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Cortar el ADN
Las enzimas de restriccin, son descubiertas a comienzos de los aos 70 son
producidas por muchas bacterias. .
Las enzimas de restriccin son protenas conocidas como ENDONUCLEASAS . Existen cientos de enzimas, capaz de ccortar ADN
en un punto especifico de ujna secuencia especifica de nucletidos . Son de diferentes tamaos, las enzimas se pueden clasificar en:
-
Las enzima encargadas de unir los extremos pegajosos de ambas cadenas se denominan ADN ligasas y generan asi una molecula de
ADN nueva denominada recombinante.
ADN RECOMBINANTE .- Es una molcula que proviene de la unin artificial de dos fragmentos de ADN. Por lo tanto, la
tecnologa de ADN recombinante es el conjunto de tcnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior
manipulacin e insercin en otro diferente. De esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o
un virus produzca una protena que le sea totalmente extraa. Es decir Las enzimas de restriccin o endonucleasas de restriccin
son enzimas que cortan los enlaces fosfodister de la doble hebra de DNA a partir de una secuencia especifica que reconocen, y ese
punto donde la enzima encuentra la secuencia de nucletidos se conoce como sitio de restriccin.
El desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante fue posible gracias a varias lneas de investigacin: 1) el conocimiento de las
enzimas de restriccin, 2) la replicacin y reparacin de ADN, 3) la replicacin de virus y plsmidos y 4) la sntesis qumica de
secuencias de nucletidos.
SEPARAR EL ADN
Despues que el ADN a sido cortado en fragmentos. Estos fragmentos no tienen el mismo tamao. Para ello los cientficos usan la
tcnica de electrolisis en gel.
La mezcla de fragmentos de ADN se depositan en pequeos pozos en un extremo de una placa de gel.. Al aplicar corriente elctrica
al gel, se desplazan hacia el extremo del gel. El resultado es un patrn de bandas dependen del tamao del fragmento, se aplican
tinciones especificas que se ligan al ADN para hacer visibles las bandas.
LECTURAS O SECUENCIAS DEL ADN
Separados los fragmentos de ADN. L os fragmentos de ADN de un solo filamento se colocan en cuatro mezclas de reaciones
diferentes, cada mezcla contiene ADN polimerasa, un cebador.
Conforme actue la enzima, usa el filamento desconocido como si fuera una plantilla para crear un nuevo filamento de ADN.
Cada vez que se agregue una base teida a un nuevo filamento de ADN, la sntesis del filamento se interrumpe, cuando
concluye la sntesis de ADN, el resultado es una serie de fragmentos de ADN coloreados y de distintas longitudes.
Una de las aplicaciones de los secuenciadores es el fingerprinting o huellas de ADN que permite tanto la realizacin de test
de paternidad como identificacin de criminales
La estructura de la enzima
Estas enzimas permiten cortar el DNA de hebra doble, donde reconocen secuencias palindrmicas, sea secuencias que se leen igual
en ambas direcciones, y los cortes se pueden realizar de 2 maneras distintas:
CORTES COHESIVOS
CORTES ROMOS
Cortes cohesivos.- o pegajosos.- Son cortes escalonados, dejan extremos complementarios (cohesivos) de simple cadena que
pueden pegarse con otros extremos de cadena simple que tengan la secuencia complementaria. Ej: Eco RI
CORTE ROMO.- Cortes simtricos, dejando productos con extremos romos Ej: Alu I no tiles en ingeniera gentica sino
sufren modificaciones.
En esta figura . Enzimas de restriccin. Este tipo de endonucleasas puede dejar dos tipos de extremos. En el primer caso, el corte
genera nuclotidos de simple cadena llamados extremos cohesivos. Estos extremos se pueden unir por medio de otra enzima, la
ADN ligasa. En el segundo caso, se generan extremos doble cadena (extremos romos). Estos extremos tambin pueden ser unidos
con la ayuda de una enzima ligasa pero, como no los extremos no son complementarios, la unin ser ms inespecfica.
Las enzimas de restriccin permiten cortar el genoma de cualquier organismo en pequeos fragmentos llamados fragmentos de
restriccin. La coleccin de miles o millones de estos fragmentos se llama biblioteca gnica.
