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Marco Terico
PROTENAS
Sin duda alguna, una de las determinaciones ms usadas en biotecnologa es la
cuantificacin de protenas. Estimar la concentracin de protenas es necesario en
diversas industrias como la alimenticia, farmacutica y biotecnolgica en general.
Generalmente se busca conocer la actividad especfica de una preparacin enzimtica,
por lo que determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica como
tcnica bsica en un esquema de purificacin concreta es de gran importancia. Para
realizarlo, existen diversos mtodos diseados para cuantificar las protenas de los
alimentos los cuales se basan en el anlisis intrnseco de estas sustancias para absorber
la luz en el UV, la facilidad de formacin de derivados qumicos o la capacidad de unir
ciertos colorantes.
Protenas de la carne
A menudo, la protena en la carne tiene una alta calidad biolgica en comparacin con
muchos alimentos vegetales. Algunas carnes procesadas tienden a tener una menor
calidad de las protenas en comparacin con sus homlogas frescas, pero aun as, en
general poseen una mayor calidad que muchos alimentos vegetales.
Los diferentes grupos musculares de un mismo animal no proporcionan idntica cantidad
de protenas. Las carnes tienen diversas caractersticas nutricionales, entre las que
podemos destacar que son:
Son una excelente fuente vitamnica. Forman parte del complejo B12
Son ricas en minerales, en las cual podemos destacar el hierro. El hierro cumple
diversas funciones en nuestro organismo, de las que podemos destacar la
absorcin del hierro, el cual es necesario para el metabolismo del hemo. En los
2.
La concentracin de la protena
3.
4.
5.
Preparar el reactivo
2.
3.
4.
5.
6.
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Es necesario:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Vaciar el contenido del matraz Kjeldahl dentro del destilador, enjuagar con un
poco de agua destilada y vaciar el agua de enjuague. Agregar 15 ml de
solucin concentrada de NaOH, o una cantidad suficiente para hacer alcalino
el contenido.
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Titular el contenido del matraz con una solucin valorada de HCl 0.05 N.
10.
11.
CENIZAS
Las cenizas representan el contenido en minerales del alimento; en general, las cenizas
suponen menos del 5% de la materia seca de los alimentos.
Los minerales, junto con el agua, son los nicos componentes de los alimentos que no se
pueden oxidar en el organismo para producir energa; por el contrario, la materia
orgnica comprende los nutrientes (protenas, carbohidratos y lpidos) que se pueden
quemar (oxidar) en el organismo para obtener energa, y se calcula como la diferencia
entre el contenido en materia seca del alimento y el contenido en cenizas.
Mtodo de Determinacin de Cenizas
Las cenizas en un alimento son un trmino analtico equivalente al residuo inorgnico
que queda despus de calcinar la materia orgnica. stas normalmente no estn
presentes en el alimento original por lo que su presencia conlleva una interaccin
qumica voltil entre varias sustancias. Es importante especificar que las cenizas tienen
mayor presencia en productos crnicos por lo que existen diversos procedimientos para
su determinacin tanto en seco como en hmedo.
La determinacin en seco es ms comn debido a su facilidad de aplicacin y su
eficiencia para determinar tanto cenizas solubles en agua, insolubles y solubles en medio
cido, basndose en la descomposicin de la materia orgnica.
Por otro lado la determinacin hmeda se basa en la descomposicin de materia
orgnica en medio cido por lo que la materia inorgnica puede ser medida por
gravimetra de las sales que permanezcan en disolucin acuosa o cida.
Ventajas: Ambos procedimientos tienen ventajas notables, el anlisis en seco resulta
ms simple y rpido, no se requiere gran atencin durante la generacin de cenizas, no
se requieren reactivos, se pueden manejar muchas muestras y es posible determinar
cualquier tipo de materia inorgnica. Por otro lado la evaluacin hmeda no requiere
alta temperatura, la oxidacin es rpida, se mantiene la disolucin acuosa, el equipo no
es caro y no existe volatilizacin de minerales.
Ensayo Prctico Ejemplo
El procedimiento consiste en:
1.
2.
3.
4.
5.
