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CEUNSP - Itu
20/01/2014
Micromtrico
Partes principais do microscpio ptico binocular.
O microscpio (palavra de origem grega; micros = pequeno; scopein =observar, olhar com
ateno) um aparelho destinado a ampliar a imagem das microestruturas observadas,
utilizando para isso, a luz e um sistema de lentes. Ele composto pelas seguintes partes:
2. PARTES DO MICROSCPIO.
Todo microscpio composto de partes mecnicas e partes pticas, que juntas nos permitem
a observao detalhada de materiais em estudo.
Mecnicas
a)
Base ou p (suporte do microscpio): feito de ligas de metais pesados para dar mais
estabilidade e impedir que o aparelho tombe. usado para o repouso do aparelho na mesa de
trabalho.
b)
Brao ou coluna: Sustenta a parte ptica (lentes) e serve para o transporte do
aparelho. Pea que liga o p parte superior do microscpio.
Prof. Dr. Rosemeire Bueno
c)
Platina ou mesa: forma redonda ou retangular, fixa, mvel ou giratria no plano
horizontal. Funciona como uma mesa que serve de apoio para a lmina que contm o
preparado a ser observado. Possui presilhas para melhor fixar a lmina e dotada de um
orifcio que permite a passagem da luz.
d)
Presilhas ou porta-lmina: local onde a lmina com o material a ser observado se
encaixa. A lmina pode ser deslocada em todas as direes, sempre no mesmo plano.
e)
Tubo ou canho: no microscpio monocular, o tubo representa um cilindro metlico,
tendo na parte superior um encaixe para a ocular e na parte inferior um sistema mecnico que
o adapta ao revlver.
f)
Botes macromtrico e micromtrico: possuem comandos prprios localizados
lateralmente, permitindo uma focalizao precisa, afastando ou aproximando o preparado das
objetivas. Com o boto macromtrico obtm-se a focalizao tica grosseira do material
examinado, enquanto o micromtrico permite o ajuste fino (2 milsimos de milmetro), dando
dessa forma nitidez imagem.
g)
Revlver: uma pea giratria na qual esto inseridas 3 ou 4 objetivas, sempre na
ordem de seu aumento progressivo. Para obter aumentos sucessivos (ampliao da imagem)
ou vice-versa, j focalizados macrometricamente, basta girar o cmbio de objetivas ou revlver
em um s sentido, durante as observaes microscpicas.
h)
"Charriot": pea ligada platina, com a funo de movimentar a lmina no plano
horizontal da esquerda para a direita e vice-versa, e de trs para frente e vice-versa.
ticas
a)
Oculares: so encaixadas na extremidade superior do tubo. So compostas de duas
lentes que ampliam a imagem formada pela objetiva e corrigem possveis aberraes pticas.
No tornam mais ntidas as estruturas do objeto a ser estudado. No aconselhvel o uso
simultneo de objetivas e oculares de forte aumento. O campo visual seria pouco ntido nas
estruturas celulares, quase no haveria luminosidade e o campo tico seria mnimo. As
oculares trazem inscries que indicam a sua capacidade de aumento: 15X significa ocular com
poder de aumento de 15 vezes.
b)
Objetivas: so sistemas ticos, construdos com 4, 5, 6 ou mais lentes superpostas.
Ampliam a imagem do material examinado, corrigindo tambm os defeitos cromticos dos
raios luminosos. As objetivas trazem inscries que especificam sua capacidade de aumento:
10X significa objetiva com poder de aumento de 10 vezes (menor aumento); 40X corresponde
a objetiva com poder de aumento de 40 vezes (aumento superior) e 100X a objetiva com
poder de aumento de 100 vezes (leo de imerso). Denomina-se imerso a tcnica pela qual
se coloca um fluido (leo transparente: leo de cedro ou sucedneo sinttico) entre a objetiva
e a lamnula, o que resulta na melhoria do poder de resoluo do microscpio e da qualidade
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PARTES DO MICROSCPIO
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5
6
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2
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1. Identifique, com base nesta figura, cada uma das partes apontadas:
1-__________________________________
2-__________________________________
3-__________________________________
4-__________________________________
5-__________________________________
6-__________________________________
7-__________________________________
8-__________________________________
9-__________________________________
10-_________________________________
11-_________________________________
12-_________________________________
13-_________________________________
14- ________________________________
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11) Olhando pela ocular, desloque toda a lmina vagarosamente para poder explorar
todo o campo da preparao.
