PRACTICA NO 1.

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
Objetivo:
Adquirir las competencias necesarias para cuantificar la hemoglobina (Hb) que hay
en toda la sangre circulante y saber si rene los requisitos para donacin.
Fundamento:
La prctica se fundamenta en el uso de una suspensin ferrocianuro de potasio y
cianuro de potasio el primero transforma en hierro ferroso de la hb, esta se combina
con el cianuro de potasio formando cianomera hb. La densidad ptica del color
producido es directamente proporcional a la cantidad de hb presentes puede ser
medida fotomtricamente pudindose cuantificar al compararse en una solucin.
Generalidades:
Hemoglobina
La hemoglobina es una protena conjugada que sirve para el transporte de O2 y
CO2. Cuando est totalmente saturada, cada gramo contiene alrededor de 1'4ml de
O2. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr de hemoglobina
capaces de transportar 800ml de O2.
Una molcula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipeptdicas (unin
de aminocidos) (globina) y 4 grupos prosticos HEM que contienen cada uno un
tomo de Fe en estado ferroso. Las cadenas peptdicas que son iguales 2 a 2
adoptan una posicin helicoidal; lo que da a la molcula de hemoglobina una
estructura esteroide. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una
de las cadenas de polipptidos. Localizado cerca de la superficie de la molcula, el
HEM se combina de forma reversible con una molcula de O2 de CO2. Este grupo
HEM es el responsable del color rojo de la hemoglobina.
La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptdicas que se denominan con
las letras , , y . Existe una cadena ms, la que est presente durante los
primeros 3 meses de vida. Se diferencian unas de otras en el nmero o posicin (de
los aminocidos de los que estn compuestas). Por lo tanto, existen varios tipos de
hemoglobinas.
1

En el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:

Hemoglobina a: consta de 2 cadenas y 2 cadenas . En un adulto normal
corresponde a ms del 95% del total.
Hemoglobina a2: consta de 2 cadenas y 2 cadenas . En un adulto sano
est en proporcin menor al 3%.
Hemoglobina f fetal: consta de 2 cadenas y 2 cadenas . Es la
Hemoglobina principal en el feto desde el 4 mes de embarazo hasta
aproximadamente los 6 meses de edad. La HB F tiene mayor afinidad por el
O2.
Hemoglobina gower: consta de 2 cadenas y 2 cadenas

. Desaparece

casi por completo en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la HB

F.

Funciones:
La principal funcin de la hemoglobina es el transporte del O2 de los pulmones
donde la tensin es elevada hacia los tejidos donde es baja. A una tensin de O2
de 100mmHg en los capilares pulmonares del 98% de hemoglobina se combina con
el O2. En los tejidos donde la tensin de O2 puede descender hasta 20 mmHg el
O2 se disocia fcilmente de la hemoglobina; en este caso menos de un 30% del O2
puede permanecer combinado con la hemoglobina.
La hemoglobina educida es hemoglobina con su hierro no asociado a no unido al
O2. Cuando cada grupo HEM se asocia con una molcula de O2, la hemoglobina
corresponde a la oxihemoglobina. Tanto en la hemoglobina como la oxihemoglobina
el hierro permanece en estado ferroso Fe+2. Con el hierro oxidado al estado frrico
Fe+3 la molcula pierde la capacidad de transportar el O2 y/o el CO2.
La anemia que es una disolucin de la concentracin de hemoglobina por debajo
de lo normal y casi siempre del nmero de eritrocitos o del hematocrito, constituye

una alteracin muy corriente y una frecuente complicacin de otras enfermedades.

El diagnstico clnico de la anemia basado en la estimacin del color de la piel y de
las mucosas visibles es de poca garanta. Para complicar ms la anemia suele estar
enmascarado en muchos procesos por
otras manifestaciones. Por estas razones la estimacin correcta de la hemoglobina
es importante y una de la prueba habitual que debe llevarse

a cabo en casi todos

los pacientes.
La anemia no constituye una enfermedad en s misma, sino que debe ser
considerada como un sndrome derivado de algn trastorno en algn sistema.
Quiere esto decir que siempre que aparezca

una anemia debe buscarse otra

enfermedad o trastorno primario que la motive. No obstante, todas las anemias

coinciden en la aparicin de unos sntomas y signos clnicos que la caracterizan y
que se presenta en todo caso. A una concentracin de hemoglobina de 16gr por
100ml se ha convenido en darle el valor arbitrario de 100%.
Espectrofotometra:
En la espectrofotometra se aprovecha la absorcin de radiacin electromagntica
en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la
radiacin incidente en este espectro y promueve la transicin del analito hacia un
estado excitado, transmitiendo un haz de menor energa radiante. En esta tcnica
se mide la cantidad de luz absorbida como funcin de la longitud de onda utilizada.
La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las molculas, y es caracterstica de cada sustancia qumica.