Resultados y anlisis
Determinacin de protenas por el mtodo de Bradford
PRODUCTO
Q1 (chuleta) =
Q2 (bistec) =
Promedio absorbancia
1
0.954
[Protena]
30.58
29.14
Determinacin de cenizas
PRODUCTO
Q1 (chuleta) =
Q2 (bistec) =
Peso crisol con muestra calcinada Peso crisol vacio Peso de la muestra
g
g
g
29.4214
24.3632
5.0633
28.8886
23.8368
5.0578
Determinacin de humedad
TOTAL
99.8993
99.8814
% cenizas
0.10
0.12
Bistec
Despus tomamos 1 ml del sobrenadante y lo diluimos con 9ml de agua destilada. Por
ltimo, colocamos 1ml de esta mezcla en la celda para el espectrofotmetro y
procedimos a leer la absorbancia a 595 nm.
La reaccin de Bradford es estable por 1 hora, despus de este tiempo el complejo se
separa porque es una reaccin de alta entropa.
Como puede observarse en el apartado de resultados, la cantidad o porcentaje de
protena para la chuleta fue del 30.58% mientras que para el bistec fue de un 29.14%. La
diferencia no fue tan marcada y esta cantidad congruente con lo que aparece en
documentacin oficial de la FAO.
Debido a que el tiempo que dejamos la materia en la mufla no pas de los cuarenta
minutos, obtuvimos un porcentaje mnimo de cenizas para ambas muestras.
Como puede observarse en el apartado de resultados, el porcentaje de cenizas para la
chuleta fue de 0.1% mientras que para el bistec de cerdo fue de 0.12%. Estos
porcentajes indican que el tiempo fue bastante corto para poder llevar a cabo la
determinacin apropiadamente.
Realizando la comparacin con datos de la FAO, podemos ver que la determinacin
requiere de mucho ms tiempo para poder determinar dichos valores correctamente (ver
ilustracin 1).
Conclusiones
El primer anlisis que se realiz fue la determinacin de protenas por el mtodo de
Bradford, en donde podemos decir que su principio se basa en emplear un colorante
hidrofbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de cido fosfrico tienen un color
pardo y que, al encontrarse en el entorno hidrofbico del interior de una protena,
origina un color azul intenso que se puede medir fcilmente. Este mtodo depende, pues
de la interaccin relativamente inespecfica entre un colorante hidrofbico y las
protenas, por lo que puede der relativamente sensible a la presencia de contaminantes
tales como restos de detergente y lquidos orgnicos como el metanol. Su principal
ventaja es que resulta ms rpido y fcil de emplear que otros mtodos alternativos, y
ms sensible que la medida de absorbancia a 280 nm. Para determinar la concentracin
de protena total presente en una muestra se requiere la preparacin de una curva de
calibrado empleando una protena patrn, que generalmente suele ser la seroalbmina
bovina.
Posteriormente se realiz la determinacin de cenizas, en donde podemos decir que
su principio se basa en quemar toda la materia orgnica presente en los alimentos
(carne) para quedarnos con los residuos inorgnicos, es decir, los minerales. Si bien hay
que tener en cuenta que en l no se encuentran los mismos elementos que en la muestra
intacta, ya que hay prdidas de volatilizacin y por conversin e interaccin entre los
constituyentes qumicos.
El contenido de cenizas es una parte del anlisis prximo para la evaluacin nutricional.
Las cenizas son el primer paso en la preparacin de una muestra de alimentos para
anlisis elemental especfico. Las cenizas contienen los elementos inorgnicos, mucho
de los cuales son de inters nutricional como es el caso del calcio, fsforo, etc.
Tabla 2. Grado de saturacin de los cidos grasos componentes de los lpidos del tejido
muscular de diversas especies (Fennema et al., 1992).
EXTRACCIN SOXHLET
Las sustanciasqumicason mucho ms solubles en elaguaque en eltero en cualquier
otro disolvente orgnico. En tales caso, ni an con una agitacin repetida con estos
disolventes se logra la extraccin de toda la materia disuelta. Por lo que se emplean
entonces los aparatos de extraccin continua.
Su funcionamiento consiste en hacer hervir en le matraz
el disolvente con el cual se va a extraer la materia slida
deseada que se encuentra en la muestra depositado en el
cartucho del soxhlet. Los vapores del disolventes
ascienden por el extractor y se condensan en el
refrigerante cayendo gota a gota sobre el cartucho. La
parte soluble pasa porgravedadal matraz.
