Professional Documents
Culture Documents
TRABAJO DE GRADO
Requisito final para optar al ttulo de Qumico Industrial
DIRECTOR:
Qco. MSc. JUAN PABLO ARRUBLA VELEZ
Presentado por:
HUGO FERNANDO ARIAS LOAIZA
Los suscritos director y jurado del presente trabajo de grado, una vez revisada la
versin escrita y presenciado la sustentacin oral, decidimos otorgar:
La nota de
_______________________________________
Con la connotacin
_______________________________________
_______________________________________
Jurado:
Firma:
_______________________________________
Jurado:
Firma:
_______________________________________
A Yenny y Mara.
AGRADECIMIENTOS
Quiero agradecer al Doctor Jos Hiplito Isaza Martnez, gran amigo y maestro, de
quien he aprendido todo lo que se sobre cromatografa y qumica analtica, al
director de este trabajo Juan Pablo Arrubla Vlez docente de la escuela de
qumica de la Universidad Tecnolgica de Pereira por sus acertadas orientaciones
y a Diana Patricia Pelez Manrique, analista del Laboratorio de Calidad de
Productos Naturales por su invaluable colaboracin en la ejecucin de este
trabajo.
TABLA DE CONTENIDO
INDICE DE TABLAS
15
INDICE DE FIGURAS
17
RESUMEN
19
INTRODUCCION
21
JUSTIFICACIN
23
OBJETIVOS
25
1. MARCO TEORICO
27
1.1. EL CAF
27
29
30
31
33
35
35
37
40
40
41
45
47
47
48
1.4.1.4. Detector
53
55
59
59
1.5.1. Exactitud
60
1.5.2. Precisin
60
61
65
65
2. PARTE EXPERIMENTAL
67
67
2.2. ANALITOS
67
2.3. ESTANDARES
68
68
69
69
70
71
71
2.5.1. Molienda
71
71
72
74
74
75
3. DATOS Y RESULTADOS
77
77
77
78
79
82
83
86
87
87
87
88
89
92
93
5. CONCLUSIONES
97
BIBLIOGRAFA
99
ANEXOS
103
INDICE DE TABLAS
38
41
50
53
57
68
68
69
71
79
80
82
82
83
Tabla 18. Relacin seal ruido de los muestras de caf verde en blanco para
evaluar el efecto de la matriz
84
85
85
86
90
94
94
INDICE DE FIGURAS
47
48
54
56
58
63
73
74
75
77
78
81
RESUMEN
estuvieron por debajo del 15% al igual que los porcentajes de error en las
concentraciones medidas.
19
INTRODUCCION.
21
22
JUSTIFICACIN
Colombia ha sido tradicionalmente uno de los mayores proveedores de caf suave
en el mercado internacional y est sujeto a legislaciones cada vez ms rigurosas
que controlan los residuos de contaminantes tipo plaguicidas en los productos
agrcolas de exportacin.
23
OBJETIVOS.
OBJETIVOGENERAL
Estandarizar una metodologa para la determinacin multiresiduo de plaguicidas
organofosforados y triazoles
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Establecer los atributos del mtodo de cromatografa de gases acoplado a
espectrometra de masas para la determinacin de plaguicidas en caf
verde.
Evaluar la tcnica de extraccin en fase slida por medio de los porcentajes
de recuperacin de los analitos a partir de la matriz de caf.
Evaluar los interferentes de la matriz del caf en la lectura instrumental y
calcular los lmites de deteccin y cuantificacin del mtodo.
Evaluar la precisin global del mtodo mediante la estimacin de la
incertidumbre de la medicin.
25
1. MARCO TERICO.
1.1. EL CAF
Se conocen como caf los granos obtenidos de unas plantas perennes tropicales
(cafetos), morfolgicamente muy variables, los cuales, tostados y molidos, son
usados principalmente para preparar y tomar como una infusin [29].
El gnero pertenece a la familia de las Rubiceas (Rubiaceae), que tiene
alrededor de 500 gneros y ms de 6000 especies, la mayora rboles y arbustos.
Son principalmente de origen tropical, y de una amplia distribucin, a ella
pertenecen plantas medicinales como la ipecacuana (Psichoria ipecacuanha), o la
Cinchona spp., de la cual se extrae la quinina [29].
Taxonmicamente, todas estas plantas se clasifican como del gnero Coffea, y se
caracterizan por una hendidura en la parte central de la semilla. Se encuentran
desde pequeos arbustos hasta rboles de ms de 10 m.; sus hojas, que son
simples, opuestas y con estpulas, varan tanto en tamao como en textura; sus
flores son completas (en la misma flor se encuentran todos los rganos) blancas y
tubulares; y los frutos, son unas drupas de diferentes formas, colores y tamaos,
dentro de las cuales se encuentran la semillas, normalmente dos por fruto [29].
La primera descripcin de una planta de caf fue hecha en 1592 por Prospero
Alpini y, un siglo despus, Antoine de Jussieu (1713) la denomin Jasminum
arabicanum (la consider un jazmn). Fue Linneo (1737) quien la clasific en un
nuevo gnero, el gnero Coffea, con una sola especie conocida: C. arabica. Hoy,
se reconocen 103 especies, sin embargo, slo dos son responsables del 99% del
comercio mundial: Coffea arabica y Coffea canephora. Son originarias de frica, o
de Madagascar (incluido los Comores) [29].
27
Los granos de caf son las semillas de un fruto llamado popularmente cereza.
Estas cerezas estn compuestas por una cubierta exterior, el exocarpio, el cual
determina el color del fruto; en el interior hay diferentes capas: el mesocarpio, es
una goma rica en azcares adherida a las semillas que se conoce como muclago;
el endocarpio es una capa amarillenta que cubre cada grano, llamada pergamino;
la epidermis, una capa muy delgada conocida como la pelcula plateada; y los
granos o semillas, el endosperma, conocidos como el caf verde, que son los que
tuestan para preparar los diferentes tipos de caf [29].