12) Passe para a objetiva de 40X. Nessa situao somente o boto micromtrico
utilizado para ajustar a focalizao. Caso voc no consiga focalizar volte para a
objetiva menor e repita toda a operao. Nunca force a objetiva sobre a lmina,
voc poder quebrar a lmina.
13) Se voc no dispe de leo de imerso no utilize a objetiva de 100X.
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5. ATIVIDADE
Responder as seguintes questes:
1. Onde se coloca a lmina com o objeto a ser focalizado no microscpio?
Resposta:_____________________________________________________________
2. Como se reconhece a objetiva de imerso?
Resposta:_____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
3. Como se focaliza em imerso?
Resposta:_____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
4. Qual a finalidade do uso do leo de imerso na focalizao em imerso?
Resposta:_____________________________________________________________
5. Como se calcula o aumento final do objeto aps a focalizao?
Resposta:_____________________________________________________________
6. Qual o aumento final obtido quando se usa uma objetiva de 100x e ocular de
10x?
Resposta:_____________________________________________________________
7. Qual a finalidade do condensador?
Resposta:_____________________________________________________________
8. Qual a finalidade do diafragma?
Resposta:_____________________________________________________________
9. Cite 5 cuidados bsicos que voc deve ter com o microscpio aps o uso.
Resposta:_____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
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2. OBJETIVOS.
Introduzir o aluno nas atividades de laboratrio. Conhecer o funcionamento do
microscpio ptico, aprender a manipul-lo, conhecer as unidades de medida
utilizadas em microscopia e relacionar as imagens formadas e os aumentos obtidos
com o seu funcionamento.
3. MATERIAIS:
-
Microscpio.
Lminas e lamnulas.
Papel absorvente ou papel filtro.
Letras recortadas.
Recipiente dom gua de torneira.
Tesoura.
Conta-gotas ou pipeta Pasteur.
Rgua de plstico.
4. PROCEDIMENTO.
Obs.: Os materiais a serem observados so colocados sobre uma lmina de vidro e
cobertos por outra, muito delgada, que a lamnula.
Lminas e lamnulas devem estar bem limpas para serem usadas. Evite toc-las nas
superfcies com os dedos: segure-as pelos bordos usando o polegar e o indicador.
Para limp-las use leno de papel. As lamnulas so muito frgeis e quebram-se
facilmente.
a) Recortar as letras A, F ou L do jornal e/ou revistas (as menores letras possveis) ou
utilizar letras recortadas.
b) Com o auxlio de uma pina e um pincel, colocar a letra no centro de uma lmina
limpa, com a letra voltada para cima, e acrescentar uma gota de gua sobre a
mesma.
c) Colocar uma lamnula sobre a gota da seguinte maneira: encostar uma das bordas
da lamnula sobre a lmina, de maneira que forme um ngulo de 45. Baixar a
lamnula vagarosamente at que a mesma cubra a amostra.
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g) Colocar uma rgua sobre a platina, focalizar suas divises utilizando todas as
objetivas do microscpio (proceder de modo idntico ao das lminas) e medir o
dimetro do campo em milmetros e em micrometros.
h) Terminado o trabalho, retire a lmina da platina, coloque a objetiva de menor
aumento, desligue o fio da tomada. Verifique se o microscpio no tem respingos
de gua. Enxugue-o se for o caso. Coloque a capa de proteo.
