RECONOCIMIENTO DE MOLECULAS

ORGNICAS
INTRODUCCIN

La clula como organismo vivo requiere establecer continuo contacto

con el medio exterior que la rodea, o bien eliminando las sustancias de
desecho; o permitiendo el ingreso de otras a travs de las membranas.
El movimiento de molculas de agua a travs de una membrana
diferencialmente permeable es un caso especial de difusin, conocido
como smosis. El contenido celular tiene generalmente varios tipos de
solutos, los cuales disminuyen la energa libre del agua en ese sistema.
As si ubicamos una clula en agua destilada o en una solucin de menor
concentracin de solutos respecto a la osmolaridad celular, el agua
tender a ingresar a la clula; se dice en este caso que la solucin es
HIPOTNICA respecto al contenido celular. En el caso inverso, si
ubicamos una clula en una solucin HIPERTNICA (de mayor
concentracin de solutos) el agua tender a salir. Por ltimo si la
concentracin de solutos de la solucin es igual a la existente en el
interior celular, el flujo neto ser cero y la clula mantendr su
contenido de agua original, en este ltimo caso se dice que la solucin
es ISOTNICA. En el caso de las clulas que no tienen pared celular, al
sumergirlas en una solucin hipotnica se produce CITLISIS, y si se
ubican en una solucin hipertnica el volumen celular disminuye
visiblemente producindose CRENACIN. En el caso de las clulas
vegetales, no se produce CITLISIS ni CRENACIN, ya que por fuera de
la membrana plasmtica, existe una estructura rgida, capaz de soportar
cierto nivel de presin y que no cambia su volumen, an cuando s
ocurra esto con su contenido. Cuando una clula vegetal se sumerge en
una solucin hipotnica la clula absorbe agua; pero no aumenta su
volumen sino que el contenido celular ejerce una mayor presin (presin
de turgor) y la pared celular opone una presin en sentido opuesto
(presin de pared), por ello la clula no se deforma. Es importante
indicar que normalmente las clulas vegetales se encuentran en este

estado, es decir trgidas. Al ubicar una clula vegetal en una solucin

hipertnica, sta perder agua, el contenido celular dejar de ejercer
presin de turgor y se separar de la pared celular. Este estado se
conoce como PLASMLISIS.

OBJETIVOS

Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a

travs de la difusin en una membrana celular por medio de la
hemlisis

Aprender a realizar la determinacin de la fragilidad osmtica de

los eritrocitos para demostrar el fenmeno de osmosis.

Observar el efecto de la concentracin del medio sobre las clulas

vegetales y animales.

Objetivos Observar y analizar la difusin y la smosis a travs de

membranas de clulas vegetales.

MARCO TERICO
La
membrana
plasmtica,
membrana
celular
o
membrana
citoplasmtica, es una bicapa lipdica que delimita todas las clulas. Es
una estructura laminada formada por fosfolpidos, glicolpidos y
protenas que rodea, limita, da forma y contribuye a mantener el
equilibrio entre el interior (medio intracelular) y el exterior (medio
extracelular) de las clulas.
Regula la entrada y salida de muchas sustancias entre el citoplasma y el
medio extracelular. Es similar a las membranas que delimitan los
orgnulos de clulas eucariotas. La membrana participa en la regulacin
de la presin osmtica que regula la concentracin de las sustancias
disueltas en el interior de la clula.
Este proceso tiene que ver con la smosis que es un fenmeno fsico
relacionado con el movimiento de un solvente a travs de una
membrana semipermeable. Tal comportamiento supone una difusin
simple a travs de la membrana, sin gasto de energa. Este proceso es
muy importante para el metabolismo celular.
Existen 3 situaciones en el medio extracelular:
Solucin Isotnica: La concentracin del medio externo es igual a la
del interior de la clula y por ende no hay alteraciones
Solucin Hipertnica: La concentracin extracelular es mayor a la del
interior de la clula y la clula comienza a perder agua
Solucin Hipotnica: La concentracin extracelular es menor que la
del interior de la clula y el agua empieza a entrar provocando que la
clula ce hinche incluso en algunos casos provocando la ruptura de la
membrana celular
Plasmlisis: cuando el medio extracelular es hipertnico con respecto
al medio intracelular, sale el agua del interior de la clula por smosis y
se produce la plasmlisis, que en el caso de las clulas vegetales
provoca la rotura de la clula al desprenderse la membrana plasmtica
de la pared celular.
Turgencia: cuando el medio extracelular es hipotnico con respecto al
medio intracelular, se produce la entrada de agua en la clula, lo que
ocasiona un aumento del volumen celular, que en el caso de las clulas
animales, especialmente en los glbulos rojos provocara su estallido o
hemlisis, mientras que en los vegetales se producir un hinchamiento o
turgencia.

