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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PRCTICA N 1: ANLISIS ELEMENTAL DE LOS COMPUESTOS ORGNICOS


INTRODUCCIN
La qumica orgnica es el estudio de los compuestos del carbono. Adems de este, se
encuentran elementos como el hidrogeno, nitrgeno, azufre, halgenos y otros en menor
grado.
Unas de las primeras pruebas sencillas para determinar la presencia de un compuesto
orgnico, consiste en realizar un ensayo de ignicin, el cual se realiza calentando a la llama
una pequea cantidad de muestra de la sustancia en estudio (0.1 0.2 gr.). Si la sustancia
es de naturaleza orgnica, generalmente cambia de aspecto, generando gases, olor y deja
un residuo. Adems, permite orientar sobre la clase de sustancia orgnica, ya que la
composicin qumica le otorga a la llama un carcter definido, el cual, visiblemente se puede
determinar.
Los hidrocarburos alifticos saturados y algunos derivados se caracterizan por presentar
llama amarilla, poca luminosa. Los alquenos, cicloalquenos, cicloalcanos y halogenuros de
alquilo generan llamas luminosas y brillantes. Los compuestos organometalicos presentan
llamas coloreadas.
Los compuestos aromticos y alquinos se caracterizan por presentar una llama de color
amarillo con una acentuada generacin de humo y holln.
Los compuestos que contienen oxigeno como los alcoholes, aldehdos, cetonas, cidos
carboxlicos y estere se caracterizan por llama azul. Si durante la ignicin la muestra se
hincha, puede tratarse de un carbohidrato o de otro compuesto hidroxilado de origen natural
(terpenos, saponinas, colesterol, etc.); estos compuestos dejan un residuo caramelo que
debe triturarse e incinerarse de nuevo.
Se recomienda en todos los casos usar el mechero con llama azul.
En los compuestos orgnicos, los tomos estn unidos por enlaces covalentes presentando
alta solubilidad en solventes orgnicos, baja solubilidad en agua, sus puntos de fusin y
ebullicin son relativamente bajos en comparacin de los compuestos inorgnicos, los
cuales se caracterizan por que sus tomos se unen a travs de enlaces inicos,
presentando por ello alta solubilidad en agua, baja solubilidad en solventes orgnicos, altos
puntos de fusin y ebullicin, al igual que alta conductividad en soluciones acuosas.
En qumica orgnica de manera general, las reacciones qumicas pueden agruparse en
cuatro categoras:

Reaccin de combinacin o sntesis: cuando dos o ms sustancias se unen para


formar una ms compleja.
Reacciones de descomposicin: cuando un compuesto se descompone en otros
ms sencillos.

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Reaccin de doble descomposicin: cuando dos compuestos reaccionan


intercambiando tomos o grupo de tomos.
Reaccin de desplazamiento: cuando un elemento sustituye a otro en un
compuesto.

REACTIVOS Y EQUIPOS

Esptula
Mechero
Tubos de ensayo
Pinzas para tubos
Mangueras
Crisol o capsulas de porcelana
Papel de filtro
Sacarosa
NaCl
AgNO3 al 2%

Cloroformo
CuO
CaOH al 3%
Urea
NaOH 6M
Albumina
Acetato de plomo al 10%
Alambre de cobre
NaI, CHCl3, KBr

PROCEDIMIENTO
Diferenciacin entre compuestos orgnicos e inorgnicos. Ensayo de ignicin.
Colocar en una capsula de porcelana o en la punta de una esptula una pequea cantidad
de sacarosa. Caliente primero suavemente y luego con toda la intensidad de la misma.
Repita lo mismo con la sal comn (NaCl). Observe los fenmenos de fusin, carcter de la
llama. Olor, el residuo que queda despus de calentar al rojo. Analice la naturaleza qumica
de cada compuesto.
Ionizacin.
Adicionar 1 o 2 mL de solucin de AgNo3 al 2% a cada uno de los siguientes compuestos:
1ml de solucin al 10% de NaCl
1 ml de cloroformo u otro solvente poco polar
Qu tipo de sustancia es el cloroformo? Qu reaccin se presento entre el nitrato de
plata y cloruro de sodio? Qu sucedi entre el nitrato de plata y el cloroformo?
Reconocimiento de carbono e hidrogeno por oxidacin de cobre.
El oxido de cobre es algo higroscpico y es necesario desecarlo antes del ensayo, para
este caliente unos 3 gr. de oxido en polvo durante unos minutos en un crisol o capsula de
porcelana cubriendo con un vidrio de reloj.
En un tubo de ensayo seco de unos 15cm colocar agua de cal (hidrxido de calcio diluido)
o agua barita (hidrxido de bario diluido). En otro tubo con desprendimiento lateral seco
colocar una pequea cantidad de CuO deshidratado (0.1 gr.) y adicionar una cantidad ms

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o menos igual de azcar seco, mezclando las dos sustancias lo mejor posible. Luego cubrir
con el CuO restante la mezcla. Tapar con un corcho el tubo con desprendimiento y conectar
una manguera a la salida de este e introducir el otro extremo en el agua de cal. Se caliente
el tubo de desprendimiento suavemente, comenzando por la parte superior donde solo hay
oxido y traslade poco a poco la llama hasta el fondo. Observe las paredes superiores del
tubo con desprendimiento. Qu ocurre con el agua de cal?
Reconocimiento de nitrgeno
Coloque aproximadamente 0.5 gr de urea en un pequeo vaso de precipitado de 50 ml,
adicionar 5 ml de NaOH 6M, cubra el vaso con un vidrio de reloj cuyo fondo tenga adherido
un papel tornasol rojo. Agite cuidadosamente y calentar con suavidad pero no hasta
ebullicin. Observe el desprendimiento de gas y el cambio de color del papel. Retire el vidrio
de reloj y con cuidado detecte el olor a amoniaco. Explique lo ocurrido.
Reconocimiento del azufre. Mtodo directo.
Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de una solucin de clara de huevo (albumina) al 2%
recin preparada. Adicione 2 ml de NaOH 6M. Divida el contenido en dos tubos de ensayo
por partes iguales. Calentar uno de ellos suavemente durante 3 min. Enfri y adicione 1 ml
de acetato de plomo al 10% a cada tubo. Explique detalladamente lo que ocurre.
Reconocimiento de halgenos. Ensayo de Belstein.
Sostenga el extremo de un alambre de cobre en la zona ms caliente del mechero hasta
que cualquier coloracin en la llama desaparezca. Enfri el alambre y luego sumrjalo en
una sustancia que contenga halgenos como: NaI, CHCl3, KBr. Nuevamente coloque el
alambre en la llama y observe la coloracin de la misma con cada sustancia.
BIBLIOGRAFA
Gmez, Marco Jos. Moreno, Pedro. Manual de prcticas de anlisis orgnico. Universidad
Nacional de Colombia, 1988

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PRCTICA N 2: RECRISTALIZACIN DE COMPUESTOS ORGANICOS

INTRODUCIN
Hoy da esta tcnica se mantiene como el procedimiento ms adecuado para la purificacin
de sustancias slidas. En general, la purificacin por recristalizacin se basa en el hecho
de que la mayora de los slidos son ms solubles en un disolvente en caliente que en frio.
El slido que se va a purificar se disuelve en el disolvente caliente, generalmente a
ebullicin, la mezcla caliente se filtra para eliminar todas las impurezas insolubles, y
entonces la solucin se deja enfriar para que se produzca la cristalizacin. En el caso ideal,
toda la sustancia deseada debe separarse en forma cristalina y todas las impurezas
solubles deben quedar disueltas en las aguas madres. Finalmente, los cristales se separan
por filtracin y se dejan secar. Si con una cristalizacin sencilla no se llega a una sustancia
pura, el proceso puede repetirse empleando el mismo u otro disolvente.
La mejor forma de encontrar un disolvente adecuado para la recristalizacin de una
sustancia determinada es ensayar experimentalmente distintos disolventes. No obstante,
algunas generalizaciones, razonablemente validas, pueden ayudar a simplificar la
bsqueda.
Los compuestos inicos se disuelven en disolvente polares y los compuestos no inicos en
disolventes no polares. Los compuestos no inicos se pueden disolver en agua si sus
molculas se ionizan en solucin acuosa o puedan asociarse con molculas de agua a
travs de puentes de hidrogeno. Los disolventes hidroxlicos asociados como metanol.
Etanol, cido actico, presentan un poder intermedio entre agua y el ter etlico o benceno.
Son buenos disolventes para los compuestos orgnicos que pueden asociarse.
Un disolvente ideal para una recristalizacin debe poseer las siguientes caractersticas:
Un coeficiente de temperatura elevado para la sustancia que se va a purificar, esto
es, debe disolver una gran cantidad de la misma a su temperatura de ebullicin y
solo una pequea cantidad a la temperatura ambiente o ligeramente por debajo de
ella
Un coeficiente de temperatura bajo para las impurezas.
Al enfriarse debe suministrar rpidamente cristales bien formados del compuesto
que se purifica de los cuales debe ser fcilmente separable.
No debe reaccionar con el soluto.
Su utilizacin no debe ser peligrosa (inflamable).
Debe ser barato.
En esta prctica se realizara la purificacin de la acetanilida, el acido benzoico y el acido
ctrico o se escoge cualquiera de ellas