El caf es el principal producto agrcola de exportacin, representa el 52% de las
exportaciones de todo el sector agropecuario con un valor de cosecha cercano a 5
billones de pesos anuales, ingresos que llegan a ms de dos millones de personas
en la zona rural por lo que se considera el principal dinamizador de la economa
rural en Colombia [7].
Las especies del caf ms importantes comercialmente en el mundo son Arbica
(Coffea arabica L) y Robusta o Canephora (Coffea canephora). Coffea canephora
tiene una amplia distribucin geogrfica y se encuentra silvestre en el frica,
como en Congo, Sudn, Uganda, y el Noroeste de Tanzania y Angola.
Aproximadamente, el 35% del caf que se comercializa en el mundo es de esta
especie, conocida como Robusta. Las zonas bajas tropicales de frica,
permitieron que esta especie desarrollara con el paso de los siglos resistencia a
numerosas plagas y enfermedades. Es en consecuencia ms resistente a muchas
de las enfermedades del caf, especialmente a la roya (Hemileia vastatrix), y esta
caracterstica determin su cultivo en el mundo a comienzos del siglo pasado. Se
cultiva generalmente en
28
entre la latitud
de sacos de 60 kilos mientras que en el mismo mes del ao 2011 fue de 7,57
millones, no obstante las exportaciones cafeteras colombianas presentaron una
leve cada de 602.693 a 582.104 sacos [8].
En cuanto a la produccin durante el ao cafetero que termin, Colombia ocup el
cuarto lugar con 7,8 millones de sacos de 60 kilos, el primer lugar lo ocupa Brasil,
con 43,4 millones de sacos; seguido de Vietnam, con 20 millones, e Indonesia,
con 8,2 millones de sacos de caf. El total mundial producido fue de 131,2
millones de sacos [8].
Aunque la participacin en el volumen de produccin mundial ha descendido
frente a Brasil y Vietnam, la participacin en valor de las exportaciones mundiales
se ha mantenido superior al 15%, lo que refleja el posicionamiento del caf de
Colombia en los mercados externos [7].
1.1.3. Principales enfermedades del caf
El control de las
31
32
de los frutos. El hongo es un moho blanco que se espolvorea en los cafetales para
que mate parte de la poblacin de la broca [31].
La broca se expande a otras plantaciones por varias vas: en las semillas y frutos
atacados; cuando el hombre los lleva de un lugar a otro; en la ropa, sombrero o
calzado de las personas que transitan por las plantaciones; en herramientas y
equipos, tales como machetes, costales y canastos; en los vehculos; y en el agua
que se usa durante el lavado del caf, etc [31].
1.1.4.2. El minador de la hoja, Leucoptera coffeellum
Es una plaga muy daina que afecta principalmente el rea fotosinttica y causa la
defoliacin de los rboles, y ha obligado a los agricultores de las zonas bajas al
uso de insecticidas [31].
Es conocida como una especie monfaga porque slo ataca el gnero Coffea. Se
ha encontrado resistencia en las especies diploides como Coffea stenophylla. Los
daos son causados durante su estado de larva, cuando consume entre 1,0 y 2,0
cm de rea foliar durante su proceso evolutivo. Si concurren varias larvas en una
sola hoja puede llegar a causar necrosamiento en el 90% de su estructura [31].
1.1.4.3. La palomilla de la raz
Son varias especies: Dismicoccus alazon, D. brevipes y D. criptus que
generalmente estn asociadas con el hongo Septobasidium y las hormigas del
gnero Solenopsis.
Las colonias se inician desde el almcigo, donde afectan el cuello de la raz de las
plantas, y en el campo su poblacin aumenta y es cuidada por las hormigas. Los
sntomas externos en el rbol son similares a los producidos por un ataque de
llagas, que ocasionan el marchitamiento generalizado de la planta [31].
Su control es preventivo. Una vez establecida en los lotes es muy costoso y
dispendioso manejarla, y en muchos casos es mejor sustituir los rboles atacados.
34
insecticidas
de
un
compuesto
orgnico
clorado
llamado
35
Aunque el insecticida DDT de Mller empez con mucho xito a mediados del
siglo 20, al final cay vctima de las mismas propiedades que lo haban logrado
llevar a la fama. Su extrema estabilidad qumica le confera una persistencia
inaceptable en el ambiente; y aunque su toxicidad aguda para los mamferos era
relativamente baja, su alta solubilidad en lpidos le confera una alta toxicidad
crnica y una alta tendencia a la bioacumulacin y la biomagnificacin. Se estima
que para el ao 1963, ya se haban fabricado y aplicado al ambiente un total de
453 millones de Kilogramos de DDT a nivel mundial [10].
El uso masivo de este insecticida empez a mostrar un nuevo problema en la
proteccin de cultivos, la resistencia biolgica de los insectos. En 1950, se
empez a notar que las dosis normales de DDT en los cultivos de algodn de
Estados Unidos, no estaban controlando las plagas como lo hacan antes. Los
bilogos del USFDA reportaron que se estaban formando razas de insectos
resistentes al DDT.