La espectrofotometra ultravioleta-visible utiliza haces de radiacin del espectro

electromagntico, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380
a 780 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin
ultravioleta y visible del espectro.

 Ley de Beer
La Ley de Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de
la concentracin en la solucin.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azcar disuelta y en otro vaso
tenemos la misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azcar en solucin.
El detector es una celda fotoelctrica, y lo que se mide es la concentracin de la
solucin de azcar.

Segn la ley de Beer, si hiciramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la
cantidad de luz que saldra del otro lado sera mayor que si repitiramos esto en el
segundo, ya que en este ltimo las ondas electromagnticas chocan contra un
mayor nmero de tomos o/y molculas y son absorbidos por estos.
Ley de Lambert
La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de
la distancia recorrida por la luz.
Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pensemos que ambos tienen la
misma cantidad de agua y la misma concentracin de azcar; pero el segundo tiene
un dimetro mayor que el otro.

Material
Material para extraccin
sangunea
2 tubos de ensaye de 13 x
100 1

Equipo
Espectrofotmetro con
adaptador (acuglobin) y
4 celdas

Reactivos
E.D.T.A
Solucin de drabkin
Ampolleta de
solucin estndar

1 pipeta graduada de 5ml

1 pipeta de sahli con
boquilla

Tcnica:

Realiza una flebotoma.

1. Colocar en un tubo de ensaye exactamente 5 ml de solucin diluyente de

drabkin

2. Las muestras de la sangre se trasladan exactamente 0.02 ml (20 micro litros)

de sangre entera con la pipeta de shaly al tubo de ensaye que contiene el
diluyente, enjuagando la pipeta varias veces con el mismo.
3. Se mezcla la sangre y el diluyente invirtiendo varias veces el tubo .se deja en
reposo

durante

10

minutos

para

permitir

la

formacin

de

la

cianometahemoglobina, la cual es estable por varias horas.

4. Se ajusta la escala de longitud de onda del espectrofotmetro a 540 nm

5. Se emplea como banco agua destilada o la solucin diluyente. La luz que

absorbe el diluyente a 540 nm es insignificante.
6. El banco se ajusta a 100 en la escala de transmitancia o a 0 en la escala de
densidad ptica o absorbancia.
7. Leer la densidad ptica del problema y calcular la concentracin de
hemoglobina en la curva de calibracin o mediante el factor correspondiente.
Calculo:
= absorvancia X factor
= 0.36 X 36.5
= 13.14

Resultados:
PACIENTE: CARLA HUERTA GARCIA
EDAD: 17 AOS

FECHA: 05/09/2016

SEXO: FEMENINO

MDICO TRATANTE: A QUIEN CORRSPONDA

EXAMEN

RESULTADO

U.M

BIOMETRA HEMTICA
HEMOGLOBINA

13.14

gr/dl

VALORES
REFERENCIA

DE

Varones

Mujeres

13.5 17.5

12.0 16.0

Celda del espectrofotmetro

Espectrofotmetro

Conclusin:
En esta prctica logramos realizarla de manera concreta y sin ninguna complicacin,
solo que se cambi de paciente pues fue errnea la extraccin del primero, pero al
segundo paciente se le realizo correctamente la flebotoma.
Bibliografa:
Quiroga Cira, BIOQUMICA MDICA II DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA.
Recuperado

de:

http://www.geocities.ws/jorgecon/HEMOGLOBINA-guia.pdf

consultado: 28/04/16

PRACTICA NO 2. DETERMINACION DE HEMATOCRITO

Objetivo:
Adquirir la competencia necesaria para identificar la importancia y tilidad clinca de
hematocrito y tilidad clnica de hematrocrito para descartar una probable anemia del
donante.
Fundamento:
El hematocrito volumen globular porcentual, se basa en el uso de la microcentrifuga,
a una velocidad de centrifugacin de 10 000 R.P.M y por lo tanto se obtiene un
volumen constante de paquete globular en un tiempo corto (aproximadamente 5
minutos), utilizando un pequeo volumen de sangre para medir la porcin de la
sangre compuesta por glbulos rojos, para determinar el volumen de glbulos rojos
que transportan oxgeno a travs de la corriente sangunea a todas las clulas del
organismo.
Generalidades:
La prueba de hematocrito forma parte de un conteo sanguneo completo (CSC). La
proporcin de glbulos rojos en comparacin con todas las clulas sanguneas
puede ayudar a tu mdico a hacer un diagnstico o controlar como responde tu
cuerpo a un tratamiento.
El hematocrito es un simple anlisis de sangre, por lo tanto, no tendrs que estar en
ayuno antes de someterte al examen, al igual que tampoco debers hacer ningn
otro preparativo. Los resultados de tu hematocrito sern reportados como el
porcentaje de clulas de la sangre que son clulas rojas. El rango normal se
encuentra entre el 38,8 y el 50 por ciento para los hombres y entre el 34,9 y el 44,5
por ciento para las mujeres. El rango normal de hematocrito en los nios de hasta
15 aos
Vara segn la edad y el sexo. Los lmites altos y bajos para el valor normal de
hematocrito pueden variar en cierta medida de una prctica mdica a otra.

