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V.A. PARDO e A.G. FERREIRA

ARMAZENAMENTO DE SEMENTES DE ORQUDEAS1


VERONICAALVAREZ-PARDO2, ALFREDO GUI FERREIRA3

RESUMO - Sementes de dezesseis espcies de orqudeas foram armazenadas a 5oC por at 42


meses, sendo verificada a viabilidade pelo teste de tetrazlio e de germinao. Houve perda da
viabilidade conforme incremento no perodo de armazenamento. Por doze meses, a maioria das
espcies estocadas a 5C, em dessecador com umidade relativa de + 6% de contedo de gua,
conservou a viabilidade prxima aos 100%, com exceo da Cattleya labiata que apresentou
queda de cerca de 50% da viabilidade inicial. Cattleya intermedia, Encyclia pygmaea, E.
odorantissima, Grobya sp., Oncidium flexuosum, Oncidium pumilum e um hbrido natural,
Laeliocattleya conservaram, em geladeira, a viabilidade das sementes acima de 90%, por at 24
meses. Para Cattleya intermdia, realizou-se armazenamento de sementes em tubos de polipropileno
a 5, -18 e a 25C, em dessecador ou condies ambientais sem controle de umidade. Em condies
de laboratrio houve perda quase total da viabilidade das sementes. A estocagem em geladeira a
5C ou em freezer a 18C fornece condies adequadas para conservar a viabilidade de sementes
de orqudeas. Com essa mesma espcie, as sementes foram armazenadas a -18C durante 24 semanas,
sendo testada semanalmente sua viabilidade. Para tais avaliaes, as sementes eram transferidas
diretamente de -18C para temperatura ambiente de laboratrio (25C) ou indiretamente, por uma
hora a 5C, depois para temperatura ambiente por uma hora. A transferncia indireta foi mais
eficiente na conservao da viabilidade.
Termos para indexao: conservao, tetrazlio, germinao, viabilidade.
ORCHID SEED STORAGE
ABSTRACT - Orchid seeds of sixteen Brazilian Southern species were stored at 5C up to 42
months, when the viability was tested by the tetrazolium or germination performance. There was
loss of viability when storage was extended. For one year, the viability of the majority of the seeds
stored at 5C in a dessecator with 6% of water content was preserved near to 100%, except for
Cattleya labiada which lost around 50% of its seeds viability. Cattleya intermedia, Encyclia
pigmaea, E. odorantissima, Grobya sp., Oncidium flexuosum, O. pumilum and one natural hybrid
of Laeliocattleya maintained seed viability of over 90% to 24 months at 5C. Cattleya intermedia
seeds were stored in polipropylene tubes at 5C or -18C and either 25C in a dessecator or in open
flasks under laboratory environmental conditions. Most the seeds of this species died under
laboratory conditions in one year. Storage at 5C or in a freezer (-18C) were the best conditions to
maintain the orchid seed viability. With this same species the seeds were stored at -18C for 24
weeks, and the viability tested weekly.. The seeds were transferred directly from this temperature
to 25C or indirectly, for one hour at 5C, and then to the environmental temperature in the laboratory
(25C). The indirect transfer preserved viability more efficiently.
Index terms: conservation, tetrazolium, germination, viability

Submetido em 16/09/2004. Aceito para publicao em 28/03/2005. Parte


da tese de doutorado apresentada para o Programa de Ps-graduao em
Botnica/UFRGS, pelo primeiro autor;
2
Eng. Agrnomo, doutora. Professora substituta do Departamento de
1

Revista Brasileira de Sementes, vol. 28, n 2, p.92-98, 2006

Botnica da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS);


Professor titular do Departamento de Botnica da UFRGS e bolsista do
CNPq. Caixa postal 15015, Porto Alegre, RS, Brasil. CEP 91501-970,
ferreira@unb.br