36
37
Forato
Terbufos
Cl
Clorpirifos
O
Disulfoton
Cl
O
O
S
S
Cl
38
Triadimefon
O
Triadimenol
OH
C
O
Cl
1-(4-Cloro-fenoxi)-3,3-dimetil-1-[1,2,4]triazol-1-il-2-butanona
FM: C14H16ClN3O2
PM : 293.78
LD50: 363 mg/Kg
CAS: 43121-43-3
FUNGICIDA
Nombre comercial: Amiral, Bayleton
Clasificacin: Triazol
Clase: III (ligeramente peligroso)
1-(4-Cloro-fenoxi)-3,3-dimetil-1-[1,2,4]triazol-1-il-2-butanol
FM: C14H18ClN3O2
PM : 295.80
LD50: 700 mg/Kg
CAS: 55219-65-3
FUNGICIDA
Nombre comercial: Bayfidan, Baytan, Summit
Clasificacin: Triazol
Clase: III (ligeramente peligroso)
Cl
Propiconazol
O
Cl
O
N
Cl
1-[2-(2,4-Dicloro-fenil)-4-propil-[1,3]dioxolan-2-ilmetil]-1H-[1,2,4]triazol
FM: C15H17Cl2N3O2
PM : 342.25
LD50: 1517 mg/Kg
CAS: 60207-90-1
FUNGICIDA
Nombre comercial: Banner, Tilt
Clasificacin: Triazol
Clase: II (moderadamente peligroso)
39
40
plaguicidas, PCBs; dioxinas y furanos. Actualmente hay 172 pases que han
ratificado el convenio [9].
Resolucin 630 de 2002. Manual tcnico andino para el registro y control de
plaguicidas qumicos de uso agrcola [9].
Convenio de Rtterdam para la aplicacin del procedimiento de
consentimiento fundamentado previo aplicable a ciertos plaguicidas y
productos qumicos peligrosos objeto del comercio internacional entr en
vigor el 24 de febrero de 2004 [9].
1.3.2. Legislacin Nacional
Ya sea por solicitud de los Ministerios de Salud o de Agricultura y mediante
Resolucin de la Gerencia General del ICA, o del Ministerio de Agricultura, desde
1974 hasta la fecha, se han venido restringiendo o prohibiendo el uso en el pas
de algunos plaguicidas sealados a continuacin en la tabla 2 [5,11,12,13,14].
Tabla 2. Resoluciones vigentes para el control de plaguicidas en Colombia.
LEY,
RESOLUCIN, AO DE
ENTIDAD QUE EMITE
OBJETO DE LA NORMA
DECRETO O
EMISIN
ACUERDO #
R-447
Ministerio de
1974 agricultura
R-2189
Instituto Colombiano
1974 Agriopecuario ICA
R-1042
Instituto Colombiano
1977 Agriopecuario ICA
R-209
Ministerio de
1978 agricultura
Ley 9
Congreso de la
1979 Republica
41
AO DE
EMISIN
OBJETO DE LA NORMA
R-749
Instituto Colombiano
1979 Agropecuario ICA
R-243
Instituto Colombiano
1982 Agropecuario ICA
R-1158
Instituto Colombiano
1985 Agropecuario ICA
R-1849
Instituto Colombiano
1985 Agropecuario ICA
D-704
Presidencia de la
1986 Republica
R-930
Instituto Colombiano
1987 Agropecuario ICA
R-19408
D-305
Presidencia de la
1988 Republica
R-47
Instituto Colombiano
1988 Agropecuario ICA
R-3028
Instituto Colombiano
1989 Agropecuario ICA
R-4863
Instituto Colombiano
1989 Agriopecuario ICA
R-5052
Instituto Colombiano
1989 Agriopecuario ICA
42
R-5053
Instituto Colombiano
1989 Agriopecuario ICA
R-2308
Instituto Colombiano
1990 Agriopecuario ICA
D-1843
R-2156
Instituto Colombiano
1991 Agriopecuario ICA
R-2471
Instituto Colombiano
1991 Agriopecuario ICA
R-29
Instituto Colombiano
1992 Agriopecuario ICA
R-9913
R-10255
R-138
43
AO DE
EMISIN
OBJETO DE LA NORMA
R-1669
R-1559
Instituto Colombiano
1999 Agriopecuario ICA
R-.1312
Instituto Colombiano
2001 Agriopecuario ICA
R-1681
Instituto Colombiano
2002 Agriopecuario ICA
R-1973
Instituto Colombiano
2004 Agriopecuario ICA
R-1756
Instituto Colombiano
2006 Agriopecuario ICA
R-2906
Ministerio de la
2007 proteccin social
Instituto Colombiano
2007 Agriopecuario ICA
R-4754
Instituto Colombiano
2011 Agriopecuario ICA
R-5469
Instituto Colombiano
2012 Agriopecuario ICA
R-228
44
con
extraccin
liquido-liquido
45
(LLE),
en
fase
solida
(SPE)
46
47
(a)
(b)
Figura 2. Tipos de insertos para cromatografa de gases. (a) Split (b) splitless
El modo Split (con divisin de muestra) se usa para el anlisis de muestras a altas
concentraciones (del orden del 1%), en este modo, despus de la vaporizacin de
la muestra, parte de ella se dirige a la columna para el anlisis y otra parte (la
mayora) se desecha por la salida Split. Cuando se trabajan muestras que se
encuentran en el nivel de trazas como en el caso de los plaguicidas, se usa el
modo de inyeccin splitless, aqu toda la muestra que se inyecta se lleva a la
columna para su separacin y posterior determinacin [15,19].
1.4.1.3. Horno y columna
A la salida del puerto de inyeccin se conecta la columna que se encuentra al
interior del horno, existen columnas empaquetadas con dimetros internos de 3 a
5 mm con longitudes que van de los 3 a los 15 metros, se construyen en vidrio,
acero inoxidable, cobre o tefln y normalmente se configuran como helicoides de
10 a 15 cm a fin de poder ser introducidas en el horno, estn rellenas con un
soporte solido finamente dividido y homogneo sobre el cual se inmoviliza la fase
48
estacionaria liquida.
internos de 0,25 0,32 y 0,53 mm y longitudes desde 15 hasta 120 metros, las
columnas capilares son de ms amplio uso pues son ms eficientes y reducen el
tamao de muestra, el tiempo de anlisis y el consumo de gas de arrastre,
mientras con columnas empaquetadas se manejan flujos del orden de los 15
mL/min con columnas capilares el consumo est alrededor de 1 mL/min [15,19].