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b)
c)
d)
Olhando pela ocular mova lentamente a lmina para a esquerda, para a direita,
para frente e para trs. Descreva o que voc nota.
e)
f)
g)
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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Objetiva
Olho nu
4X
Objetiva
Objetiva
10X
40X
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1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Conhecer alguns mtodos de observao das clulas, identificando os efeitos
produzidos por corantes em um mesmo material. Observar um tipo de clula de
origem animal, as clulas epiteliais que revestem a cavidade bucal, diferenciando-a da
clula vegetal e bacteriana.
3. MATERIAIS:
- Microscpio.
- Azul de metileno a 1% ou 0,5% ou lugol.
- Lmina e lamnula.
- Conta-gotas ou pipeta Pasteur.
- Palito de sorvete ou esptula.
- Clulas descamadas da mucosa bucal
- Papel filtro.
O azul de metileno um
composto aromtico
heterocclico solvel em
gua, com a frmula
molecular C16H18CIN3S.
Usado como corante e
indicador, um remdio de
cor azul, em farmcias
comuns.
4. PROCEDIMENTO.
a) Com o auxlio de um palito de sorvete ou esptula, raspar suavemente a mucosa
bucal da face interna da bochecha para a obteno de clulas da mucosa bucal.
b) Preparao a fresco sem colorao: Colocar o material no centro de uma lmina
limpa com uma gota de gua destilada ou soluo salina.
c) Descarte o objeto que serviu para coletar o material da boca.
d) Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar).
e) Enxugue o excesso de soluo encostando um pedao de papel filtro na borda
externa da lamnula, na linha de contato entre esta e a lmina.
f)
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Sem tirar a lamnula apoie a lmina e coloque uma gota de azul de metileno na
linha de contato entre a lamnula e a lmina.
j)
No lado oposto da lamnula (sem retir-la), encoste um pedao de papel filtro. Este
papel absorver a soluo salina ou gua, permitindo que o corante penetre, por
capilaridade, por baixo da lamnula, pelo outro lado.
5.
RESULTADOS
solicitado).
A. Faa um esquema representando o que voc observou, antes e aps a colorao.
B. Questes:
1. As clulas epiteliais apresentam forma e contorno definidos? Qual a disposio
das mesmas?
2. Ao raspar a parte interna da bochecha, que tipo de tecido foi coletado?
3. O azul de metileno, sendo um corante bsico, cora principalmente o ncleo ou o
citoplasma? Por qu?
4. Quais as estruturas bsicas de uma clula animal?
5. O que voc observa no interior das clulas? Com e sem corante.
6. Voc notou parede celular, vacolos e plastos no citoplasma desta clula? Por
qu?
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wpcontent/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Humanas_web1.pdf
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Sem corante
Com corante
Aumento: 10X
Sem corante
Com corante
Aumento: 40X
Sem corante
Com corante
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1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Conhecer alguns mtodos de observao das clulas e observar a estrutura da
clula vegetal, diferenciando-a da clula animal.
3. MATERIAIS:
-
Microscpio.
Azul de metileno 0,1% ou lugol.
Lmina e lamnula.
Conta-gotas ou pipeta Pasteur.
Lmina de barbear e pina.
Papel filtro.
gua destilada.
Cebola e tomate.
4. PROCEDIMENTO.
4.1. Cebola
a. Cortar uma cebola em quatro e, da parte
interna de uma escama (catfilo) retirar
uma pelcula correspondente a epiderme
da clula vegetal, com o auxlio de uma
pina.
b. Colocar a pelcula sobre uma lmina limpa
com
uma
gota
de
gua
destilada,
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http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wpcontent/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Vegetais_web1.pdf
Prof. Dr. Rosemeire Bueno
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Sem corante
Com corante
Aumento: 10X
Sem corante
Com corante
Aumento: 40X
Sem corante
Com corante
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4.2. Tomate
a. Com o auxlio de uma lmina de barbear, recortar um tringulo com cerca de 1
cm de lado na superfcie de um tomate maduro.
b. Com uma pina, retirar a epiderme do pedao recortado (primeira camada
externa).
c. Colocar a pelcula sobre uma lmina limpa com uma gota de gua destilada,
distendendo-a muito bem.
d. Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar).
e. Remover o excesso de gua com papel filtro e observar ao microscpio.
f.