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MATERIALES Y REACTIVOS

Varilla agitadora
Tubos de ensayo
Esptula
Pipeta de 10 0 20 ml
Mechero
Hielo
Termmetro de 250 o 300C
Etanol
Agua
Acetona
Hexano
Acetanilida

Acido benzoico
Papel filtro
Baln fondo redondo o plano
Refrigerante
Manta de calentamiento con
agitacin
Erlenmeyer
Embudo de vidrio de tallo corto
Erlenmeyer con salida lateral
Embudo Buchner
Carbn activado

PROCEDIMIENTO
Inicialmente se debe de realizar pruebas de solubilidad para elegir el solvente adecuado de
recristalizacin. Para ello se debe considerar la estructura del compuesto, ya que semejante
disuelve lo semejante.
Para tal fin, se toman 0.05 gr del producto y se agrega 0.5ml de solvente a probar, se agita
y se observa. Si no hay disolucin de los cristales, se adiciona ms solvente hasta 1.5 ml.
Si el slido se disuelve, se considera soluble en frio y por tanto el solvente no es de utilidad
para la recristalizacin.
Si por el contrario, fue insoluble a pesar de agregar hasta 1.5 ml, se caliente la muestra de
3 a 5 min (en bao mara si el solvente es inflamable, si es agua puede calentarse con el
mechero) y con agitacin, manteniendo constante el volumen durante el calentamiento. Si
hay solubilizacin, el compuesto es soluble en caliente e insoluble en frio. Si fue soluble en
caliente, enfre a temperatura ambiente y luego en bao de hielo, obsrvese la formacin
de cristales. Realice pruebas de solubilizacin con agua, etanol, acetona, hexano.
En el baln de 100ml, se pesa 1.0 gr del producto impuro, se aade 30ml de agua y se
agregan virutas de porcelana para regular la ebullicin. Sobre un bao de agua (o
directamente sobre la placa calefactora si el disolvente tiene un punto de ebullicin mayor
que el del agua) se calienta la mezcla hasta ebullicin, agitando constantemente induciendo
al lquido un movimiento de giro.

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Si no se disuelve todo el producto, agregar porciones sucesivas de 2 a 3 ml de agua


caliente. Si se observa presencia de impureza coloreadas agregar 0.05 gr de carbn
activado y calentar durante 2 a 3 min. Sin ebullicin y filtrar con embudo Buchner o por
gravedad en caliente. Si el solvente escogido para recristalizar es agua, en lugar del
montaje anterior, se puede realizar un Erlenmeyer en lugar del baln sin necesidad del
refrigerante.
Si la filtracin es por gravedad en caliente, se realiza en un embudo de tallo corto caliente
con papel filtro con pliegues para evitar recristalizacin en el embudo. Se puede calentar el
embudo con la llama del mechero, en estufa o en agua caliente. Si de todas formas el
producto cristaliza en el embudo, se recogen los cristales del papel, y en un vaso pequeo
se agrega a 10 ml de agua caliente, se mezcla con la solucin que no se ha filtrado, se lleva
hasta ebullicin, se calienta el embudo y se procede a la filtracin.

El filtrado recogido en un Erlenmeyer o vaso pequeo se enfra en agua a temperatura


ambiente y luego el bao de hielo durante 5 a 10 minutos.
Se filtra la mezcla en un embudo Buchner con succin quedando los cristales en el papel.
Se instala en montaje el embudo, se hace succin se agrega rpidamente la mezcla que se
ha de filtrar. Tan pronto ha pasado todo el lquido, se mantiene la succin por 5 minutos.

Posteriormente se pasa el producto a un reloj de vidrio limpio y se seca a 70C por una
hora. Determinar el peso de los cristales secos y calcula el porcentaje de recuperacin.
Nota: cabe destacar que antes de colocar el papel filtro en el embudo de Buchner, debe
cortarse para que no toque las paredes laterales evitando arrugas que impiden una buena
succin. Una vez cortado el papel y antes de iniciar la filtracin, este debe mojarse con el
solvente que ha usado en la recristalizacin.

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RESULTADOS
a) Solubilidad
Los datos se registran en la siguiente tabla:
Agua
Compuesto

F
C

Hexano
F
C

Acetona
F
C

Etanol
F
C

Disolvente de
recristalizacin

Acetanilida
Acido benzoico
Acido ctrico
F: frio C: Caliente
b) Recristalizacin
Gramos del compuesto sin recristalizar:
Gramos obtenidos del compuesto
Color
Punto de fusin puro
Observaciones
En el proceso de recristalizacin se efectan dos filtraciones en qu se diferencian?
Qu tipo de impurezas se eliminan en cada una de ellas?
Por qu es conveniente lavar los slidos cristalizados con disolvente puro despus de la
segunda filtracin? Con que disolvente se lava? Es necesario que este disolvente para
lavar se encuentre a ebullicin?
Cuando se filtra con succin Por qu se debe interrumpir siempre la succin antes de
cerrar la trompa con agua?
BIBLIOGRAFA
Morrison, Robert Thomton. Qumica Orgnica. Buenos Aires, Addison Wesley. 1990.
Gmez, Marco Jos. Moreno, Pedro. Manual de prcticas de anlisis orgnico. Universidad
Nacional de Colombia, 1988
Durst, Dupont. Glokel. Qumica orgnica experimental. Editorial Revert, 1985.

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PRCTICA N 3: TECNICAS BASICAS EN QUIMICA ORGANIA. REFLUJO,


EXTRACCION SOXHLET Y DESTILACION.
INTRODUCCIN
Un montaje para reflujo permite realizar procesos a temperaturas superiores al ambiente
(reacciones, recristalizacin, etc.), evitando la perdida de disolvente y que esta salga a la
atmosfera. Bsicamente consta de un matraz donde se coloca la disolucin y de un
refrigerante, acoplado en vertical, al que segn la finalidad del experimento se acoplan otros
elementos en funcin de que sea necesario llevar a cabo adiciones, mediciones de
temperatura interna, etc.
El refrigerante se conecta mediante tubos de goma al grifo por su parte superior y el
desage por la parte inferior (en contracorriente). El matraz se sumerge parcialmente en el
bao calefactor y todo el montaje en posicin vertical debe ser adecuado asegurado
mediante un pie, pinzas y clips o muelles de sujecin. Para evitar ebulliciones violentas es
conveniente introducir en le matraz con la disolucin un agitador magnticoo porcelana
porosa.

La destilacin constituye el mtodo, ms frecuente e importante para la purificacin de


lquidos. Se utiliza siempre en la separacin de un lquido de sus impurezas no voltiles y,
cuando ello es posible, en la separacin de dos o ms lquidos.
Cuando un lquido puro se introduce en un recipiente cerrado y vaco parte del mismo se
evapora hasta que el vapor alcanza una determinada presin, que depende solamente de
la temperatura. Esta presin, que es la ejercida por el vapor en equilibrio con el lquido, es
la tensin de vapor del lquido a esa temperatura. Cuando la temperatura aumenta, la
tensin aumenta regularmente hasta que llega un momento en que la tensin de vapor
alcanza el valor de 760mm, entonces, si el lquido est en contacto con el exterior, comienza
a hervir. La temperatura a la que esto ocurre recibe el nombre de punto de ebullicin normal
del lquido en cuestin, y es una constante caracterstica de cada lquido.

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Destilacin sencilla: para esta se utilizan soportes. Consta de un matraz de destilacin,


provisto de un termmetro. El matraz descansa sobre una placa calefactora. El matraz de
destilacin va unido a un refrigerante con camisa de refrigeracin por la que circula agua
en contracorriente. Finalmente, el extremo inferior del refrigerante se une a una alargadera
que conduce el destilado al matraz colector.

El lquido que se quiere destilar se pone en el matraz (que no debe llenarse mucho ms de
la mitad de su capacidad) y se calienta con la placa calefactora. Cuando se alcanza la
temperatura de ebullicin del lquido comienza la produccin apreciable de vapor,
condensndose parte del mismo en el termmetro y en las paredes del matraz. La mayor
parte del vapor pasa al refrigerante donde se condensa debido a la corriente de agua fra
que asciende por la camisa de este. El destilado (vapor condensado) escurre al matraz
colector a travs de la alargadera. Durante la destilacin el extremo superior del bulbo
termomtrico debe quedar justamente a la altura de la horizontal que pasa por la parte
inferior de la tubuladura lateral de la cabeza de destilacin, de tal forma que todo el bulbo
sea baado por el vapor que asciende. La destilacin debe hacerse con lentitud, pero sin
interrupciones, manteniendo para ello la calefaccin adecuada.
Se denominan lpidos al complejo de productos naturales constituidos por los esteres de
los cidos grasos superiores, parafnicos y mono carboxlicos, con los alcoholes como la
glicerina u otro tipo de aceite.
Los lpidos se clasifican en tres grupos: simples, compuestos y derivados. Los lpidos
simples estn compuestos por grasas y ceras. Los diferentes cidos grasos que intervienen
en la composicin de los glicridos con los que confieren las caractersticas particulares de
cada aceite y determinan su comportamiento como nutriente.
Cuando predominan los cidos grasos saturados, se mantienen slidos o semislidos a
temperatura ordinaria (20C), constituyendo grasas. Mientras que si predominan los cidos
grasos no saturados son lquidos a dicha temperatura componiendo los aceites que se
denominan fijos.
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La extraccin Soxhlet ha sido (y en muchos casos, contina siendo) el mtodo estndar de