Las columnas capilares fueron introducidas en 1959, pero no entraron en pleno
uso sino hacia 1980, a partir de entonces han ganado gran popularidad; se estima
que hoy en da mas del 90% de las aplicacin en CG se hacen con columnas
capilares [19].
La columna capilar original inventada y patentada por el Doctor Marcel Golay,
consisti en un tubo capilar con una capa delgada de fase liquida recubriendo la
pared interna del tubo, razn por la cual se le llamo columna tubular abierta con
pared recubierta, o WCOT por sus siglas en ingles [19].
Otros dos tipos de columnas capilares se encuentran disponibles comercialmente,
la columna tubular abierta con soporte recubierto (o SCOT, support-coated open
tubular) y la columna tubular abierta de capa porosa (o PLOT, porous layer open
tubular). Las columnas SCOT tienen una delgada capa de un soporte solido
absorbente recubierto de fase liquida, estas columnas tienen mayor cantidad de
fase mvil y por ende mayor capacidad de carga que una columna comn WCOT
[19].
Las columnas PLOT contienen una capa porosa de un slido absorbente como
almina o tamiz molecular. Las columnas PLOT son adecuadas para el anlisis de
gases livianos, por ejemplo la separacin de nen, argn, oxigeno, nitrgeno y
xenn se hace con una columna PLOT de tamiz molecular [19].
49
dimetilpolisiloxano 100 %
G1
CH3
Si
DB/HP 1 (AGILENT)
SPB 1 (Supelco)
CH3
100%
Polaridad: no polar
Usos:
solventes, productos de petroleo,
muestras farmaceuticas.
Rtx/MXT 5 (Restek)
difenil 5%
dimetilpolisiloxano 95%
G27
DB/HP 5 (AGILENT)
CH3
Si
Si
SPB 5 (Supelco)
O
CH3
5%
95%
Polaridad: no polar
Usos:
saborizantes, muestras ambientales
hidrocarburos aromaticos.
polisilfenileno 5%
dimetilpolisiloxano 95%
NO
APLICA
CH3
Si
CH3
CH3
O
Si
Rtx - 5sil MS
Rtx 5Sil MS (Restek)
CH3
Si
DB 5 MS (AGILENT)
O
y
CH3
CH3
Polaridad: no polar
Usos:
saborizantes, muestras
ambientales, pesticidas,
PCBs, hidrocarburos aromaticos.
50
SLB 5 MS (Supelco)
G43
CN
Rtx/MXT (Restek)
CH3
(CH2)3
Si
Si
1301, Rtx/MXT -
CH3
6%
94%
Polaridad: lijeramente polar
Usos:
compuestos volatiles, insecticidas,
residuos de solventes en productos
farmaceuticos.
difenil 20%
dimetilpolisiloxano 80%
G32
Rtx/MXT 20 (Restek)
SPB 20 (Supelco)
CH3
Si
Si
CH3
20%
80%
Polaridad: lijeramente polar
Usos:
compuesos volatiles, alcoholes.
difenil 35%
dimetilpolisiloxano 65%
G42
Rtx/MXT 35 (Restek)
DB/HP 35 (AGILENT)
CH3
Si
Si
SPB 35 (Supelco)
CH3
35%
65%
Polaridad: medianamente polar
Usos:
pesticidas, PCB, aminas.
cianopropilfenil 14%
dimetilpolisiloxano 86%
G46
CN
CH3
(CH2)3
Si
Si
CH3
14%
86%
Polaridad: medianamente polar
Usos:
pesticidas, PCB, alcoholes oxigenados.
51
624
G3
Rtx/MXT 50 (Restek)
DB/HP 50 (AGILENT)
CH3
Si
Si
SPB 50 (Supelco)
CH3
50%
50%
Polaridad: medianamente polar
Usos:
triglicridos, steres de ftalato,
esteroides, fenoles.
G6
trifluoropropilmetilpolisiloxano 100%
CF3
C2H4
Si
CH3
100%
Polaridad: selectivo para pares de electrones libres
Usos:
muestras ambientales, solventes, gases
drogas, cetonas, alcoholes
G7
cianopropilmetil 50%
fenilmetilpolisiloxano 50%
CN
(CH2)3
Si
Si
CH3
CH3
50%
50%
Polaridad: polar
Usos:
FAMEs, carbohidratos.
G16
polietilenglicol
H
Polaridad: polar
Usos:
FAMEs, acidos, aminas, solventes,
isomeros del xileno.
52
1.4.1.4. Detector
Al final de la columna se encuentra el detector, existen gran variedad de
detectores que se basan en diversidad de fenmenos fsicos.
Con pocas excepciones, la mayora de detectores para cromatografa de gases
fueron inventados especficamente para esta tcnica. Las mayores excepciones
son el detector de conductividad trmica, que ya exista como un analizador de
gases cuando comenz la CG; y el espectrmetro de masas (o detector selectivo
de masas), que fue adaptado para las altas velocidades de escaneo necesaria
para los picos cromatogrficos [19].
En total, hay probablemente ms de 60 detectores que han sido usados en CG.
Muchos de ellos se basan en la formacin de iones por uno u otro medio; y de
estos, el detector de ionizacin de llama es el ms popular. En la tabla 4 se
enlistan los detectores ms comunes para CG [19].