SEMENTES DE ORQUDEAS

INTRODUO
O procedimento de armazenamento utilizado na
conservao de sementes tem sido escassamente abordado
para armazenamento de sementes de orqudeas (Seaton e
Hailes, 1989; Jesup, 1996).
Sugere-se que as sementes de orqudeas apresentam
comportamento semelhante aos das sementes ortodoxas
(Pritchard e Seaton, 1993; Pritchard et al., 1999). E, como
tais, so fisiologicamente afetadas pelas condies de
armazenamento, incluindo as de criopreservao (Pritchard e
Prendergast, 1989).
A vitalidade dessas sementes pode ser favorecida com a
adequao do perodo de coleta dos frutos e com as redues
do teor de gua das sementes, da temperatura e da presso de
oxignio na atmosfera de armazenamento (Seaton e Pritchard,
1990, Thornhill e Koopowitz, 1992, Mello, 2000).
O uso de bancos de sementes, para conservao ex situ
de germoplasmas de orqudeas depende de disponibilidade de
conhecimentos, capazes de permitir a definio de
temperaturas e graus de umidade ao armazenamento (Pritchard
e Seaton, 1993; Koopowitz, 1996).
O objetivo deste estudo foi verificar o comportamento
germinativo e de viabilidade de sementes de orqudeas nativas
durante o armazenamento.
MATERIAL E MTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratrio de

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Fisiologia Vegetal do Departamento de Botnica da de


Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS - Porto
Alegre, RS).
Frutos com sementes de Bifrenaria inodora Lindl.,
Cattleya bicolor Lindl., Cattleya intermedia R.Grah (misturas),
Cattleya intermedia var. pallida Lindl., Cattleya labiata Lindl.,
Encyclia pygmaea (Hook.) Dressler, Encyclia odorantissima
Schltr., Epidendrum fulgens A. Brongn., Grobya sp. Lindl.,
Laelia purpurata Lindl. Paxt., Laeliocattleya Rolfe, Maxillaria
picta Hook., Oncidium enderianum Hort., Oncidium
flexsuosum Sims, Oncidium pumilum Lindl. Pleurothallis
glumacea Lindl. foram coletados nas regies leste e litoral
norte do Rio Grande do Sul (Tabela 1).
As superfcies dos frutos (cpsulas fechadas prdeiscentes) foram lavadas com gua e detergente neutro,
recebendo posteriormente, limpeza com lcool (70%). A seguir,
as cpsulas foram colocadas em dessecadores com slica gel
at a deiscncia. Aps, as sementes foram isoladas e colocadas
em envelopes de papel Kraft, mantidas nos dessecadores
contendo cloreto de clcio hexahidratado, durante 10 dias
(Thompson, 1980; Seaton e Pritchard, 1990).
A viabilidade foi avaliada pelos testes de tetrazlio e teste
de germinao. No teste de tetrazlio, as sementes previamente
embebidas durante 24 horas em gua destilada, foram imersas
em soluo aquosa (1%) de sal de tetrazlio (cloreto de 2,3,5
trifenil tetrazlio) e mantidas na ausncia de luz a 30oC, durante
24 horas (Singh, 1981; Jordo et al., 1988). A contagem foi
realizada ao microscpio estereoscpico, considerando-se
viveis as sementes portadoras de embries coloridos de

TABELA 1. Procedncias e pocas de coleta dos frutos das orqudeas estudadas

a
b

Espcies
Bifrenaria inodora Lindl.
Cattleya bicolor Lindl.
Cattleya intermedia var. pallida Lindl.
Cattleya intermedia R. Grah.
Cattleya labiata Lindl.
Encyclia odorantissima Hook
Encyclia pygmaea Hook.
Epidendrum fulgens A. Brongn
Grobya sp. R. Br.
Laelia purpurata Lidl. Paxt
Laeliocattleya Rolfe
Maxillaria picta Hook.
Oncidium pumilum Lindl.
Oncidium enderianum Hort
Oncidium flexuosum Sims
Pleurothallis glumacea Lindl.

Procedncias a
Terra de Areia
Terra de Areia
Terra de Areia
Montenegro
Terra de Areia
Terra de Areia
Terra de Areia
Viamo
So Leopoldo
Terra de Areia, Montenegro
Terra de Areia
Viamo
Terra de Areia
Terra de Areia
Terra de Areia
Viamo

pocas de coleta dos frutosb


Maio/99
Fevereiro/99
Abril/99
Maio/00
Fevereiro/99
Agosto/99
Maro/99
Agosto/00
Novembro/99
Agosto-Outubro/99; Abril/00
Outubro/98
Agosto/99
Maro/99
Agosto/99
Abril/00
Maro/00

Municpios na Depresso Central ou Litoral-norte do Estado de Rio Grande do Sul


(-) Testes no efetuados.

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V.A. PARDO e A.G. FERREIRA

vermelho (Lauzer et al., 1994).


