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BIOQUMICA Y FARMACIA
NOVENO SEMESTRE
SYLLABUS DE LA ASIGNATURA
ANLISIS CLNICO
UDABOL
UNIVERSIDAD DE AQUINO BOLIVIA
Acreditada como PLENA mediante R.M. 288/01
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VISIN DE LA UNIVERSIDAD
Ser la Universidad lder en calidad educativa.
MISIN DE LA UNIVERSIDAD
Desarrollar la Educacin Superior Universitaria con calidad y
Competitividad al servicio de la sociedad.
Estimado(a) estudiante:
El Syllabus que ponemos en tus manos es el fruto del trabajo intelectual de tus docentes,
quienes han puesto sus mejores empeos en la planificacin de los procesos de enseanza
para brindarte una educacin de la ms alta calidad. Este documento te servir de gua para que
organices mejor tus procesos de aprendizaje y los hagas mucho ms productivos.
Esperamos que sepas apreciarlo y cuidarlo.
SELLO Y FIRMA
JEFATURA DE CARRERA
SYLLABUS
Asignatura:
Cdigo:
Requisito:
Carga Horaria:
Horas Tericas:
Horas Prcticas
Crditos:
ANLISIS CLNICO
LBF 921
BCL 621
240
80
160
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Describir con exactitud los principios fundamentales del trabajo de laboratorio, tomando en
cuenta los principios de bioseguridad.
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11.1.1 Importancia
11.3. Fracciones de colesterol
11.3.1. HDL
11.3.2. LDL
11.4. Triglicridos
11.2.1 Importancia
11.2.2. Variaciones
TEMA 12. ELECTROLITOS
12.1. Composicin de los lquidos corporales
12.2. Sodio
12.3. Potasio
12.4. Calcio
12.5. Cloruros
12.6. Magnesio
12.7. Fsforo
TEMA 13. PROTENAS
13.1. Importancia y clasificacin
13.2. Variaciones de las protenas
13.2.1. Disproteinemias
13.3. Electroforesis de protenas
13.4. Pruebas relacionadas a su alteracin
13.5. Determinacin de Hierro
13.6. Mtodo e interpretacin
TEMA 14. ENZIMOLOGA CLNICA
14.1. Medida de la actividad Enzimtica
14.2. Mtodos cinticos
14.3. Mtodos de punto final
14.4. Mtodos de puntos mltiples
14.5. Origen y libracin de las enzimas
14.6. Metodologa analtica
14.7. Tcnicas colorimtricas y cinticas
TEMA 15. PRUEBAS FUNCIONALES HEPATICAS
15.1. Generalidades
15.2. Test hepatobiliares
15.2.1. Transaminasas
15.2.1.1. Predominio de ALT
15.2.1.2. Predominio de AST
15.2.2.3. Elevaciones de transaminasas
15.2.2. Fosfatasa alcalina
15.2.3. Gammaglutamiltranspeptidasa
15.2.4. Bilirrubina
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Tipo de asignatura
Asignatura de Especialidad
ii.
iii.
Nombre del proyecto al que tributa la asignatura.
Determinacin de valores de rea y creatinina, como diagnstico de insuficiencia renal en
pacientes diabticos que acuden al laboratorio de Anlisis Clnico de la UDABOL, en el periodo
de mayo a junio del 2013
iv.
Contribucin de la asignatura al proyecto.
De acuerdo al contenido programtico de la carrera y la vinculacin de la asignatura con todas
las reas, la relacin entre estas dos determinaciones de anlisis permitir al estudiante hacer
una evaluacin y anlisis del estudio a realizar poniendo en prctica sus conocimientos
acumulados en las diferentes asignaturas y los adquiridos en la materia de anlisis clnico.
v.
Localidad,
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Incidencia social
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Fecha.
aula o
laboratorio
Aula
estudiantes
Organizacin de
actividades del proyecto
08 al 13 de
abril
02 de mayo
al 29 de
junio
En
diferentes
centros de
salud de
Santa Cruz
15 al 19 de
julio
Aula
15 al 19 de
julio
Toma de muestras,
procesamiento y
obtencin de los
resultados
Laboratorio
de la
universidad
Aula
24 al 29 de
junio
PROCESUAL O FORMATIVA.
Se evaluarn como actividades procesuales: la participacin en clases prcticas y tericas,
exposiciones, repasos cortos, trabajos grupales, interpretacin de anlisis, pruebas funcionales
y cuadro biolgico de patologas, adems de los trabajos de brigada realizados en las reas
seleccionadas. Independientemente de la cantidad de actividades realizada por cada
estudiante, se tomarn como evaluacin procesual calificndola entre 0 y 50 puntos,
equivaliendo al 50% de la nota de la asignatura.
ACTIVIDAD
EVALUATIVA
Preguntas orales y
PARMETROS
Conocimiento del tema
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PONDERACI
N
5 puntos
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FECHA
En todas las clases
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escritas
Participacin en clases
Participacin en aula
Interpretacin de
anlisis, pruebas
funcionales y cuadro
biolgico
Prcticas de laboratorio
Defensa y
Presentacin
5 puntos
Presentacin de GIP`s
Exactitud de los
conocimientos y
Destreza en la prctica
10 puntos
5, 11 y 17 semana se
realizarn evaluaciones
prcticas y escritas de
aplicacin
de
conocimientos de las
pruebas de laboratorio
en
las
diferentes
patologas
Pre - internado
30 puntos
TOTAL
50 puntos
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ACTIVIDADES ACADMICAS
OBSERVACIONES
1ra.
