleva ranuras para separar los portas en la tincin.
-Cubeta Coplin: Material de vidrio con tapadera, en su interior lleva ranuras, para
introducir los portas verticalmente en la tincin, su base es cilndrica.
-Cubreobjetos: Pequeo cristal cuadrado o rectangular para cubrir preparaciones.
-Portaobjetos: Cristal rectangular de mayor grosor que el cubreobjetos.
-Bote de boca ancha: Recipiente de vidrio para contener reactivos o muestras.

2-MATERIAL NO VIDRIO:
-Frasco lavador: Bote de plstico con tapn y un tubo de salida, se utiliza para
contener agua destilada.
-Frasco de tincin: Bote de plstico de varios tamaos con una salida rgida en
el tapn, se utiliza para contener colorantes.
-Mechero Bunsen: Material de acero inoxidable que se conecta mediante una
goma a la salida del gas.
-Trpode: Material metlico con tres patas y un aro superior, donde se coloca la
rejilla de amianto o un matraz esfrico.
-Rejilla de amianto: Tela metlica cuadrada con una zona central circular de
amianto. Se apoya sobre el trpode para que la llama, llegue uniformemente a toda la
superficie del vaso de precipitado.
-Gradillas de alambre: Material metlico que se utiliza para colocar tubos.
-Cestillos de pipetas: Recipiente metlico o de plstico con agujeros, que se
utiliza para colocar pipetas.
-Cazos y esptulas de acero inoxidable: Se utilizan para pesar slidos.
-Barras de Leuckhart: Barras metlicas en forma de ele, que se utilizan para
hacer bloques.
los

-Bases metlicas: Placas metlicas para colocar las barras de leuckhart al hacer
bloques.

-Cpsulas metlicas: Cpsulas circulares de varios tamaos, con agujeros y

tapadera tambin perforada donde se colocan las muestras para procesarlas.

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-Sistema Tissue-Tek para inclusin: Consta de unos cassettes de plstico con

tapadera de plstico o metlica y unos moldes metlicos de varios tamaos. El
cassette se utiliza para procesar las muestras, una vez procesadas, se tira la tapadera
del cassette, se pone un poco de parafina en el molde metlico, se coloca la muestra,
despus el cassette y por ltimo se llena de parafina.
-Escobillones de limpieza: Se utilizan para limpiar recipientes de difcil acceso.

3- MATERIAL DE DISECCION:

Tijeras: Punta fina y roma; recta y curva.

Pinzas de diseccin: con dientes y sin dientes.
Pinzas en bayoneta:
Agujas de diseccin:
Cuchillos: de varios tamaos.
Esptulas: anchas y estrechas.
bistur (escalpelo): con cuchillas de varios tamaos.
Costtomo: (sierra para cortar hueso).
Tabla de diseccin.

4- APARATOS:
-Baos de inclusin o baos termostticos: Son recipientes que contienen agua,
cuya temperatura puede ajustarse mediante un termostato y se puede comprobar con un
termmetro. Los vamos a utilizar a unos 50 C, para estirar los cortes obtenidos con el
microtomo.
- Agitadores magnticos: Aparatos provistos de un imn, que se introduce en la
solucin a agitar y se mueve segn la velocidad establecida.
-Estufas: Llevan un termostato para mantener constante la temperatura, un botn
de encendido/apagado y un termmetro para comprobar la temperatura. Disponemos de
dos tipos: Horno Pasteur o estufa de desecacin, que se utiliza para secar material y
estufa de cultivo, para incubar microorganismos y cultivo de tejidos o para mantener
lquida la parafina. La estufa de desecacin se puede regular hasta 200 C mientras que la
de cultivo generalmente solo hasta los 100 C.
-Dispensador de parafina: Aparato que mantiene la parafina liquida que por medio
de un grifo puede dispensarla.
-Lavador de pipetas: Cilindro abierto que se conecta a una toma de agua y lleva un
tubo en forma de sifn; en su interior se introduce otro cilindro en forma de cesto donde
se introducen las pipetas con la punta hacia arriba.
-Reloj avisador: Reloj con sistema de alarma para avisar del tiempo transcurrido.
-Destilador de agua: Aparato que consigue agua destilada.

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-Campana de extraccin de humos.