El resultado de tu prueba de hematocrito es slo una parte de informacin que

ayuda a tu mdico a evaluar tu salud. Habla con tu mdico acerca de lo que significa
el resultado de la prueba de hematocrito a la luz de los sntomas que ests
experimentando y de los resultados de otras pruebas diagnsticas.

Material
Material para extraccin
sangunea

Equipo
Mechero bunsen
Microcentrifuga

Un tubo capilar para

Reactivos
E.D.T.A
Muestra

biolgica

(sangre

hematocrito
Tubo de ensayo de 13 x 100

Tcnica:

Realizacin de flebotoma

1. Sumergir en una muestra de sangre con anticoagulante la punta del tubo

capilar colocndolo horizontalmente para que por capilaridad la sangre
hacienda por el tubo, de manera que se llene 3 cuartas partes de su longitud

2. Posteriormente llevar la punta de del capilar a la llama para sellarlo, de

manera que quede en fondo y que al centrifugar la sangre no se salga del
capilar.

3. Una vez sellado el capilar colocarlo en una micro

centrifuga y centrifugarlo durante 5 minutos a 10
000 R.P.M. esto separa a los eritrocitos de
plasmas y deja una banda de leucocitos y
plaquetas en la superficie de separacin.

4. Una vez centrifugando en tubo capilar, leer el

hematocrito como aquel porcentaje de toda la
sangre venosa ocupada por los eritrocitos, esto
puede hacerse con un tubo capilar de calibre
constante o bien obtenido una proporcin de
distancia

utilizado

un

``lector

para

micro

hematocrito.
Calculo:

Hct =
Hct =

altura de eritrocitos
altura volumen total
2.4
5.2

x 100

x 100

Hct = 46.15 %
Resultados:
PACIENTE: CARLA HUERTA GARCIA
EDAD: 17 AOS

FECHA: 06/09/2016

SEXO: FEMENINO

MDICO TRATANTE: A QUIEN CORRSPONDA

Examen

Resultado

U.M

Biometra hemtica
Hematocrito

46.15

Valores de referencia
Varones

Mujeres

41.0 51.0

36.0 45.0

Conclusin:
La prctica de manera correcta sin dificultades. Esta prctica debe ser realizada
correctamente para que no se den falsos negativos o falsos positivos. Se debe tener
cuidado cuando se llena el capilar y hacerlo correctamente. La paciente se
encuentra dentro de los valores normales.

Bibliografa:
Cortes

Esmeralda

(2013)

Hematocrito.

Recuperado

http://www.fisiologia.medica/images/7/7d/info-hemato-recuento_5.pdf
28/04/16

10

de:

Consultado

PRACTICA NO 3. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO

Objetivo:
Adquirir las competencias necesarias para determinar un grupo sanguneo de
acuerdo con las aglutinaciones que presente.

Fundamento:
Esta prueba se basa en la demostracin de un antgeno en la superficie de los
eritrocitos al hacer reacciones la sangre con antisuero especifico.
Los glbulos rojos contienen en la membrana celular diferentes tipos de sangre
existen principalmente dos tipos de protena que determina el tipo de sangre, la
protena A y B.

Generalidades:
Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre
en base a la presencia o ausencia de determinadas molculas, llamadas antgenos,
en la superficie de los glbulos rojos. Existen muchos grupos sanguneos, pero entre
todos ellos destacan por su importancia a la hora de la transfusin los grupos
pertenecientes al sistema ABO y Rh.

EL SISTEMA Rh
En 1940 se descubri otro grupo de antgenos (D) que se denominaron factores
Rhesus (factores Rh) porque fueron descubiertos durante unos experimentos con
simios del tipo Macaccus Rhesus. Segn este grupo sanguneo, las personas con
factores Rhesus en su sangre se clasificaran como Rh positivos; mientras que
aquellas sin los factores se clasificaran como Rh negativos, y slo podrn recibir
sangre de donantes Rh negativos.

11

Material
Material para extraccin

Equipo
Placa de reaccin

sangunea

Reactivos
E.D.T.A
Suero anti A

Pipeta Pasteur

Suero anti B

Tubo de ensayo de 13 x

Suero anti AB
Suero anti D

100

Tcnica:
1. Colocar en la placa una gota se suero anti-A, una de anti-B, una mezcla de
anti-A y anti-B, y una gota de anti-D, cada una en su casilla correspondiente.
2. Despus colocar gotas de sangre de tres diferentes pacientes.
3. Homogenizar con los aplicadores de madera.
4. Observar la aglutinacin.