Fragilidad osmtica
La prueba de fragilidad osmtica es una medida de la resistencia del
eritrocito, a la hemlisis por estrs osmtico, la cual depende
principalmente del volumen de la clula, del rea de su superficie y de la
funcin de su membrana. Los eritrocitos se incuban en solucin
hipotnica de NaCl, los eritrocitos absorben agua en un esfuerzo para
conservar o para lograr el equilibrio osmtico, y las clulas se hinchan
hasta que se forma un esferocito.
La captacin adicional del agua produce una membrana porosa que
permite la liberacin de hemoglobina (hemlisis). Las clulas normales
comienzan a hemolizar a concentraciones de NaCl cercanas a 0.50% y la
hemlisis es completa a una concentracin aproximadamente de 0.30 %
de NaCl. Debido a la disminucin en la proporcin de superficie a
volumen, los esferocitos son incapaces de expandirse tanto como las
clulas normales deforma discoide. Se necesita absorber muy poco
lquido antes que las clulas se hemolicen. Los esferocitos tambin
tienen un aumento en la permeabilidad dela membrana, la cual
contribuye al aumento de su fragilidad.

PARTE EXPERIMENTAL
FRAGILIDAD OSMTICA EN ERITROCITOS

I.

MATERIALES

MATERIAL DE VIDRIO, EQUIPOS, OTROS:

Centrfuga.
Gradilla.
16 tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Equipo de venopuncin.
Papel parafilm.
Pipetas graduadas de 5 ml.
Pipeta graduada de 0.2 ml.
EDTA.
Solucin salina al 1% tamponada (pH 7.4).
Detergente
Escobilla lavatubos

MUESTRAS
MATERIAL GRUPAL:

5 AGUJAS N 21 (para extraccin de sangre fresca obtenida con

EDTA)
1 Liga para brazo (para extraccin de sangre)
2 Tubos con anticoagulante (EDTA- tubo Lila)
Fsforo

MATERIAL PERSONAL

Gorro
Mascarilla
Guantes
Marcador indeleble
GUIA DE PRCTICA

II.

PROCEDIMIENTO

1. Obtener 5 ml de sangre venosa y mezclar con cuidado con el

anticoagulante EDTA.
2. Colocar 16 tubos de ensayo en una gradilla y enumerarlos (del 1 al
16) de izquierda a derecha.
3. Montar la prueba de la siguiente manera:

4. Mezclar cuidadosamente el contenido de los tubos.

5. Agregar a cada tubo 0.2 ml de sangre. Invertir cuidadosamente
cada tubo con papel parafilm, para asegurar la mezcla.
6. Las gradillas que contienen los tubos se dejan reposar a
temperatura ambiente durante 30 minutos.
7. Transcurrido el tiempo indicado se mezcla cuidadosamente su
contenido y se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 5
minutos.
8. Examinar los tubos observando macroscpicamente en que punto
comienza la hemlisis y en qu punto es completa. El menor
indicio de color rojo en el lquido sobrenadante indica el inicio de la
hemlisis de los glbulos menos resistentes; la hemlisis completa
queda indicada por una solucin rojo claro y ausencia de
eritrocitos residuales en el fondo del tubo o enturbiamiento al
agitar el tubo ligeramente.