El uso fragmentos de ADN como vectores cumple un rol fundamental en la ingeniera gentica, ya que sirven para transferir
material gentico de un organismo a otro.
Vector: cualquier organismo o virus capaz de mover genes de un organismo a otro
Cmo amplificar el ADN? Reaccin en cadena de la polimerasa
Durante las dcadas de 1970-1980, la manera ms prctica de hacer mltiples copias de una secuencia particular de ADN era
introduciendo una molcula de ADN recombinante (un plsmido ms un gen) en una clula husped. Esto poda resultar un poco
engorroso, ya que muchas veces se dispona de una cantidad muy pequea de molculas de ADN para realizar pruebas.
A mediados de la dcada de los 80, la invencin de una tcnica capaz de generar centenares de miles de copias de una secuencia sin
la necesidad de clonarla en ningn tipo de vector resolvi este problema. Kary Mullis, un bioqumico americano que trabajaba
sintetizando ADN, resolvi este problema con la invencin de la reaccin en cadena de la polimerasa.
Esta se basa en la separacin de ambas hebras de ADN, la posterior unin de pequeos fragmentos (denominados primers) y la
extensin de estos fragmentos usando de molde el ADN de la muestra. As se obtienen dos copias idnticas por cada molcula en
cada ciclo de reaccin. Para llevar a cabo esta reaccin se requiere de una enzima polimerasa que sea capaz de soportar la alta
temperatura del proceso de desnaturalizacin. Esta enzima es una ADN-polimerasa especial obtenida de una bacteria termfila (la
Thermus aquaticus), resistente a altas temperaturas.
La reaccin en cadena de la polimerasa permite amplificar la muestra de manera espectacular y su sensibilidad es tal que alcanza
con una molcula para que la reaccin genere una infinidad de copias. Esto la convierte en una importante, si no imprescindible,
herramienta para el anlisis de filiacin o de criminalstica forense, ya que con slo una pequesima muestra se pueden realizar
diferentes estudios comparativos que nos permiten conocer el dueo de un "rastro" gentico en particular.
Tambin se usa para el desarrollo de nuevas estrategias de diagnstico mdico, como la deteccin de virus o de mutaciones que
provocan enfermedades genticas, a partir de una muestra de ADN tan pequea como un cabello o una gota de sangre.
Otra aplicacin de la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa es la transcripcin inversa de ARNm. Mediante el uso de una
enzima de origen viral denominada transcriptasa reversa puede usarse como molde una molcula de ARNm, transcribirla a una
secuencia de ADN, y luego ser amplificada como cualquier otra secuencia por la reaccin en cadena de la polimerasa, con lo que se
obtiene una gran cantidad de ADN a partir de unas pocas molculas de ARNm. Esta tcnica es muy empleada para el estudio de
expresin gnica, as como para la produccin de protenas en diferentes organismos.
SECUENCIACION DEL ADN
Los avances en secuenciacin del ADN ofrecen grandes posibilidades en medicina. Uno de los avances ms importantes en el
desarrollo de la medicina personalizada, realizar la secuenciacin de ADN ha permitido no solo conocer nuestra
informacin gentica, sino tambin predecir cul es el riesgo de padecer ciertas enfermedades o incluso,
adaptar ciertos tratamientos en funcin de nuestro genoma.
ELECTROFORESIS EN GEL
La electroforesis en gel es una tcnica sencilla empleada de forma rutinaria en laboratorio para separar
molculas biolgicas especialmente ADN, ARN y protenas.
As por ejemplo se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo,
para la identificacin de cidos nucleicos de agentes infecciosos o para la obtencin de un fragmento
determinado de ADN que, una vez localizado en el gel, puede ser extrado para anlisis posteriores.
PERFIL DE ADN O PERFIL GENETICO
La huella gentica o anlisis de ADN es una tcnica que se utiliza para distinguir entre los individuos de una misma especie
utilizando muestras de su ADN. Su invencin se debe al doctor Alec Jeffreys, quien dio a conocer su nueva tcnica en 1984.1 El
primer resultado prctico en medicina forense sirvi para condenar a Colin Pitchfork por los asesinatos de Narborough en 1983 y de
Enderby en 1986.