Otros extractores de soxhlet se construyen de tal modo
que el disolvente llena la cmara de extraccin y la
disolucin resultante es sifonada al matraz de
destilacin, el proceso se repite automticamente hasta
que la extraccin es completa. El mtodo que nos
permite seguir este aparato tiene la ventaja de que
siempre se est extrayendo con el disolvente puro en su
punto de ebullicin por lo que el rendimiento es ptimo.
La extraccin Soxhlet se fundamenta en las siguientes
etapas:
1) colocacin del solvente en un baln.
2) ebullicin del solvente que se evapora hasta un condensador a reflujo.
3) el condensado cae sobre un recipiente que contiene un cartucho poroso con la
muestra en su interior.
4) ascenso del nivel del solvente cubriendo el cartucho hasta un punto en que se
produce el reflujo que vuelve el solvente con el material extrado al baln.
5) Se vuelve a producir este proceso la cantidad de veces necesaria para que la muestra
quede agotada. Lo extrado se va concentrando en el baln del solvente.
Resultados
Tabla 1. Pesos iniciales y finales
Material
Carne de cerdo
5.0818
Matraz
148.15
149.06
Donde:
M es el peso de la muestra
M1 es la tara del matraz solo
M2 es el peso del matraz con grasa
Por lo que, sustituyendo los valores en la ecuacin, tenemos el siguiente resultado:
Anlisis de resultados
Como muestran los resultados, la carne de cerdo analizada contiene 17.9% de grasa
cruda, esto quiere decir, que por cada 100g de esta carne hay un contenido graso de
17.9g.
El mtodo utilizado consiste en la extraccin de la grasa por medio de un solvente, que
debido a la polaridad, esta es lavada de la carne y llevada al matraz. Los sifones se
dejaron actuar durante dos horas para lograr la mayor extraccin posible.
Conclusiones
Aunque las carnes rojas como las procedentes de vacuno, ovino y porcino, se consideran
perjudiciales para la salud por su contenido en grasa y la composicin de la misma, es
necesario analizar los siguientes aspectos:
Respecto a su contenido en grasa, ste es bajo si nos referimos a la grasa intramuscular,
que es la que verdaderamente se consume ya que no puede ser retirada. As, el
contenido de esta grasa es de un 2-3% en el caso de vacuno joven, pudindose elevar
hasta un 6% en los animales viejos. En el caso del ganado ovino oscila entre un 2-5%
segn la edad del animal, y en el porcino la media es de un 2,5%, siendo an inferior en
las carnes blancas como el pollo (1,7%). La grasa intramuscular es importante tambin
desde el punto de vista sensorial de la carne ya que aporta el sabor, aroma y agrado de
la misma.
La importancia de su cuantificacin radica en obtener los parmetros de calidad
adecuados para obtener un producto o subproducto de calidad.
Marco terico
La carne constituye obviamente la materia prima fundamental de los productos crnicos.
A pesar de que se trata de un material slido, el constituyente mayoritario de la carne
es el agua, la que puede representar alrededor de un 75 % del total, en funcin del
msculo de que se trate, el tipo de animal, la alimentacin del mismo, etc.
El agua que entra en la composicin del tejido muscular no es homognea en cuanto a
sus propiedades fisicoqumicas y a la funcin que cumple, lo cual se encuentra en
estrecha relacin con las interacciones que se establecen entre las molculas de agua y
los elementos estructurales de la carne, fundamentalmente las protenas, lo que
permite decir que en las carnes existen diferentes tipos de agua. Las diferentes formas
en que se encuentre el agua, as como la fortaleza de la unin a las protenas de la
carne determinan la capacidad de sta de retener mas o menos fuertemente una
cantidad de agua. Tal propiedad de las carnes se conoce como Capacidad de Retencin
de Agua (CRA).
La CRA es una propiedad muy importante de las carnes, que vara en dependencia de
muchos factores (cambios de pH y adicin de sales, entre otros) y define el
comportamiento tecnolgico de stas, sobre todo en un aspecto tan sensible como lo es
el rendimiento de los procesos. Las carnes que presentan una CRA disminuida, sufrirn
mayores prdidas de agua que conllevan prdidas de peso superiores y por ende,
afectacin de la rentabilidad o las ganancias de un proceso.
