Clase Terica:

Papel del Laboratorio en el

diagnostico de Tuberculosis
OBJETIVOS
Introduccin a las bases del diagnstico de
las enfermedades producidas por
Mycobacterium tuberculosis.
Precisar el rol del Laboratorio en el
Diagnstico de las enfermedades
producidas por Mycobacterium tuberculosis.

Introduccin

Hoy hay en el mundo ms

tuberculosis que en
cualquier otro momento de
la historia
Mortalidad: 1 paciente cada
20 segundos
De no tomar medidas,
1.000 millones de personas
contraern
la enfermedad para 2020.

TB
MULTIRRESISTENTE
EN AMERICA

Casos de TBXDR
Per, ao 2009.

Personas con
TBXDR en Lima.

Mycobacterium
Bacilos,

aerobios, inmviles y no
esporulados.
Pared celular rica en lpidos.
Bacilos cido alcohol resistentes.
Cultivos requieren incubacin de 8 semanas.

FISIOLOGA Y ESTRUCTURA
cido

alcohol resistencia.
Presencia de cido miclico con 70- 90
tomos de carbono.
Contenido de G + C (61-71%).
Pared celular compleja.

Pared celular

Similar a gram positivas,

peptidoglicano
Abundantes lpidos
Arabinogalactano
cidos miclicos
Glucolpidos

Membrama citoplsmica

Lipoarabinomananos

arabinogalactano
polisacarido

Acyl -lipido
Lipoarabinomanano LAM
(lipopolisacarido)
Ac. Miclico
Cord factor

Cadena Epidemiolgica
Agente

causal

Complejo Mycobacteriun tuberculosis

Depende de pH y O2
Replicacin Lenta

Reservorio:

fuente de Infeccin:
Hombre sano infectado hombre enfermo

Transmisin

Ncleos suspendidos en
pequeas gotas que son
expulsadas al hablar, cantar o
toser.
Estas pequeas gotas
permanecen infectantes en el
aire por horas, por lo que
pueden ser inhaladas por otras
personas.

Infeccin - Enfermedad

No todas las personas

infectadas enferman, slo una
de cada diez, las ms
susceptibles.
M.tuberculosis se disemina por
todo el organismo
Sin embargo, la enfermedad
pulmonar es la ms frecuente
(80-85% de todos los casos
diagnosticados) debido a que
el bacilo necesita oxgeno para
multiplicarse.

SNC

Definiciones diagnsticas
Tuberculosis pulmonar (TBp).
Tuberculosis extrapulmonar (TBe).
Tuberculosis grave y no grave.

Bases del diagnstico

Sospecha Clnica

Tos (sintomtico
respiratorio: SR)
Baja de peso
Sudoracin Nocturna
Anorexia

Tcnicas diagnosticas:
Demostrar la presencia
del Mycobacterium

Microscopia
Cultivo
Tcnicas moleculares

Tcnicas Diagnosticas

Baciloscopia

Cultivo

Coloracin Ziehl neelsen

Aureamina
Medios a base de huevos:
Lowenstein Jensen Ogawa
Medios Lquidos:
Middlebrook
Automatizados: Bactec

Tcnicas de Biologa
Molecular

Diagnstico inmunolgico
Prueba de Tuberculina

Es una prueba cutnea que se realiza para conocer si el

organismo de la persona presenta reaccin frente a las
protenas del M. tuberculosis, que se adquiere despus
de una infeccin producida por el mismo.
En menores de 15 aos se utiliza como apoyo al
diagnstico de la TB.
Se aplica en el tercio superior, cara externa del
antebrazo
0,1 ml. de tuberculina va intradrmica.
La tuberculina es conocida como derivado protenico
purificado o PPD.

Prueba de la tuberculina. Tcnica de Mantoux

Prueba de tuberculina. Lectura

Incorrecto

Correcto

BACILOSCOPIA

Primera prioridad Nacional

para el control de la
Tuberculosis en Pases de alta
prevalencia.
Tcnica de eleccin para el
Diagnostico de
Tuberculosis
Pulmonar.
Monitoreo y respuesta del
tratamiento.
Importancia en Salud Pblica:
Indica mayor capacidad de
transmisin

Baciloscopia Directa. Un programa para Laboratorios.CDC.UICTER.OMS 2000

Microscopa
Coloracin

de
Ziehl- Neelsen

BACILOSCOPIA
VENTAJAS

DESVENTAJAS

Depende de la calidad de la muestra:

Esputo/ saliva.

Difcil deteccin en pacientes en

estadios iniciales de la enfermedad
(no expectoran)

Tcnica sencilla, rpida, reproducible,

accesible a laboratorios de 1er nivel y
barata
Alta especificidad en pases de alta
endemia.
Sensibilidad alta en sintomaticos
respiratorios.
Vara de acuerdo al cuadro clinico

Necesitan gran carga bacilar para que

la baciloscopia sea positiva
Baja sensibilidad en TBC
extrapulmonar.