O teste de germinao foi realizado em meio Knudson C
(Knudson, 1946) adicionado de micronutrientes (Arditti et
al., 1982) e suplementado com de tiamina (0,05mg.L-1), de
cido nicotnico (0,05mg.L-1), de sacarose (20g.L-1) e de agar
(6g.L-1) com o pH do meio com NaOH para 5,7. O substrato,
recoberto com filme de alumnio em camada dupla, foi
autoclavado a 120C por 20 minutos e colocado em tubos de
ensaio (10mL por tubo de 20x1,5cm) que foram inclinados,
ainda quentes, permitindo incrementar a superfcie de
semeadura.
Previamente semeadura, as sementes foram
desinfestadas com gs formol por uma hora (Alvarez-Pardo
et al., 2001), em cmara de fluxo laminar. Depois, o material
foi transferido para sala de crescimento temperatura de
25+5C com fotoperodo de 16 horas (luz branca de
30mol.m -2.s -1 ), por 30 dias. Aps, as sementes foram
examinadas ao microscpio estereoscpico e aquelas que
apresentavam embries expandidos e massa celular de
colorao verde (estgio 1) foram consideradas germinadas,
segundo as definies de Seaton e Hailes (1989) e Milaneze
(1997).
Ensaio 1. Armazenamento de sementes a 5C.
As sementes das 16 espcies de orqudeas foram
armazenadas at 42 meses com um teor de gua prximo de
6% (Pritchard e Seaton, 1993), em tubos de polipropileno
(capacidade 1,5mL) contendo fibras de algodo no espao
no ocupado pelas sementes. Os tubos foram colocados
dentro de frascos hermticos de vidro (20mL) e mantidos a
5+1C.
A viabilidade expressada em percentagem foi verificada
semestralmente, empregando-se os testes de tetrazlio e
germinao, ambos realizados com quatro repeties de 10mg
de sementes por espcie. Estudo de Correlao foram
realizados com as mdias das repeties entre os testes de

viabilidade, usando-se o programa estatstico SSPS-10.


Ensaio 2. Condies de armazenamento das
sementes de Cattleya intermedia
As sementes de Cattleya intermedia, obtidas pela reunio
de amostras provenientes de duas regies do estado do Rio
Grande do Sul, apresentaram teor de gua inicial de 6%,
segundo a metodologia descrita por Pritchard e Seaton (1993).
As sementes armazenadas durante 24 meses, nas
condies indicadas na Tabela 2, foram semestralmente
avaliadas pelos testes de tetrazlio e de germinao, ambos
realizados com trs repeties e expressos em percentagem.
Foi utilizado delineamento inteiramente casualisado em
esquema fatorial de 6 x 5 (condies de armazenamento x
perodos de armazenamento). Os dados em percentagem
foram transformados em arcsen(x + 10)1/2, submetidos
anlise de varincia e realizado o teste de comparao de mdias
por Tukey (p 5), com o programa estatstico SSPS-10.
Ensaio 3. Curtas interrupes nas condies de
armazenamento.
Foram utilizadas sementes de Cattleya intermedia, que
apresentaram viabilidade inicial de 99 1% pelo teste de
tetrazlio, armazenadas a -18C durante 24 semanas, o qual
foi semanalmente interrompido pela transferncia das sementes
para ambiente de laboratrio (25 + 5C), utilizando-se os
seguintes procedimentos:
Tratamento A (indireto): transferncia das sementes
para 5C por uma hora, seguida de permanncia a 25 5C
por uma hora e imediato retorno a condio de 18C;
Tratamento B (direto): transferncia para ambiente a
25 5C por uma hora e imediato retorno condio inicial
de 18C.
As subamostras retiradas semanalmente eram avaliadas
pelos testes de germinao e de tetrazlio, com trs repeties
e expressos em porcentagem. Foi utilizado delineamento
inteiramente casualizado em fatorial 2 x 20 (tratamentos x

TABELA 2. Armazenamento de sementes de Cattleya intermedia em diferentes condies por 24 meses

Tratamntos
T1
T2
T3
T4
T5
T6

Acondicionamento
tubos de polipropileno hermticos, contendo fibras de algodo no espao no
ocupado pelas sementes.
tubos de polipropileno hermticos, contendo fibras de algodo no espao no
ocupado pelas sementes.
tubos de polipropileno hermtico, contendo fibra de algodo no espao no
ocupado pelas sementes e mantidos no interior de um desseca dor.
tubos de polipropileno hermticos, contendo fibras de algodo no espao no
ocupado pelas sementes.
Em envelopes de papel de seda
Em envelopes de papel de seda no interior de um dessecador.

