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Microbiologa farmacutica I
UANCV - EAP:FYB
PRACTICA N 07
MEDIOS DE CULTIVO
DOCENTE: Q.F. Fredy Catacora Yucra
SEMESTRE: VII
Microbiologa farmacutica I
UANCV - EAP:FYB
OBJETIVOS:
-
FUNDAMENTOS TERICOS
Medios de Cultivo
Agentes gelificantes.
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Lquidos
Slidos
Semislido
Complejos
Composicin
Sintticos
Semisintticos
Enriquecimiento o Multiplicacin
Selectivos o Inhibidores
Enriquecidos
Utilizacin o funcin
Diferenciales
Identificacin
Transporte
marinas,
compuesto principalmente por D-galactosa, 3,6-anhidro-Lgalactosa y cido D-glucurnico. Es un buen agente solidificador porque,
una vez que se funde en agua hirviendo, puede enfriarse hasta una
temperatura de 40 a 42 c, sin endurecerse, y no fundir de nuevo hasta
que no se alcance una temperatura de 80 a 90C. Es tambin excelente
porque la mayora de los microorganismos no pueden degradarlo. Puede
utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar
comercial para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares
purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente
la mitad de todo el agar que se produce se utiliza en trabajo microbiolgico,
por lo que es importante la ausencia de metales txicos.
La gelatina es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el
inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso
est muy limitado porque su punto de fusin es bajo (licua a temperatura
ambiente) razn por la que no puede utilizarse para cultivos a 37C, que es
la temperatura ptima de crecimiento para muchos microorganismos.
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1 Segn su consistencia
Medios Lquidos.
Son los que se presentan en este estado, denominndose por ello
caldos. Contienen los nutrientes antes citados, con adicin de algn
tampn, capaz de mantener el pH adecuado. Se utiliza fundamentalmente
cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una
determinada concentracin.
Ejemplos: caldo nutritivo, caldo tioglicolato, agua peptonada, etc.
Medios Slidos.
Se prepara aadiendo un agente gelificante a un medio lquido
determinado. Los ms usados son gelatina y agar.
Este conjunto, convenientemente esterilizado, se vierte en una placa de
Petri o en tubos. Las exigencias nutritivas y las condiciones fsico-qumicas
son similares a las de los medios lquidos. Pero, a diferencia de ellos,
presentan la posibilidad de obtener colonias aisladas, siempre que la
cantidad de inculo est suficientemente diluida. En este caso se puede
observar la existencia de colonias separadas unas de otras, y cada una
constituye un clon (conjunto de bacterias que provienen de una clula
madre, con el mismo patrimonio hereditario y las mismas caractersticas
fisiolgicas).
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Ej.: agar nutritivo, agar EMB, CLDE y todos los medios de aislamiento
primario y de identificacin.
Medios Semislidos.
Se preparan a partir de medios lquidos, agregando un agente
solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos.
Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias.
Ej.: agar cepa, SIM, medios base para utilizacin de aminocidos.
2 Segn su composicin.
Medios complejos.
Son aquellos que contienen ingredientes cuya composicin no es
exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante.
Adems, no se conoce exactamente la proporcin de cada uno de sus
componentes. Esto tiene ciertos inconvenientes en condiciones
experimentales, donde la reproducibilidad no podr ser exacta. En la
prctica estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados.
Ejemplo: caldo nutritivo.
Medios Sintticos
Son aquellos que poseen exclusivamente componentes qumicos
definidos (se conocen todos los componentes) disueltos en agua destilada,
donde la proporcin de cada uno de sus componentes es conocida
exactamente. Entre ellos se encuentran los medios mnimos, pues en ellos
se intenta comprobar el crecimiento de una bacteria determinada, con muy
pocos nutrientes. Los medios definidos son ampliamente usados en
investigacin, pues a menudo se quiere conocer qu est metabolizando el
microorganismo experimental.
Ejemplos: medio basal de sales y una fuente de carbono determinada.
Medios Semisintticos.
Cuando alguno de sus componentes no tiene composicin definida. En
estos casos, se aaden factores de crecimiento bajo la forma de un extracto
orgnico complejo, como por ejemplo, extracto de levaduras, peptona cono
fuente de nitrgeno, glucosa como fuente de carbono.
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Medios de Enriquecimiento.
Se basan en la libre competencia por los sustratos. Son siempre
lquidos que favorecen o permiten la multiplicacin de unas bacterias,
inhibiendo parcialmente la de otras. Pueden ser: de enriquecimiento
propiamente dichos, que se basan en las propiedades metablicas del
microorganismo, o de enriquecimiento selectivo, en cuyo caso se agrega
un agente de seleccin que puede ser, un colorante, un antibitico, etc. Este
agente de seleccin no favorece el desarrollo del microorganismo a
enriquecer, sino que inhibe a la flora acompaante.
Ejemplos:
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Medios Enriquecidos.
Son medios a los que se le agrega un nutriente extra (adems de las
sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores
indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes). Pueden
ser lquidos o slidos. En estos medios no crece un determinado grupo de
bacterias sino todas. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u
otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, lquido
asctico, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del
mismo, por ejemplo Polivitex, Isovitalex, etc.
Ejemplos: agar sangre, agar chocolate, caldo infusin cerebrocorazn, caldo tristona-soya.
Medios de Identificacin.
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Medios de Transporte.
Se usan para transporte de aquellas muestras que no van a
procesarse de inmediato o que deban ser trasladadas de un laboratorio a
otro, y que puedan contener microorganismos fastidiosos para su
desarrollo por lo que se debe impedir el sobrecrecimiento de bacterias que
colonizan con frecuencia piel y mucosas. Estos medios son generalmente
semislidos, tamponados y sin sustancias nutritivas.
Ejemplos: Stuart-Amies, Cary-Blair, etc.
MATERIALES:
MATERIAL DE VIDRIO:
-
Balones
Palcas Petri
Probetas graduadas
Tubos de ensayo
OTROS MATERIALES:
-
Algodn
Esptula
Gasa
Gradilla
Mechero bunsen
Papel Kraft
Pabilo
Agua destilada
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EQUIPOS:
-
Autoclave
Balanza
Potencimetro PH-metro
MEDIOS DE CULTIVO:
Medios Solidos:
-
Agar
Agar
Agar
Agar
Agar
Agar
Medios lquidos:
-
Agua peptonada
Caldo cerebro de corazn
Caldo lactosado
Caldo nutritivo
PARTE EXPERIMENTAL
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PROCEDIMIENTO:
X=5x20/1=100ml
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peso.
Luego
Clculos:
20gr de
1000ml
agar
nutritivo----------------
Xgr----------------------------------------40ml
X=20grx40ml/1000ml
X=0.8gr.
Y as pesamos 0.8 gr de muestra a preparar
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Luego
se realiza la esterilizacin en el
autoclave a una presin de 1.5
atmosferas, 120C y por 15 minutos. Hay algunos medios de cultivo
que no deben esterilizarse al autoclave.
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RESULTADOS y CONCLUSIONES:
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CONCLUSIONES:
-
CUESTIONARIO:
1
-
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