UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA

E.A.P:
Ingeniera Agroindustrial
ASIGNATURA:
Bioqumica - Prctica
TEMA:
Extraccin del ADN

DOCENTE:
BLGA. ACUIC. Carmen Yzasiga Barrera
CICLO:

GRUPO:
III

INTEGRANTES:
Granados Navarro Alonso
Palma Pucutay Fernando
Valverde Arteaga Walter

Chimbote - Per
2016

I.- OBJETIVOS

 Extraer el ADN a partir de una muestra biolgica (hgado de pollo).

Reconocer microscpicamente el ADN.
II.- MARCO TEORICO
El ADN y ARN son biomoleculas que intervienen en el almacenamiento y la
transferencia de la informacin gentica. Son componentes fundamentales
de la clula y constituyen en conjunto, entre el 5 y el 10% del peso seco.
Normalmente no se encuentran solos sino que se hallan formando ncleo
protenas, ya que suelen unirse a determinados tipos de estas, como las
histonas. El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el
ncleo, mitocondrias y cloroplastos, mientras que el ADN se sita
fundamentalmente en el ncleo de la clula y tambin cloroplastos y
mitocondrias en pequeas cantidades. Poseen una importancia manifiesta
por el hecho de que ellos dirigen y llevan a cabo la sntesis de protenas, y
por tanto de las enzimas necesarias para el funcionamiento celular. Por otra
parte el ADN es el vehculo de la herencia que se transmite de padres a
hijos de generacin en generacin.
El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, son
estructuras constituidas por dos pequeos filamentos o brazos, que pueden
ser iguales o desiguales, estn unidos por un punto comn llamado
centrmero, varan en forma y tamao pueden verse fcilmente al momento
de la divisin celular por medio de un microscopio. Adems, existe ADN en
otras estructuras como los virus y dentro de las clulas eucariotas en los
cloroplastos y las mitocondrias.
El ADN es una molcula muy larga y tiende agruparse, de ah la facilidad
para retirarla. El ADN lleva codificada la informacin gentica. En las clulas
eucariontes como son las del hgado de res, se encuentra asociado a
protenas histonas formando la cromatina. Esta se encuentra totalmente
condensada con el fin de ocupar el mnimo volumen posible en el interior de
la clula.
El primer paso en la elaboracin del ADN recombinante es el aislamiento del
ADN donante y el vector. Los protocolos generales para el aislamiento de
ADN han estado disponibles desde antes del desarrollo de la tecnologa del
ADN recombinante, con el uso de estos mtodos el ADN extrado puede
ser nuclear en eucariotas o el genoma principal en procariotas; estos son
algunos de los tipos de ADN requerido para estos anlisis.
El ADN regula la actividad celular, debido a la sntesis de protenas que, en
su gran mayora, son enzimas. La informacin necesaria para la sntesis de
protenas se encuentra en el ADN en forma de clave que esta presentando
por la secuencia de las bases nitrogenadas.
En trminos generales la purificacin o aislamiento de ADN implica el
rompimiento de la estructura que lo contiene y la eliminacin de cualquier
sustancia contamnate o molcula unida a ste, como son las protenas, las
membranas y las sales, etc.

III.- MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS

3.1 EXTRACCION DEL ADN (hgado de pollo)
-

Primeramente en un mortero triturar 10 g de hgado de pollo

seguidamente agregar 15 ml de SFS (Solucin salina Fisiolgica).
Con la ayuda de un embudo y gasas, filtrar el triturado, esto para
eliminar restos de tejido.
En un vaso precipitado colocar 10 ml del filtrado, seguidamente
agregar 5 ml de NaCl 2 M (Sol. Hipertnica).
Luego aadir 2 g de detergente y agitar con una varilla por 10
minutos aproximadamente.(El detergente ayudara a precipitar la
solucin, separar los cidos nucleicos).
Luego muy cuidadosamente agregar alcohol por las paredes del
vaso si es posible ir girando el vaso, esto hasta que se forme dos
capas o fases. En la interface se precipita el ADN.
Con la ayuda de una varilla de agitacin ir moviendo en la misma
direccin y observar cmo se va adviniendo una fibra blanquecina
transparente a simple vista (ADN)
En la varilla sacar una fibra de ADN y depositarlo en una lmina
portaobjeto y agregar el colorante (safranina.)
Dejar actuar el colorante (safranina) por diez minutos, luego llevar
el portaobjeto al microscopio, observar a menor y mayor aumento
y anotar los resultados correspondientes.

IV.RESULTADOS

Se ha observado el producto filamentoso de

la extraccin, mezclado ya que hay
fragmentos de ARN.
Tambin se observ que las protenas y las
grasas se quedan en la parte acuosa de la
mezcla.

Extraccin de ADN
HIGADO DE POLLO

Trituracin

Gasa

Filtracin

Formacion de
capas o fases

Varilla

Coloran
te

15ml de
SSF

Aadir NaCl
2M, 1g
Detergente

Alcohol

Observacin de la fibra
blanquecina (presencia
de ADN)

Preparacion en
fresco de la fibra

DETERMINACION
DE SU
ESTRUCTURA
FIBRILAR (ADN)