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Temperatura(C)
5+1
-18
25+5
25+5
25+5
25+5

SEMENTES DE ORQUDEAS

momentos de transferncia). Os dados em percentagem foram


transformados em arcsen(x + 10)1/2, submetidos anlise de
varincia, seguido de anlise de regresso (programa SSPS10).
RESULTADOS E DISCUSSO
Obter frutos com sementes com boa qualidade fisiolgica
requer cuidados e ateno, no podem ser coletados muito
verdes, pois as sementes podem no ter atingindo a
maturidade, nem colocadas em condies inadequadas como
sacos plsticos fechados. Altas temperaturas ps-coleta
(30C) podem prejudicar a viabilidade das sementes, assim
como coletas em casa de vegetao, onde pode haver
prevalncia de sementes sem embries pela falta do polinizador

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natural. As cpsulas, em geral, apresentam uma colorao


amarelada antes da abertura das fendas de maturao.
Entretanto, em expedies de coleta a campo, esta operao
se torna difcil (Mello, 2000), preferindo-se realizar coletas
unicamente de cpsulas no incio da deiscncia (Thompson,
1980; Pritchard e Seaton, 1993). Para completar a maturao,
deve-se colocar os frutos em dessecadores com slica gel ou
cloreto de clcio, at que ocorra uma abertura completa.
imprescindvel diminuir o teor de gua das sementes para
depois armazen-las (Seaton e Pritchard, 1990; Pritchard et
al., 1999).
Houve perda da viabilidade das sementes (Ensaio 1) com
o avano de perodo de armazenamento em todas espcies
estudadas (Tabela 3), detectadas tanto pelo teste de germinao
como de tetrazlio, que apresentaram alta correlao. Por

TABELA 3. Ensaio 1: dados obtidos nos testes de tetrazlio (TZ) e de germinao (G) de sementes de orqudeas armazenadas a 5C
durante 42 meses
Espcies
Epidendrum fulgens
Grobya sp.
Cattleya Intermedia
Oncidium flexsuosum
Pleurothallis glumacea
Oncidium enderianum
Maxillaria picta
Laelia purpurata
Bifrenaria inodora
Encyclia pygmaea
Oncidium pumilum
Cattleya iIntermedia pallida
Cattleya bicolor
Cattleya labiata
Encyclia odorantissima
Laeliocattleya
a
b

Testes
%
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G
TZ
G

0
83
89
94
92
99
99
94
95
100
99
100
100
98
94
95
95
98
100
100
100
99
97
99
100
100
99
63
61
100
99
100
100

6
84
80
86
90
99
98
93
96
98
99
97
98
98
94
94
93
92
99
99
99
94
86
100
100
99
99
58
61
99
99
100
99

12
83
68
83
71
96
96
91
92
48
55
91
95
91
82
93
90
91
92
96
95
88
90
100
99
84
79
29
24
99
97
100
100

Meses
18
24
57
52
57
43
72
73
66
48
96
92
95
95
88
90
89
87
35
36
22
34
75
63
71
56
88
73
81
49
77
63
76
56
69
54
64
49
91
91
86
86
86
86
83
81
99
94
100 99
68
52
68
61
14
9
14
6
93
92
91
94
98
100
97
98

30
-b
34
21
1
0
41
40
19
3
89
84
89
83
69
70
41
20
2
1
84
82
74
67

36
9
0
84
78
75
63
54
48
14
6
0
0
74
70
72
57

42
43
35

Valores de R a
0,896
0,876
0,850
0,852
0,982
0,998
0,975
0,994
0,997
0,995
0,929
0,992
0,972
0,996
0,989
0,990

Valores de correlao entre os dados dos testes de tetrazlio e de germinao.


(-) Testes no efetuados.

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V.A. PARDO e A.G. FERREIRA

insuficincia de material, em algumas espcies os testes foram


efetuados at 24 ou 30 meses. Em outras espcies, como
Maxillaria picta e Cattleya labiata, que em 30 meses,
perderam quase completamente a viabilidade.
Existiu interao significativa entre as condies e os
perodos de armazenamento das sementes de C. intermdia

(Ensaio 2). Nas condies de baixa temperatura (T1=5C ou


T 2=-18C), as sementes dessa espcie no alteraram a
viabilidade durante 24 meses de armazenamento (Figura 1A e
B). At seis meses de armazenamento T 1, T 2, T 3 e T 6 ,
mantiveram-se estatisticamente iguais (Figura 1A e B). As
sementes armazenadas em condies ambientais fora do