Avance de materia
UNIDAD I Tema 1
2da.
Avance de materia
UNIDAD I Tema 1
3ra.
Avance de materia
UNIDAD II Tema 2
4ta.
Avance de materia
UNIDAD II Tema 3
5ta.
Avance de materia
Actividades de Brigadas
6ta.
Avance de materia
UNIDAD II Tema 4
7ma.
Avance de materia
UNIDAD II Tema 4 y 5
Primera Evaluacin
8va.
Avance de materia
Actividades de Brigadas
9na.
Avance de materia
UNIDAD II Tema 6
Actividades de Brigadas
UNIDAD IV Tema 9, 10 y 11
UNIDAD IV Tema 15 y 16
UNIDAD IV Tema 17 y 18
Actividades de Brigadas
UNIDAD IV y V Tema 19 y 20
4ta. incursin
Preguntas orales y escritas,
GIP`s
Avance de materia
Evaluacin final
Avance de materia
Evaluacin final
18va.
19va.
20va.
Segunda Evaluacin
Preguntas orales y escritas,
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6.
8.
9.
10.
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Aplicar las normas bsicas sobre las medidas de bioseguridad a cumplir en el interior del
laboratorio.
Promover por parte de los estudiantes las medidas de bioseguridad en los laboratorios de la
carrera.
Concienciar a los estudiantes sobre la importancia de las medidas de bioseguridad.
MATERIALES.
-
PROCEDIMIENTO.
-
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RESULTADOS.
CONCLUSIONES.
EVALUACIN.
1. Indique la clasificacin de los agentes biolgicos por grupo de riesgo mencionando
ejemplos
2. Cules son los niveles de bioseguridad para los laboratorios?
3. Describa brevemente la clasificacin de las Cabinas de Seguridad Biolgica CSB segn el
tipo de nivel y el grado de proteccin
4. Describa la cadena de infeccin
5. Mencione los factores que intervienen en un accidente ocupacional
6. Cul es la importancia del lavado de manos?
7. Mencione razones por las que el personal de salud no se lava las manos
8. Mencione las precauciones estndar en el laboratorio
9. Calcular la cantidad de Hipoclorito de sodio y agua necesarios para preparar una solucin
al 0,1 % de Hipoclorito de sodio de volumen final de 500 ml
10. Qu cantidad de Hipoclorito de sodio al 5 % se necesita para preparar 3 Lt de una
solucin al 1 %
11. Esquematice el programa de inmunizacin del personal de salud
12. Describa el procedimiento en caso de ocurrir un derrame en el laboratorio
13. Del reglamento para la aplicacin de la Norma de Bioseguridad para establecimientos de Salud
NB 63001-63006 (Lineamientos de gestin, Hospitales, Laboratorios, Consultorios Odontolgicos
y Veterinarios), describa los Objetivos y resumen de la 63001 a la 63004
14. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE del lavado de manos
BIBLIOGRAFA.
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MATERIALES.
Tubos cnicos
Gradilla para tubos
Marcador para vidrio
Tiras reactivas para orina
PROCEDIMIENTO.
- La muestra deber estar correctamente identificada y codificada de acuerdo a los registros de
laboratorio, no olvidar el tipo de servicio al que pertenece el paciente.
- La muestra debe ser agitada completamente en el frasco antes de iniciar el examen fsico.
- Identificar tubos cnicos de centrfuga y colocar aproximadamente 10 - 12 ml.
- Realizar el examen fsico de la orina, anotar las caractersticas
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- Para el examen qumico, sumergir rpidamente una tira reactiva, cuidando de no dejarla mucho
tiempo en la orina
- Escurrir la tira en las paredes del tubo, tener cuidado de que toda la tira se impregne con la
muestra
- Realizar la lectura de cada unos de los tacos reactivos, anotando rpidamente uno por uno de lo
observado y comparando con el examen fsico realizado
RESULTADOS.
EXAMEN DE ORINA
Paciente...
Reg
Sexo
Edad..
Medico.............................................................
Fecha.
PRUEBAS DE LABORATORIO
RESULTADOS
EXAMEN FISICO
Volumen
Color
Olor
Aspecto
Densidad
pH
.
.
..
..
..
..
EXAMEN QUMICO
Protenas
Glucosa
Cetonas
Hemoglobina
S. Biliares
Pigmentos Biliares
Urobilingeno
Nitritos
.
.
.
.
.
.
RESULTADOS
CONCLUSIONES
EVALUACIN.
1. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de la toma de muestra para el examen de orina
2. Describa el procedimiento para la recoleccin de muestra de orina para prueba de drogas
3. En cul de las siguientes situaciones el bioqumico del laboratorio solicita una nueva muestra de
orina? Coincidencias y discrepancias con las decisiones:
a) Muestra de color verde-amarillo con resultados negativos para las pruebas de glucosa y
bilirrubina
b) Muestra de color amarillo oscuro que produce gran cantidad de espuma blanca
c) Orina turbia con olor intenso a amoniaco
d) Muestra brumosa con densidad mayor de 1.035, determinada por un refractmetro
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BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
- Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
- Graff. Anlisis de orina. Atlas de orina. Editorial Panamericana.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
- Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. Anlisis de orina y de los lquidos corporales, 5ta.
Edicin, Editorial mdica Panamericana.
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Tubos cnicos
Gradilla para tubos
Marcador para vidrio
Tiras reactivas para orina
Cubreobjetos
Portaobjetos
Microscopio
Centrfuga
PROCEDIMIENTO.
- La muestra deber estar correctamente identificada y codificada de acuerdo a los registros de
laboratorio, no olvidar el tipo de servicio al que pertenece el paciente.
- La muestra debe ser agitada completamente en el frasco antes de iniciar el examen fsico.
- Identificar tubos cnicos de centrfuga y colocar aproximadamente 10 - 12 ml.
- Realizar el examen fsico de la orina, anotar las caractersticas
- Realizar el examen qumico de la orina, anotar las caractersticas
- Llevar los tubos a centrifugar a 1500 - 2000 rpm por 5 minutos
- Colocar una gota del sedimento de orina sobre el portaobjetos y colocar el cubreobjetos, realizar la
visin lo ms rpido posible para evitar que se seque el sedimento
- Observar el sedimento con el objetivo de 10X inicialmente para buscar cilindros y luego realizar el
recuento de elementos con 40X (En caso de observar partculas de talco agregarles unas gotas de
lugol y estas se manifestaran de azul)
RESULTADOS.
EXAMEN DE ORINA
Paciente...
Reg
Sexo
Edad..
Medico.............................................................
Fecha.
PRUEBAS DE LABORATORIO
RESULTADOS
EXAMEN FISICO
EXAMEN QUMICO
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EXAMEN MICROSCOPICO
Clulas redondas
Clulas poligonales
Leucocitos
Eritrocitos
Cilindros: Hialinos
Cilindros: granulosos
Cristales: Uratos amorfos
Cristales: Acido rico
Cristales: Oxalato de Clcio
Cristales: Fosfato Triple
Cristales: Fosfato Amorfo
Otros cristales
....................................................
....................................................
.....................................x campo
.....................................x campo
...................................................
....................................................
....................................................
....................................................
....................................................
....................................................
....................................................
....................................................
OBSERVACIONES
.............................................................................................................................................................
Cristales frecuentes hallados en orinas cidas
cido rico
Sulfato de Calcio
Oxalato de calcio
Cistina
Uratos de sodio
c. hiprico
Leucina
Colesterol
Tirosina
Fosfato triple
Carbonato de Calcio
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Biurato de amonio
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Fosfato de Calcio
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CONCLUSIONES.
EVALUACIN.
1. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE del examen de orina
2. Como bioqumico de laboratorio, una de sus tareas es revisar los resultados de la seccin de
anlisis de orina. Determine por qu le preocuparan los siguientes resultados o por qu no le
importaran:
a) La presencia de cristales creos y protena negativa en orina de una nia de 6 meses
b) El aumento del nmero de clulas epiteliales de transicin en una muestra obtenida despus de
una cistoscopia
c) Cristales de tirosina en una muestra con resultado negativo en la prueba de bilirrubina
d) Cristales de cistina en una muestra de un paciente con gota
e) Cristales de colesterol en orina con densidad mayor de 1.040
f) Trichomonas vaginalis en una muestra de orina de un hombre
g) Cristales de uratos amorfos y de carbonato de calcio en una muestra con pH 6
3. Hombre de 40 aos de edad desarrolla graves dolores de espalda y abdominales despus de la
cena. El dolor disminuye durante la noche pero se repite en la maana y visita a su mdico de
familia. Los resultados de un recuento completo de sangre y de la amilasa son normales. Los
resultados de los anlisis de orina son los siguientes:
Color: Amarillo
Protena: Trazas
Microscpico:
Aspecto: Turbio
Glucosa: Negativo
Clulas: Epiteliales escamosas escasa cantidad
Densidad: 1.030
Cetonas: Negativo
Eritrocitos: 15-20 /campo (aparecen crenados)
pH: 5
Sangre: Moderada
Leucocitos: 0-2 /campo
Bilirrubina: Negativo
Urobilingeno: Normal
Nitrito: Positivo
Leucocitos: Negativo
a) Qu trastorno podran representar estos resultados de los anlisis de orina y los sntomas
del paciente?
b) Cules seran las causas de la presencia de eritrocitos crenados?
c) Existe una correlacin entre el color y la densidad de orina y los sntomas del paciente?
d) Sobre la base de la sustancia principal que causa esta enfermedad, Qu tipo de cristales
podran estar presentes?
e) Qu cambios en el estilo de vida se le recomiendan al paciente para evitar futuras
apariciones?
BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
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- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
- Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
- Graff. Anlisis de orina. Atlas de orina. Editorial Panamericana.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
- Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. Anlisis de orina y de los lquidos corporales, 5ta.