extraccin de muestras slidas ms utilizadas desde su diseo en el siglo pasado, y
actualmente, es el principal mtodo de referencia con el que se comparan otros mtodos
de extraccin. Adems de muchos mtodos de la EPA (U.S environmental protection
angency) y de la FDA (Food and Drugs administration) utilizan Esta tcnica clsica como
mtodo oficial para la extraccin continua de slidos.
La extraccin Soxhlet es la tcnica de separacin slido-lquido comnmente usada para la
determinacin del contenido graso en muestras de diferente naturaleza. De igual modo,
puede ser usada como tcnica preventiva demuestra como paso previo al anlisis mediante
otra tcnica instrumental por ejemplo, la extraccin de cidos grasos en muestras de tocino
para su posterior determinacin mediante cromatografa de gases. Aunque su campo
aplicaciones fundamentalmente el agroalimentario es tambin utilidad en el rea
medioambiental, as es el mtodo de anlisis recomendado para la determinacin del aceite
y la grasa total recuperable en aguas de vertidos industriales permitiendo la determinacin
de hidrocarburos relativamente no voltiles, aceites vegetales, grasas animales, ceras,
jabones y compuesto relacionadas.

En este procedimiento la muestra slida finamente pulverizada se coloca en un cartucho de


material poroso que se sita en la cmara de extractor Soxhlet. Se calienta el disolvente
extractante, situado en el matraz, se condensa sus vapores que caen, gota a gota, sobre el
cartucho que contiene la muestra, extrayendo los anualitos solubles. Cuando el nivel del
disolvente condensado en la cmara alcanza la parte superior del sifn lateral, el disolvente,
con los anualitos disueltos, asciende por el sifn y retoma al matraz de ebullicin. Este
proceso se repite hasta que se completa la extraccin de los anualitos de la muestra y se
concentra en el disolvente.
Extraccin con soxhlet presenta las siguientes ventajas:

La muestra est en contacto repetidas veces con proporciones frescas de solvente.


La extraccin se realiza con el disolvente caliente, as se favorece la solubilidad de
los analitos.
No es necesaria la filtracin despus de la extraccin.
La metodologa empleada es muy simple.
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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

Es un mtodo que no depende de la matriz.


Se obtienen excelentes recuperaciones, existe una gran variedad de mtodos
oficiales cuya tapa de preparacin de muestras se basa en la extraccin con Soxhlet.

Por otra parte, las desventajas ms significativas de este mes extraccin son:

el tiempo requerido para la extraccin normalmente es entre 6-24 horas.


la cantidad de disolvente orgnico (50-300 mL)
la descomposicin trmica de los analitos termolbiles, ya que la temperatura del
disolvente orgnico est prxima a su punto ebullicin.
No es posible la agitacin del sistema, la cual podra acelerar el proceso.
es necesaria una tapa final de evaporacin del disolvente para la concentracin de
los anualitos.
Esta tcnica no es fcilmente automatizable.

Las grasas son sustancias insolubles en agua y menos densos que ella. En cambio, se
disuelve en otros disolventes tales como la nafta, el ter, el benceno, el tetracloruro de
carbono, el cloroformo.
Puede descomponerse, dando nuevamente el glicerol y los cidos grasos que las
constituyen, en una reaccin inversa a la de su formacin. Como esta descomposicin es
producida por el agua, el fenmeno se llama hidrlisis. Se realiza con vapor de agua a
presin, en autoclave y utilizando catalizador. En los seres vivos la hidrlisis se activa por
el curso de encima de lipasas.
Se forma por la combinacin del alcohol glicerol o propanotriol (comnmente llamado
glicerina) conciertos cidos, llamados cidos grasos. Las grasas y los aceites son steres
(un alcohol ms un cido). Como el alcohol que lo forma es del glicerol, se llama tambin
glicridos. La numeracin de la cadena se hace a partir del grupo carboxilo.
PROCEDIMIENTO
Mtodo para reflujo
Para reflujo se pesan 10 g de semilla de higuerilla y se macera en el mortero. Se transfiere
el macerado a un baln de 250 mL y se adicionan 100 mL de hexano o ter de petrleo (se
lava el mortero con 20 mL del mismo solvente y tambin se agrega al baln).Se calienta a
reflujo durante 45 minutos. Terminado el tiempo de filtracin la solucin y se evapora el
solvente mediante destilacin simple.

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

Mtodo para extraccin soxhlet


Se pesan 15 gramos de semilla de man y se macera en el mortero. Se transfiere el
macerado a un dedal y se instala en un equipo de extraccin soxhlet y en un baln de 250
mL se adicionan 100ml de hexano ter de petrleo (se lava el mortero con 20 mL del mismo
solvente y tambin se agrega en el dedal)
Se calienta a reflujo durante 45 minutos. Terminado el tiempo se filtra la solucin y se
evapora el solvente mediante destilacin simple.

RESULTADOS
El producto obtenido se pesa y se determina el rendimiento. Se caracteriza la grasa obtena
mediante pruebas de solubilidad y el punto de fusin. Adems se debe hacer la
diferenciacin qumica entre grasas y aceites.

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PRCTICA N 4: EXTRACIN DEL LICOPENO


INTRODUCCIN

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La mayora de los pigmentos vegetales que se encuentran en una planta y por supuesto,
los ms importantes se alojan en los plastos. Los pigmentos que aparecen en los
cloroplastos podemos clasificarlos en comunes y especficos. En el primer apartado estara
las clorofilas (a y b), las xantofilas y los carotenoides. En el segundo, la fucoxantina (tpico
de las algas pardas) y las ficobilinas, ficoeritrina y ficocianina de las algas rojas y azules,
como ejemplos de pigmentos ms extendidos. El ms importante es la clorofila porque lleva
la responsabilidad de la vida en nuestro planeta, ya que es un pigmento utilizado
universalmente en la fotosntesis.
Los carotenoides son nutrientes que actan como antioxidantes y como secuenciadores de
radicales libres; son los responsables de los colores amarillos, anaranjados y rojos de frutas
y verduras, entre ellos se encuentra el licopeno, - caroteno y lutena (Vasconcellos, 2000)
El licopeno es un carotenoide que se encuentra en tomate, toronja roja, sandas y
pimentones rojos. Es un antioxidante probado que posee el mayor efecto protector contra
los radicales libres.

Beta carotene

Lycopene

En variedades comunes de tomate, la concentracin del licopeno es de 3 a 12.2 mg/100 g


de fruta madura (Arias y col., 2000; Martnez-Valverde, 2002; Tonucci y col., 1995; Kachik
y col., 1992). La causa principal del deterioro en los carotenoides en la oxidacin, qu es
mayor cuando se pierde la integridad celular.
El alto grado de insaturacin los as fcilmente oxidables, siendo especialmente sensibles
a la luz, calor y oxgeno. Otros factores fsicos y qumicos que se saben degradan otros
carotenoides, son temperaturas elevadas, exposicin a la luz, al oxgeno y a pH extremos.
Adems de la degradacin oxidativa, con facilidad se llevan acab la isomerizacin cistrans

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

La isomerizacin no existe, o es muy poca, cuando se lleva a cabo la extraccin de


carotenoides con tetrahidrofurano (THF), metanol (MeOH) y acetonitrilo (ACN)(Ball, 1992).
Diversos autores reportan qu el licopeno se separa de otros carotenoides utilizando
columnas C18 en fase reversa y qu para separar sus ismeros se usa una columna C30.
La deteccin de licopeno se hace de 470 a 475 nm.

MATERIALES Y REACTIVOS

Equipo de reflujo
Embudo de vstago
Embudo de separacin
Erlenmeyer de 100 y 150 mL
Vaso de 100 mL
Manta de calentamiento

Cloruro de sodio
Sulfato de sodio anhidro
Diclorometano
5 gramos de pasta de tomate
Etanol

PROCEDIMIENTO
Mezclar 5 gramos de pasta tomate y 25 mL de etanol al 95%. En un baln de 100 mL se
calienta a ebullicin por 5 minutos en un equipo de reflujo. Filtra la mezcla en caliente. Con
la esptula presionar el residuo semislido en el papel de filtro hasta que culmine de fluir la
solucin etanlica. Se guarda el filtrado amarillo en un Erlenmeyer de 100mL.
Se regresa el residuo slido al baln inicial, adicionar 20 ml de diclorometano y la mezcla
se calienta reflujo de 3 a 4 minutos. Se filtra el extracto amarillo y se suma al filtrado
previamente guardado. Se repite la extraccin del residuo con dos o tres porciones
adicionales de diclorometano. Se adicionan los extractos combinados en un embudo de
separacin y se aade 15 ml de una solucin saturada de cloruro de sodio y agite. Permitir
la separacin de las capas y suavemente se drena la capa coloreada inferior (diclorometano
es ms denso que el agua). El extracto orgnico con una pequea cantidad del sulfato de
sodio anhidro. Filtrar y se destila el solvente. Pesar el licopeno obtenido.