1A
T1

T2

T3

T4

T5

T6

100
90
80

Tetrazlio %

70
60
50
40
30
20
10
0
0

12

18

24

Perodo de armazenamento (meses)

1B
100
90

Germinao %

80
70
60
50
40
30
20
10
0
0

12

18

24

Perodo de armazenamento (meses)

FIGURA 1. Ensaio 2: dados obtidos nos testes de tetrazlio (1A) e de germinao (1B) para as condies de armazenamento adotadas
durante o armazenamento (T1=em tubos de polipropileno (1,5mL) a 5C; T2=em tubos a 18C; T3=em tubos em
dessecador a 25C; T4=em tubos sem dessecador a 25C; T5=em envelope de papel de seda sem dessecador a 25C;
T6=em envelope de papel com dessecador a 25C) de 24 meses das sementes de Cattleya intermedia.

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SEMENTES DE ORQUDEAS

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temperatura e do teor de gua nas sementes interfere na


conservao das sementes de vrias espcies de orqudeas.
Houve efeito significativo entre os perodos de
armazenamento e os procedimentos de transferncia (Ensaio
3), indicando que o efeito dos tratamentos dos lotes A e B
estavam na dependncia dos ciclos de armazenamento das
sementes de Cattleya intermedia, a partir da quinta semana
de avaliao com os mtodos direto e indireto (Figura 2)
Segundo o teste de tetrazlio (Figura 2A), a perda da

dessecador (T4 = tubo de polipropileno e T5 = em papel de


seda) mostraram perda da viabilidade j aos seis meses de
estocagem, perdendo completamente a viabilidade aos 18
meses. Efeito similar foi observado por Limartha (1975) para
sementes de Phalaenopsis amabilis e Dendrobium
phalaenopsis, que perderam 30% da viabilidade em 20 dias a
temperatura de 25 28C. Mello (2000) comprovou a perda
da viabilidade de sementes de vrias espcies de orqudeas do
Cerrado brasileiro, armazenadas a 25oC. Assim, o controle da

2A
y Indireto= -0,0686x2 + 0,2221x + 95,509

Indireto

100

R2 = 0,7456

Tetrazlio (%)

80
60

Direto

40

y Direto = 0,0104x2 - 1,9384x + 100,91


R2 = 0,7656

20
0
1

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Perodo de armazenamento (semanas)

2B

Germinao (%)

y Indireto= 0,0729x2 - 3,7627x + 104,75

Indireto

100

R2 = 0,8353

80
60
40

y Direto= -0,1404x2 - 0,3529x + 88,504


R2 = 0,7648

Direto

20
0
1

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Perodo de armazenamento (semanas)

FIGURA 2. Ensaio 3: dados dos testes de tetrazlio (2A) e germinao (2B), obtidos para os tratamentos de lote direto (de 18C para
25C) e lote indireto (de 18C; para 5C; para 25C), aplicados em sementes de Cattleya intermedia.

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V.A. PARDO e A.G. FERREIRA

viabilidade, aps os vinte ciclos avaliados, foi de 20% em


ambos os lotes (indireto e direto) e de acordo com o teste de
germinao (Figura 2B), perdeu-se de 30 a 50%, para estes
dois lotes. Sabe-se que quanto mais frio e maior a diferena
de temperatura com ambiente, maior a condensao de
umidade sobre o corpo resfriado. Assim, transferir as sementes
diretamente de -18C para a temperatura ambiente, deve
condensar mais umidade sobre essas. Como foi ressaltado
anteriormente, o controle da umidade relativa e do teor de
gua nas sementes influi na viabilidade das mesmas, e isto
pode ter prejudicado na germinabilidade. No se mediu o grau
de absoro de gua pelas sementes aps as transferncias.
Desta forma, se houver necessidade de vrias subamostras
de sementes ao longo do tempo, na estocagem inicial, devese dividir o material e as sobras no devem voltar para as
condies de baixas temperaturas de armazenamento (5C
ou -18C).
CONCLUSES
H perda da viabilidade das sementes conforme aumenta
o perodo de armazenamento, nas dezesseis espcies
estudadas.
A conservao de sementes de Cattleya intermedia
favorecida por temperaturas ambientais de 5 e 18oC.
H perda de viabilidade com as mudanas de temperatura
de 18oC para 25oC nos lotes A (indireto) e B (direto) de
sementes de C.intermedia, ao final dos vinte ciclos de
armazenamento. O mtodo indireto mostrou menor perda de
viabilidade ao longo dos vinte ciclos analisados.

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