Tabla 4. Detectores ms comunes para cromatografa de gases
Nombre
Detector de ionizacin de llama (FID)
Detector de conductividad trmica (TCD)
Detector de captura electrnica (ECD)
Detector de nitrgeno/fosforo (NPD)
Detector de fotoionizacin (PID)
Detector de ionizacin de Helio (HID)
Detector fotomtrico de llama (FPD)
Detector de emisin atmica de plasma (AED)
Quimioluminiscencia
Detector de densidad de gas (GADE)
Detector de radioactividad
Espectrmetro de masas (MSD)
Infrarrojo con transformada de Fourier (FTIR)
selectivo para
NO
NO
X*
N,P,X
Aromticos
NO
S,P
Metales, X,C,O
S
NO
3
H, 14C
SI
SI
*X = halgeno
Con la mayora de detectores la identificacin de un componente se hace
comparando el tiempo de retencin del pico cromatogrfico con el de un patrn
53
corrido a las mismas condiciones, esto implica que se debe tener informacin
previa sobre la identidad de los analitos, es decir, la comparacin de los tiempos
de retencin se hace solo con fines de verificacin y el uso de los detectores se
limita principalmente al anlisis cuantitativo. El detector selectivo de masas tiene
la ventaja de que a la vez que genera una seal cromatogrfica puede obtener y
registrar el espectro de masas de cada uno de los analitos facilitando su
identificacin ya sea por medio de la interpretacin de su espectro de masas o con
la simple comparacin en una base de datos. Esto lo hace idneo para el anlisis
cualitativo en los diversos campos de la investigacin [20].
En los sistemas modernos el detector est comunicado con un ordenador el cual a
travs de un software interpreta la seal y la registra en una grfica llamada
cromatograma. La figura 3 muestra un cromatograma tpico.
54
55
ENTRADA
DE LA MUESTRA
FUENTE DE
IONIZACIN
ANALIZADOR
DE MASAS
DETECTOR
VACIO
ESPECTRO DE MASAS
SISTEMA
DE DATOS
m/z
Figura 4. Esquema de un espectrmetro de masas
Se consigue
bombardeando las molculas del compuesto con electrones de alta energa (70
56
blandas,
producen
ionizaciones
menos
energticas
menor
Magnticos
de
doble
enfoque
Cuadrupolares
De tiempo de vuelo
Trampa de iones
La mayora de los CG-EM de mesa usan analizadores de masas de cuadrupolo,
trampa de iones o tiempo de vuelo. Los de tipo cuadrupolo representan cerca del
80% de los equipos comercializados en el mundo. Sistemas con analizadores de
masas magnticos de doble enfoque tambin estn disponibles en el mercado, sin
embargo son ms costosos y no pueden considerarse de mesa por su tamao
[19].
57
Por ltimo los iones formados a partir de las molculas de la muestra y separados
por el analizador, son colectados en el detector produciendo una seal elctrica
que convenientemente amplificada, se registra y representa grficamente en el
espectro de masas. Figura 5.
58
As, cada barra o pico en el espectro de masas representa un ion cuya posicin en
el grafico depende de su masa y su altura de su abundancia. En condiciones de
reproducibilidad las molculas de un mismo compuesto siempre se fragmentaran
produciendo los mismos iones en iguales cantidades. El espectro de masas se
considera por esta razn la huella digital de un compuesto [20].
1.4.2.1. El anlisis cuantitativo con espectrometra de masas.
Los espectrmetros de masas cuadrupolares tienen la ventaja de poderse
configurar tanto para anlisis cualitativo como para anlisis cuantitativo.
El analizador cuadrupolar puede ajustarse para que separe y registre la totalidad
de los iones generados en la fragmentacin, as se obtiene el espectro de masas
completo con el que se hace la identificacin del compuesto. Este modo de trabajo
del espectrmetro se conoce como full scan y se usa para el anlisis cualitativo.
Para el anlisis cuantitativo, el cuadrupolo se configura de manera que solo
permita el paso hacia el detector de los fragmentos ms representativos de cada
analito. Este procedimiento se conoce como monitoreo de iones seleccionados
(SIM) y tiene la ventaja de que se evita la llegada al detector de fragmentos de
molculas diferentes a los analitos, que pueden estar presentes en la matriz y que
generan interferencia. Adems la respuesta por unidad de masa es mayor por SIM
[20].
59
Los
atributos
de
calidad
pueden
ser
de
tipo
estadstico
de
tipo
la
facilidad
de
comprensin
del
mtodo
manejo
de
la
60
61
62
Definir el mensurando Y
Establecer el modelo fsico
Identificar las magnitudes de entrada Xi
Establecer el modelo matemtico
Identificar las fuentes de incertidumbre
SI
Cuantificar
el nmero de
grados?
NO
Determinar tp(vef)
FIN
63
Cabe mencionar que esta clasificacin no significa que exista alguna diferencia en
la naturaleza de los componentes que resultan de cada uno de los dos tipos de
evaluacin, puesto que ambos tipos estn basados en distribuciones de
probabilidad. La nica diferencia es que en las evaluaciones tipo A se estima esta
distribucin basndose en mediciones repetidas obtenidas del mismo proceso de
medicin mientras en el caso de tipo B se supone una distribucin con base en
experiencia o informacin externa al metrlogo [24].
En la prctica esta clasificacin no tiene consecuencia alguna en las etapas para
obtener una estimacin de la incertidumbre combinada.
En este trabajo las incertidumbres de tipo A son las debidas a:
El volumen final del extracto
La inyeccin
La recuperacin
La dispersin de los datos se expresa mediante la desviacin estndar y para
convertir la dispersin en incertidumbre estndar se divide la desviacin estndar
entre n donde n es el nmero de mediciones.
