VICERRECTORA ACADMICA

INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES

CURSO DE BIOQUIMICA

Gua N5
Laboratorio de Bioqumica
CQU 310

METABOLISMO AERBICO

2013 (Revisin 2015)

VICERRECTORA ACADMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA

METABOLISMO AERBICO
OBJETIVOS
-

Identificar la actividad de enzimas que participan en el metabolismo aerbico, como son

la Succinato Deshidrogenasa y Citocromo Oxidasa, a partir de un extracto enzimtico
de tejido animal.
Identificar el efecto de sustancias inhibitorias sobre la actividad enzimtica.

INTRODUCCIN
Las dos grandes vas del Metabolismo celular, catabolismo y anabolismo, estn
necesariamente conectadas a travs de molculas con funciones muy definidas. Por un lado
las vas se conectarn a travs de molculas transportadoras de energa (ciclo del ATP); pero
adems, existe una clara conexin con molculas encargadas de la transferencia de
electrones. En las dos vas metablicas se producen reacciones de oxido-reduccin: en las
vas catablicas, donde se realizan reacciones de oxidacin, los electrones se irn reduciendo;
y en las vas anablicas, las molculas irn captando los electrones de estas molculas
reducidas.
La principal molcula transportadora de energa es el ATP, y las molculas trasportadoras de
electrones sern nucletidos como el NADH y el NADPH.
Todas las reacciones del metabolismo estn estrechamente relacionadas e interconectadas de
tal manera que la separacin es ms que nada, formal. Para facilitar el estudio y la
comprensin de las rutas metablicas, el metabolismo se divide clsicamente en varias etapas:
tres para el catabolismo y tres para el anabolismo.
En particular las etapas del catabolismo son:
ETAPA I: Comprende la digestin de las grandes macromolculas
molculas precursoras o monmeros.

o biopolmeros a sus

ETAPA II Los monmeros se convierten en un reducido nmero de especies metablicas

intermediarias ms sencillas. As, productos como monosacridos, glicerol y algunos
aminocidos se degradan hasta dar piruvato, molcula intermediaria de tres carbonos, que
posteriormente, rendir una especie de dos carbonos: el grupo acetilo del acetil CoA. En esta
etapa se pueden destacar varias rutas metablicas: por un lado, la gluclisis, ruta por la cual la
glucosa y otras hexosas se degradan a piruvato, y posteriormente a acetil CoA a travs de la
descarboxilacin oxidativa del piruvato, por otro lado, cabra destacar el proceso de
degradacin de los cidos grasos comnmente denominado beta-oxidacin, que tambin
acaba rindiendo acetil CoA en las mitocondrias.
ETAPA III en esta ltima etapa, tanto el grupo acetilo del acetil CoA como los dems productos
de la etapa anterior se canalizan haca una ruta catablica final comn, en la que, en ltimo
trmino, pueden ser oxidados, dando dixido de carbono y agua.
En esta etapa se encuentra el Ciclo de Krebs o Ciclo de los cidos Tricarboxilicos, as como
la cadena transportadora de electrones (C.T.E).

2013 (Revisin 2015)

VICERRECTORA ACADMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA

La C.T.E sirve para producir grandes cantidades de energa en forma de ATP, gracias a la
oxidacin de las coenzimas NADH y FADH2, que se originan en las rutas del catabolismo,
especialmente en la gluclisis, -oxidacin y ciclo de Krebs. (Bioqumica conceptos esenciales,
Feduchi, 2011)

VISIN GENERAL DEL METABOLISMO AERBICO

Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL
and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

La gluclisis y el ciclo de Krebs generan por s una cantidad relativamente baja de energa en
forma de ATP. Sin embargo seis pasos de deshidrogenacin (uno en la gliclisis, otro en la
reaccin de la piruvato deshidrogenasa y cuatro ms en el ciclo de Krebs) reducen en total 10
moles de NAD+ a NADH y 2 moles de FAD a FADH2 por mol de glucosa.
La re-oxidacin de estos transportadores electrnicos reducidos genera la mayor parte de la
energa necesaria para la sntesis de ATP. Las clulas y tejidos aerobios transfieren los
electrones en un proceso escalonado, desde los transportadores reducidos hasta el oxgeno
molecular y agua. En este proceso, una serie de protones se transfieren desde la matriz
mitocondrial, de modo que forma un gradiente de protones (gradiente electroqumico). Este
gradiente resultante sirve para impulsar la sntesis de ATP, a partir de ADP y Pi, a travs de la
llamada Fosforilacin Oxidativa (F.O).
Cadena Transportadora de Electrones y Fosforilacin Oxidativa.
En la siguiente figura se muestra la cadena transportadora de electrones y la fosforilacin
oxidativa.