Baciloscopia: Sensibilidad

Vara de acuerdo al cuadro clnico

TB cavitaria80 90%
TB Infiltrado50 80%
Miliar 5 - 10%

Baciloscopia: Toma de Muestra

La muestra debe recogerse en frasco

ancho con tapa rosca, de material
plstico y descartable, cierre
hermtico.

La muestra debe ser llevada al

Laboratorio lo mas rpido posible,
sobretodo las de Jugo gstrico.

No deben ser recolectada de 24

horas.

De no ser trabajada el mismo da de

su recoleccin, deber ser refrigerada
a 4 C y protegidas de la Luz

Baciloscopia: Especificidad

Especificidad: 96 99 %
Depende de la endemia del
pas.
En pases de mediana-alta
endemia, mas del 99% de
los BK+ son Tuberculosis.
Falsos Positivos:

Nocardia
Restos de alimentos
Hongos
Ralladuras

Sintomtico Respiratorio
2 Baciloscopias
positiva

negativa

Radiografa pulmonar

Dx TBC
Algoritmo de Diagnostico

Anormal

Normal

2 Baciloscopias
positiva
Dx TBC

negativa
Cultivo
Seguimiento diagnostico

Instrumentos Diagnsticos
El Cultivo

Identifica 20% ms que la

baciloscopia en SR, en
reas de gran
prevalencia.
Necesita 10 a ms
bacilos/ ml de muestra.
Ideal para muestras
paucibacilares y
extrapulmonares
Base de las pruebas de
sensibilidad

Desventajas

Costo mayor que el de la

baciloscopia
Tcnica ms compleja
Necesita personal
adiestrado
Adecuada Infraestructura
Tiempo de incubacin de
acuerdo a Medio utilizado:

Medios Lowenstein
Jensen / Ogawa de3 a 8
Semanas
Medios Lquidos de 10
das a 4 semanas

Seguimiento Diagnostico

Mientras se espera
resultado de cultivo de 3
a 8 semanas

Dx diferencial con otras

enfermedades
Baciloscopias cada 2
semanas

Actualizacin de la doctrina, Normas y procedimientos para el control de la tuberculosis en el Per.Marzo 2001

Indicaciones del uso de cultivo para

Diagnstico

Sintomtico Respiratorio con Rx anormal y baciloscopa negativa con

cuadro clnico sospechoso de tuberculosis
Baciloscopia paucibacilar:
1 A 9 baar en 100 campos microscpicos observados
Todas las muestras extrapulmonares
Toda muestra pulmonar o extrapulmonar de los pacientes portadores
del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH positivos) y sospecha
de tuberculosis.
Todos los menores de 15 aos

Control

Muestras de pacientes en tratamiento con sospecha de fracaso

Baciloscopia positiva en dos controles sucesivos despus de un
perodo de negativizacin.

Prueba de Sensibilidad

Examen auxiliar para determinar la sensibilidad o resistencia a

los frmacos antituberculosos en los casos de fracaso a los
esquemas de tratamiento antituberculosos.

Primera lnea

Segunda lnea

Indicaciones para la Prueba de

Sensibilidad a frmacos de Primera lnea

Cepa del cultivo positivo que sirvi para el diagnstico de

fracaso a los esquemas de tratamiento.
Cepas de cultivos positivos de pacientes con infeccin VIH
o SIDA/TB
Cepas de cultivos positivos de personal de salud con TB
pulmonar baciloscopa positiva.

Mtodos Diagnsticos Moleculares

H e r r a m ie n t a s d e B io lo g a M o le c u la r

H ib r id a c i n p o r s o n d a s
D e t e c c i n d ir e c ta
M u e s tra s
C u lt iv o

T c n ic a s d e a m p lific a c i n
D e t e c c i n d ir e c ta
I d e n t if ic a c i n
R e s is t e n c ia a n t ib io t ic a

T e c n ic a d e la h u e lla d ig it a l
E s t u d io s e p id e m io lo g ic o s
F u e n t e s d e in f e c c i n
R e c a id a s /r e in f e c c i n

Conclusiones

Es errneo pensar en reemplazar los exmenes convencionales

por las tcnicas moleculares.
El valor no debe subestimarse ni sobrestimarse.
El cultivo en medio solidos o liquidos sigue siendo el patrn de oro.
Baciloscopia muy til : bien realizada.
Por ahora no deber sacrificarse una muestra para utilizarla en
PCR como diagnostico de Tuberculosis.
La interpretacin de un resultado de PCR, positivo o negativo,
deber evaluarse muy bien y siempre dentro de anlisis crtico y
juicio clnico adecuado. De acuero a evidencia cientfica
(metanalisis) un resultado de PCR negativo NO descarta el
diagnostico de tuberculosis
Tcnicas moleculares son de PRIORIDAD para diagnostico de
MDR o XDR