La huella gentica se utiliza en la medicina forense para identificar a los sospechosos con muestras de sangre, cabello, saliva o
semen. Tambin ha dado lugar a varias exoneraciones de condenados. Igualmente se utiliza en aplicaciones como la identificacin
de los restos humanos, las pruebas de paternidad, la compatibilidad en la donacin de rganos, el estudio de las poblaciones de
animales silvestres, y el establecimiento del origen o la composicin de alimentos. Tambin se ha utilizado para generar hiptesis
sobre las migraciones de los seres humanos en la prehistoria.
LA BIOTECNOLOGIA
La biotecnologa puede ser clasificada en cinco amplias reas.
Biotecnologa en Salud Humana.( Donde se incluye la B. Alimentaria)
Biotecnologa Animal.
Biotecnologa Industrial.
Biotecnologa Vegetal.
Biotecnologa Ambiental.
Las tcnicas biotecnolgicas utilizadas en los diferentes campos de aplicacin de la biotecnologa se pueden agrupar en dos grandes
grupos:
Cultivo de tejidos: Trabaja a un nivel superior a la clula e incluye clulas, tejidos y rganos que se desarrollan en condiciones
controladas.
Tecnologa del ADN: Involucra la manipulacin de genes a nivel del ADN, aislamiento de genes, su recombinacin y expresin en
nuevas formas, etc.
BIOTECNOLOGIA EN PLANTAS
Durante siglos la humanidad ha introducido mejoras en las plantas que cultiva a travs de la seleccin y
la hibridacin (polinizacin controlada de plantas
La biotecnologa de plantas abarca campos muy variados; se comercializan plantas resistentes a
enfermedades o plagas, reducindose la necesidad del uso de pesticidas agroqumicos; tambin se han
diseado plantas resistentes a sequas y temperaturas extremas, o aptas para crecer en suelos cidos
y/o salinos, o resistentes a herbicidas, lo que permite eliminar malezas sin afectar el cultivo; adems, se
ha diseado variantes con una capacidad mayor para fijar nitrgeno, lo que reduce el uso de
fertilizantes. Una de las aplicaciones ms demandada de la biotecnologa vegetal es la mejora de la
calidad nutricional, generando alimentos enriquecidos en aminocidos, vitaminas, minerales o
determinados cidos grasos. Por ltimo, cabe destacar las modificaciones realizadas para obtener
cosechas ms tempranas regulando la velocidad de maduracin de frutos; esto permite un proceso de
postcosecha y transporte de ms larga duracin sin que lleguen los alimentos al consumidor en estados
avanzados de madurez.
Uno de los ejemplos de alimentos modificados genticamente (gm) que se cultivan hoy en da es la soja
resistente a glisofato, el componente activo de un herbicida; esta resistencia permite la utilizacin del
herbicida sin afectar el cultivo, haciendo que se alcancen niveles de productividad mayor. El maz
resistente a glufosinato, componente activo de un herbicida, y a ostrinia nubilabis, un insecto que horada
el tallo de la planta destruyndola.
Hoy en da se conocen ms de 40 genes, muchos de ellos de origen bacteriano, que confieren resistencia
a insectos. Uno de los ms utilizados es la toxina producida por Bacillus thuringiensis; cuando esta
bacteria esporula en la superficie de la hoja, produce unos cristales que se convierten en pptidos
txicos al ser atacados por las proteasas del tracto intestinal de las larvas y orugas; las orugas que
ingieren la toxina quedan paralizadas.
ANIMALES TRANSGENICOS
Mtodos de obtencin de animales transgnicos I
Los mtodos de obtencin de un animal transgnico son:
Electroporacin de cigoto.
Los mtodos biolgicos de transferencia gnica tambin utilizan virus, principalmente adenovirus y retrovirus. Los
retrovirus son virus de ARN que poseen la enzima transcriptasa inversa y de la cual deriva su nombre. El retrovirus
alcanza una eficiencia prxima al 100%.
XENOTRANSPLANTES
Es el trasplante de clulas, tejidos u rganos de una especie a otra, idealmente entre especies prximas
para evitar rechazo, como de cerdos a humanos.
