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Tipos de microscopios.
Ventajas y desventajas.
EL MICROSCOPIO EN LA ACTUALIDAD
Terminologa prctica de la microscopa ptica y caracterizar correctamente un microscopio.
Las partes del microscopio.
Pruebas en uso.
ptica ICS.
Revolver portaobjetivos.
Procedimientos de valoracin.
Seleccin de equipo.
Oculares.
Objetivos.
Sistema de iluminacin.
DESCUBRIENDO EL MICROSCOPIO
INTRODUCCIN
Veremos sus progresos hasta llegar a la perfeccin que a adquirido durante los siglos, as mismo se dar una
descripcin lo ms clara y detallada de todas sus partes y lo delicado de cada una de sus componentes.
Sabremos que partes podemos remover y cuales se recomienda no quitar, para lograr un mejor
aprovechamiento de este instrumento, adems de la prevencin de futuros problemas en su
mantenimiento y cuidado.
Daremos una informacin clara, sencilla y sin complicadas formulas pticas, con lo que se pretende dar una
gua tanto de la operatividad del microscopio como para futuras adquisiciones.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
Es necesario preparar las muestras debidamente antes de poder estudiarlas, el objeto tiene
que ser muy delgado para que este suficientemente transparente y as permita el paso de
luz, de lo contrario la observacin del objeto no ser la correcta.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
Las preparaciones secas tienen posibilidad muy limitada para sus estudios, generalmente
se estudia con aumentos bajos iluminndolos desde arriba, es decir como objetos opacos,
de nuevo se recomienda los microscopios estereoscpicos.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
MARCAS DISPONIBLES EN EL MERCADO
habr que tomar en cuenta algunos aspectos muy importantes en la adquisicin de un
equipo microscpico, como el servicio postventa y la garanta que deber brindar el
proveedor, sea accesible y atienda las necesidades inmediatas del cliente. En las pruebas
sobre todo pticas, no es posible engaar la calidad de las imgenes, por la parte de
iluminacin tambin es muy importante conocer que tipo de iluminacin que se tiene y
por ltimo y no menos importante la mecnica que debe de ser suave, rgida y segura en
cada uno de los movimientos.
El proveedor de microscopios deber saber cual ser la aplicacin del equipo y as
ofrecer el producto adecuado a su cliente, en caso de ser de enseanza, de laboratorio
de investigacin, quirrgico entre otros.
Es muy importante verificar la capacidad del soporte tcnico de la casa vendedora, para
el posible crecimiento del microscopio, ya que ahora existen estas ventajas de ir
adaptando los equipos y complementndolos de acuerdo a las necesidades.
A continuacin se mencionan algunas marcas reconocidas por aos en el mercado
nacional de microscopios, las cuales cuentan con un gran respaldo en la fabricacin de
los mismos: Carl Zeiss de Mxico, Olimpus, American ptica, Rossbach de Mxico. Motic
y Leica. Se tendr que verificar si el proveedor cuenta con accesorios y asistencia tcnica
inmediata.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Cuando se adquiere un microscopio es muy importante conocer lo que nos ofrece el
proveedor de microscopios y las ventajas del equipo, ya que esto ser un beneficio en las
largas jornadas de trabajo.
Es muy comn escuchar que la iluminacin es flexible segn Kohler, que se cuentan con
objetivos ICS, que algunos objetivos son compatibles con otros microscopios, otros nos
dicen que son totalmente automatizados para algunas aplicaciones, objetivos
apocromaticos y de campo plano, cosas que de verdad son posibles solo que algunos las
dicen en sus manuales pero no las cumplen, y esto es algo que sobre todo en cuestiones
de la ptica si es difcil de probar que el equipo lo este cumpliendo.
No es necesaria la experticia en la clasificacin de la ptica, ms sin embargo ser de
mucha utilidad identificar con facilidad algunos problemas sencillos de los oculares,
objetivos condensadores, desviaciones de los prismas, que nos ayudarn a tener en
buenas condiciones nuestro equipo de trabajo.
Se identificar la causa del problema al observar algo de color en los bordes de las
imgenes que se analizan, o al no enfocar bien con un ocular y con el otro si, o en ambos
oculares a la vez; ya que est problemtica suele suceder frecuentemente en los equipos.
EL MICROSCOPIO EN LA ACTUALIDAD
PARTES DE UN MICROSC0PIO
PRUEBAS EN USO
ptica ICS
La ptica ICS (Infinity Color-corrected System) quiere decir: Imgenes luminosas, con correccin cromtica y
contrastes fuertes. Por esta razn, los objetivos ICS forman una parte muy importante en el microscopio para
el trabajo diario de laboratorio.