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PRCTICA N 5: ANLISIS DE ALCOHOLES EN UN ALIMENTO. DETERMINACIN


DEL GRADO DE ALCOHOL, ACIDEZ TOTAL Y STERES
INTRODUCCIN
El alcohol puede provenir de la fermentacin de materias primas ricas en azcar como el
vino y la cerveza, o de la destilacin de productos fermentados como en los aguardientes
o de las que se preparan directamente con el alcohol, agua, azcar y sustancias aromticas
o nutritivas llamadas licores: Cremas de licor, que se expenden en el comercio con
diferentes nombres.
Las bebidas son productos que se incorporan a la dieta alimenticia, que se caracterizan por
el suministro de agua al organismo, a veces en cantidad considerables. El agua en las
bebidas no slo aporta contenido hdrico (bebidas hdricas) sino tambin otras sustancias
estimulantes, nutritivas o aromticas (bebidas estimulantes). En este segundo caso es un
producto energtico y estimulante del sistema nervioso, que produce 7 caloras por gramo
de alcohol.
El control de la calidad de una bebida alcohlica tiene por objeto establecer las condiciones
en las que se encuentran desde el punto de vista higinico, determinacin de sus
componentes, lmites de tolerancia en algunas sustancias y las adulteraciones que son
frecuentes debido a su elevado costo. Existe una serie de determinaciones comunes a
todas las bebidas: cenizas, acidez, alcohol, productos voltiles resultantes de la
fermentacin o aejamiento, en casos especiales se determina sacarina, colorantes no
permitidos, alcohol metlico.
El alcohol rectificado o neutro es aquel que sea procesada mediante destilacin
(rectificacin) hasta obtener un producto en 96 alcoholmetros como mnimo, con un
contenido total de congneres inferior o igual a 35 ppm de alcohol anhdrido. El alcohol
rectificado o neutro es aquel que se ha procesado mediante destilacin (rectificacin) hasta
obtener un producto en 95 alcoholmetros como mnimo, con un contenido total de
congneres inferior o igual a 80 ppm de alcohol anhdrido. Se denomina como congneres
aquellas sustancias voltiles naturales, diferentes al etanol y metanol, que provienen de las
materias primas empleadas o que se han originado durante el proceso de elaboracin de
la bebida alcohlica.
Los alcoholes contienen alguna cantidad de acetato de etilo, mezclado con butiratos,
propionatos, que provienen de alcoholes superiores. La presencia del acetato de etilo hace
necesaria su determinacin. El principio del anlisis se basa en la saponificacin de los
steres mente titulacin con NaOH.
Segn la norma INCONTEC N 74 el grado alcoholmetro es el volumen de alcohol etlico
contenido en 100 cm3 de una bebida alcohlica a 20 C. En la prctica se expresa en alcohol
etlico, an cuadro se mide el conjunto alcoholes voltiles y estrs. Existen dos formas de
determinar el grado de alcohol: indirecto en base al peso especfico o directo con los
alcoholmetros. El primer mtodo es vlido en caso de que no se tengan cantidades

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

sensibles de materia fija (ningn residuos de evaporacin: voltiles extraas al alcohol


etlico y aceites esenciales), pero si no es as es mejor utilizar la destilacin para la
eliminacin de estas. En el segundo mtodo, el alcoholmetro ms usado es el de Gay
Lussac graduada 15 C, el cual da el alcohol en volumen (cm3 de etanol en 100 cm3 de
lquido a 15 C.
La norma ICONTEC 620 establece para el alcohol etlico los siguientes requisitos

requisitos

Alcohol puro
extraneutro
min
mx.
96
10

Grado Alcohlico 20C


Acidez expresada como cido
actico (ppm del alcohol
anhdrido).
Aldehdos expresados como
aldehdo actico (ppm del
alcohol anhdrido).
Esteres como acetato de etilo
(ppm del alcohol anhdrido).
Alcoholes superiores expresada
como alcohol amlico (ppm del
alcohol anhdrido).
Metanol
Prueba de barbet en minutos
40
Furfural (ppm del alcohol
No
anhdrido).
detectable

Alcohol puro
rectificado
min
mx.
95
20

10

25

50

50

100
30
No
detectable

MATERIALES Y REACTIVOS

Alcoholmetro
NaOH 0.1N
NaOH 0.05N
HCl 0.1N
Rojo de fenol
Bebida Alcohlica
Vasos de precipitado de 100 y
200mL
Erlenmeyer de 100 y 200 mL

probeta de 100 ml
Pipeta de 10 ml
termmetro de 200 300 C
Vidrio reloj
Esptula
Bureta de 50 ml
Pinza con nuez
Equipo de reflujo de 100 ml

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PROCEDIMEINTO
Determinacin del grado de alcohol. Norma Icontec 620 (mtodo el alcoholmetro)
Se toma en una probeta de 100 a 200 mL de la bebida alcohlica analizar. Luego se
sumerge el alcoholmetro (debe sumergirse por lo menos 3 mm por cada grado
alcoholmetro centesimal). Leer el grado indicado. Hacer la lectura en la parte inferior del
menisco. Si la temperatura de medicin no coincide a la que se graduado, el alcoholmetro
obtiene solo el grado aparente de alcohol a la temperatura dada. Para determinar el grado
real se hace necesario utilizar tablas de correccin por las diferencias de temperatura.
Determinacin de la acidez total (NTC 197).
Inicialmente la muestra de alcohol se lleva hasta 50 alcoholmetros. Luego, con 50 mL se
deposita en un matraz de 250 mL; luego se aaden 3 o 4 gotas de rojo de fenol y se titula
con la solucin de NaOH 0.05N, hasta color fucsia caracterstico (viraje de amarillo a
rojo).
En otro erlenmeyer se colocan 50 mL de agua destilada, se adiciona 3 o 4 gotas de rojo
de fenol y se repite el proceso anterior. Este paso corresponde al blanco de la titulacin.
La acidez total se calcula mediante la siguiente ecuacin:
ACIDEZ TOTAL (mg/L) = 1200*N*(Vm-Vb)
Vm =Volumen de NaOHgastado en la muestra
Vb= Volumen de NaOHgastado en el blanco
1200= (peso equivalente de acido actico 60*1000)/volumen de la muestra
Determinacin de esteres (NTC 196)
Una vez determina la acidez se adiciona a la muestra 5 o 10 mL de NaOH 0.1N, se lleva
a reflujo en bao de agua durante una hora. Luego se enfra al ambiente y se titula
directamente con HCl 0.1N hasta el viraje de rojo a amarillo.
Esteres (mg/mL) = [(V1-V2)*Norm HCl*88*1000]/volumen de muestra
V1 = Volumen de NaOHgastado en la muestra
V2= Volumen de HCl
88 = peso del acetato de etilo
RESULTADOS
Describir todo lo observado y mostrar y explicar las reacciones de todas las
determinaciones

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PRCTICA N 6: PREPARACIN DE ASPIRINA (ACIDO ACETIL SALICLICO)


INTRODUCCIN
La aspirina es el frmaco que mayor empleo ha recibido en la sociedad moderna. El nombre de
aspirina deriva de su estructura, cido acetilsaliclico. Antiguamente el cido saliclico se conoca
como cido spiraeico (de la Spiraea ulmaria) y por tanto la aspirina era el cido acetilespiraeico,
de donde deriv su nombre. La aspirina es, aun actualmente, uno de los medicamentos de
mayor uso y consumo mundial por su conocida accin analgsica, antipirtica y antiinflamatoria
sobre el organismo.
La aspirina, acta inhibiendo la biosntesis de prostaglandinas, puestos que inducen el dolor, la
inflamacin y la fiebre. Asimismo, la aspirina posee un moderado efecto anticoagulante derivada
de la inhibicin que ejerce en la biosntesis del tromboxano, un agregar plaquetario, y que ha
llevado a su utilizacin en la prevencin del infarto de miocardio y de ataques al corazn por
formacin de trombos.
El propio cido saliclico es un analgsico. Este es el producto que se extrae de varias plantas
medicinales capaces de aliviar el dolor. Inicialmente, el frmaco se administr en forma de sal
sdica. Sin embargo, el uso del salicilato sdico produca molestos efectos secundarios, y
pronto se busc una modificacin del frmaco que retuviese las propiedades teraputicas sin
presentar los efectos secundarios indeseables. Por tratamiento del cido saliclico con anhdrido
actico se obtiene el cido acetilsaliclico, un compuesto tan eficaz como el salicilato sdico,
pero de reducidos efectos secundarios. El mismo tipo de estrategia se emple ms tarde para
la modificacin de otro potente analgsico, la morfina. En este caso el problema consista en su
capacidad de crear adiccin y, con la idea de solventarlo, se acetilo la morfina, obtenindose la
herona. No cabe duda que, en este caso, la estrategia no tuvo el mismo xito que con el cido
saliclico.
El producto de partida para la fabricacin de la aspirina es el cido saliclico que, a su vez, se
prepara como sal sdica por tratamiento del fenxido sdico con dixido de carbono a unas 5
atm de presin y a una temperatura de 125C (sntesis de Kolbe). El cido acetilsaliclico se
prepara fcilmente en el laboratorio por esterificacin del grupo hidroxilo del cido saliclico
(cido 2-hidroxibenzoico). La formacin de un ster a partir de un cido carboxlico y un alcohol
(esterificacin de Fischer) es un proceso que slo se produce si se utiliza como catalizador un
cido fuerte: cido orto-fosfrico, cido sulfrico, etc. Es una reaccin de equilibrio que puede
evolucionar en ambas direcciones dependiendo de las condiciones empleadas. Los estudios
realizados para conocer el mecanismo de esta reaccin, han puesto de manifiesto que el OH
del cido (del grupo COOH) y el H del alcohol (del grupo OH) son los que forman la molcula
de H2O.
La reaccin se puede desplazar hacia la formacin del ster eliminando el agua a medida que
se va formando y/o utilizando un exceso de uno de los reactivos (generalmente de alcohol).
Aunque se pueden obtener steres de cido por reaccin directa del cido con el alcohol, se
suele utilizar un derivado de cido cmo puede ser un anhdrido o un cloruro como agente
acilante, ya que stas permiten obtener los steres a una velocidad mucho mayor.