Preparar outra lmina, corar o material com azul de metileno 0,1% e observar
ao microscpio.
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wpcontent/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Vegetais_web1.pdf
Prof. Dr. Rosemeire Bueno
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Sem corante
Com corante
Aumento: 10X
Sem corante
Com corante
Aumento: 40X
Sem corante
Com corante
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1.
INTRODUO.
2.
OBJETIVOS.
Identificar as bactrias e suas diferenas em relao s clulas eucariticas.
Aprender o procedimento para utilizao de leo de imerso.
3.
MATERIAIS:
-
Microscpio.
Azul de metileno 0,1% ou lugol.
Fucsina bsica.
Lmina e lamnula.
Esptula.
Conta-gotas ou pipeta Pasteur.
Papel filtro.
leo de imerso.
4. PROCEDIMENTO.
a)
Retire um pouco da placa bacteriana dos seus dentes com o auxlio da esptula e
espalhe esse material em uma lmina.
b)
c)
d)
e)
Repita o procedimento adicionando agora uma gota de azul de metileno. 0,1% (de
forma idntica a preparao para clula animal) e observar ao microscpio.
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Aumento: 100X
Questes:
1. O que so bactrias?
2. Por que adicionou azul de metileno?
3. Quais as diferenas entre uma bactria (clula procaritica) e uma clula
animal (eucaritica)?
6.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Demonstrar a presena da membrana em clulas vegetais e animais. Verificar a
permeabilidade da membrana celular. Observar o comportamento da membrana
quanto a sua permeabilidade seletiva a diferentes substncias e tratamentos.
3. MATERIAIS:
- Beterraba (Beta vulgaris).
- Solues de acetona: (25%, 50%, 75% e 100%).
- Tubos de ensaio e estante para tubos.
- gua destilada e provetas.
4. PROCEDIMENTO.
a)
b)
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Questes:
1. Explique as diferentes coloraes observadas nos 5 tubos analisados.
2. Como a membrana plasmtica sendo uma membrana semi-permevel tornou-se
permevel?
3. Por que no tubo 5 ocorreu nova alterao de colorao?
4. Que nome se d ao movimento de gua atravs da membrana plasmtica?
5. Qual a diferena entre os fenmenos de difuso e osmose?
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Demonstrar a presena da membrana plasmtica em clulas vegetais. Visualizar o
processo de osmose em clulas vegetais e determinar quais os meios isotnicos
hipertnicos e hipotnicos clula vegetal, baseando-se na sua alterao estrutural.
Observar os fenmenos de plasmlise e deplasmlise.
3. MATERIAIS:
-
Lminas e lamnulas.
Lmina de babear e pina.
Solues de NaCl (0,9% e 1,5%).
gua destilada e papel filtro.
Epiderme de cebola (Allium cepa) ou folhas de Tradescantia.
Microscpio.
4. PROCEDIMENTO.
a) Retirar cuidadosamente uma pelcula fina correspondente a epiderme inferior da
folha de Tradescantia ou da cebola, com o auxlio de uma lmina de barbear.
b) Colocar o pelcula sobre uma lmina limpa com uma gota da soluo de NaCl
0,9%, distendendo-a muito bem.
c) Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar) e observar ao
microscpio.
d) Retirar a soluo de NaCl 0,9% utilizando papel filtro e adicionar uma gota de NaCl
1,5%.
e) Observar ao microscpio o fenmeno da plasmlise e o contorno da membrana
plasmtica.
f)
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Questes
1. Explique por que as saladas temperadas murcham aps determinado tempo.
2. Diferenciar os processos de plasmlise e deplasmlise em clulas vegetais.
3. Certas conservas so feitas com salmoura. Voc capaz de explicar por que
no ocorre ataque dos micro-organismos nesses alimentos?
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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Cebola
Tradescantia
Cebola
Tradescantia
Cebola
Prof. Dr. Rosemeire Bueno
Tradescantia
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1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Visualizar o processo de osmose em clulas animais. determinar quais os meios
isotnicos hipertnicos e hipotnicos hemcea, baseando-se na sua alterao
estrutural. Observar o fenmeno da hemlise.