Revolver portaobjetivos
El revolver portaobjetivos debe garantizar la visin libre y clara de las muestras de observacin as como
una marcha suave y se enclave con precisin con cada uno de los objetivos.
Procedimientos de valoracin
Procedimientos para valorar objetivos plan acromtico 4 5X, 10X, 40X y 100X. Los objetivos
plano acromticos sern sometidos a la prueba de la Estrella para observar.
a) Campo plano
1.- Tomar un substrato con pin-holes.
Este substrato puede ser fabricado depositando polvo o mejor pequeas micro esferitas en un porta objeto
y luego aluminisarse en una campana de vaco, o utilizar polvo blanco como objetos corpusculares en el
porta objeto. El tamao de estas micro estructuras deben de ser tal que no puedan ser resueltas por
cuestiones de difraccin por el objetivo a evaluar de un microscopio.
2.- Enfocar los pin-holes con el objetivo de evaluar y seleccionar de estos los que presenten un patrn de
difraccin ms cercano al de un disco de Airy y por lo tanto que el objetivo no pueda resolver su estructura.
Es necesario comprobar que los pin-holes seleccionados sean lo mas circulares posibles por lo que es
necesario verlos con un instrumento que garantice que lo son. (Puede ser utilizando otro microscopio que
se este seguro de su calidad de imagen).
3.- Realizar una observacin de todo el campo visual.
4.- La presencia de un campo plano estar dada por un enfoque uniforme y obtencin de nitidez total en
todo el campo visual, sin necesidad de hacer continuos ajustes con el mando micromtrico.
5.- Para que presente campo plano los pin-holes de las orillas y del centro deben de estar ambos
enfocados.
PRUEBAS EN USO
b) Acromatismo (correccin de color, ausencia de color en las imgenes del microscopio)
1.- Utilizar el mismo substrato con pin-holes e la prueba de campo plano.
2.- Colocar sobre la platina el substrato.
3.- Seleccionar y enfocar en eje y fuera de eje un pin-hole con patrn de disco de airy.
4.- Observar si en eje existe aberracin cromtica al estar enfocado y al desenfocar ligeramente dentro
y fuera de foco el patrn de airy.
5.- Enfocar fuera de eje un pin-hole.
6.- Observar si en eje existe aberracin cromtica al estar enfocado y al desenfocar ligeramente dentro
y fuera de foco el patrn de airy.
7.- Si se genera una descomposicin de haz de luz blanca mostrando una serie de halos de colores,
se estar produciendo el fenmeno de aberracin cromtica.
Esta prueba se realiza sin colocar filtro adicional alguno al microscopio, es decir con luz blanca.
Por lo tanto, esta prueba recibe el nombre de prueba de la estrella, ya que el campo oscuro obtenido
en el campo de observacin, as como los puntos de luz observados semeja la bveda celeste. 3.-Realizar
una observacin de todo el campo visual.
La prueba de la estrella es particularmente utilizada para lentes de objetivos de microscopios y lentes
de telescopios.
PRUEBAS EN USO
CARACTERIZACIN DE UN MICROSCOPIO
Oculares
Su funcin es magnificar ms el aumento del objetivo, y colocar las imgenes
que ha formado el juego ptico en un punto focalde poco ms o menos tres o
cuatro milmetros del lente superior del ocular.
Existen varios tipos de oculares, los Huygens, los Ramsden los de punto focal
largo, los de campo ancho (especiales para patologa).
El microscopio compuesto forma una imagen real amplificada del objeto por
medio de una lente llamada objetivo y luego se observa esta imagen por
medio de una lupa a la que se le llama ocular.
La imagen se observa invertida debido a la inversin del objetivo. Como la
pupila del ojo tiene un dimetro pequeo, es necesario colocarla sobre el
plano en que todos los rayos cruzan el rea circular mnima, a fin de que todos
los rayos penetren en el. Esta rea es una imagen real de la abertura del
objetivo, y se domina pupila de salida.
Este sistema tiene dos desventajas: la pupila de salida esta muy alejada del
ocular, y el ocular debe tener un dimetro mayor que el de la imagen real.
Se pueden evitar mediante el uso de una lente convergente sobre el plano de
la imagen, a la que llaman lente de campo. Esta lente dobla el haz
acercndolo al eje ptico sin cambiar la imagen, conservando as la misma
amplificacin el microscopio. Al conjunto formado por el ocular y la lente de
campo se le llama en forma general simplemente ocular.