12

Resultados:
PACIENTE: CARLA HUERTA GARCIA
EDAD: 17 AOS

FECHA: 06/09/2016

SEXO: FEMENINO

MDICO TRATANTE: A QUIEN CORRSPONDA

Examen

Resultado

Grupo sanguneo
Primera muestra (carla)

O+

Segunda muestra

AB-

Tercera muestra

B-

Interpretacin:
La primera muestra fue O+ ya que no aglutino en anti A, anti B y anti AB pero
presento aglutinacin en anti D.
La segunda muestra resulto AB- ya que, si presento aglutinacin en anti A, anti B y
anti AB, pero no aglutino en anti D.
La tercera muestra presento aglutinacin en anti B y AB y no presento en anti A y
anti D siendo del grupo B-.

13

Conclusin:
La variedad de grupos sanguneos, dificulta muchas veces la donacin de
rganos, pues puede producir aglutinacin o hemolisis inmediata o tarda de los
hemates con las tpicas reacciones transfusionales que con frecuencia causan la
muerte.
Bibliografa:
Mauri, Claudia; Bosma, Anneleen (2003) grupos sanguneo y Rh Medica
Panamericana.

14

PRACTICA No 4. DETERMINACION DEL SISTEMA ABO EN TUBO

Objetivo:
Adquirir la competencia necesaria para la determinacin de aglutingenos y
antininas en una muestra sangunea con una persona donante.

Fundameto:
Esta prueba se encuentra constituida por dos partes en la primera se determina los
aglutingenos en forma directa usando eritrocitos problema, as como anti sueros A
y B esta se conoce como tipado globular la segunda parte se le conoce como
contratipado serio o prueba inversa en el que se confirma el grupo sanguneo de la
persona investigando sus aglutininas con glbulos con aglutingenos conocidos.

Generalidades:
EL SISTEMA ABO
En este caso la sustancia que determina el grupo sanguneo
son los azcares, y segn su composicin encontramos
cuatro grupos: A, B, AB y O. En cada uno de estos grupos
los hemates tienen un antgeno que los diferencia, el grupo
A tiene el antgeno A, el grupo B tiene el antgeno B, el
grupo AB tiene los dos antgenos y el grupo O no tiene
antgeno A, ni B.
Antgeno
Son sustancias que actan como antgeno y estimulan la produccin de aglutinas lo
que produce el aglutinamiento de los agentes patgenos
Aglutinas
Son producidas por las mismas clulas que producen los anticuerpos frente a
antgenos extraos

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Material
Material para extraccin
sangunea con geringa

Equipo
Centrifuga

Reactivos
E.D.T.A
Muestra sangunea

6 tubos de ensayo

Solucin salina

Pipeta pasteur

Suero anti A
Suero anti B
Suero anti AB

Tcnica:
1. Se extraen 5ml de sangre y se divide en dos tubos, 3ml en un tubo sin anti
coagulante y 2ml en un tubo con E.D.T.A.
2. Se separa el suero, los eritrocitos problema se lavan tres veces con solucin
salina y se hace suspensin al 2% en solucin salina.
3. Se obtienen eritrocitos patrn de A, B, y O lavados tres veces y suspendidos
al 2% en solucin salina.
4. Se rotulan dos tubos del 1 al 6 los primeros (1 al 3) constituyen al tipado
globular donde se agrega una gota de eritrocitos problema al 2% ms una
gota de anti suero A al tubo 1, al 2 anti suero B y al 3 anti suero AB..
5. Se agita los tubos suavemente y se centrifuga a 300rpm durante 1minuto
6. Agitar suavemente para desprender el botn de eritrocitos.
7. La aglutinacin nos indica la presencia de aglutingeno o aglutinina.

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Resultados:
PACIENTE: MARIA HERNANDEZ JIMENEZ
EDAD: 17 AOS

FECHA: 12/09/2016

SEXO: FEMENINO

MDICO TRATANTE: A QUIEN CORRSPONDA

Examen

Resultado

Grupo sanguneo
grupo sanguneo

Interpretacin:
En nuestro equipo el tipo de sangre fue ``A por que presento aglutinacin
en los tubos 1, 3, 5 presenta antgenos A, por lo tanto, aglutino en el A.A. y
anti A-B porque presenta los mismos antgenos y posee anticuerpos B por
eso aglutino en el tubo 3

Conclusin:
Adquirimos las competencias para realizar y determinar los aglutingenos y
antininas de la muestra de un donante

Bibliografa:
Bernadette F. Rodak (2005) Hematologa: grupos sanguneos ABO Mexico: la
determinacin del grupo sanguneo

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