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PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

En esta prctica se prepara el cido 2-acetoxibenzoico por reaccin entre el cido


ortohidrxibenzoico y el anhdrido actico utilizando cido sulfrico como catalizador.
MATERIALES Y REACTIVOS

cido saliclico
Anhdridoactico
cido actico
Etanol
Matraz de fondo redondo
Viruta de porcelana
Equipo de reflujo
Termmetro

Vaso 1000 o 500 ml


Probeta
Vaso
Tubo de tiel
Tubos capilares
Embudo buchner
Papel de filtro
Pipeta

PROCEDIMEINTO
En un matraz de fondo redondo de 100 ml agregar por este orden: 2.5 g de cido saliclico, 5 ml
de anhdrido actico y 4 gotas de cido sulfrico concentrado. Se aade un trocito de porcelana
porosa y se acopla al matraz un refrigerante (engrasar los esmerilados). El medio de accin
se mantiene a 60 - 70 C durante 10 minutos, introduciendo para ello el matraz en un bao
de agua previamente calentado a unos 60- 70C utilizando una placa calefactora. Comprobar
cuidadosamente la temperatura del bao con un termmetro.

Al cabo de este tiempo, se interrumpe la calefaccin y el matraz se enfra exteriormente con


agua hasta alcanzar la temperatura ambiente, obsrvese la formacin de una masa slida de
producto blanco. Se aade entonces 25 ml de agua fra, se agita bien la suspensin y los
cristales se recogen por filtracin a vaco. Se presiona el producto sobre el filtro con una esptula
para eliminar la mayor cantidad posible de la disolucin acuosa acida. Se extiende el producto
sobre el papel de filtro y se seca minuciosamente.
El cido acetilsaliclico una vez seco, se pesa para determinar el rendimiento obtenido en su
preparacin. Una pequea parte del producto se recristaliza utilizando una mezcla de
disolventes (etanol/agua, calentando en un bao de agua) y se determina su punto de fusin.
1. Calcular rendimiento obtenido en la preparacin de aspirina. Cuntos gramos de aspirina
podramos obtener a partir de 2 g de cido saliclico y 2 g de anhdrido actico
2. Si en la sntesis de la aspirina queda cido saliclico sin reaccionar qu procedimiento
experimental, podramos utilizar para separar la aspirina pura?

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PRCTICA N 7: OBTENCIN DE UN COLORANTE. SNTESIS DE LA


FENOLFTALENA

INTRODUCCIN
El color de los pigmentos es debido al sistema grande de enlace doble conjugado, el cual
disminuye la energa requerida para excitar un electrn de manera que la luz en la zona
visible del espectro tenga suficiente energa para que ocurra la excitacin. Cuando esto
sucede, la luz visible es absorbida y entonces vemos el color.
Todos los colores contienen uno o ms grupos no saturados que son primariamente
responsables del color: se denominan grupo cromforos. Entre estos pueden citarse como
tpicos: los grupos azo, nitro, los anillos de quinona, etc.
La copulacin de sales de diazonio con fenoles o aminas aromticas genera
azocompuestos, los cuales son de enorme importancia para la industria de los colorantes.
La obtencin de un colorante diazoico consta de las operaciones siguientes:
1) Diazotacin de una sustancia aromtica que contenga un grupo amino primario.
2) Preparacin de una disolucin de algn compuesto amino-aromtico en un cido diluido
o una sustancia fenlica en un lcali diluido.
3) El mezclado de las soluciones anteriores con lo que tienen lugar la formacin del
colorante en una reaccin que se denomina copulacin. Para que tenga lugar esa reaccin,
la solucin debe ser alcalina o ligeramente cida.
La fenolftalena y sus derivados estn estrechamente relacionados con los colorantes de
trimetilmetano que ambos tipos de compuestos pueden estudiarse conjuntamente. La forma
incolora la fenolftalena se puede considerar como la lactona de la base carbinol de esta
sustancia coloreada.
La fenolftalena de frmula C20H14O4 es un compuesto qumico que se obtiene por reaccin
del fenol (C6H5OH) y el anhdrido ftlico (C8H4O3), en presencia de cido sulfrico.
Cuando se utiliza como indicador para la determinacin cualitativa y cuantitativa del pH en
las volumetras en de neutralizacin se prepara disuelta en alcohol al 70%. El intervalo de
viraje de la fenolftalena, es decir, el intervalo de pH dentro del cual tiene lugar el cambio
de color del indicador, no sufre variacin entre 0 y 100 C y est comprendida entre 8,0 y
9,8. El cambio de color de este indicador est acompaado de un cambio de su estructura;
su color en medio bsico de rojo-violeta y en medio cido es incoloro. La fenolftalena es
un componente frecuente los medicamentos utilizados como laxantes, aunque se tiende a
restringir su uso por sus posibles efectos cancergenos.

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

MATERIALES Y REACTIVOS

0,4 g Fenol
0,2 g Anhdrido ftlico
1 mL Acido sulfrico
2 mL NaOH 1 M
2 Matraz Erlenmeyer

1 Esptula
1 Pipeta
1 Probeta
5 Tubos
2 Vasos de precipitado

PROCEDIMIENTO
En un tubo de ensayo se mezclan 0.3-0.4g de fenol con unos 0.2 g de anhdrido ftlico. Se
aaden 3 o 4 gotas de cido sulfrico concentrado, se agita la mezcla durante dos o tres
minutos, se calienta la mezcla a una temperatura de 160 grados aproximadamente. La
mezcla de sustancias reaccionar con una ebullicin suave. La masa fundida se vierte
sobre 50-60 mL de agua y una parte de la solucin se alcaliniza y despus se acidula.
1. Se comportar la solucin obtenida de la misma forma que una solucin de
fenolftalena?
2. Qu estructuras de la fenolftalena se tiene en un pH alcalino?
3. Qu tipo de reaccin es la que se lleva a cabo en la sntesis de la ftalenas?

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PRCTICA N 8: REACCIN DE ESTERIFICACIN DE FISCHER. OBTENCIN DE


SALICILATO DE METILO.
INTRODUCCIN
cido actico. Tambin llamado cido etanoico o cido metilencarboxlico, es un cido
orgnico de dos tomos de carbono, se puede encontrar en forma de ion acetato. Su
frmula es CH3-COOH (C2H4O2), siendo el grupo carboxilo es el que le confiere las
propiedades cidas a la molcula. Este es un cido que se encuentra en el vinagre, siendo
el principal responsable de su sabor y olor agrios. Se obtiene por sntesis y
por fermentacin bacteriana, aportando un 10 % de la produccin mundial. El 75% obtenido
en la industria qumica es preparado por carbonilacin del metanol, otros mtodos
alternativos aportan el resto, la preparacin de estos esteres se llevar a cabo mediante
una esterificacin de Fischer del cido actico con metanol, propanol , isopropanol, fenilmetanol catalizada por cido sulfrico. En estas condiciones, la reaccin supone un
proceso reversible, en el que la posicin de equilibrio no es favorable a la formacin del
ster. Para desplazar el equilibrio en la direccin deseada, un procedimiento muy habitual
consiste en eliminar el agua formada por destilacin azeotropica utilizando un Dean-Stark,
llevando a cabo la reaccin en presencia de un ligero exceso de alcohol. De esta forma,
puede conseguirse elevados rendimientos partiendo de reaccin de reactivos baratos y
asequibles como son los cidos carboxlicos y alcoholes.
A diferencia de los cidos, los steres no pueden dar enlaces de hidrgeno puesto que no
tienen un tomo de hidrgeno unido a un tomo de oxgeno. Por lo tanto, los puntos de
ebullicin de los steres son inferiores en comparacin con los puntos de ebullicin de los
cidos carboxlicos con masas moleculares semejantes. Sin embargo, los steres pueden
aceptar enlaces de hidrgeno de otros lquidos con enlaces de hidrgeno; por lo tanto, los
steres de baja masa molecular son solubles en agua y los de mayor masa molecular son
insolubles en agua. A diferencia de los cidos carboxlicos de los cuales se derivan, los
steres poseen olores agradables. En realidad, los aromas especficos de muchas flores y
frutos se deben a la presencia de steres. Estos se emplean en la fabricacin de perfumes
y como agentes saborizantes en las industrias de la confitera y bebidas no alcohlicas.
Para obtener un sabor artificial de frambuesa, se emplea una mezcla de nueve steres. Los
vapores de los steres son inocuos, a menos que se inhalen grandes concentraciones. El
uso ms importante de los steres es como disolventes industriales. La mayor parte de los
steres son lquidos, incoloros, insolubles y ms ligeros que el agua.