Las incertidumbres de tipo B son las que se obtienen de informacin externa como
certificados de calibracin, manuales o especificaciones de los instrumentos,
valores de mediciones anteriores, entre otros:
Masa de muestra
Error en la interpolacin.
Cuando la incertidumbre se obtiene de un certificado, como el caso de la
incertidumbre en la masa de muestra, el dato ledo debe dividirse por el factor de
cobertura, este depender de las distribuciones de probabilidad. Esto se debe a
que la incertidumbre estndar representa un intervalo de valores que contiene el
valor verdadero con una probabilidad de 68% asumiendo una distribucin normal
64
65
2. PARTE EXPERIMENTAL.
2.1. MUESTRAS DE ANLISIS.
Se analizaron muestras de caf verde en grano calidad excelso tipo exportacin
suministradas por la Federacin Nacional de Cafeteros, se conservaron en bolsas
de polietileno a temperatura ambiente.
Para la evaluacin de los porcentajes de recuperacin y de los interferentes de
matriz se usaron muestras de caf verde en grano, libres de plaguicidas evaluadas
previamente.
2.2. ANALITOS.
Los plaguicidas objeto de anlisis se enlistan en la tabla 6 con su respectivos
nmeros CAS y lmites mximos de residuos (LMR), segn resolucin 2906 de
2007 del Ministerio de la Proteccin Social.
Tabla 6. Analitos en el mtodo para determinacin de plaguicidas en caf verde
Formula
MRL
ITEM
Nombre
Qumica
Cas #
(mg/kg)
Forato
C7H17O2PS3
298-02-2
0,02
Terbufos
C9H21O2PS3
13071-79-9
0,05
Disulfoton
C8H19O2PS3
298-04-4
0,2
Clorpirifos
C9H11Cl3NO3PS 2921-88-2
0,05
Triadimefon
C14H16ClN3O2
43121-43-3
0,05
Triadimenol
C14H18ClN3O2
55219-65-3
0,1
Propiconazol I & II
C15H17Cl2N3O2
60207-90-1
0,1
67
2.3. ESTNDARES.
Se usaron estndares de alta pureza de cada pesticida de marca ChemService,
en la tabla 7 se relacionan los nmeros de catlogo y grado de pureza. El anexo 1
contiene las fichas tcnicas de cada estndar emitidas por el fabricante.
Tabla 7. Estndares de plaguicidas para la preparacin de patrones de referencia. Los
nmeros de catalogo corresponden a la marca ChemService
Numero
de
ITEM
Nombre
% Pureza
catalogo
1
Forato
PS-654
97,5
2
Terbufos
PS-680
99,1
Disulfoton
PS-652
98,2
Clorpirifos
PS-674
99,5
Triadimefon
PS-1013
99,2
Triadimenol
PS-1064
99,5
Propiconazol I & II
PS-1075
98,2*
*Mezcla de ismeros
2.3.1. Soluciones patrn individuales.
A partir de los estndares se prepar una solucin patrn de aproximadamente
5.000 partes por milln (mg/L) por cada plaguicida. En la tabla 8 se relacionan los
solventes que se utilizaron para cada plaguicida.
Tabla 8. Solventes para la preparacin de soluciones patrn de plaguicidas individuales
ITEM
Nombre
Solvente
1
Forato
Tolueno
Terbufos
Metanol
Disulfoton
Metanol
Clorpirifos
Acetona-Hexano (1:1)
Triadimefon
Acetona-Hexano (1:1)
Triadimenol
Tolueno-Acetonitrilo (1:1)
Propiconazol I & II
Acetona-Hexano (1:1)
68
Madre
mg/Kg
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
Forato
0,0200
0,0050
0,0100
0,0200
0,0400
0,0800
0,1600
4,0
Terbufos
0,0500
0,0125
0,0250
0,0500
0,1000
0,2000
0,4000
10
Disulfoton
0,2000
0,0250
0,0500
0,1000
0,2000
0,4000
0,8000
20
Clorpirifos
0,0500
0,0125
0,0250
0,0500
0,1000
0,2000
0,4000
10
Triadimefon
0,0500
0,0125
0,0250
0,0500
0,1000
0,2000
0,4000
10
Triadimenol
0,1000
0,0250
0,0500
0,1000
0,2000
0,4000
0,8000
20
Propiconazol I & II
0,1000
0,0250
0,0500
0,1000
0,2000
0,4000
0,8000
20
69
70
ion de
cuantificacin
Forato
Terbufos
Disulfoton
Clorpirifos
Triadimefon
Triadimenol
Propiconazol I & II
75
231
88
314
208
168
173
Ion de
referencia
1
Ion de
referencia
2
121
288
186
197
181
112
259
260
153
153
286
Ion de
referencia
3
231
128
71
Luego se
72
Filtrar
Residuo
Acetonitrilo 20 mL
Homogenizar 15 min en agitador
Filtrar
Residuo
Desechar
Fase
Acuosa
Desechar
Fase
Acetonitrilo
Extracto en
Acetonitrilo-Tolueno
73
Concentrar a 1 mL
GC/MS
74
muestra 1
cafe verde
10 gramos
muestra 2
cafe verde
10 gramos
muestra 3
cafe verde
10 gramos
Referencia
Adicionar
Adicionar
Adicionar
1 mL de
1 mL de
1 mL de
1 mL de
solucion dopaje solucion dopaje solucion dopaje solucion dopaje
LECTURA INSTRUMENTAL
Figura 9. Protocolo para la evaluacin de los porcentajes de recuperacin en la
extraccin de plaguicidas en caf verde.
