PRCTICA DE LABORATORIO: ESTUDIO DE LA MITOSIS

OBJETIVOS.

Realizar preparaciones microscpicas de clulas en mitosis, mediante la tcnica de Squash.

Identificar y diferenciar, en preparaciones microscpicas, las distintas fases de la mitosis.

MATERIALES.
Bulbos de Allium cepa (cebolla) germinados, microscopio ptico, cpsulas de Petri, porta objetos, cubre
objetos, agujas de diseccin, bistur, tijera, pinzas, papel absorbente o toalla, cido actico, colorante acetoorcena, cido clorhdrico (HCL) al 50% y agua destilada.
PROCEDIMIENTO.
1. Montaje de bulbos de cebolla germinados.

Fig.1. Partes de
un

bulbo

de

cebolla.

Para poder observar clulas mitticas es indispensable tener una fuente de

material en divisin. El pice de las races es un tejido (meristemo) que se est
dividiendo activamente in vivo, por lo que es un material ideal para observar
cambios celulares durante la mitosis.
En este caso, se trabajar con las races de cebolla, las cuales se obtienen
poniendo a germinar 3 bulbos de dicha planta entre 4-6 das antes de la prctica. Para ello, se
colocan los bulbos en un recipiente con agua, tal como se indica en la figura 1, de manera
que slo el disco radicular quede en contacto con el lquido. Si la el bulbo es muy grande,
procure dejar entradas de aire hacia el frasco.
2. Fijacin del tejido.
Los tejidos que van hacer tratados con colorantes para su observacin deben ser fijados
previamente, ya que los procesos de maceracin y coloracin pueden distorsionar las

Fig.2.

Germinacin

de bulbo de cebolla.

estructuras celulares a observar por no haber sido fijadas. Para el caso de la mitosis, se requiere la observacin
de la cromatina no condesada y condensada (cromosomas) en sus diferentes fases, en este sentido, los
cromosomas fijados deben en lo posible mantener las mismas caractersticas de los tejidos vivos.
Para fijar el tejido meristemtico de los pices radicales del bulbo de la cebolla, se selecciona tres races cuya
longitud sea de 2 a 3 cm, con una tijera o pinza se cortan y sumergen en el fijador (cido actico) por 5 minutos.
3. Maceracin.
Una vez fijado el tejido debe ser ablandado y separadas sus clulas. Para ello, es necesario romper la pared
celular que mantiene unidas las clulas; si esta se destruye las uniones desaparecen quedando las clulas
aisladas. El cido clorhdrico al 50% produce ese efecto, y a esta concentracin permite el grado adecuado de
ablandamiento e hidrlisis del tejido.
Para macerar se sumergen las races fijadas en agua destilada durante 5 minutos para retirar el exceso de fijado.

En una cpsula de Petri, se coloca una gota de cido clorhdrico al 50%, y con ayuda de una pinza, se sumerge
en ella una raicilla por un perodo de 10 minutos. Transcurrido los minutos, se lavan las races con agua
destilada dos o tres veces, para dejarlas en agua reposar.
4. Coloracin.
Para observar las fases de la mitosis, es necesario observar los cromosomas en sus diversos desplazamientos. El
colorante aceto-orcena es una substancia que se ocupa para teir los cromosomas y verlos en sus distintas fases
en divisin. Con esta tcnica de tincin se ven los cromosomas impregnados por la orcena en color morado y el
resto de las estructuras celulares de otro color.
Primero se debe limpiar tres porta objetos y cubre objetos con alcohol para desengrasarlos. Se secciona el pice
de una raicilla, ya macerada. Se coloca sobre una gota pequea de colorante aceto-orcena, en un porta objetos,
dejando teir por 5 minutos. Si la preparacin tiende a secarse se le aade otra gota pequea del colorante.
5. Squash.
El squash es una tcnica de aplastamiento y dispersin del tejido. Con este ltimo procedimiento se da por
hecha la preparacin una lmina microscpica permanente o semipermante.
La tcnica consiste en cubrir la preparacin con un cubre
objetos. Se deja caer sobre la muestra tapada la borra de un
lpiz o el mango de una pinza de diseccin, de modo que la
preparacin se extienda debajo del cubre objetos (ver figura 3).
Se debe sostener el cubre objeto por el borde, para evitar el
desplazamiento de lmina al momento de dejar caer el lpiz o
el aguja de diseccin.
Se coloca la lmina dentro de una toalla doblada de papel

Fig.3. Colocacin del cubre objetos y dispersin de la muestra.

absorbente. Se elimina el exceso de colorante, tocando con cuidado el rea alrededor del cubre objetos (ver
figura 4a), y se procede a realizar el squash, presionando suavemente con el pulgar, por encima del papel, el
cubre objetos (ver figura 4b), evitando el desplazamiento y ruptura del mismo.

Fig.4. Tcnica de squash. Se indica el modo de efectuar el aplastamiento