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

MATERIALES Y REACTIVOS

10 g cido actico
50 mL Metanol
50ml n-propanol
50ml isopropanol
50ml fenilmetanol
10 mL Acido sulfrico
80 mL CH2CL2
15 mL Bicarbonato sdico al 5%
10 mL Cloruro clcico escoriforme

1 Equipo de reflujo
1 Embudo de separacin
2 Matraz Erlenmeyer
1 Esptula
1 Pipeta
1 Probeta
1 Papel indicador
1 Equipo de destilacin

PROCEDIMIENTO
En un matraz de fondo redondo se introducen 10 g de cido actico y 50 mL de metanol.
A continuacin, se aade con cuidado 10 mL de cido sulfrico concentrado, agitando
suavemente para mezclar bien los reactivos. El conjunto se calienta a reflujo durante 60
minutos. Tras dejar enfriar, se aaden al matraz 140 mL de agua y se transfiere la mezcla
a un embudo de decantacin. Extraer la mezcla con dos porciones de 40 mL de CH2Cl2.
Las fases orgnicas combinadas se lavan en el mismo embudo con 15 mL de una disolucin
acuosa de bicarbonato sdico al 5%, agitando suavemente mientras se observa
desprendimiento gaseoso. La fase acuosa se separa y se repite la extraccin de la fase
orgnica con la disolucin acuosa de bicarbonato sdico al 5% hasta pH bsico de las
aguas de lavado. La fase orgnica se lava con 30 mL de salmuera. (El pH de las aguas de
lavado de ser neutro, de lo contrario habr que repetir el lavado). Se saca la fase orgnica
del embudo de decantacin y se transfiere a un Erlenmeyer para su secado con cloruro
clcico escoriforme. Se filtra y se evapora el disolvente en el rota vapor. Finalmente, el
producto se purifica por destilacin a presin reducida.
1. A qu se le denomina trans-esterificacin?
2. Expliqu a qu se debe el aroma y el sabor agradable que presenta una flor o un
fruto. Represente ejemplos.

BIBLIOGRAFA
tcnicas experimentales en sntesis orgnica. M.A. Martnez Grau y A.G. Csaky Editorial
Sntesis, Madrid, 1998 (Captulo 2 y 8).
Vogels. Textbook of practical organic chemistry. B.S. Furniss, A.J. Hannahford, P.W.G.
Smith, A.R. Tatchell, Ed. Longman, 1989 (Capitulo 6).
Curso prctico de qumica orgnica R. Brewster, C.A. Vanderwert y W.E. McEwen. Ed.
Alhambra, Madrid, 1965.

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PRCTICA N 9: OBTENCIN Y RECONOCIMIENTO DE PIGMENTOS VEGETALES

INTRODUCCIN
Entre todos los caracteres ms externos de los vegetales, el ms notable y caracterstico
es probablemente el color. El color no es nicamente un carcter llamativo de la vegetacin,
sino que, adems, algunas los pigmentos que lo condicionan estn estrechamente ligados
a las actividades fisiolgicas del propio vegetal. Por consiguiente, el estudio de cmo las
plantas viven y se desarrollan requiere el previo conocimiento de los pigmentos vegetales.
En el reino vegetal es posible encontrar todos los matices y combinaciones de colores del
espectro, predominando generalmente los colores primarios: verde, amarillo, rojo y azul.
Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados compuestos qumicos
definidos, llamados pigmentos.
El color particular que presenta un determinado rgano vegetal depende generalmente el
predominio de uno u otro o la combinacin de ellos. Se debe tener claro que cuando un
vegetal presenta un color blanco, es debido a la falta de los pigmentos. La luz solar que
incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas,
sino que es trasmitida o reflejada prcticamente sin sufrir modificacin.El color de un
pigmento depende la absorcin selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la
reflexin de otras. Constituyen el sustrato fisicoqumico donde se asienta el proceso
fotosinttico.
Hay diversas clases de pigmentos:
Clorofila (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloracin verde. Carotenoides (carotenos y
xantofilas) de coloracin amarilla y roja. Ficobilinas de coloracin azul y roja presentes en
algas verdeazuladas, que comprenden el filo de los Cianofitos.

Clorofila a

Beta- Caroteno

La clorofila, es el pigmento que da color verde a los vegetales y que se encarga de absorber
la luz necesaria para realizar la fotosntesis, proceso que posibilita la sntesis de sustancias
orgnicas a partir de las inorgnicas (CO2 H 2O y sales minerales), mediante la
transformacin de la energa luminosa en energa qumica. La clorofila absorbe sobre todo
la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde.

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

Generalmente la abundancia de clorofila en las hojas y su presencia ocasional en otros


tejidos vegetales, como los tallos, tien de verde estas partes de la planta. En ocasiones,
la presencia de clorofila no es tan patente a descomponerse y ocupar su lugar otros
pigmentos. Asociados con las clorofilas, existen tambin dos clases de pigmentos amarillos
y amarillos-anaranjados de origen isoprenico qu son las xantofilas y carotenos (alfa, beta
y gama).
Las algas verdeazuladas contienen la misma clase de clorofila que las plantas superiores,
pero la ausencia de los cloroplastos hace que se distribuye por toda la clula. Con
frecuencia otros pigmentos como la ficobilina (presenta tambin en los rodfitos)
enmascaran la clorofila y confieren a estas a las clulas, un color azulado o rojizo. Su
funcin es captar la luz y transferirla a la clorofila:
Las clorofilas presentan una estructura molecular de gran tamao de tipo porfirinico,
formada en su mayor parte por carbono e hidrgeno, constituyendo un anillo tetrapirrolico
ocupado en el centro por un nico tomo de magnesio, rodeado por un grupo de tomos
que contienen nitrgeno. Del anillo parte una larga cadena de 20 tomos de carbono,
denominada fitol que constituye el punto de anclaje de la molcula de la clorofila a la
membrana interna del cloroplasto, el orgnulo celular donde tiene lugar la fotosntesis.
Cuando la molcula de clorofila absorbe un fotn, sus electrones existan elevndose a un
nivel de energa superior. Esto es el punto de partida en el cloroplasto de una secuencia
compleja de reacciones qumicas que dan lugar almacenamiento de energa en forma de
enlaces qumicos.
Las clorofilas actan como catalizadores, es decir, como sustancias que aceleran o facilitan
las reacciones qumicas, pero que no se agotan en las mismas. Entre los carotenoides hay
tambin muchos catalizadores e intervienen como pigmentos accesorios en la fotosntesis,
transfieren a la clorofila la energa de la luz que absorben para su conversin en energa
qumica.
Los pigmentos cloroflicos son insolubles en agua, pero si son solubles (afinidad qumica)
en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol etlico y acetona. A los solventes que
extraen simultneamente todos los pigmentos de la hoja se les suele llamar extractantes.
Existen otros solventes que presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama
separadores, como por ejemplo el tetracloruro de carbono y el ter de petrleo.
MATERIALES Y REACTIVOS

20 mL Etanol
30 mL Hexano o ter de petrleo
40 mL Metanol
20mL KOH en alcohol metlico al 30%
20 mL ter etlico

2 Matraz Erlenmeyer
1 Embudo de separacin
1 Mortero
2 Vasos de precipitado

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PROCEDIMIENTO
Lavar las hojas del vegetal. En un mortero colocar 5g de las hojas y 20 mL de etanol. Triturar
sin golpearse que liquidar adquiera en color verde. En un vaso de precipitado 100 mL
transferir el producto de la maceracin, lavar el mortero con 20 mL de etanol y agregarlo al
vaso. Agitar y filtra el lquido obtenido recogiendo con el filtrado los pigmentos.
Tomar el extracto alcohlico bruto de pigmentos, y aadirle dentro de un embudo de
decantacin 20 mL de ter de petrleo o hexano. Agitar suavemente durante un tiempo y
dejar que se separen las dos capas lquidas. Eliminar la capa inferior de agua y alcohol. En
la capa superior orgnica de ter de petrleo, de color verde oscuro, se encuentran los
pigmentos. Realizar dos lavados de la fase orgnica, aadiendo 50 mL de agua, agitando
suavemente y dejar decantar y eliminar la capa inferior acuosa.
Una vez que se dispone el extracto purificado de pigmentos se aade 40 mL de alcohol
metlico (en el embudo de decantacin), agitar y dejar que se separen las dos capas.
Decantar la capa inferior alcohlica en un vaso de precipitado y se guarda.
La capa superior de ter de petrleo en el embudo de decantacin se mezcla con una
solucin de KOH en el alcohol metlico al 30%, agitar y luego incorporar un poco de agua.
Observe la coloracin de las dos capas.
Tomar la fase inferior del alcohol metlico guardan el vaso de precipitado, se coloca en un
embudo de decantacin con ter etlico y agitando continuamente se aaden 5 porciones
de 5 mL de agua. Dejar que se separen las dos capas. Eliminar la carpa alcohlica y de
agua inferior. En la capa superior de ter etlico en el embudo, se aade lentamente 15 mL
de una solucin de KOH en alcohol metlico al 30%. Aadir 10 mL de agua, agitar y dejar
que se separen las dos fases. Observe la coloracin de las fases
RESULTADO
Describir todo lo que se observa en la experiencia