CARACTERIZACIN DE UN MICROSCOPIO
Objetivos
La amplificacin de un microscopio se obtiene multiplicando la ampliacin del objetivo por la
amplificacin del ocular.
Existen cuatro tipos de objetivos, segn su poder amplificador. Para bajas amplificaciones el diseo
es un doblete simple o un par de dobletes formando el sistema de Lister, para amplificaciones
intermedias se aade al frente del doblete una lente plano-convexa gruesa a fin de disminuir la
distancia focal del objetivo. En esta forma se obtiene el diseo
de amici.
Para altas amplificaciones es necesario disminuir aun mas la distancia focal del objetivo sin
introducir aberraciones. Esto se logra aadiendo al frente del objetivo un sistema de dos lentes al
que s acostumbra llamar dplex frontal; se obtiene as, el llamado objetivo sumergible o de
inmersin.
El dplex frontal del objetivo sumergible, hace uso de las propiedades de los puntos aplanaticos
de Abbe.
CARACTERIZACIN DE UN MICROSCOPIO
Sistema de Iluminacin
El sistema de iluminacin bsico de un microscopio consta de un lente
condensadora que forma una imagen del filamento de la fuente
luminosa sobre el diafragma de abertura. Esta imagen se vuelve a
formar sobre la pupila de entrada del objetivo del microscopio por
medio de la lente condensadora.
El diafragma de la abertura efectiva del objetivo y la lente condensadora
forman tambin una imagen del diafragma de campo sobre el objeto.
Este diafragma controla el dimetro del rea iluminada del objeto a
observar.
Seleccin de equipo
Para una correcta seleccin de equipo, que satisfaga las necesidades de
las observaciones a realizar es recomendable tomar en cuenta los
siguientes incisos:
a) De las partes ms delicadas es la adquisicin de equipos de
microscopia que actualmente se tienen que licitar por ley en algunas
instituciones y dependencias gubernamentales sobre todo si es una
compra de ms de 10 equipos, es importante saber y conocer los
diferentes modelos que se ofrecen en el mercado pero no son siempre los
mas adecuados por ejemplo, para que se ocuparan, ya que el usuario o
comprador decidir cual de los equipos es el mejor o mas adecuado para
lo que se usara. Si es de laboratorio o de experimentacin o de ciruga o
quizs simplemente de educacin o enseanza.
CARACTERIZACIN DE UN MICROSCOPIO
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
Cuando no se tiene la prctica es importante seguir las siguientes
indicaciones:
a)
Se comienza removiendo los oculares ya que son los que generalmente siempre
estn ms sucios, es necesario iniciar una buena limpieza empezando con aire, ya
sea con la jeringa pera o aire comprimido y luego con un cotonete humedecido
de la solucin de 60% de acetona y 40% de ter en un despachador de solventes
para que este no se evapore, s dar una pasada sobre la lente ocular y en un
sentido tratando de pasar por toda la lente se tira el cotonete y se toma otro y se
realiza la misma operacin viendo que quede limpia la superficie, cuando la grasa
y polvo adherido desaparecen. Se inspeccionara la parte posterior del ocular,
siempre sin desarmar ya que el ensamble de los oculares de fbrica vienen libres
de impurezas internas y es Imposible que se penetre el polvo a menos que lo
dejemos en lugares hmedos por lo pronto NO se deber abrir nunca un
componente ptico que sabemos que esta sellado ya que se puede perder la
alineacin ptica de nuestras lentes.
b)
Se revisar que el cabezal del microscopio gire los 360 alrededor del cuerpo y
ver que tenga un ajuste de giro. Revisando el tornillo opresor que s vera en el
cuello de giro.
c)
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
d) La platina del microscopio es un lugar en donde se escurren diferentes materiales
y es la parte que soporta las muestras de anlisis; esta cuenta con una regleta de
desplazamiento y pinzas de sujecin de el portaobjetos; en la mayora de los
microscopios la regleta y la pinza se pueden remover de la platina para lograr una
mejor limpieza y un engrasado a las cremalleras de desplazamiento X, Y.
La platina al igual que la regleta se limpiarn con solvente thinner, para remover
cualquier sedimento de anlisis, pero teniendo cuidado de no tocar otra parte
del cuerpo del microscopio con el thinner, ya que est sustancia puede resultar
muy agresiva para otras partes.
Un buen espacio acondicionado para el mantenimiento ser lo ms adecuado
para ir poniendo con orden cada pieza que se retira y limpia del microscopio.
e)
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
f)
g)
Una vez que el microscopio esta sin sus partes pticas principales quedar el cuerpo
del microscopio, el cual tambin deber ser limpiado, se comienza verificando el mando
de enfoque que traslada la portaplatina, la cual esta situado de manera funcional, se
manejar fcilmente, mientras que las manos estn apoyadas en la mesa de trabajo.