-Campana de flujo laminar: Se utiliza cuando queramos trabajar en un medio
inerte. Evitando as contaminar los productos que manejemos o que estos contaminen
otras zonas.
-Centrifuga: Aparato donde se introducen los tubos con el material a centrifugar. Se
puede seleccionar la velocidad y tiempo de giro.
Es importante no abrirla hasta que est totalmente parada y que los tubos vayan
enfrentados unos a otros con igual cantidad de liquido.
-Placa refrigeradora: Placa metlica para enfriar los bloques antes de ser cortados.
-Placa calefactora: Placa metlica que se utiliza para mantener la parafina lquida a
la hora de hacer los bloques.
-Repro Vit: consta de una base donde se puede colocar un diafanoscopio, un eje
donde se acopla una cmara de fotografa con un fuelle, y lateralmente lleva a cada lado
una o dos lmparas en ngulo de 45. Se utiliza para fotografa macroscpica.
-Microscopios.
-Balanzas.
-Procesadores automticos.
-Microtomos.

5-GENERALIDADES DEL SERVICIO DE A.P:

OBJETIVOS GENERALES DEL ESTUDIO MACROSCPICO:

1.- Descripcin de la pieza a estudiar: esta descripcin la realiza el patlogo y es grabada

para elaborar su posterior informe.
2.- Seleccionar detalladamente las reas sobre las cuales se va a realizar el estudio
microscpico: este proceso debe ser realizado por el patlogo auxiliado.
3.- Descalcificacin de la muestra.
FIJACIN:
La funcin de la fijacin es evitar la autolisis y putrefaccin celular.
- La autolisis es la destruccin de las clulas por sus propias enzimas.
- La putrefaccin consiste en la destruccin celular por la accin de las bacterias
y microorganismos.
PRINCIPIOS GENERALES:
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1.- No existe un mtodo universal de fijacin. Un agente fijador adecuado para un

tejido, puede no serlo para otro.
2.- No todos los fijadores conservan indefinidamente un tejido ya que fijacin no
equivale a conservacin tisular.
3.- Un defecto de fijacin jams puede ser corregido.
4.- Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con graves defectos de
fijacin.
TIPOS DE FIJADORES:
1.- Por mtodos fsicos:
El mtodo utilizado es por congelacin para detener los procesos de autolisis y
putrefaccin. Pueden utilizarse el nitrgeno lquido o el isopentano a -50C.
2.- Por mtodos qumicos:
Actan desnaturalizando e insolubilizando las protenas tisulares. Los agentes
fijadores pueden ser simples o compuestos.

DESCALCIFICACIN QUMICA:
Es la completa eliminacin de sales de calcio presentes en los tejidos. Sus cualidades
principales son:
Producir una eliminacin completa de los depsitos de calcio.
No provocar efectos indeseables o artefactos sobre el tejido tratado.
No interferir con los procedimientos de tincin que se realicen con posterioridad.
Los agentes descalcificantes pueden ser:

cidos fuertes.
cidos dbiles.

SALA DE MICROSCOPA:
INCLUSIN:
Se realiza en un aparato denominado procesador de muestras, el cual consta de 12
depsitos con diferentes lquidos, que son:
-1 Formol.
-1 Alcohol de 70.
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-1 Alcohol de 80.
-1 Alcohol de 95
-3 Alcohol absoluto.
-2 Tricloro etileno.
-1 Xilol, que es un aclarante del anterior.
-2 Parafina.
Segn el tamao de la muestra, sta debe estar en estos lquidos diferentes horas
(normalmente durante 24h).
El mantenimiento del procesador y lquidos corre a cargo del tcnico.
Actualmente existen procesadores de muestras que se limpian automticamente.
MEDIOS DE INCLUSIN:
Existen dos tipos de medios de inclusin:
a) Medios no acuosos:
Los ms importantes son la parafina, la cual segn el punto de fusin puede ser
blanda (35C), dura (ms de 70C) y semidura (50-55C), celoidina, toluidina
(compuesta por nitrato de celulosa), esterwax (corroe los metales), metacrilato (se utiliza
para la inclusin en microscopa electrnica).
b) Medios acuosos:
Gelatina, jabones, hidroxietil metacrilato.
INCLUSIN EN PARAFINA:
Se realiza en un procesador automtico y despus se pasa a una estacin de dispensacin
de parafina. A la muestra se le aade parafina caliente y el bloque se coloca en la placa
fra para su solidificacin. La muestra ya est preparada para realizar los cortes en el
microtomo.
FUNCIONES DEL T.E.A.P.:
El tcnico al recibir los volantes y piezas, comprueba en el volante si estn todos los
datos y si son correctos.
Seguidamente ste registra las piezas, ponindole los siguientes datos:
- Nombre y apellidos del enfermo.
- Edad.
- Procedencia de la pieza.
- Servicio del que procede la pieza.
- Mdico que ha realizado la biopsia.
- Nmero de afiliacin a la Seguridad Social.
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- Se asigna un n correspondiente a cada pieza, segn el nmero de las