Edicin, Editorial mdica Panamericana.
- Tubos capilares
- Microcentrfuga
- Plastilina
Lector de Microhematocrito
- Pipetas de 5 ml
- Micropipetas de 20 ul
- Espectrofotmetro
- Reactivo de para la determinacin de la Hb (mtodo de la cianometahemoglobina)
- Tubos de ensayo
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- Gradillas
- Pipetas de Westergren
- Gradillas para pipetas de Westergren
Reloj
Succionador o propipeta
Lquido de Turk
Cmara de Neubauer
Guantes
PROCEDIMIENTO.
Hematocrito
La determinacin del hematocrito debe realizarse por duplicado.
- Homogenizar correctamente el tubo con la muestra, invirtiendo este suavemente mnimo de 8 a 10
veces
- Llenar el capilar por el extremo sin la marca hasta tres cuartas partes de la capacidad del tubo
(aproximadamente 5 cm.), con sangre total
- Limpiar el exceso de sangre de las paredes del tubo capilar y sellar el extremo de el llenado con
plastilina
- Colocar el tubo capilar lleno en los huecos radiales de la centrfuga con el extremo sellado hacia
fuera, lejos del centro
- Asegurar la parte superior de la centrfuga, para evitar que los capilares se quiebren
- Centrifugar durante 5 minutos de 10.000 a 15.000 rpm.
- Terminada la centrifugacin, comprobar que no se haya producido salida de sangre del capilar y
extraerlo de la centrfuga
- Observar en el capilar, las 3 separaciones
- Colocar el tubo con el extremo sellado en la parte inferior del lector de hematocrito
- Hacer coincidir la lnea inicial de la columna de glbulos rojos con el principio del lector (0)
- Medir la longitud de la columna de eritrocitos hasta la lnea de separacin plasma/eritrocitos
- Fijar el nmero de la escala el cual, ser el valor en % de Hematocrito
Hemoglobina
Homogenizar correctamente el tubo con la muestra, invirtiendo este suavemente mnimo de 8 a 10
veces.
- En dos tubos debidamente identificados, como estndar (S) y desconocido (D) colocar:
-
S
2,5 ml
10 ul
Diluyente
Muestra (sangre entera)
Estndar
-
D
2,5 ml
10 ul
-
Mezclar por agitacin suave y esperar 3 minutos para que se produzca la hemlisis total y se
complete la transformacin de toda la hemoglobina en cianometahemoglobina
Leer la absorbancia del D y S a 540 nm o fotocolormetro con filtro verde (520 550), llevando el
aparato a cero con reactivo
Hemoglobina (g/dl) = D x Factor
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= 50
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4
10 = volumen de cada cuadrado
20 = Factor de dilucin
4
ndices hematimtricos
VCM (femtolitros; fl)
MCHC (%)
Hematocrito (HCT)
Conteo de eritrocitos (RBC)
x 10
Hemoglobina (HGB)
Conteo de eritrocitos (RBC)
Hemoglobina (HGB)
Hematocrito (HCT)
x 10
x 100
RESULTADOS.
CONCLUSIONES.
EVALUACIN.
1. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de Hematocrito y responder lo siguiente:
-Describa los factores naturales o fisiolgicos que determinan la diferencia de los valores de
referencia de un hematocrito
2. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de Hemoglobina y responder lo siguiente:
-Describa las formas y lugares en los que se encuentra la hemoglobina en nuestro organismo
-Por qu se prefiere la valoracin de la hemoglobina en vez del hematocrito en e proceso de
evaluacin de una anemia?
3. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de VSG y responder lo siguiente:
- Explique cules son las limitantes de la valoracin de la VSG?
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BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Garca-Conde J. y Col. 2003. Hematologa. 1 Edicin. Madrid Espaa.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lluis V. Joan, Lluis A. Joseph. 2001. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. 2
Edicin. Barcelona Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
FUNDAMENTACIN TERICA
La interpretacin correcta de la citometra hemtica (medicin de las clulas de la sangre) supone el
anlisis detallado de cada uno de los datos que informa, los cuales pueden dividirse en tres grupos:
datos de la serie roja, de la serie blanca y de la serie tromboctica.
II. PRCTICA
OBJETIVO
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4.