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

DIAGRAMA METODOLGICO PARA EL AISLAMIENTO DE LOS PIGMENTOS


VEGETALES
Vegetal-alcohol

Residuos filtro

Capa inferior de
alcohol

Filtrado

Extracto pigmentos en alcohol

Extraccin con ter de petrleo


Capa superior ter de
petrleo con pigmentos
Capa inferior de agua

Lavados con agua


Extracto ter de petrleo
con pigmentos purificados

Extraccin con metanol


Capa inferior de
metanol con pigmentos

Capa superior ter de


petrleo con pigmentos

Extraccin con ter


etlico. Porciones de agua

Solucin KOH 30% en


metanol, agua

Capa inferior de
agua-alcohol

Capa inferior de
agua-alcohol
Capa superior de ter
etlico con pigmentos

Solucin KOH 30% en


metanol, agua

Capa inferior de
agua-alcohol

Capa superior de ter


etlico

Capa superior
ter de petrleo

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PRCTICA N 10: CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (CCF). IDENTIFICACIN DE


PIGMENTOS VEGETALES
INTRODUCCIN
La separacin de mezclas complejas de productos y aislamiento y purificacin de los
componentes individuales es de gran importancia de la qumica orgnica. La cromatografa
constituye una importante herramienta en este sentido, complementaria con las tcnicas
clsicas: de cristalizacin, destilacin, etc. En la actualidad existe una gran variedad de
tcnicas cromatografcas a disposicin del qumico, desde ayudas muy simple:

Cromatografa de capa fina (TLC)


Cromatografa de columna

Tcnicas mucho ms sofisticadas que requieren equipos de elevado costo:

Cromatografa de gases
Cromatografa de lquidos
HPLC, ect.

No obstante, el fundamento de la mayor parte de las tcnicas cromatografcas es similar, y


su conocimiento facilita la comprensin de todas ellas. Examinaremos los principios de la
cromatografa tomando como referencia una en las tcnicas cromatografcas ms utilizadas
en el laboratorio de qumica orgnica: la cromatografa de capa fina.
Cromatografa de absorcin
La cromatografa adsorcin emplea una fase estacionaria slida de carcter polar,
ADSORBENTE y una fase mvil lquida, ELUYENTE. Se utiliza tanto con fines analticos
como preparativos y la separacin de los componentes de la mezcla viene determinada por
las interacciones polares de los componentes de la misma con las fases estacionaria y
mvil. Por tanto, los compuestos ms difciles de separar mediante este tipo de
cromatografa, sern aquellos que tengan una polaridad muy similar.
Fase estacionaria: Adsorbente
Est constituida por un slido poroso, finamente granulado, con centros activos polares en
su superficie donde se adsorben las molculas de los compuestos que se van a
cromatografiar. Cuanto menor sea el tamao de la partcula de este material mayor ser la
capacidad de adsorcin. La adsorcin se debe a interacciones intermoleculares del tipo
dipolo-dipolo, dipolo-dipolo inducido o enlaces de hidrgeno entre el adsorbente y el soluto.
el adsorbente ms utilizado es la gel de slice donde las interacciones tienen lugar entre
los grupos Si------OH y Si---O---Si; tambin se emplea con relativa frecuencia almina
(Al2O3). El adsorbente debe ser inerte con las sustancias a cromatografiar. La gel de slice
presenta carcter cido y la almina puede adquirirse con carcter neutro, cido o bsico.

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

Fase Mvil: Eluyente


En un disolvente en el que los componentes de la mezcla son, al menos, parcialmente
solubles, al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la velocidad de elucin de los
compuestos de la mezcla. Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de disolventes
e incluso de llegar a cabo la elucin con un gradiente polaridad aumentando
progresivamente la proporcin del disolvente ms polar.
Retencin
Las molculas de soluto S se adsorben en los centros polares de la fase estacionaria X y,
a medida que se produce la elusin, van siendo desplazadas por las molculas de
disolventes que constituye la fase mvil M. La retencin de un soluto se puede justificar por
la competencia de establece entre S y M por adsorbense a los centros de polar X, es decir,
depende los valores de las constantes de equilibrios, que estn en funcin de:

Polaridad del compuesto a eluir que depende de sus grupos funcionales.


Naturaleza del adsorbente
Naturaleza del disolvente

Cuanto ms polar sea un compuesto ms se retendr en la fase estacionaria, por ejemplo,


se retiene ms un alcohol que un hidrocarburo. Para un mismo compuesto, un aumento en
la polaridad de la fase mvil hace que se desplace con ms facilidad de la fase estacionaria;
por ejemplo se eluira rpidamente una amina en acetonitrilo que un hexano.
Para compuestos poco polares, que se retienen poco en la adsorbente, se utilizan eluyentes
apolares o poco polares como por ejemplo, hexano; para compuestos muy polares, que
quedan muy retenidos en el adsorbente, se emplean eluyentes muy polares como por
ejemplo: metanol o mezclas metanol-diclorometano. Para compuestos de polaridad media
se emplean eluyentes de polaridad intermedia y son muy aconsejables en estos casos las
mezclas en distintas proporciones de hexano-acetato de etilo.
Cromatografa de capa fina (CCF)
La fase estacionaria (adsorbente) se encuentra depositada, formando una capa fina de un
espesor uniforme sobre una placa de vidrio, plstico o una lmina metlica. La mezcla a
analizar se deposita en un capilar a una pequea distancia del borde inferior de la placa.

Aplicacin de la muestra

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

Se introducen en una cubeta donde est la fase mvil (Eluyente), que ascender largo de
la capa por capilaridad eluyendo a los componentes de la mezcla a distintas velocidades,
lo que provoca su separacin. Cuando el frente del disolvente se encuentra
aproximadamente a 0.5 cm del borde superior, se saca la placa de la cubeta, se marca
hasta dnde ha llegado el eluyente y se deja secar para a continuacin, proceder a la
visualizacin de las manchas correspondientes a los productos cromatografados.

Desarrollo de la placa
Determinacin del Rf
Se conoce como Rf (rate factor) la relacin entre las distintas recorridas por un compuesto
y por el disolvente desde el origen del cromatograma.

Cada compuesto en unas condiciones cromatografcas determinada: adsorbente,


disolvente, temperatura, etc., tiene un valor constante y caracterstico del Rf. Sin
embargo, slo se puede establecer comparaciones entre el Rf de dos compuestos cuando
los dos compuestos se eluyan juntos en la misma placa. La distancia recorrida por el
compuesto se mide del centro de la mancha.

Rf(A) menor de Rf(B), entonces A es mas polar que B


Determinacin del Rf de dos compuesto.

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Revelado del cromatograma (Visualizacin)


a) Con luz UV (ultravioleta): Las placas suelen llevar incorporado un indicador
fluorescente que absorbe la luz UV y emite luz visible, generando verde. Cuando se
cromatografan sustancia que absorbe en el UV donde se encuentra el compuesto no
absorbe el indicador y como resultado vemos una mancha que indica su presencia.
b) Con un agente: Revelador se emplea cuando las sustancias no absorben radiacin UV,
el revelador reacciona con los productos absorbidos dando lugar a compuestos
coloreados y por tanto se utilizar uno u otro en funcin del compuesto que se quiera
visualizar. Algunos ejemplos: H2SO4 concentrado en etanol para azcares, ninhidrina
para aminocidos y yodo para compuestos insaturados y aromticos.
Aplicaciones de la CCF
La CCF es una tcnica cualitativa muy utilizan la oratorio de qumica orgnica para:
a) Determinar el nmero de componentes de una muestra: Precaucin si slo hay una
mancha muy retenida o aparece junto al frente del disolvente hay que aprobar otro
eluyente.

Separacin de dos componentes A y B en una mezcla. a) Eluyente poco polar, b)


Eluyente de polaridad adecuada, c) Eluyente muy polar

b) Comprobar la pureza un compuesto: Aparecer una sola mancha, se debe


comprobar que slo hay una mancha utilizando distintos eluyente.
c) Determinar la identidad de dos compuestos: Hay que tener precaucin pues valores
del Rf igual (o prcticamente iguales) para dos compuestos en una misma placa no
garantizan inequvocamente su identidad. En la misma placa hay que
cromatografiar una una mezcla de los compuestos cuya identificacin se quiere
comprobar.
d) Seguir la evolucin de una reaccin: Cada cierto tiempo se cromatografa en una
misma placa los reactivos y la mezcla de reaccin.
e) Determinar el disolvente ms apropiada para llevar a cabo una separacin mediante
una cromatografa preparativa (en columna o en placa)
f) Seguir el proceso de una cromatografa en columna (CC).