El mando con engranaje de rodamiento permite enfocar todas las preparaciones de
manera exacta y segura sin requerir mantenimiento y reajustndose automticamente.
En el caso de aumentos bajos, la muestra se enfoca fcilmente, con el mando
macromtrico. El mando micromtrico recorre toda la carrera.
Los componentes del mando estn protegidos por limitadores en las posiciones finales.
Mando micromtrico equivale 1 vuelta= a 0,2mm de desplazamiento. Mando
macromtrico equivale a 1 vuelta= a 2mm de desplazamiento , la carrera total es de
25mm que los mandos macro y micro debern estar operando suave y sin ningn
problema de vibracin externa, para detectar si el equipo necesita grasa el tipo de grasa
es de silicona esta dura varios aos sin que sea necesario remover ya que por sus
propiedades no-suelta absolutamente nada de escurrimientos de aceites o de otros
materiales y se adhiere en las cremalleras de avance por lo que es inmediato ya que el
movimiento macro o micro se endurece y esto nos indica que algo anda mal ya que
siempre estos movimientos son suaves y cmodos de operar.
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
En la mayora de los mandos micro y macro de los microscopios se cuenta con un
sistema de freno o de pocicionador del macro y con el micro se puede mover y ajustar
mejor el enfoque, es frecuente que este sistema de freno o de ajuste se dae, para
esto se tiene que iniciar un proceso de desarmado mecnico de las perillas de avance
del micro y macro ya sea de tornillo o de opresores aleen, es muy importante antes de
iniciar un desensamble sea ptico, electrnico o mecnico siempre contar con las
herramientas apropiadas y justas a los tornillos u opresores a remover, as mismo
tener un orden tanto de que pieza se quita primero hasta la posicin de la misma, la
tornilleria de los microscopios es muy frgil por lo que no se tiene que hacer fuertes
Presiones al apretar esto pueden causar un rompimiento del tornillo si se diera
presin mas fuerza de lo necesario.
h)
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
i)
j)
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
ERRORES EN LA PRCTICA
Algunas de las recomendaciones bsicas se describen en los siguientes incisos:
a)
b)
El usuario del microscopio nunca deber usar maquillaje en los ojos ni mucho menos
mscara de pestaas durante la operacin, esto deteriora en gran medida la lente
ocular del sistema, ya que se trabaja demasiado cerca de la misma y esto con el
tiempo puede provocar rayas en la pelcula antirreflectora.
c)
Con los objetivos se debe tener extremo cuidado ya que algunos microscopios no
tienen un tope de seguridad, el cual para evita lastimar la lente del objetivo, al subir
al mximo la platina del objeto a observar.
Se recomienda buscar el tope de seguridad del microscopio que se encuentra en la
parte interior del cuello del microscopio cerca del revolver de oculares y fijarlo, pero si
no se encontrar este tope en el microscopio se deber tener mucho cuidado cuando
se acerca el objetivo a la platina, no lastimar al objetivo.
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
El objetivo que en la mayora de los casos ser 100x, y el de inmersin, debern limpiarse con el
algodn en forma de cotonete humedecido en la solucin de acetona con ter, si por alguna razn se
llegar a rayar la superficie del ocular, se podr pulir levemente la superficie con fieltro para pulir
ptica y con pulidor de 3 micras que puede ser Cerite, Barnesita o Opalin, estos son pulidores para
ptica de precisin, con lo que fueron seguramente fabricados las pticas del microscopio.
d)
El condensador tiene como misin condensar la luz que viene del foco a un punto ms o
menos de un milmetro y medio arriba de la superficie (de la platina del microscopio) es decir,
aproximadamente en el lugar donde va a ser puesto el objeto el cual esta colocado sobre el
porta objetos que tiene un espesor de 9 dcimas de milmetro.
Algunos condensadores estn provistos de un diafragma iris para controlar la cantidad de luz
que va a emitir, como tambin el ngulo de los rayos de iluminacin.
e)
f)
Tambin algunos condensadores estn marcados con el ngulo de abertura numrica que nos
marcara diferentes aberturas del diafragma iris, de manera es fcil de saber de no cerrarlo a un
punto menor de la abertura numrica con el cual este marcado el objetivo que se este usando.
Si aun entra demasiada luz para ver el objeto claramente, esta luz de sobra deber eliminarse
por medio de filtros de color colocados en los porta filtros del microscopio.
g)
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