III.

RESULTADOS Y DISCUCIN

IV. CONCLUSIONES

PLASMLISIS EN CLULAS DE HOJA DE ELODEA

I.

MATERIALES
Reactivos: NaCl al 10 %, agua destilada.
Material de vidrio: Porta y cubre objetos,
Equipos: Microscopio compuesto.

MUESTRAS
MATERIAL GRUPAL:

HOJAS DE ELODEA (mximo 10 hojas)

Pinza de metal (cosmtica)
5 Vasos descartables
5 goteros simples de plstico o vidrio

MATERIAL PERSONAL

II.

Gorro
Mascarilla
Guantes
Marcador indeleble

PROCEDIMIENTO

1. Rotular 3 vasos descartables ( vaso 1= solucin isotnica, vaso 2=

solucin hipertnica y vaso 3 =solucin hipotnica)
2. Cortar una ramita de ELODEA que se encuentra en su agua normal e
introducirlo al vaso n 1 (sol.Isotnica).
3. Adicionar al vaso n 1, 20 ml de agua normal que contena la ELODEA.
4. Cortar una ramita de ELODEA que se encuentra en su agua normal e
introducirlo al vaso n 2 (sol.hipertnica).
5. Adicionar al vaso n 2, 20 ml NaCl al 10 %, dejar reposar mnimo 10
minutos.
6. Cortar una ramita de ELODEA que se encuentra en su agua normal e
introducirlo al vaso n 3 (sol.hipotnica).
7. Adicionar al vaso n 3, 20 ml de agua destilada, dejar reposar mnimo
10 minutos.

8. En el centro de un portaobjetos limpio, colocar una gota de agua del

vaso n 1 y luego una hoja de Elodea, colocar el cubreobjetos. Observe
al microscopio las caractersticas morfolgicas de las clulas a mediano
y mayor aumento, y esquematice.
9. Repetir la misma situacin con el vaso n 2 y n 3
10. Compare las 3 observaciones de hojas de ELODEA en diferentes
soluciones
11. Analice, esquematice y explique.

III.

RESULTADOS Y DISCUCIN

CONCLUSIONES

La capacidad que tiene la clula de ser semipermeable posibilita la

buena interaccin extracelular y una adecuada respuesta a ciertos
estmulos externos de los cuales depende la clula para su
subsistencia.

Al probar la permeabilidad celular de las clulas vegetales la pared

celular que poseen cumple un papel importante protegiendo a la
clula de la ruptura de la membrana al someterlo a un medio
hipotnico.

Los procesos de ingreso de sustancias se dan en distintos medios

y por lo tanto difieren en los mecanismos de transporte.

Estos mecanismos de transporte son los responsables del eficiente

desarrollo del metabolismo celular.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico.

Segunda edicin. Editorial Revert. Pgs. 55-61
Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F.
Primera edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 89-91
Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial
McGraw Hill. Pgs. 34-39
Mckenzie, S. 2000. Hepatologa clnica Editorial El Manual
Moderno. Segunda edicin. Mxico D.F. Pgs. 104-112
Lynch, M. 1992. Mtodos de laboratorio. Mxico. Segunda
edicin. Editorial interamericana. Pgs. 358-365
Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico.
Novena edicin. Editorial Oxford. Pgs. 68-70, 622-626

CUESTIONARIO

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Establezca las diferencias entre: difusin, dilisis y smosis.

Qu importancia tiene el proceso difusin en los seres vivos?
Qu es fragilidad osmtica?
Qu importancia clnica tiene la fragilidad osmtica?
Qu es la esferocitosis hereditaria?
Qu diferencia existe entre una membrana semipermeable y
una membrana selectivamente permeable?
7. Defina los siguientes trminos: Plasmlisis, hemlisis, presin
de turgencia y presin osmtica.