Recuento de plaquetas
Realizar una dilucin: 1/100
1. En un tubo de plstico colocar:
2. 990 ul del reactivo de dilucin (reactivo de Rees), previamente filtrado y 10 ul de sangre
anticoagulada
3. Mezclar suavemente hasta la homogenizacin completa, dejando actuar por 5 minutos
Llenado de la Cmara cuentaglobulos
1. La cmara debe estar limpia y seca
2. Colocar el cubreobjeto sobre los prismas laterales
3. Proceder al llenado por la parte superior del retculo con una micropipeta de volumen regular
4. Se debe evitar los revalses por los surcos laterales y transversales
5. Una vez llena, se debe dejar reposar en una caja petri con algodn o papel absorbente embebido
en agua (cmara hmeda), 20 minutos
Recuento
1. Utilizando un microscopio, observar con objetivo 40X y bajando ligeramente el condensador y
moviendo el micromtrico
2. Contar las plaquetas que se depositan sobre 16 cuadritos medianos que existen en unos de los 4
cuadrantes de recuento de glbulos blancos
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3. La suma de plaquetas estn presentes en un volumen de 0,1 mm 3 (1mm2 x 0,1mm), este numero
para que tenga valor de 1mm3, debe ser multiplicado por 10 y por 100 que corresponde al factor
de dilucin
4. Finalmente este resultado multiplicar por 106, para expresarlo en 1 litro (L) segn el SI de
unidades (plaquetas/ul)
Recuento de reticulocitos
-
Este mtodo usa como colorante el azul de metileno nuevo: 1 g cada 100 ml de solucin citratada
(1 vol de citrato de sodio 30 g/L y 4 vol de ClNa 9 g/L)
- Mediante una pipeta Pasteur se aaden a un tubo de hemlisis tres gotas de solucin colorante y
tres gotas de sangre total bien homogeneizada. En caso de valores muy bajos de hematocrito
debe colocarse doble cantidad de sangre total que de solucin colorante
- La suspensin sangre/colorante se agita suavemente e incubar por 15 minutos en bao Mara a
37 C, transcurrido este tiempo, mezclar bien el contenido del tubo, tomar una pequea gota de la
suspensin y se extiende sobre un portaobjetos (realizar 2 extendidos en lamina), una vez seca
identificar con lpiz.
- Agregar una gota de aceite de inmersin, colocar el extendido sobre la platina del microscopio y
enfocar en bajo poder (10X) para localizar el rea donde los glbulos rojos que no estn
superpuestos. Pasar al objetivo de 100X cuidadosamente e iniciar el conteo. Las clulas rojas
toman una coloracin griscea verdosa. El RNA presente en los reticulocitos se colorea de azul
intenso.
- Contar todas las clulas rojas presentes en el campo seleccionado y luego enumere los
reticulocitos existentes, localizar un segundo campo y continuar hasta que todos los reticulocitos
existentes en 1000 clulas rojas hayan sido contadas.
- Se cuentan aproximadamente 1.000 hemates y se saca el promedio de Reticulocitos.
- Es necesario realizar el recuento sobre un mnimo de 500 eritrocitos. El recuento se efecta
contando en donde los eritrocitos estn distribuidos homogneamente. Se cuentan tantos
campos como sean necesarios para alcanzar la cifra de eritrocitos requerida, siendo 100-125 el
nmero optimo de hemates por campo de los cuales distinguimos cuales son Reticulocitos para
luego expresar el resultado como porcentaje, siendo el 100 % el nmero total de hemates
contado. Este valor ser vlido si se trata de una concentracin normal de eritrocitos en sangre
total.
- En casos en que el hematocrito sea bajo se debe corregir el nmero total de Reticulocitos. Por
ello, cuando disminuye el nmero de eritrocitos como suele suceder en la anemia, el valor
porcentual debe corregirse segn el hematocrito empleando la siguiente frmula:
Reticulocitos corregidos = % de Reticulocitos observados X
Clculo
500 clulas observadas
-----------> 100 %
N Reticulocitos observados -----------> X
X = % (Valor de Reticulocito)
RESULTADOS.
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CONCLUSIONES.
EVALUACIN.
1. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de Formula leucocitaria y responder lo
siguiente:
- Cules son las desventajas de realizar un frotis mal realizado?
- Existe diferencia en la lectura realizada entre un frotis sanguneo con sangre + anticoagulante
con el sangre entera?
2. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de Recuento de plaquetas
3. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de Recuento de reticulocitos
BIBLIOGRAFA.
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
-
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Garca-Conde J. y Col. 2003. Hematologa. 1 Edicin. Madrid Espaa.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lluis V. Joan, Lluis A. Joseph. 2001. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. 2
Edicin. Barcelona Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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I. FUNDAMENTACIN TERICA
La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes
mellitus. El diagnostico precoz y el control de los pacientes diabticos, tiene por objeto evitar la
cetoacidosis y las complicaciones de los sntomas resultantes de la hiperglicemia, mediante el
tratamiento adecuado. Dado que existen mltiples factores de hiper o hipo glicemia, debe
considerarse en cada caso la condicin fisiolgica y/o patologa presentes en el paciente en cuestin.
Fundamento del mtodo: El esquema de reaccin es el siguiente:
GOD
Glucosa + O2 + H2O
______________ ACIDO GLUCORONICO + H2O2
2H2O2
POD
+ 4- AF + FENOL _________________ QUINONA COLOREADA + 4H2O
II. PRCTICA
OBJETIVO
Determinacin de glucosa en sangre en muestra normal y patolgica
MATERIALES.
