Dr.

Pablo Anaya Rivera

Secretario de Salud y Director General de los
Servicios de Salud de Veracruz
Dra. Minerva Junco Gonzlez
Subsecretaria de Salud
Dra. Irasema A. Guerrero Lagunes
Directora de Salud de Pblica
Dr. Alejandro Escobar Mesa
Subdirector de Prevencin y Control de
Enfermedades
Dra. Rosa Aguilar y Meza
Jefa del Departamento de Salud Reproductiva
Dra. Martha Lilia Flores Guzmn
Coordinadora Estatal del Programa de Salud de la
Mujer

LA TINCIN DE PAPANICOLAOU

Bases y prctica
JICA

Yoshikuni Taira

H FALTA DE TRANSPARENCIA
PRIMERO
Posibles causas

El diagnstico citolgico de alta

confiabilidad se puede lograr con la
observacin exacta de las muestras
elaboradas adecuadamente y con la
interpretacin correcta.

Se logra obtener una muestra de

buena calidad y con uniformidad,
realizando el procedimiento de tincin
adecuado.

1.

Deshidratacin inadecuada el alcohol est

mezclado con agua

2.

Aclaramiento(xilol de baja pureza Material

inadecuado para el montaje.no es transparente

E LA TINCIN INADECUADA DEL CITOPLASMA.

ROSADONARANJA TENUE

PRINCIPIO DE LA TINCIN

Posibles causas

3 REGLAS DE LA TINCINDE PAPANICOLAOU

1.
2.
3.

1) Afinididad qumica.

Sequedad antes de la fijacin.

Tiempo Insuficiente para la fijacin.
Deficiencia del lquido de EA-50.

Unificacion de los colorantes y el radical funcional quimico en

componentes celulares.
Ejemplo enlace ionico del quelato de hematin aluminio y
radical fosforico del ADN.

2) Concentracin.

Densidad del radical funcional quimico en componente celular

con el cual une con los colorantes.

3) Permeabilidad.
Relacion del tamao de las moleculas de los colorantes y
densidad de la estructura celular.
EjemploDiferentes tamaos de las moleculas de los
colorantes acidos (OG, EosinY, Verde Claro), penetran en
diferentes estructuras celulares y logran teir.

PRINCIPIO DE LA TINCIN DEL NCLEO

D TINCIN INADECUADA DEL

CITOPLASMA (OSCURA).

Posibles causas

La cromatina es una sustancia nuclear que se

tie de obscuro con el colorante bsico
(hematoxilina).

Cromatina est constituda por finas cadenas de

cido desoxirribonucleico unidas a una protena
base, por lo general histona; contiene la protena
no- histona y poca cantidad de ARN.

1.
2.
3.

Exceso del tiempo de tincin.

Falta de fraccionamiento
Concentracin de los lquidos de tincin.

CAMBIO DEL NCLEO POR LA FIJACIN

Por la fijacin del ncleo, hay cambio en la histona del

mismo, producindose la disolucin del radical fosfrico del
ADN, el cual tiene carga negativa.

Lograr la tincin por la unin del ADN con el radical fosfrico

y con hematoxilina().

TINCION DEL NUCLEO

La hematixilina tiene color transparente o blanco, se oxida

por medio de un oxidante quimico para unirse fuertemente
con los componentes vitales.

Si se agrega aluminio el cual es mordente, forma el quelato

y hace enlace ionico con la parte que tiene carga negativa
de los componentes vitales, por consiguiente tie a esa
parte con azul morado a azul.

C TINCIN DEFECTOSA DEL

CITOPLASMA (TENUE

ELPHDE LA HEMATOXILINA Y LA TINCIN

Posibles causas
LOS RADICALES FUNCIONALES ANINICOS.
1. El radical cido sulfricoSOmucosidad, cartlago, etc.
2. El radical fosfricoPOncleo, etc.
3. El radical carboxiloCOO citoplasma, etc.

Dependiendo del pH de la solucion de hematoxilina, cambia la

disolucion del radical funcional del anion.
El radical funcional del anion de la celula, el cual se une con la
hematoxilina, esta mostrado en la diapositiva izquierda. Hasta
pH 3.0, la hematoxilina se une con los tres radicales funcionales
y tie en forma general.
La hematoxilina de Harris de pH 2.7 2.8 se une con el nucleo
que contiene el radical fosforico y con el citoplasma que contiene
el radical carboxilo( COO), por esa razon, es necesario hacer el
fraccionamiento.

1.
2.
3.
4.

Lquidos de tincin deficientes.

Deterioro del lquido de tincin por dilucin.
Tiempo insuficiente de tincin.
Exceso de fraccionamiento.

5.

Deshidratacin y aclaramiento inadecuado.

B LA TINCIN DEL NCLEO ES FUERTE Y

LA ESTRUCTURA DEL NCLEO QUEDA
AMBIGUA.