75
3. DATOS Y RESULTADOS
3.1. RESULTADOS DEL ANLISIS CUALITATIVO.
3.1.1. Determinacin de los tiempos de retencin
En la figura 10 se muestra el cromatograma de la mezcla madre de los plaguicidas
y en la tabla 12 se registran los tiempos de retencin.
77
B
Figura 11. Comparacin del espectro de masas del forato. A) Espectro de masas tomado
experimentalmente. B) Espectro de masas del forato en la base de datos.
78
79
Por otro lado, en el nivel cuatro todos los plaguicidas presentaron en la primera
rplica un dato notoriamente distinto de los otros dos, lo que result en %DER
superiores al 25% para algunos de ellos en ese nivel de concentracin, esto pudo
deberse a un error aleatorio en la inyeccin de esa replica, como por ejemplo una
burbuja en la jeringa de inyeccin.
Existen pruebas estadsticas que permiten determinar si el dato diferente o
anmalo se puede atribuir a un error aleatorio y en consecuencia desecharse, sin
embargo en este caso no fue posible aplicar dicha prueba, pues se requiere para
ello mnimo cuatro datos [26], luego, se conservaron los datos anmalos.
En la tabla 14 se muestran las concentraciones y las reas medidas para el forato,
en el anexo 3 se presentan los datos para todos los plaguicidas.
Tabla 14. Tabla de resultados. rea bajo el pico obtenida por triplicado para diferentes
concentraciones de forato
Nivel
1
Desviacin
Concentracin
estndar de
(mg/L)
rea promedio
rea
0,0050
13098,33
778,51
Desviacin
estndar
relativa de
rea
5,94
0,0100
17015,67
777,05
4,57
0,0200
43941,00
507,99
1,16
0,0400
68915,33
20503,01
29,75
0,0800
176158,33
5607,74
3,18
0,1600
345393,00
8242,78
2,39
rea
13242
12258
13795
16383
17883
16781
43795
44506
43522
45399
83042
78305
170110
181185
177180
339028
354704
342447
81
Concentracin.
(mg/L)
0,0050
0,0100
0,0200
0,0400
0,0800
0,1600
Promedio
seal ruido
(S/R)
151,71
173,87
533,30
995,11
2228,45
5065,07
Con los datos de concentracin y relacin seal ruido promedio se hizo una
regresin lineal y con la ecuacin resultante se calcul la concentracin necesaria
para obtener las relaciones seal ruido de 3 y 10 correspondientes al lmite de
deteccin y cuantificacin respectivamente.
82
83
hizo necesario evaluar el efecto que estos interferentes tienen sobre el ruido y las
consecuencias sobre los lmites de deteccin y cuantificacin.
Para esto se
La alta
84
Plaguicida
Forato
Terbufos
Disulfoton
Clorpirifos
Triadimefon
Triadimenol
Propiconazol I & II
Limite de
Limite de
deteccin cuantificacin
(mg/L)
(mg/L)
0,0049
0,0053
0,0094
0,0135
0,0146
0,0147
0,0187
0,0247
0,0151
0,0219
0,0207
0,0213
0,0145
0,0156
85
86
87
Dnde:
Cm = concentracin de plaguicida en la muestra (mg/kg)
Cext= concentracin de plaguicida en el extracto (mg/L)
Vext = volumen de extracto (mL)
%R = porcentaje de recuperacin (no tiene unidades)
mm = masa de la muestra (g)
4.1.3. Fuentes de incertidumbre
Con base en el modelo matemtico se construy el diagrama causa efecto que se
muestra en la figura 14.
89
90
rea
205.947
214.007
202.871
208.763
204.969
209.538
207.683
3.953
1,9
es
91
92
93
Resultados
Pesticida
Forato
Terbufos
Disulfoton
Clorpirifos
Triadimefon
Triadimenol
Propiconazol I & II
Concentracin
0,0098
0,0256
0,0511
0,0253
0,0260
0,0471
0,0481
U*
U Relativa
13,4
7,7
8,0
12,0
7,6
12,5
8,6
0,0013
0,0020
0,0041
0,0030
0,0020
0,0059
0,0041
Pesticida
Forato
Terbufos
Disulfoton
Clorpirifos
Triadimefon
Triadimenol
Propiconazol I & II
Resultados
Concentracin Concentracin
esperada
calculada
0,0100
0,0250
0,0500
0,0250
0,0250
0,0500
0,0500
94
0,0098
0,0256
0,0511
0,0253
0,0260
0,0471
0,0481
% Error
2,0
2,4
2,2
1,2
4,0
5,8
3,8
95
5. COCLUSIONES
97
BIBLIOGRAFA
WORLD
HEALTH
ORGANIZATION
&
FOOD
AND
AGRICULTURE
{14
de
enero
de
2013}
disponible
en:
(www.codexalimentarius.org/standards/pesticide-mrls/en/).
[7] MUOZ ORTEGA, Luis Genaro. Caf: principal dinamizador de la economa
rural.
{En
lnea}.
{15
de
enero
de
2013}
disponible
(www.portafolio.co/negocios/cafe-principal-dinamizador-la-economia-rural).
99
en:
[8] TOVAR Edmer. Comercio de caf en el mundo creci segn la OIC. {En lnea}.
{15 de enero de 2013} disponible en: (www.portafolio.co/negocios/comercio-cafeel-mundo-crecio-segun-la-oic).
[9] AUDITORA GENERAL DE LA REPUBLICA DE COLOMBIA. Auditora analtica
de gestin al uso y manejo de plaguicidas en Colombia. Bogot. 2004.
[10] MINISTERIO DEL AMBIENTE Y LOS RECURSOS NATURALES DE LA
REPUBLICA DE NICARAGUA. Inventario Nacional de Plaguicidas COP en
Nicaragua. Managua. 2005.