-
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Standard
Muestra
Reactivo de Trabajo
2.5 ml
25 ul
2.5 ml
25 ul
2.5 ml
Valores de referencia
Suero o plasma: 70 - 110 mg/dl
Linealidad: La reaccin lineal hasta 4,5 g/l. Para valores superiores, diluir la solucin coloreada
final con el reactivo de trabajo y repetir la lectura multiplicando el resultado final por 2
CONCLUSIONES
EVALUACIN
1. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de glicemia
2. Cul es la funcin que cumple la glucosa en nuestro organismo?
3. Defina:
- Gluclisis
- Gluconeognesis
4. En qu consiste la Curva de Tolerancia a la Glucosa?
5. Describa lo que es la diabetes y cuantos tipos de diabetes existen?
6. Qu importancia tiene la linealidad en esta prueba de diagnostico?
BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
- Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
- Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
- Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
- Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
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I. FUNDAMENTACIN TERICA
La urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en la mayora de los lquidos
biolgicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce en el
hgado y es excretada por la orina a travs de los riones. Una elevacin de la concentracin srica
de urea, se interpreta generalmente como una posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse
de lado el hecho de que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la
dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin en estas variables se traducir en un
cambio de la concentracin de urea en suero.
Fundamento del mtodo: La ureasa descompone especficamente a la urea produciendo dixido de
carbono y amonaco; ste reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de
indofenol que se determina colorimtricamente.
II. PRCTICA
OBJETIVO
Determinacin de urea en suero normal y patolgico
MATERIALES.
- Espectrofotmetro
- Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados
- Bao de agua a 37 C
- Reloj o cronmetro
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Marcador para vidrio
- Guantes
REACTIVOS
Reactivo 1: disolver el contenido del frasco con agua destilada de acuerdo con las indicaciones del
rtulo. Mezclar por inversin hasta disolucin completa. Fechar.
Reactivo 2: diluir el contenido del frasco con agua destilada de acuerdo con las indicaciones del rtulo
y mezclar por inversin. Colocar fecha de preparacin.
Standard: listo para usar.
Precauciones: Los reactivos son para uso in vitro. El fenol es txico e irritante.
PROCEDIMIENTO.
Uremia: En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido)
colocar una o dos gotas de agua y agregar:
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Standard
Suero o plasma
Ureasa
B
----1 gota
S
20 ul
--1 gota
D
--20 ul
1 gota
B
1 ml
1 ml
S
1 ml
1 ml
D
1 ml
1 ml
Agua destilada
B
10ml
S
10ml
D
10ml
Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus de 10 minutos leer en fotocolormetro con filtro
verde (510-550 nm) o en espectrofotmetro a 540 nm, llevando a cero con el Blanco.
Urea en orina: Se sigue la misma tcnica que para sangre utilizando orina diluida con agua o solucin
fisiolgica. Como el contenido de urea est relacionado con la densidad, es conveniente diluir segn
el siguiente esquema:
Densidad hasta 1,015................................. diluir 1/10
Densidad de 1,016 a 1,025......................... diluir 1/20
Densidad mayor de 1,025........................... diluir 1/40
Como la orina contiene cantidades variables de amonaco debe efectuarse un Blanco de orina (BD).
Este Blanco se ejecuta igual que el Blanco de Reactivo (B), con la diferencia que, luego de agregar el
Reactivo 1 y antes del 2, se agregan 20 ul de la dilucin de orina. Llevar el aparato a cero con el
Blanco de Reactivos (B) y leer el Standard (S), el Blanco de orina (BD) y el Desconocido (D).
Estabilidad de la mezcla de reaccin final: El color de la reaccin final es estable 12 horas, por lo que
la absorbancia debe ser leda en ese lapso.
Clculo de los resultados:
SUERO O PLASMA
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Limitaciones del procedimiento: Evitar contaminaciones con amonaco provenientes del ambiente
(humo de cigarrillo, vapores amoniacales).
Rango dinmico: cuando el resultado obtenido sobrepasa los 1,5 g/l de urea, debe diluirse la solucin
final 1/3 empleando como diluyente Blanco de Reactivos y efectuando la lectura luego de 10 minutos
de efectuada la dilucin. El resultado obtenido debe multiplicarse por la dilucin efectuada.
CONCLUSIONES
EVALUACIN
1.
2.
3.
4.
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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Espectrofotmetro o fotocolormetro
Tubos de khan y de fotocolormetro
Micropipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados
Reloj o cronometro
Marcador para vidrio
Guantes
REACTIVOS.
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Equilibrar el reactivo de trabajo a la temperatura de reaccin (25 C). Antes de agregar la muestra,
llevar el aparato a cero con agua destilada. En dos cubetas espectrofotomtricas marcadas S
(Standard) y D (Desconocido), colocar:
Reactivo de trabajo
Standard
Muestra
S
1,2 ml
0,2 ml
--
D
1,2 ml
-0,2 ml
20 mg/l
S2 S1
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Mujer : 11 20 mg/Kg/24 hs
D.C.E: Hombre: 94 140 ml/min/1,73 m2
Mujer : 72 110 ml/min/1,73 m2
CONCLUSIONES
EVALUACIN
1. Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de la determinacin de creatinina
2. En qu situaciones patolgicas se incrementa la concentracin de creatinina
srica?
3. En qu consiste la depuracin de creatinina?
4. Cul la importancia de la creatinina en sangre en relacin a la funcin renal?
5. Qu otras pruebas de laboratorio se asocian a una creatinina alterada en sangre?
BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
-
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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II. PRCTICA
OBJETIVO
Determinar cido rico en suero normal y patolgico
MATERIALES.