El xenotrasplante: esto se refiere al trasplante de un rgano o tejido, de una especie diferente (nohumana) a un ser humano.
El enorme cambio ocurrido en ciencia y salud durante las ltimas dcadas ha conducido a una
reformulacin de la tica mdica. El desarrollo reciente de la Biotica se caracteriza por el intento de
conjugar los nuevos hechos propios de las ciencias biolgicas con todos los valores, en sus principios, los
que a menudo entran en conflicto en la prctica y resolverlos resulta fundamental para el arte de la
medicina, en lo cual, adems, se halla involucrada la responsabilidad social. En este trabajo se tratan de
establecer puntos de encuentro entre biotica y asignacin de recursos para la salud o de justicia
sanitaria, es decir, entre la tica y la economa, dos disciplinas que -segn la creencia contemporneaviven de espaldas una de otra y, sin embargo, siempre han pertenecido a un mismo terreno, en el marco
de una Amrica Latina donde prevalecen los perfiles demogrficos del subdesarrollo y la profunda
desigualdad que desgarran a la Regin. Por otro lado, se muestra que la formacin profesional y tica del
mdico y el dominio de habilidades semiolgicas, no reemplazables por la tecnologa, aunque sin
despreciar la trascendencia de sta, son decisivas para el ejercicio de una medicina humana, tcnica,
tica y socialmente eficaz.
CLONACION
La clonacin es el procedimiento cientfico que consiste en tomar el material gentico de un organismo
para obtener otro idntico, denominado clon, no hay una unin de vulos con espermatozoides. La
clonacin llamada teraputica consiste en tomar el material gentico de una clula de un paciente para
despus fusionarlo con un vulo, el embrin resultante se llama "sinttico". A este embrin se le
extraeran las clulas madre, que seran controladas para desarrollarse como clulas de una naturaleza
especfica (musculares, neurolgicas, etc.). Estas clulas "perfectas" se implantaran en el paciente para
curar supuestamente la imperfeccin orgnica o enfermedad. Hasta el momento no se han obtenido
resultados favorables, pero se piensa que podran ayudar en la diabetes, el mal de Parkinson, el
Alzheimer, la fibrosis qustica, la esclerosis mltiple, accidentes cerebrovasculares, algunos tipos de
cncer, leucemia, artritis reumatoide y otras enfermedades cardiovasculares. No obstante, la clonacin
teraputica no es el nico camino mdico por el que podran obtenerse estos resultados, ya que las
clulas "madre" o neutrales, que pueden ser convertidas en otras clulas especficas, pueden obtenerse
de individuos adultos y no slo de embriones. Aunque este proceso es ms complejo, no slo es
ticamente legtimo, sino incluso ha aportado algunos resultados ms prometedores que las
investigaciones con clulas de embriones.
La clonacin de seres humanos se basa en el supuesto de que un huevo fecundado no es una persona,
pues desde el punto de vista gentico slo se distingue por el tamao de ste, aun cuando posea todo el
cdigo gentico de una persona.
Una interrogante que deja abierta la duda sobre esta prctica incluso en animales: se desconoce si la
reproduccin por clonacin puede traer malformaciones genticas peligrosas an desconocidas por los
cientficos y que podran ser fuente de nuevas enfermedades y malformaciones animales y humanas.
Con el nacimiento de la oveja Dolly se abra una serie de perspectivas que repercutan directamente en la industria ganadera, la
empresa farmacutica y la medicina, tambin en la filosofa y la tica.
Aos despus de la primera clonacin de un mamfero los investigadores descubren que la naturaleza contina resistindose ms de
lo previsto. Como es el caso de los primates, donde la clonacin sigue siendo casi imposible o se ha limitado a experimentos no
reproducidos. En muchos casos, el ndice de xito es todava muy bajo. Lo mismo ocurre con la posible clonacin teraputica de
embriones humanos, ya que la clonacin no reproductiva puede dar lugar a la creacin de rganos y tejidos, con lo que el trasplante
pasara a la historia igual que el problema del rechazo de stos.
PASOS PARA REALIZAR UNA CLONACION
1.- Se retira el ncleo del vulo. Consiste en poner el material gentico de la clula a clonar en un
gametocito hembra de la misma especie.