CLASE DE
TINCIN

HEMATOXILINA

LA

1. Tincin progresiva la hematoxilina de contenido de la

hematoxilina

POSIBLES CAUSAS

2. Tincin regresiva la hematoxilina de r contenido de la

hematoxilina

1. Uso de alcohol de alta concentracin.

Despus de teir con la hematoxilina, el ncleo y el citoplasma se
2. Exceso de tiempo para la tincin del ncleo. tien conjuntamente.
3. Falta de fraccionamiento.

Comparando con el numero absoluto del radical anion de la celula,

con una mayor cantidad de colorante de hematoxilina, se tie
mas fuerte el nucleo, si embargo, al mismo tiempo, tie en forma
general.
La utilizacion de la hematoxilina de Harris o Gill de alta
concentracion en la citologia , es para uniformizar el grado de
tincion del extendido el cual no es uniforme, si no que presenta
areas gruesas. Caso particular en la citologia. Si se utiliza el
liquido colorante con menos densidad (Mayer), dependiendo del
extendido de la laminilla, se tie irregularmente.

PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO

A LA TINCIN DEL NCLEO ES TENUE

POSIBLES CAUSAS

Despues de la tincion con hematoxilina, el nucleo y el

citoplasma estan teidos conjuntamente. Despues de teir
fuerte a toda la celula se sumerge en el acido(H )clohidrico, el
quelato de hematin aluminio que se unio con el citoplasma, se
intercambia con el ion hidrogeno y por este resultado, se
decolora la parte del citoplasma. La diapositiva seala que
esta teido conjuntamente.

1.
2.
3.
4.
5.
6.

se seala que esta sumergida en el liquido para fraccionar. Se

seala el intercambio del quelato de hematin aluminio que se
unio con el citoplasma, con el ion hidrogeno. Sin embargo, hay
que tener cuidado porque si se deja mucho tiempo el quelato
que se ha unido con el nucleo, tambien intercambia con el ion
hidrogeno y lo decolora. Dependiendo de la densidad del
alcohol de acido clorhidrico, cambia tambien la intensidad del
fraccionamiento. El liquido de hematoxilina es acido, por esa
razon, si se deja como esta, las partes teidas cambian a color
pardo rojo y ademas tienden a decolorarse.

7.
8.

Lquido de tincin deficiente.

Sequedad antes de la fijacin.
Tiempo insuficiente para la fijacin.
Tiempo insuficiente para la tincin del
ncleo.
Deterioro de la hematoxilina por dilucin.
Exceso de fraccionamiento con alcohol de
cido clorhdrico.
Blanqueado por el cloro del agua de la llave.
Mezcla con el lquido de citospray para la
fijacin.

CAUSAS DE UNA TINCIN INADECUADA

El diagnstico citolgico de alta confiabilidad se puede
lograr con las muestras elaboradas adecuadamente. As
que todos nosotros, quienes nos dedicamos al examen de
citologa, siempre debemos tratar de elaborar muestras de
buena calidad.
Para esto, no hay que ignorar las muestras inadecuadas,
sino buscar la causa y mejorarlas.

PRINCIPIO DE LA COLORACIN
(VIRAJE)

Disolucin acuosa de hematoxilina

amarillo
rojomorado
azul

La tincin recibe influencia del del

agua, densidad del cloro y temperatura del
lquido colorante.

DESHIDRATACIN

Deshidratar bien con alcohol de 96alcohol absoluto. Si

no se hace bien la deshidratacin, las laminillas se vuelven
color blanquecido y no se logra obtener una muestra
adecuada. Los colorantes tienden a disolverse en el agua o
en alcohol, y sta es la causa de la decoloracin.

OrangeG
OG6
contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a
disociarse.
Si baja el pH, aumenta la intensidad de la tincin.
Cerca
de la neutralizacin, se debilita la intensidad de la tincin.
Con esto puede pensarse que el radical sulfito es bastante
fcil de disociarse y dificulta la unin de la protena con el
colorante.

Principio de la tincin del citoplasma.

Los colorantes OG6 (orange G) y EA 50 (eoginY, verde
palido) son colorantes acidos que tienen el radical funcional
acido, y carga negativa. Los componentes principales del
citoplasma son azucar, lipidos y proteinas antoferas que
contiene RNA y tiene la caracteristica de tener carga
negativa y positiva. Sin embargo, dependiendo de las
condiciones de la tincion(pH), cambian
estas cargas.
Cuando el pH es neutro, muchas veces tiene carga negativa
y cada vez que tiende a la acidez, el radical amino se ioniza y
toma carga positiva y por esa razon se mejora la tincion.

ACLARAMIENTO(PENETRACIN
COMPLETO) MONTAJE

ACLARAMIENTO(PENETRACIN
COMPLETO) MONTAJE
Realizar bien la desalcoholizacin con xilol.
En la ltima etapa de la elaboracin de la laminilla, sino
se hace bien la deshidratacin y desalcoholizacin,
despus del montaje, los colorantes, los cuales estn en
las clulas, se disuelven en el material para montar.
Es importante utilizar alcohol y xilol para evitar la
disolucin.

Eosin Y
contiene el radical carboxilo(COOH), el cual tiene tendencia a
no disociarse; con pH 5 6 se tie ms fuerte y cada vez
que baja el pH, tiende a bajar la intensidad de la tincin. Si
baja el pH, se reduce la ionizacin del radical
carboxilo(COOH) de eosin Y y es frenado, por esa razn no se
puede combinar con las protenas.