-
Espectrofotmetro o fotocolormetro
Tubos de ensayo y de fotocolormetro
Micropipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados
Reloj o cronometro
Marcador para vidrio
Guantes
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REACTIVOS.
- Reactivo: Uricasa, peroxidasa, clorofenol, 4 aminofenazona y fosfatos para ls siguientes
reacciones finales
UOD mayor o igual a 26 U/l
4-AF: 6 mM
POD mayor o igual a 200 U/l
pH: 7,3 0,1
Clorofenol: 2,4 mM
fosfatos: 25 mM
- Standard: solucin de cido rico 100 mg/l
PROCEDIMIENTO.
En tres tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas marcados B (Blanco), S (Standard),
D (Desconocido), colocar:
Standard
Muestra
Reactivo de trabajo
B
----2.5 ml
S
50 ul
--2.5 ml
D
--50 ul
2.5 ml
Donde
f =
100 mg/l
S
Valores de referencia
Hombres: 25 60 mg/l
Mujeres: 20 50 mg/l
RESULTADOS.
CONCLUSIONES.
EVALUACIN.
Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de la determinacin de cido rico
BIBLIOGRAFA.
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
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BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
CHOD
H2 O2 + 4-AF + fenol
POD
Triglicridos
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Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma endgena a partir
de los carbohidratos. Su medicin es importante en el diagnstico y manejo de las dislipidemias.
Estas enfermedades pueden tener origen gentico o ser secundarias a otras tales como nefrosis,
diabetes mellitus y disfunciones endcrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como un
factor de riesgo en enfermedades aterosclerticas.
Fundamentos del mtodo: El esquema de reaccin es el siguiente:
Triglicridos lipoprotein lipasa> glicerol + cidos grasos
Glicerol + ATP glicerol kinasa> glicerol-1-P + ADP
glicerol-1-fosfato + O2 GPO > H2O2 + dihidroxiacetonafosfato
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol POD> quinonimina roja
II. PRCTICA
OBJETIVOS
Determinar la concentracin de colesterol en un paciente normal y uno patolgico
- Determinar la concentracin de triglicridos en un paciente normal y uno patolgico
MATERIAL
-
Espectrofotmetro o fotocolormetro
Micropipetas, pipetas y material volumtrico adecuados
Frasco de vidrio color caramelo
Tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas
Bao de agua a 37C
Reloj o cronometro
Marcador para vidrio
Guantes
REACTIVOS.
Colesterol
Standard: Solucin de colesterol 2 g/l
Enzimas: Suspensin conteniendo lipasa fungal 300 U/ml, colesterol
peroxidasa (POD) 20 U/ml.
Reactivo 4 AF: solucin de 4- aminofenazona 25 mmol/l.
Reactivo Fenol: solucin de fenol 55 mmol/l.
Triglicridos
Reactivo de trabajo:
- 10 x 20 ml: agregar 20 ml de Buffer a un vial de Enzimas. Mezclar hasta disolucin completa.
Homogeneizar y fechar.
- 4 x 50 ml: reconstituir el contenido de un vial de Enzimas
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- El Reactivo de Trabajo puede presentar una coloracin rosada que no afecta su funcionamiento.
Lecturas del Blanco superiores a 0,160 D.O. o lecturas del Standard anormalmente bajas, son
indicios de deterioro del Reactivo. En tal caso, desechar.
PROCEDIMIENTO.
Colesterol
En tres tubos de fotocolorimetro o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y
D (Desconocido), colocar:
Standard
Muestra
Reactivo de trabajo
B
----2 ml
S
20 ul
--2 ml
D
--20 ul
2 ml
Valores de referencia
Hombres: 1.72 a 2.48 g/l
Mujeres: 1.75 a 2.40 g/l
n=63
n=68
Triglicridos
Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos. En tres tubos de
fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido)
colocar:
B
S
D
Standard
10 ul
Muestra
10 ul
Reactivo de Trabajo
1 ml
1 ml
1 ml
Mezclar, incubar 5 minutos a 37C o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25C). Enfriar y leer en
espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato a
cero con agua destilada.
Estabilidad de la mezcla de reaccin final. El color de reaccin final es estable 60 minutos, por lo que
la absorbancia debe ser leda dentro de este lapso.
Clculo de los resultados: Corregir las lecturas con el Blanco de reactivos y usar las lecturas
corregidas para los clculos.
TG g/l = D x factor
factor = 2 g/l
S
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Valores de referencia
Deseable: < 1,50 g/l
Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l
Elevado: 2,00 - 4,99 g/l
Muy elevado: > 5,00 g/l
No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos o valores de
referencia.
Linealidad: la reaccin es lineal hasta 10 g/l de triglicridos. Para valores superiores, repetir la
determinacin con muestra diluida 1:2 con solucin fisiolgica. Multiplicar el resultado obtenido por la
dilucin efectuada.
CONCLUSIONES
EVALUACIN
1. Realizar el Procedimiento operativo estandarizado POE de la determinacin de colesterol y
responder lo siguiente:
- Cules son las funciones que cumple el colesterol en nuestro organismo?
- Describa el metabolismo del Colesterol
- Defina lo que es dislipidemia, cul es su efecto en nuestro organismo?
- En qu patologas se elevan los niveles de colesterol?