2.- Se quita el ncleo de la clula somtica y se pone en el ovulo enucleado. Consiste en poner
el ncleo de una clula somtica en un vulo enucleado y asi conseguimos una fecundacin y dejar que
el embrin se desarrolle in vitro.
3.- Ponemos el ncleo al ovulo enucleado. As conseguiremos un embrin que posteriormente se
implantar en el tero materno.
4.- Cultivacin del cigoto. Mantenemos el embrin in vitro hasta llegar al proceso de mrula.
A partir de ah se puede implantar en un tero materno. Este tero ha de estar previamente
preparado para cultivar el embrin.
5.- Nacimiento del nuevo ser. Se dar de forma natural o en caso de que fuese necesario se realizara
una cesarea.
Inseminacin artificial paso a paso
El proceso de inseminacin artificial incluye las siguientes etapas :
Estimulacin de la ovulacin
La estimulacin de la ovulacin se realiza mediante gonadotropinas en pequeas dosis y controlando el momento del ciclo
menstrual en el que se encuentra la paciente.
Es importante tambin tener control sobre el nmero de folculos que se pretende conseguir para evitar el embarazo mltiple.
Mediante ecografa transvaginal y anlisis de estradiol en sangre se puede controlar la maduracin folicular. En caso de desarrollar
demasiados folculos la probabilidad de que fecunde ms de un ovocito se ve aumentada. No obstante, aunque la mujer no tenga
ningn problema de fertilidad tambin se estimula el ciclo ovrico por varios motivos:
Mediante ecografa, se controla el nmero de folculos (posibles vulos fecundables) que hay en
los ovarios y se calcula el da idneo para llevar a cabo la inseminacin.
La inseminacin artificial, es una tcnica sencilla que se realiza en parejas con problemas de fertilidad muy concretos.
Los requisitos ideales seran mujer joven, con trompas permeables, esterilidad de menos de 3 aos y varn con semen normal. En
estas parejas, la inseminacin artificial tiene su utilidad. Se realizan no ms de 4 intentos, con tasas de xito acumuladas de 25%
30 % de gestacin.
La fecundacin in vitro, es una tcnica totalmente diferente: la fecundacin de los gametos se realiza en el laboratorio de
reproduccin. Tiene mucha mayor tasa de xito y da mucha ms informacin al clnico y a la pareja, al poder observar durante
varios das el comportamiento de estos embriones en el laboratorio.
A continuacin les explicamos, de manera sencilla, las principales diferencias entre estos dos tratamientos:
INSEMINACION ARTIFICIAL
FERTILIZACION IN VITRO
1.
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8.
9.
10.
El Proyecto Genoma Humano (PGH) fue un proyecto de investigacin cientfica con el objetivo fundamental de determinar la
secuencia de pares de bases qumicas que componen el ADN e identificar y cartografiar los aproximadamente 20.000-25.000 genes
del genoma humano desde un punto de vista fsico y funcional.
El proyecto, dotado con 3000 millones de dlares, fue fundado en 1990 en el Departamento de Energa y los Institutos Nacionales
de la Salud de los Estados Unidos, bajo la direccin del doctor Francis Collins, quien lideraba el grupo de investigacin pblico,
conformado por mltiples cientficos de diferentes pases, con un plazo de realizacin de 15 aos. Debido a la amplia colaboracin
internacional, a los avances en el campo de la genmica, as como los avances en la tecnologa computacional, un borrador inicial
del genoma fue terminado en el ao 2000 (anunciado conjuntamente por el expresidente Bill Clinton y el ex-primer ministro
britnico Tony Blair el 26 de junio de 2000), finalmente el genoma completo fue presentado en abril del 2003, dos aos antes de lo
esperado. Un proyecto paralelo se realiz fuera del gobierno por parte de la Corporacin Celera. La mayora de la secuenciacin se
realiz en las universidades y centros de investigacin de los Estados Unidos, Canad, Nueva Zelanda, Gran Bretaa y Espaa. El
genoma humano es la secuencia de ADN de un ser humano. Est dividido en fragmentos que conforman los 23 pares de
cromosomas distintos de la especie humana (22 pares de autosomas y 1 par de cromosomas sexuales). El genoma humano est
compuesto por aproximadamente entre 22500 y 25000 genes distintos. Cada uno de estos genes contiene codificada la informacin
necesaria para la sntesis de una o varias protenas (o ARN funcionales, en el caso de los genes ARN). El "genoma" de cualquier
persona (a excepcin de los gemelos idnticos y los organismos clonados) es nico. Sin embargo descubrir toda la secuencia gnica
de un organismo no nos permite conocer su fenotipo.
