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Practica 1: EXTRACCIN DE ADN EUCARIOTICO

Introduccin
El bioqumico suizo Friedrich Miesches fue el primero en
descubrir cidos asociados con las protenas del ncleo celular. Al
estudiarlas mejor, Miesches comprendi que estas sustancias son
bastante diferentes de las protenas y de otros compuestos conocidos.
La unidad bsica de un cido nucleico es el nucletido, cada molcula
de cido nucletido se forma como una larga cadena de 4 clases de
nucletidos, a su vez los nucletidos pueden ser fragmentados en 3
partes; una de esas partes es siempre un azcar de 5 carbonos y que
son la ribosa y la desoxirribosa, los cidos nucleicos que contienen
ribosa se denomina cido ribonucleico o ARN y los cidos nucleicos
que contienen desoxirribosa se denominan cido desoxirribonucleicos
o ADN.
En la naturaleza, el DNA se localiza en el ncleo de las clulas
eucariticas en forma de desoxirribonucleoprotena. El aislamiento requiere su
extraccin de la clula y posterior separacin de la protena asociada .
Objetivo:
Utilizar tcnicas sencillas para poder extraer el ADN de un tejido
animal y por el
aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar y confirmar que
en el ncleo el ADN se encuentra replegado
Materiales:
Hgado de pollo
1 Probeta de 100 ml
Varilla de vidrio
Alcohol de 96
1 Mortero
Cloruro sdico 2M
2 Vasos de precipitado 500 ml
SDS
1 Pipeta
Arena
1 Portaobjetos
1 cubreobjetos
Trozo de tela para filtrar
Azul de metileno
1 microscopio
Procedimiento:
1. Triturar medio hgado de pollo en un mortero. Aadir arena para
que al triturar se puedan romper las membranas de las clulas y
queden los ncleos sueltos.
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2. Aadir al triturado, 50 ml de agua. Remover hasta hacer una


especie de papilla.
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos
que hayan quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con esto
conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden
libres las fibras de cromatina.
6. A continuacin se aade 1 ml de SDS. (Nota: Si no se dispone de
este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas. La
accin de este detergente es formar un complejo con las protenas y
separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las protenas que
tiene asociadas.
7. Aadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hay que
hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se
formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN.
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma
direccin. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas,
visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupacin de
muchas fibras de ADN.
9. Tincin especfica de ADN: tenemos que tomar una muestra de las
fibras que se van depositando sobre la varilla de vidrio y depositarlas
sobre un portaobjeto.
10. Teir durante unos minutos con un colorante bsico.
11. Observar al microscopio.
Referencias:
Griffith. 2002. Genetica. Mc. Graw-Hill.
Carey, J., Bamshad M., Jorde L. 2010. Gentica medica. Elsevier
Espaa S.A.

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