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MATERIALES Y REACTIVOS

20 mL Etanol
10 mL ter de petrleo
2 mL Ciclohexano
3 mL Metanol
5 mL Acetona
6 mL Acetato de etilo
2 Matraz Erlenmeyer

1 Mortero
1 Embudo
1 Capilar
1 Lmpara de UV
2 Vasos de precipitado
2 Placas cromatografcas

PROCEDIMIENTO
Lavar las hojas del vegetal. En un mortero se coloca 1.0 gr de las hojas y 20 mL de etanol.
Triturar sin golpear hasta qu el lquido adquiera un color Verde. En un vaso de precipitado 100
mL transferir el producto de la maceracin. Agitar y filtra el lquido obtenido recogiendo con el
filtrado los pigmentos.
Se introducen un tubo capilar en la disolucin toman una pequea cantidad de la misma por su
extremo y se coloca en una placa de cromatografa, con gel de slice como adsorbente, una
mancha en el centro de la placa y a 1 cm del borde inferior.
Se deja secar y se introducen en el interior de una cubeta de cromatografa conteniendo 5 mL
de ter de petrleo, de modo que el disolvente no toqu la zona en la que se entran las manchas.
Se tapa la cubeta y cundo el disolvente ha ascendido a 1 cm del borde superior se saca la
placa y se marca el nivel del disolvente en un extremo de la misma. Se deja secar y se revela
la placa en una lmpara de luz ultravioleta, localizando la posicin de cada mancha. Se miden
las distancias recorridas por el frente del disolvente y para cada mancha se calcula el valor de
Rf.
Se repite todo el proceso utilizando las siguientes mezclas como solventes de elucin

Mezcla 1: 60% de ter de petrleo, 16% del Ciclohexano, 10% acetato de etilo, 10% de
acetona y 4% de metano
Mezcla 2: 70% de hexano y 30% de acetona
Mezcla 3: 60 % de iso-octano, 20% de acetona y 20% de eter petrleo
Mezcla 4: 50% de Ciclohexano 25% de acetona y 25% de ter de petrleo

Para cada mezcla utilizar una placa diferente


RESULTADOS
Analizar e interpretar los compuestos observadas y determina para cada mancha su Rf

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PRCTICA N 11: CROMATOGRAFIA EN COLUMNA. SEPARACION DE UNA MEZCLA AZUL


VICTORIA / NARANJA DE METILO
INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los componentes de una mezcla
debido a la influencia de dos efectos contrapuestos: a) Retencin. Efecto producido sobre los
componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado
a un soporte slido; b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por
una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.
El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria,
impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. La mezcla a separar se deposita sobre la
fase estacionara, mientras que la mvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la
mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas
fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo
distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario
los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como
consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas
discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
Existen distintos tipos de cromatografa en columna:
Cromatografa de intercambio inico: se basa en la afinidad de los iones en solucin por los sitios
de polaridad opuesta que se encuentran en la fase estacionaria.
Cromatografa de exclusin: Se basa en la habilidad de materiales de porosidad controlada para
separar los componentes de una mezcla de acuerdo al tamao y forma de las molculas.
Cromatografa de afinidad: se fundamenta en la especificidad de algunas macromolculas
biolgicas. stas se unen especficamente a la fase estacionaria y para separar dicha
macromolcula, bastar con variar el pH una vez que la columna este limpia y slo se encuentre de
inters.
Cromatografa de adsorcin: se basa principalmente en las diferencias en la afinidad relativa de
los compuestos por el slido utilizado como fase estacionaria. Las separaciones obtenidas se
determinan casi exclusivamente por interacciones polares, siendo la fase estacionaria ms polar que
la fase mvil.
Cromatografa de particin: la fase estacionaria es un lquido soportado en un slido inerte. Otra
vez, la fase mvil puede ser un lquido (cromatografa de particin lquido-lquido) o un gas
(cromatografa de particin gas-lquido, GLC). La cromatografa en papel es un tipo de cromatografa
de particin en la cual la fase estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel. La
cromatografa de gases (GC) y de alta resolucin (HPLC) son tcnicas de particin ampliamente
empleadas.
Cromatografa de fase reversa: el mecanismo de separacin depende de interacciones
hidrofbicas entre las molculas de soluto en la fase mvil y el ligando hidrofbico inmovilizado en

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

la fase estacionaria. La naturaleza actual de las interacciones de unin hidrofbica asume que la
interaccin de unin es el resultado de un efecto entrpico favorable. Las condiciones inciales de
unin de la fase mvil usadas en la cromatografa de fase reversa son acuosas lo cual indica un
grado alto de estructuras de agua organizadas alrededor de las molculas de soluto y el ligando
inmovilizado. A medida que el soluto se une al ligando hidrofbico inmovilizado disminuye el rea
hidrofbica expuesta hacia el disolvente. As, el grado de organizacin de la estructura de agua
disminuye con un favorable aumento de entropa en el sistema.
El proceso de cromatografa en columna consta de tres pasos:
a) Preparacin de la columna: Empaquetamiento de la fase estacionaria en la columna. Se prepara
una suspensin del adsorbente (fase estacionaria) en el eluyente (fase mvil) y se vierte en el interior
de la columna.
b) Siembra de la muestra: La muestra se deposita (siembra) en la superficie superior del adsorbente
contenido en la columna con la ayuda de una pipeta. Si la muestra es lquida se puede sembrar
directamente, si es slida se siembra una solucin concentrada de la misma en un disolvente
adecuado (de baja polaridad).
c) Desarrollo/Elucin de la columna: Una vez sembrada la muestra se permite el paso de la fase
mvil a travs de la fase estacionaria y se van recogiendo fracciones consecutivas del eluyente, que
sern examinadas posteriormente para determinar su composicin.
El naranja de metilo es un colorante azoico (los azo-derivados contienen el agrupamiento N=N-,
son compuestos intensamente coloreados y muchos se emplean como colorantes) que se utiliza
como indicador cido-base y es amarillo en medio bsico y rojo en medio cido. El violeta cristal es
un colorante derivado del trifenilmetano. Ambos compuestos son muy polares y sus estructuras son:
+

HN (CH3)2

Cl

(CH3)2

NH
(CH3)2

NH

SO3

Azul Victoria

Na

Naranja de Metilo

MATERIALES Y REACTIVOS

Montaje para cromatografa


columna
5 Tubos de ensayo
1 Embudo de caa
1 Beaker
1 Erlenmeyer
5gr de Almina
1 Varilla de vidrio

de

1 Pipeta de Pasteur
1 Vidrio de reloj
Algodn
Arena
80 mL de Agua destilada
70mL de Etanol 98%
2 mL de Solucin preparada de azul
victoria y naranja de metilo (1/1).

PRCTICAS DE LABORATORIO QUMICA ORGNICA

PROCEDIMIENTO
Se sujeta la columna, en posicin vertical, a un soporte utilizando dos pinzas: una cerca de la llave
y otra en la parte superior y se introduce un pequeo copo de algodn en su extremo inferior. Se
coloca un Erlenmeyer debajo de la columna y un embudo en la parte superior.

Llene la columna con etanol hasta el fondo del embudo. Prepare una mezcla de 4,0gr de almina y
8 mL de etanol en un vaso pequeo. Agite la mezcla suavemente para eliminar burbujas de aire y
vierta rpidamente al embudo. Raspe el slido que queda en el embudo. Luego de aadir la almina
a la columna, abra la llave y permita que el disolvente se escurra lentamente a un matraz Erlenmeyer.
Use el etanol que baje para enjuagar el vaso con la almina. Segn se aade la almina, dele golpes
suaves a la columna, con la parte de goma de su agitador de vidrio, para que el empaque se
acomode, sin dejar espacio vacios. Coloque una capa fina de arena sobre este empaque.
Ajuste la altura para que, debajo, pueda alinear una serie de 4 tubos de ensayo colocado en la
gradilla. Estos servirn para recoger sus fracciones. Rotlelos N1, N2, N3 y N4.
Permita que empiece un goteo moderado de solvente y recoja este en el tubo de ensayo N1.
Durante este proceso, siga aadiendo disolvente, segn sea necesario, para evitar que nunca se
seque la superficie superior de la columna.
Dejar que casi se acabe el disolvente y aada 3 gotas de la mezcla de tintes al tope de la columna.
Aada etanol y comience a recoger en el tubo N1 hasta que vea que empieza a salir lquido con
color. En ese punto, cambie le tubo y empiece a recoger la primera fraccin con color en el tubo de
ensayo N2. Aada etanol, segn sea necesario para evitar que se seque la columna y siga
recogiendo esta fraccin hasta que vea que las gotas salen incoloras. ( para notar esto mejor,
coloque un papel blanco detrs de las gotas que van cayendo).
Cambie entonces al tubo de ensayo N3 y empiece a aadir agua hasta que el lquido eluido tenga
color nuevamente. Cambie ahora al tubo de ensayo N4 y recoja la fraccin del ltimo tinte, siempre
aadiendo agua para que se eluya este.

RESULTADOS
Mida y reporte el volumen de cada fraccin y analice la separacin obtenida

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