El agua presente en las carnes tambin interviene de manera significativa durante la
conservacin por congelacin. Los cristales de hielo que pueden formarse durante una
congelacin lenta, favorecen la prdida de jugos crnicos, lo cual trae aparejado una
disminucin del valor nutricional de la carne, prdidas de peso y afectaciones
sensoriales.
Slo una parte del agua total presente en la carne o los productos crnicos se encuentra
disponible para participar en las reacciones qumicas o para ser utilizada por los
microorganismos para su desarrollo, ya sea aquellos que son causa de deterioro u otras
especies cuya actividad metablica favorece el desarrollo de algunas cualidades
deseadas en los productos crnicos.
El contenido de agua de la carne fresca se relaciona (aunque no es el nico elemento
responsable de ellas) con sus propiedades sensoriales, particularmente con la textura.
Igualmente, el contenido de humedad de los productos crnicos se relaciona con sus
propiedades sensoriales, particularmente con la textura. Un ejemplo tpico son los
jamones, donde los jamones tipo York, ms secos, pero ms duros, han dado paso a los
jamones tipo Virginia, de mayor contenido de humedad, pero ms suaves y jugosos.
*Chuleta de cerdo.
Resultados:.
Con gasa
Chuleta PM
1.1904
CM
1.6786
5.0640
5.5522
Con gasa
Carne cerdo PM
1.7791
1.6948
CM
5.0077
5.092
C1
(min)
C2
Peso ( g )
Peso ( g )
4.9240
4.9586
10
4.5237
4.5758
15
4.3909
4.4479
20
4.2624
4.3413
60
4.1294
4.2270
Peso g
4.6
4.5
4.4
4.3
4.2
4.1
4
15
30
45
Tiempo ( min )
Perdida de humedad (Chuleta)
60
%Humedad
Chuleta
28.0964
Carne de cerdo
76.1320
Anlisis de Resultados
Se procedi a visitar expendios comerciales de la ciudad y a comprar los respectivos
productos teniendo en cuenta el mismo lugar de compra, frescura del producto y lote
principalmente. Se adquirieron dos muestras producto crnicos (chuleta de cerdo y carne
de cerdo magra) para tener contra muestras por si se presentaban algn tipo de problema
como hidratacin del producto por abertura y almacenamiento.
En la literatura se pudo constatar que la humedad de los productos variaba cuando se
abra el empaque o proceda directamente del matadero y se almacenaban en
refrigeracin por 24 horas, por lo que se decidi realizar los ensayos de hmedad y
extraccin Soxhlet para cada producto en un mismo da determinado.
Por otro lado, se prepar la muestra cortndola en pequeos trozos con el fin
homogeneizar el secado.
Siguiendo el protocolo descrito en la metodologa donde se estima la temperatura de
secado de 103 2C y un peso de muestra de 5 a 8 gramos, se procedi a realizar la
determinacin del porcentaje de humedad de cada producto (chuleta de cerdo y carne de
cerdo magra) por el mtodo de estufa de secado o mufla.
Segn las especificaciones el equipo utilizado, se debe poner en funcionamiento una hora
antes del anlisis, tanto para la tara de crisoles como para la determinacin de humedad.
Esto conllev a que, para una determinacin de un producto era necesario un tiempo
entre seis y siete horas entre la tara de crisoles y la determinacin propiamente dicha.
En la tabla anterior de resultados , se pueden observar los valores obtenidos para cada
producto. En ella se puede apreciar que la carne de cerdo magra es la que mayor
contenido de humedad presenta y que la chuleta de cerdo el de menor humedad
presenta. Tambin se puede notar que a medida que el producto se encuentra sin
procesar aumenta el porcentaje de humedad .Esto en teora debera ser que mayor
emulsionado mayor retencin de agua.
Bibliografa
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Textos y Materiales Didcticos. MES.
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%20Anlisis%20de%20Calidad%20en%20Muestras%20de%20Carne.pdf
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http://avibert.blogspot.com/2010/12/contenido-de-cenizas-en-los-alimentos.html
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http://datateca.unad.edu.co/contenidos/211614/Modulo/leccin_4_lpidos_de_la_carne.html
http://www.ecured.cu/index.php/Extractor_de_soxhlet
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