3. MATERIAIS:
- Lanceta descartvel.
- Lminas e lamnulas.
- Solues de NaCl (0,9% e 1,5%).
- gua destilada e papel filtro.
- Microscpio.
- Luvas cirrgicas.
4. PROCEDIMENTO.
a) Retirar cuidadosamente uma gota de sangue do dedo (puno digital) e colocar
sobre uma lmina limpa com uma gota da soluo de NaCl 0,9%.
b) Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar) e observar ao
microscpio.
c) Repetir o experimento utilizando uma gota da soluo de NaCl 1,5% e observar ao
microscpio.
d) Repetir o experimento utilizando uma gota de gua destilada e observar ao
microscpio o fenmeno da hemlise.
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34
Questes:
1. O que hemlise? Onde e como ela ocorreu?
2. Determine as solues hipotnicas, hipertnicas e isotnicas.
3. Diferenciar os processos de osmose vegetal e animal.
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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2. OBJETIVOS.
Observar as clulas de levedura devido a facilidade de reproduo deste microorganismo em pequeno espao de tempo.
3. MATERIAIS:
-
Microscpio.
Fermento.
conta-gotas.
lmina e lamnula.
Pincel.
placa de Petri.
Bquer.
acar e gua.
guardanapo de papel.
4. PROCEDIMENTO.
a) Dissolver uma pequena poro de fermento em 2 mL de gua. Adicionar 1/4 colher
(caf) de acar. Misturar.
b) Fazer um esfregao do material sobre uma lmina de vidro, cobrir com lamnula e
observar ao microscpio.
c) Desenhe a sua observao.
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Aumento: 4X
Aumento: 40X
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
Aumento: 10X
Aumento: 100X
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PRTICA 10 - MITOSE.
PRTICA 10 - MITOSE.
Observao de mitose em clulas vegetais (tcnica do esmagamento).
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Aprender a tcnica de preparao de lmina para o estudo microscpico da diviso
celular e observar as diferentes fases da mitose em razes de cebola comum (Alium
cepa).
3. MATERIAIS:
- Microscpio.
- Bquer.
- Lminas e lamnulas.
- Estilete, pina e pincel.
- Lamparina ou bico de Bunsen ou vela.
- Papel filtro.
- Tubo de ensaio.
- Cebola (raiz em crescimento).
- Papel mata-borro.
- Placa de Petri ou vidro de relgio.
- Tesoura.
- gua.
- Orcena actica 70% (corante preparado em cido actico) ou soluo a 1,5%
4. PROCEDIMENTO.
a) Raspar levemente com uma faca as razes secas das cebolas novas, eliminandoas sem ferir o bulbo. Colocar somente a parte inferior da cebola em um bquer
contendo gua, mantendo-o em local sombreado. Aproximadamente em uma
semana aparecero diversas razes.
b) Cortar com a tesoura ou estilete as extremidade das razes (3 ou 4 mm) e
imediatamente colocar no tubo de ensaio contendo 0,5 mL a 1,0 mL de orcena
actica 70% ou 2,0 mL de orcena 1,5%.
c) Ferver com cuidado durante 3 ou 4 vezes e transferir o material para uma placa de
Petri ou vidro de relgio.
Prof. Dr. Rosemeire Bueno
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PRTICA 10 - MITOSE.
d) Com uma pina ou pincel, transfira uma ou duas pontas de raiz para uma lmina
limpa. Adicionar 1 a 2 gotas de orcena actica fria sobre as razes e pic-las com
o estilete.
e) Aguardar 5 minutos, colocar a lamnula sobre o material, evitando a formao de
bolhas de ar. Envolver a lamnula com um papel mata-borro e com o polegar,
esmagar levemente o tecido da raiz.
f)
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
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PRTICA 10 - MITOSE.
Prfase
Metfase
Anfase
Telfase
Intrfase
40