mismas.
Segn el nmero que se le ha asignado a la pieza corresponde a un mdico o a otro.
Se preparan los cassettes con su nmero correspondiente segn la pieza.
Mientras el patlogo realiza las secciones macroscpicas, el tcnico toma nota del
nmero de piezas y cassettes que se incluyen para el estudio. Tambin anota la posible
peticin de tcnicas especiales y existencia de material restante para nuevas inclusiones y
se denomina con la palabra queda. Seguidamente los cassettes deben incluirse en el
lquido fijador o descalcificador adecuado para su posterior estudio.

El fijador o descalcificador debe ser preparado por el tcnico.

Limpieza y cuidado del procesador y dispensador de parafina.

Realizacin de cortes, limpieza y mantenimiento del microtomo.

Realizacin de coloraciones, as como, limpieza y mantenimiento de los

colorantes.
Montaje.

Archivo de bloques y portaobjetos.

NECROPSIAS:
Es el estudio realizado para conocer la causa de la muerte. Se distinguen dos tipos:
- Medico legal: Trata de investigar el origen de un fallecimiento cuando existen
implicaciones penales o civiles en la causa o en las circunstancias de ste.
- Clnica: Cuya finalidad es conocer la historia natural de la enfermedad que
provoc la muerte.
Las necropsias se realizan en la sala de necropsias, las cuales deben disponer de:
Primero se les debe pedir permiso a los familiares. Se hace un resumen de la historia
clnica del cadver.
La peticin se registra en un libro poniendo su nmero correspondiente seguido de la
letra A y el ao.
Hay dos maneras de realizar una necropsia:
Parciales: - Abdominales
- Pectorales
- Craneales cerebrales
Totales: Abdominales y pectorales e incluso craneales.
Una vez extrados los rganos del cadver, el mdico realiza el tallado y toma de
muestras. La muestra es introducida en un cassette de color verde, que se diferencian de
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los de biopsias, porque en stas son blancos. Seguidamente se realizan todos los
procedimientos igual que en las biopsias.
La preparacin del cadver es realizada por el mozo de autopsias, el tcnico no tiene la
obligacin de asistir.
INTRAOPERATORIAS.
Se las denomina simplemente intra.
La pieza es trada en fresco por un celador mientras se est realizando la operacin. Este
proceso debe ser muy rpido, y sirve para determinar si lo que padece el enfermo es
maligno, y extirpar todo lo que sea necesario.
La pieza es tallada rpidamente por el patlogo para proceder a su congelacin, que se
realizar con nitrgeno lquido o isopentano a -50C.
Una vez congelada la pieza, para evitar la putrefaccin y la autolisis tisular, se procede al
corte en microtomo, que es igual que el de tipo MINOT, pero con una cuchilla ms
resistente, con un dispositivo antienrrollamiento. El corte se recoge directamente con un
porta y se procede a la tincin pertinente.
El diagnstico es remitido rpidamente al cirujano. A la muestra sobrante se le realizan
los mismos procedimientos que a una biopsia.
FUNCIONES DEL TCNICO:
Recogida de muestra y registro en el libro de biopsias especificando intraoperatorias.
- Congelacin y procedimiento de cortes.
- Tincin de los cortes.
- Y todo el proceso normal de las biopsias.
CITOLOGA:
Ciencia que estudia la estructura, morfologa y composicin de las clulas.
Toda muestra que llega a citologa es registrada dndole un nmero y la letra C.
Segn la muestra que llegue, se le realizarn los procedimientos adecuados. Segn la
tcnica que el patlogo solicite, podemos encontrar:
- Hematoxilina-Eosina.
- Panptico.
- Masson.
- PAS.
- Papanicolau, etc...
A la citologa se le realizan todos los procedimientos igual que la biopsia. El tcnico tiene
las funciones de:
- Recogida de las mismas.
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- Tcnicas o procedimientos necesarios.

- Coloraciones.
- Registro de salida de los mismos.

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