[11] INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO. Restricciones prohibiciones y
suspensin de registros de plaguicidas de uso agrcola en Colombia. Bogot.
2006.
[12] INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO. Normas ICA. {En lnea}. {16
de enero de 2013} disponible en: (http://www.ica.gov.co/Normatividad/NormasIca.aspx).
[13] CONGRESO DE LA REPUBLICA DE COLOMBIA. Ley 9 de 1979. Bogot.
2009.
[14] MINISTERIO DE SALUD DE LA REPUBLICA DE COLOMBIA. Decreto
nmero 1843 de 1991. Bogot. 1991.
[15] SKOOG, D.A., HOLLER F.J. and NIEMAN, A.T., Principios de anlisis
instrumental. Quinta edicin. Madrid: Ed. McGraw-Hill, 2001. 1028p.
[16] PIZZUTTI, Ionara R., et al. A multi-residue method for pesticides analysis in
green coffee beans using gas chromatographynegative chemical ionization mass
spectrometry in selective ion monitoring mode. En: Journal of Chromatography A.
Vol 1251., 2012. p. 16-26
100
fruits
using
solid-phase
extraction
and
gas
chromatography-mass
INSTITUTO
DE
HIDROLOGA,
METEOROLOGA
ESTUDIOS
101
mayo
de
2013}
disponible
en:
(http://www.cafedecolombia.com/particulares/es/sobre_el_cafe/el_cafe/el_cafe/).
[30] FEDERACIN NACIONAL DE CAFETEROS. El caf de Colombia. {En lnea}.
{14
de
mayo
de
2013}
disponible
en:
(http://www.cafedecolombia.com/particulares/es/el_cafe_de_colombia/).
[31] FEDERACIN NACIONAL DE CAFETEROS. El manejo agronmico del caf.
{En
lnea}.
{15
de
mayo
de
2013}
disponible
en:
(http://www.cafedecolombia.com/particulares/es/sobre_el_cafe/el_cafe/manejo_ag
ronomico/).
[32] WORLD HEALTH ORGANIZATION. The WHO recommended classification of
pesticides by hazard and guidelines to classification : 2004.
[33] FDA. Glossary of Pesticide Chemicals. Octubre 2001
[34] Chem Service Inc. Pesticide and Metabolite Standards Catalog
102
ANEXOS
Anexo 1. Fichas tcnicas de los estndares de plaguicidas
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0050
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
13098,33
778,51
Desviacin
estndar
relativa de
rea
5,94
rea
13242
12258
13795
0,0100
17015,67
777,05
4,57
16383
17883
16781
0,0200
43941,00
507,99
1,16
43795
44506
43522
0,0400
68915,33
20503,01
29,75
45399
83042
78305
0,0800
176158,33
5607,74
3,18
170110
181185
177180
0,1600
345393,00
8242,78
2,39
339028
354704
342447
117
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0130
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
6866,00
195,10
Desviacin
estndar
relativa de
rea
2,84
rea
7038
6654
6906
0,0250
11951,67
151,19
1,26
11895
12123
11837
0,0500
27852,00
66,55
0,24
27904
27875
27777
0,1000
46736,67
12090,93
25,87
32871
55083
52256
0,2000
112073,00
4160,00
3,71
107746
117043
112430
0,4000
221511,00
6346,22
2,86
215579
228203
220751
118
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0250
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
40856,67
96,55
Desviacin
estndar
relativa de
rea
0,24
rea
40806
40968
40796
0,0500
69621,67
1819,11
2,61
68596
71722
68547
0,1000
164294,67
497,52
0,3
163737
164454
164693
0,2000
287845,33
67626,52
23,49
210549
336101
316886
0,4000
674606,33
23427,34
3,47
648841
694627
680351
0,8000
1333945,00
31224,07
2,34
1304531
1366709
1330595
119
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0130
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
1215,00
58,39
Desviacin
estndar
relativa de
rea
4,81
rea
1150
1232
1263
0,0250
2624
104,80
3,99
2511
2643
2718
0,0500
6554,67
79,06
1,1
6565
6621
6478
0,1000
12774,67
3024,50
23,68
9297
14791
14236
0,2000
31702,00
1270,51
4,01
30257
32644
32205
0,4000
65369,33
1065,90
1,63
64538
66571
64999
120
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0130
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
3204,00
43,58
Desviacin
estndar
relativa de
rea
1,36
rea
3201
3249
3162
0,0250
7075,33
274,05
3,87
6760
7210
7256
0,0500
17733,00
351,40
1,98
17339
17846
18014
0,1000
33110
4714,53
14,24
27743
36583
35004
0,2000
73465,33
1997,17
2,72
71243
75110
74043
0,4000
141861,67
1861,77
1,31
139982
143705
141898
121
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0250
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
4111,67
100,73
Desviacin
estndar
relativa de
rea
2,45
rea
4001
4198
4136
0,0500
11094,33
114,46
1,03
10994
11219
11070
0,1000
22788,33
633,33
2,78
22086
22963
23316
0,2000
42312,67
11620,78
27,46
28928
48180
49830
0,4000
105020,33
2973,74
2,83
101607
107051
106403
0,8000
240763,00
2109,93
0,88
242195
238340
241754
122
Nivel
1
Concentracin
(mg/L)
0,0250
rea
promedio
Desviacin
estndar de
rea
10852,67
805,17
Desviacin
estndar
relativa de
rea
7,42
rea
11000
9984
11574
0,0500
23714
385,00
1,62
23716
24098
23328
0,1000
49596,00
765,40
1,54
49227
50476
49085
0,2000
87887,33
21363,30
24,31
63302
98406
101954
0,4000
199832,67
2724,08
1,36
199011
202873
197614
0,8000
432083,00
3171,37
0,73
431780
433395
429074
123