Light green SF yellowish

Es un colorante antfero que tiene el radical funcional cido
el radical sulfitoy el radical funcional bsicoel radical
amino), sin embargo, contiene ms radical funcional cido,
por lo que se califica como colorante cido.
Como contiene el radical sulfito(SO 3) el cual tiende a
disociarse, con pH2 tiene la intensidad ms fuerte de tincin
y cerca del pH neutro, la intensidad de la tincin se debilita.
Igual que en el OG 6.

DESHIDRATACIN
En cada caja se sumergen diez veces despacio y
deben escurrirse lo ms posible.
En la ltima caja, se debe usar alcohol limpio. Para
eliminar el agua, si es posible, agregar un desecante
como el Molecular Sheave.

Ahora vamos a ver desde el punto de vista de la estructura del

citoplasma. En la tincion del citoplasma se tiene mucha relacion
del tamao de las moleculas de los colorantes con la densidad
de la estructura celular. El tamao comparativo de las moleculas
de los colorantes es Orange G es menor que Eosina Y es
menor que Light Green yellow

Aclaramiento(Penetracin completa)

En la imagen de la izquierda seala la estructura de la celula no

teida.
En la imagen de la derecha seala la estructura de la celula
teida con diferentes colorantes. (con imaginacion)
En cada caja se sumergen diez veces despacio, deben
escurrirse lo ms posible. El lquido para el
aclaramiento, se utiliza el que no contenga agua
(agregar un desecante como el Molecular Sheave).

DESHIDRATACIN
En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben
escurrirse lo ms posible.
En la ltima caja, se debe usar alcohol limpio.

EA-
3 minutos
La eosin Y y Verde claro SF amarillo, los cuales estan
contenidos en EA-50, son colorantes cidos y tienen carga
negativa.
Por eso se unen con las protenas que tienen caractersticas
de carga positiva.

En la imagen de la izquierda seala una celula que esta

sumergida en OG 6,parece que el colorante tie a toda la celula,
sin embargo, por fraccionamiento con el alcohol, se hece la
tincion selectiva.
En la imagen de la derecha seala la tincion de EA 50, y se
muestra como tie cada colorante. Tambien seala hasta el
ultimo proceso de deshidratacion y fraccionamiento con alcohol.
De esta manera se lleva a cabo el proceso de la hermosa tincion del
Papanicolaou.

DESHIDRATACIN

PRCTICA
DE LA
TINCIN

Despus de hacer bien la coloracin, realizar la deshidratacin

con alcohol.
En cada caja se sumergen diez veces despacio y se deben
escurrir lo ms posible.
En la ltima caja , se debe usar alcohol limpio.

OG-
3 minutos
El OG 6 contiene el radical sulfito que tiende a disociarse, si baja el pH,
aumenta la intensidad de la tincin. Cerca de la neutralizacin, se
debilita la intensidad de tincin.
Las molculas de OG-6 son pequeas, tien a los citoplasmas
queratinizados de color amarillo a naranja

Para obtener el color ptimo, se deber hacer el paso de la

coloracin viendo posteriormente al microscopio para evitar una
posible equivocacin del resultado por la diferencia de la tincin
(tomando como pauta los leucocitos polimorfonucleares.)

PARA OBTENER UNA BUENA TINCIN

1. Despus del extendido, sumergir inmediatamente(en

menos de 5 segundosen alcohol de 96durante
ms de 15minutos
2. Evitar la sequedad en lo absoluto. Si hay sequedad no
se observa claramente la estructura del ncleo.
3. Cambiar los lquidos de tincin deficientes.
4. Obedecer exactamente el procedimiento de la tincin.
Fraccionamiento coloracinviraje deshidratacin
aclaramiento

COLORACIN

EL PROCESO DE LA TINCIN.

TINCIN DEL NCLEO CON HEMATOXILINA

Fraccionamiento
Se fracciona con alcohol de cido clorhdrico a 0.5 para
eliminar la hematoxilina sobrante que ha tedo conjuntamente
tanto el ncleo como el citoplasma.
Se debe tener cuidado porque dependiendo de la densidad,
tiempo de sumersin y temperatura, cambia el grado de
fraccionamiento.

LAVADO CON AGUADECOLORACIN

Se lava con agua para eliminar de la muestra el lquido de
hematoxilina sobrante.

LAVADO CON AGUA

Disolucin acuosa de la hematoxilina
pH4~5amarillo
pH6~7rojomorado
Por elevacin del pH con lavado de agua o neutralizacin, el ncleo
cambia a color azul.

COLORACIN VIRAJE
Despus del fraccionamiento y lavado con agua, vira con el
agua de la llave, si contiene nivel de cloro alto, es mejor usar
agua tibia o un alcali dbil( solucin de carbonato de litio,
solucin de amonia)

Despus de fraccionar en alcohol de cido clohdrico, si se deja

tal como est, las partes teidas cambian a color pardo-rojo y
adems tienden a decolorarse.