Investigacin de biologa

Electroforesis
Jonathan Coronel

4-774-2110

1. Que es la electroforesis y para que se usa?

R.: La electroforesis es un mtodo de laboratorio en el que se

utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de
separar biomolculas segn su tamao y carga elctrica a travs
de una matriz gelatinosa.
Se usa en:
Electroforesis Capilar (CE)
Aplicacin en las ciencias biolgicas.
La electroforesis se emplea como una tcnica de separacin
de molculas que se basa en la migracin diferencial de las
partculas biolgicas cargadas, dispuestas en un soporte
inerte, bajo la accin de un campo elctrico aplicado.

2. Explique en que consiste la electroforesis de ADN

y cules son los tipos de electroforesis que
existen?

R.: La electroforesis de cidos nucleicos es el mtodo habitual

para separar, identificar y purificar molculas o fragmentos de

DNA y RNA. En los tampones habitualmente utilizados, los cidos
nucleicos estn cargados negativamente y migran hacia el nodo.
Cada molcula aporta una carga negativa, por lo que la

relacin carga/tamao es prcticamente constante e idntica para

todas las molculas, independientemente de su tamao.

cidos nucleicos. En los cidos nucleicos la direccin de

migracin es del electrodo negativo al positivo, y esto es debido a
la carga negativa presente en el esqueleto azcar-fosfato. En los
fragmentos de ADN dobles (con estructura de doble hlice) la
velocidad de migracin es inversamente proporcional a su tamao.
En fragmentos simples de ADN y ARN (una sola cadena), dichas
molculas tienden a plegarse de forma compleja y a migrar de
forma ms complicada, segn la estructura terciaria formada tras
el plegamiento. Sin embargo, compuestos que puedan romper los
enlaces de puente de hidrgeno, como el hidrxido de sodio o la
formamida, son empleados para 'desplegar' las molculas
plegadas y permitir que la velocidad de migracin dependa
nicamente y exclusivamente del tamao y no de la estructura
formada tras el plegamiento.

Tipos de electroforesis:

Electroforesis de frente mvil o libre.

Electroforesis
zona:
Electroforesis
papel.

de
en

Electroforesis
en
gel
Existe una gran variedad de
tipos de electroforesis en gel,
que se pueden agrupar en dos
categoras:
a)

a) Electroforesis en gel en una dimensin (continuo o

discontinuo)
Electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE)


PAGE
en
condiciones

PAGE
en
condiciones
no

SDS

Electroforesis en campos pulsantes.

desnaturalizante
desnaturalizantes
PAGE
Isoelectroenfoque

b)
Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional).

Electroforesis capilar:
Electroforesis capilar de zona (CZE)
Electroforesis
capilar
en
gel
Isotacoforesis
capilar
Isoelectroenfoque
capilar
Cromatografa electrocintica capilar micelar (MEKC).

3. Diferencias
horizontal.
R.:

entre

electroforesis

(CGE)
(CITP)
(CIEF)

vertical

Electroforesis vertical.

La electroforesis vertical es una tcnica que utiliza geles de

poliacrilamida (PAGE) para la separacin de diferentes molculas en
funcin de su peso molecular y carga elctrica. Resulta por tanto una
tcnica de gran utilidad en laboratorios de investigacin para anlisis de
cidos nucleicos y protenas ya que permite separar e identificar los
componentes de un extracto celular y, combinada con otras tcnicas
permite por ejemplo detectar anomalas moleculares o analizar el
aumento o disminucin de la sntesis de una protena como
consecuencia de un determinado tratamiento. La cubeta de
electroforesis vertical presenta electrodos de platino resistentes a la
corrosin y dispone de todo lo necesario para la preparacin y
electroforesis de geles de dimensiones 82x82 mm:
CARACTERSTICAS:

Cubeta o tanque externo fabricado en material acrlico de alta

calidad y en una sola pieza sin junturas que evita las fugas de lquido y
las roturas.

Soporte para geles: en el mismo soporte se lleva a cabo la

polimerizacin y posterior electroforesis de los geles minimizando su
manipulacin y facilitando y agilizando el trabajo.

Placas de vidrio planas y placas de vidrio formateadas y con

espaciadores fijos de 1 1.5 mm grosor para la preparacin y
electroforesis de los geles.

Juego de peines de 10 y 15 pocillos para geles de 1 y 1.5 mm de

grosor.

Placa gruesa de vidrio para utilizar en caso de realizar la

electroforesis de un nico gel.

Compatible con fuente de alimentacin y mdulo de transferencia.

Electroforesis horizontal.
La electroforesis horizontal en geles de agarosa es una tcnica de rutina
en laboratorios de gentica y biologa molecular para la preparacin de
plsmidos, reacciones de PCR, anlisis de fragmentos de restriccin,
geles estndar en estudios analticos y preparatorios de cidos
nucleicos,
etc.
Con este propsito, las cubetas de electroforesis horizontal Nahita estn
especialmente diseadas para la separacin, identificacin y

preparacin de molculas de DNA y RNA en geles de agarosa.

Las cubetas se suministran completas con todos los accesorios
necesarios para la preparacin y electroforesis de los geles:
- Cubeta de electroforesis fabricada en material acrlico de alta calidad y
en una sola pieza sin junturas que evita las fugas de lquido y las
roturas. Presenta 4 patas antideslizantes y 2 electrodos reemplazables
de platino puro resistentes a la corrosin y a elevadas temperaturas. La
tapa dispone de ranuras para disipar el calor y de dos cables fijos de
alimentacin
con
conector
tipo
banana.
- Molde para la preparacin de geles: cada modelo se suministra con un
molde para la preparacin de geles de distinto tamao (consultar tabla).
Los moldes presentan ranuras laterales para la colocacin y sujecin de
hasta 2 peines paralelos en caso de tener que analizar un elevado
nmero
de
muestras
al
mismo
tiempo.
- Bandejas para geles con regla integrada y banda oscura para favorecer
la visualizacin de los pocillos y as facilitar la carga de las muestras.
- Juego de peines dobles de distinto grosor y nmero de muestras.

4. Qu es la electroforesis capilar?
R.:
La electroforesis capilar se basa en los mismos principios de las tcnicas
electroforticas convencionales, pero utiliza condiciones y tecnologa
distintas que nos permiten obtener una serie de ventajas respecto a las
mismas. Este mtodo alternativo ofrece mejoras en lo concerniente a
simplicidad y tiempo del ensayo, as como a la resolucin del mismo.
La electroforesis capilar separa los componentes proteicos de la
muestra con el mismo patrn que lo hace la electroforesis en gel de
agarosa, pero en este caso una cantidad diminuta de muestra diluida
pasa a travs de un capilar de slice fundido de dimetro interno muy
pequeo (25-75 mm) y longitud variable (7-100 cm) lleno de solucin
tampn, al cual se le aplica un alto voltaje (25-30 Kv).