2013 (Revisin 2015)

VICERRECTORA ACADMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA

http://web.usal.es/~jmcsil/biblioteca/biofisica/unizar/FO.htm
La cadena trasportadora de electrones funciona gracias a cuatro complejos proteicos, los
cuales van trasportando electrones desde el NADH o FADH2 hasta el O2. El Complejo I recibe
electrones del NADH, los cuales se transfieren a la Coenzima Q (Q) llegando al Complejo III,
y desde aqu hacia el complejo por una protena mvil llamada Citocromo C, el cual se
encuentra en entre la membrana interna el espacio intermembrana. El citocromo C transfiere
los electrones haca el Complejo IV, quien finalmente se los entrega al Oxigeno Molecular
produciendo agua.
El Complejo II es la succinato deshidrogenasa nica enzima del ciclo de Krebs, que cataliza
la conversin del Fumarato en Malato y se encuentra en la membrana interna de la
mitocondria, y tiene unido, covalentemente, el FAD, quien al recibir los electrones de una
molcula intermediaria del ciclo de Krebs, el succinato, se reduce pasando a FADH2, estos
electrones tambin son trasferidos a la coenzima Q siguiendo la misma ruta que se sigue
anteriormente hasta llegar al Oxigeno Molecular.
La Teoria Quimiosmotica se basa en el siguiente mecanismo:
-

Los complejos transportadores de electrones logran pasar protones al espacio

intermembrana en contra de una gradiente, creando as n gradiente elctrico y un
gradiente de protones a travs de la membrana interna. A este gradiente electroqumico
generado por el transporte de electrones por los diversos complejos mitocondriales se
le denomina fuerza protn-motriz.

El potencial electroqumico de este gradiente o fuerza protn motriz lo aprovecha la

ATP sintasa para sintetizar ATP. La ATP sintasa trasporta los protones a la matriz
mitocondrial a favor de gradiente y acopla este proceso a la sntesis de ATP.

En este prctico revisaremos el funcionamiento de la Succinato Deshidrogenasa, la cual es

capaz de reducir al Azul de metileno (indicador), y del Complejo IV (Citocromo Oxidasa) que
es capaz de oxidar al p-fenilendeamina (sustrato). Generando cambios cualitativos que pueden
ser observado a simple vista.

2013 (Revisin 2015)

VICERRECTORA ACADMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA

Para este laboratorio debes investigar.

-

Como es la estructura de la mitocondria.

Que efecto tiene el Malonato en el metabolismo aerbico.
Que efecto tiene el Cianuro en el metabolismo aerbico.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.
1. Seguimiento de la reaccin catalizada por el Complejo IV o Citocromo Oxidasa:
Prepare una batera de tubos debidamente marcados segn la siguiente tabla:

- Mezcle bien el contenido de cada tubo e incube a 37C hasta cuando aparezca el complejo
coloreado.
- Anote y comente los resultados obtenidos en cada tubo.

2. Seguimiento de la reaccin catalizada por la Succinato Deshidrogenasa:

Prepare una batera de tubos debidamente marcados segn la siguiente tabla:
Reactivo
Buffer fosfato pH7.4 (ml)
Succinato de sodio 1% (ml)
Azul de metileno (gotas)
Malonato de sodio 1% (ml)

B
3,0
2
Incubar
1,0
1,0

Extracto enzimtico (ml)

Aceite mineral (ml)

1
2,5
1,0
2
a 37C
0,5
1,0

2
2,0
1,0
2
-

3
1,5
1,0
2
-

4
1,0
1,0
2
1,0

1,5
1,0

1,0
1,0

10 min.

1,0
1,0

- Antes de agregar el extracto enzimtico, deje los tubos incubando a 37C durante 10
minutos, y sin retirarlos del bao termorregulado, agregue el extracto enzimtico,
inmediatamente agite bien y coloque el aceite mineral.
- Espere a que los tubos se decoloren.

Comente los resultados obtenidos en cada tubo.

2013 (Revisin 2015)

VICERRECTORA ACADMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA

BIBLIOGRAFIA
(1).- Harper, Bioqumica Ilustrada, 28a Edicin, McGraw Hill, 2010
(2).- Mathews, Bioqumica, 3a Edicin, Addison Wesley, 2002
(3).- Feduchi, Bioqumica Conceptos esenciales, 2011

2013 (Revisin 2015)