Laminas
Portaobjetos

Microscop
io

VI.DISCUSION
La extraccin es un procedimiento de separacin en el que el soluto de una
disolucin se distribuye entre dos lquidos inmiscibles, generalmente uno
acuoso y otro orgnico. La extraccin es una de las tcnicas ms empleadas
para separar compuestos orgnicos de las disoluciones o suspensiones
acuosas en las que se encuentran. Para ello, se agita la mezcla con un
disolvente orgnico inmiscible con el agua y se dejan separar ambas capas.
De este modo, el soluto presente se distribuye entre las fases orgnica y
acuosa de acuerdo con sus solubilidades relativas, siendo la relacin entre la
concentracin de la sustancia en ambos disolventes el llamado coeficiente
de distribucin o de reparto. El ADN lleva codificada la informacin gentica.
En las clulas eucariontes como son las del hgado de res, se encuentra
asociado a protenas histonas formando la cromatina. Esta se encuentra
totalmente condensada con el fin de ocupar el mnimo volumen posible en
el interior de la clula. En la prctica se obtienen buenos resultados
realizando tres o cuatro extracciones consecutivas con un volumen de
disolvente orgnico aproximadamente tres veces menor que el de la fase
acuosa. La eleccin de disolvente depende de la naturaleza de la sustancia
que se desea extraer y de su solubilidad en dicho disolvente.
VII.CONCLUSIONES

El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy

replegado, unido a protenas para formar la cromatina. As, para
extraerlo hubo necesario homogeneizar el tejido y romper las clulas
para separar el ncleo, rompiendo tambin la envoltura nuclear para
liberar su contenido, luego separando el ADN de las protenas que lo
protegen y, por ltimo, precipitndolo para extraerlo de la solucin.
Una vez realizado esto, el ADN apareceri como un agregado de
fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio.
Triturar en fro la muestra de hgado tambin rompe muchas clulas
liberando su contenido.
El NaCl 2M: esta disolucin tan concentrada tiene varios efectos. En
primer lugar provoca un choque osmtico que es capaz de romper
algunas membranas no afectadas por el tratamiento anterior.
Adems, las cargas positivas de los iones Na+ atraern luego las
cargas negativas del ADN mantenindolo en la disolucin.
El detergente completa la rotura de las membranas al disolver y
separar los lpidos de las mismas. Tambin interviene en la
separacin de las protenas que rodean al ADN.

VIII. CUESTIONARIO
1. Qu muestras biolgicas podran utilizarse para extraer
ADN?
TIPOS DE
MUESTR
AS
Hisopos
bucales

Sangre
Lquida

Manchas
de
Sangre

Cabello
con
races

DESCRIPCIN

Hisopos o torundas estriles (dos por persona) que se

utilizan para frotar el interior de las dos mejillas. Son
las muestras estndares utilizadas por nuestro
laboratorio.
La tasa de xito para obtener ADN es del 99 %.
La sangre se puede utilizar sin problema, pero debe enviarse
en un tubo conEDTA-K3 ) como conservante. La heparina de
sodio o de litio no sirve, puesto que impide que el anlisis se
realice correctamente. Para el transporte de la muestra es
muy importante proteger adecuadamente el tubo para evitar
su rotura.
La tasa de xito para obtener ADN es del 90 %.
Se puede utilizar manchas de sangre sobre papel
absorbente (con una mancha de 1 cm 2), sobre tejidos (el
tejido puede interferir en el anlisis, impidiendo obtener
resultados) o sobre objetos (puede resultar difcil extraer el
ADN).
La tasa de xito para obtener ADN es del 75 al 90 %.
Para realizar una prueba de paternidad o de maternidad es
necesario disponer de un mnimo de 3 - 4 pelos con
races. Se puede utilizar los pelos sin races solamente con
la prueba de lnea materna Test de ADNmitocondrial).
La tasa de xito para obtener ADN es del 85 %.

2. Cul es el modelo estructural del ADN?

COSTE
ADICION
AL
Sin
supleme
nto

sin
supleme
nto

supleme
nto
de 90

supleme
nto
de 90

3.

Cules son las funciones del ADN?

La funcin del ADN es contener la informacin gentica hereditaria de la
clula, por la cual se sintetizan las protenas y se desarrollan los
organismos. En especial las enzimas son responsables de la regulacin
de todas los procesos vitales: el crecimiento, la reparacin de tejidos y la
reproduccin.
4. Qu otros colorantes podrn ser usados para visualizar el
ADN?
En el laboratorio, utilizamos diferentes cosas para poder visualizar el
ADN (no creo que sea posible 'teir ' como tal al ADN). Una de ellas es
el bromuro de etidio, que es un agente carcinogeno, as que muy
peligroso.
El bromuro de etidio se intercala en el ADN. Esta propiedad es
bastante buena, ya que el bromuro de etidio emite luz rosada / rojanaranja si se pone en luz ultravioleta.
Muchos laboratorios utilizan otras productos comerciales para
visualizar ADN, ya que bromuro de etidio es considerado como
potente agente carcinogenico, como el SYBR Green de Invitrogen.
Este emite una luz verde, y no es carcinogenico.
5. Cul es la importancia de la prctica?

Comnmente conocida como "huella gentica", la prueba de ADN es

una de las herramientas usadas ms precisas y controvertidas de
identificacin. El papel de las pruebas de ADN se ha expandido de la
validacin histrica de los restos humanos y animales, a determinar
los casos en los juzgados familiares y penales. La extraccin de ADN
a menudo es un paso temprano en muchos procesos de diagnstico
utilizados para detectar bacterias y virus en el medio ambiente, as
como el diagnstico de enfermedades y trastornos genticos.

IV. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Cortez, L.R. 1991. Manual de prcticas de biologa general.
Universidad Nacional de la Libertad. Departamento de Ciencias
Biolgicas. Trujillo, Per.
Gree, E. y Bobrowsky, K. 1970. Laboratorio de Biologa de
Investigaciones. Publicaciones Cultural S.A. D.F. de Mxico.
Villee, C. 1981. Biologa. 7ma. Edicin. Nueva Editorial Interamericana
S.A. Mxico.