EL FUTURO A PARTIR DEL CONOCIMIENTO DEL GENOMA:
La comunidad cientfica viene desarrollando procedimientos efectivos para el mejoramiento de la calidad de vida del ser humano.
Con olo ver unas gotas de nuestra sangre en un biomicroprocesador se podr detectar si tenemos cncer y definir el frmaco que se
pueda utilizar. Los genes de nuestros hijos sern analizados para ver la enfermedades como Alzheimer Parkinson, distrofia muscular
o enfermedades cardiacas. Se descubrir cuales son los genes de la vejez, del crecimiento.obesidad, del,apetito de la tendencia
homosexual y de las conductas patolgicas.
Los bebes estarn diseados antes de la concepcin. La medicina diagnostica permitir tratar con certeza las alteraciones.
Se conocera la historia de la humanidad y el origen de algunas culturas. Se podr llegar a la terapia de implantes genticos, con la
cual muchas enfermedades serian curadas inclusive antes de que se presenten.
En el futuro el nio ser sometido a un examen genetico apenas nace y los padres recibirn informacin electrnica con la
secuencia gentica de su hijocuyo medico utilizara para recetar los frmacos.
Se perderan algunos genes que causan algunas enfermedades pero otorgan resistencia contra otras enfermedades. Ser portador del
gen de la anemia falciforme, por ejemplo confiere resistencia al paludismo..
ALGUNOS GENES HAN SIDO UBICADOS.
Las malformaciones congenicas, se desarrollan partir de errores genticos. Si el ADN se encuentra en los cromosomas, lgico que
los investigadores escudrien estas estructuras para encontrar en sus archivadores los genes que comprometen el desarrollo normal
de un individuo.
Acontinuacion la listade los cromosomas humanos con algunos genes codificadores de enfermedades.
CROMOSOMA 1 ENFERMEDAD DE GAUCHER.- es de carcter recesiva, producida por un gen codificador de protena gluco
brosidasa. Esta enzima metaboliza los lpidos ,, los pacientes no metabolizan los lpidos acumulndose en el hgado bazo y medula
osea. Sintomas, dolores, cansancio, anemia, alteraciones oseas y la muerte. Tratamiento, a base de dilisis renales.
CROMOSOMA 2 ENFERMEDADES DE ALZHEIMER.- Alteracion de carcter degenerativo del sistema nervioso central,
especialmente del cerebro, se manifiesta con perdidad de la memoria, puede darse en pacientes jvenes, se presenta en personas que
superar los 60 aos. Los primeros sntomas son de 5 a 10 aos.
CROMOSOMA 3 CANCER DEL COLON.- Sintomas hemorragia rectal, sangre heces fecales. Tratamiento a base de estrgenos,
radioterapias, ciruga y una dieta especial en fibra vegetal. Genticamente se a encontrado un gen afectado en el cromosoma 2, se
les conoce como LMH1 y MSH2 respectivamente.
CROMOSOMA 4 MAL DE HUNTINGTON.- Causada por un gn mutante del cromosoma 4 con carcter dominante. La alteracin
produce degeneracin del cerebro. Sintomas, depresin, demensia, espasmos musculares con perdidad del control psicomotriz.
Diagnostico a base de una prueba de sangre. La enfermedad se manifieta a partir de los 30 aos, aunque a veces en nios. Este
cromosoma 4 se encontr tambin el gen Alpha-sinucleina que produce el mal de Parkinson.
CROMOSOMA 5 DISPLASIS DIASTROFICA.- Enfermedad prducida por el gen conocido como DTD, ubicado en el brazo del
cromosoma 5. Produce