Instituto

Politcnico
Nacional
Escuela
Nacional de
Ciencias
Biolgicas
Bioqumica y
Biologa
Molecular

Aislamiento de
DNA plasmdico

Introduccin
Los plsmidos son molculas
pequeas de DNA circular
(entre dos y varios cientos de
kilo bases) que se replican de
forma
autnoma
e
independiente del cromosoma
de
la
clula.
Son
muy
comunes
en
bacterias
y
algunos de ellos, los ms
pequeos, existen en las
clulas bacterianas en un
nmero elevado (hasta 100
copias
por
clulas).
Los
plsmidos
son
una
herramienta fundamental en
Biologa Molecular e Ingeniera
Gentica ya que se pueden
usar como "vectores" para
introducir en ellos cualquier
fragmento de DNA de inters
y, de esta forma, amplificarlo
de forma natural dentro de la
bacteria en la que el plsmido
se replica. El mtodo utilizado
para la obtencin de plsmido
en
esta
prctica
se
denomina lisis alcalina y se
basa en la desnaturalizacin
selectiva
del
DNA
cromosmico
mediante
alcalinizacin con NaOH y
adicin de SDS (detergente),

en condiciones en las que el

DNA plasmdico permanece
prximo
a
su
estructura
nativa, debido principalmente
a su pequeo tamao y su
naturaleza circular y sper
enrollada. Al neutralizar el
medio y aadir una alta
concentracin de sal (acetato
potsico),
se
produce
la
precipitacin de gran parte de
las
protenas
debido
al
tratamiento con SDS y a la
alta concentracin de sales.
Tambin precipita el DNA
cromosmico, probablemente
porque
se
producen
re
asociaciones al azar entre las
diferentes regiones de este
DNA
y
as
se
forman
agregados insolubles. Por el
contrario, no precipita el DNA
plasmdico, que queda en el
sobrenadante. La utilizacin
de un kit comercial para la
purificacin
del
DNA
plasmdico permite obtener de
una forma rpida y sencilla y
con un alto rendimiento un
DNA de gran calidad utilizando
reactivos no peligrosos en
comparacin con los mtodos
tradicionales que utilizan fenol
u otros reactivos txicos.

Objetivos

Aislar
DNA
plasmdico
bacteriano,
comprobando
dicho aislamiento mediante
electroforesis
en
gel
de
agarosa.

aplicaciones se recorri a lo
largo
del
gel
sin
desnaturalizarse o que se
haya desdoblado o destruido
el DNA circular, aislando as el
DNA.

Resultados
Conclusiones

Electroforesis de DNA en placa de gel de

agarosa revelada con Bromuro de etidio en
transiluminador.

Discusin de resultados
Ya que no se cont con el gel
de agarosa, se recurri a
observar una placa de gel de
agarosa
ya
revelada
anteriormente, en la cual se
pudo observar que el DNA
plasmidico
en
ciertas

Con el desarrollo de la
prctica, se comprob que,
por medio de la electroforesis,
es un buen mtodo para aislar
el DNA plasmidico de una
bacteria, solo que requiere un
proceso cauteloso y delicado
para lograr con xito el
aislamiento.

Referencias
Sambrook, J. and D. Russell.
2001. Molecular Cloning: A
Laboratory Manual, 3rd
edition. Cold Spring Harbor,
NY. Pp 5.8, 5.76.