2.
Realizar el Procedimiento operativo estndar POE de la determinacin de
triglicridos y responder lo siguiente:
- Qu relacin tienen los lpidos con las enfermedades cardiovasculares?
- Cul es funcin que cumplen los triglicridos en nuestro organismo?
- En qu situaciones patolgicas se observa modificada las concentraciones de
triglicrido srico?
- La elevacin de Triglicridos con qu otras pruebas de laboratorio est relacionada?
BIBLIOGRAFA.
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
-
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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Espectrofotmetro o fotocolormetro
Micropipetas, pipetas y material volumtrico adecuados
Tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas
Gradilla
Bao de agua a 37C
Reloj o cronometro
Marcador para vidrio
Guantes
REACTIVOS.
HDL
Reactivo precipitante: solucin de cido fosfotngstico 0,44 mmol/l y cloruro de magnesio 20 mmol/l
LDL
Reactivo precipitante: solucin 10 g/l de Sulfato de polivinilo disuelto en polietilenglicol (pm 600) al 25
% pH 6,7
PROCEDIMIENTO.
HDL
En tubo de Kahn medir 200 ul de muestra y agregar 500 ul de reactivo precipitante
Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 10 minutos en reposo a temperatura
ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3000 rpm o 2 minutos a 12000 rpm. Usar el sobrenadante lmpido
con muestra.
En tres tubos de fotocolormetro marcados B, S y D, colocar:
Sobrenadante
Standard
Reactivo de trabajo
B
----2 ml
S
--20 ul
2 ml
D
200 ul
--2 ml
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f= 0,762
S
Sobrenadante
Standard
Reactivo de trabajo
S
--20 ul
2 ml
D
100 ul
--2 ml
Dx f
f= 0,624
S
VS
VE
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BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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MATERIALES.
-
Espectrofotmetro o fotocolormetro
Micropipetas, pipetas y material volumtrico adecuados
Tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas
Gradilla
Bao de agua a 37C
Reloj o cronometro
Marcador para vidrio
Guantes
REACTIVOS.
Reactivo Cfx: solucin de cresolftalein complexona 3,7mmol/l
Buffer: solucin de amnometil propanol (AMP) 0,2mol/l en metanol 35% V/V para pH final 11
Standard: solucin de calcio 10mg/dl
PROCEDIMIENTO.
Se aconseja trabajar directamente en tubos de fotocolormetro de manera de poder determinar un
Blanco interno para cada ensayo, condicin indispensable para controlar las trazas de calcio que
pudiera haber escapado al proceso de lavado de material.
En dos tubos de fotocolormetro marcados S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
Reactivo Cfx
Buffer
S
50 ul
3.5 ml
D
50 ul
3.5 ml
Mezclar con la varilla provista y leer la absorbancia de ambos tubos (blancos internos: BS Y BD) en
espectrofotmetro a 570 nm en fotocolormetro con filtro rojo (560 590 nm) llevando el aparador a
cero con agua destilada. Luego agregar:
Standard
Muestra
S
20 ul
---
D
---20 ul
F= 10 mg/dl
S
Valores de referencia
Suero. 8.5-10.5 mg/dl
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CONCLUSIONES
EVALUACIN
1.
2.
3.
4.
5.
6.
BIBLIOGRAFA.
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
- Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
- Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
- Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
- Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
- V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
- Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
- WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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PROCEDIMIENTO
Protenas totales:
En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:
Agua destilada
Suero Patrn
Muestra
Reactivo EDTA/Cu
B
50 ul
----3,5 ml
S
--50 ul
--3,5 ml
D
----50 ul
3,5 ml
B
----3,5 ml
S
10 ul
--3,5 ml
D
--10 ul
3,5 ml
Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28 C durante 10 minutos. Leer en
espectrofotmetro a 625 nm o en fotocolormetro con filtro rojo (620-650 nm) llevando a cero con el
Blanco de reactivo
Estabilidad de la mezcla de reaccin final: El color es estable 20 minutos por lo que la absorbancia
debe ser leda dentro de ese lapso
Clculo de los resultados
Empleando el Suero Patrn tal como se indica en PROCEDIMIENTO, los clculos se realizan como
sigue:
Protenas Totales (g/dl) = D x f
f =S
Albmina (g/dl) = D x f
f =S
Globulinas = P.T. (g/dl) - Alb. (g/dl)
Relacin A/G = Albmina (g/dl)/Globulinas
Valores de referencia
Protenas totales: 6,1 a 7,9 g/dl
Albmina: 3,5 a 4,8 g/dl
Relacin A/G: 1,2 a 2,2
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Linealidad: la reaccin es lineal hasta 12 g/dl para Protenas Totales y hasta 6 g/dl para Albmina
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CONCLUSIONES
EVALUACIN
1. Realizar el procedimiento operativo estndar POE de Protenas totales y responder lo siguiente:
- Cul es funcin que cumplen las protenas sricas en nuestro organismo?
- Cul es funcin que cumplen las albminas en nuestro organismo?
- En qu situaciones patolgicas se observa modificada las concentraciones de protenas
sricas?
- Mencione las protenas ms importantes presentes en suero?
- Qu otras pruebas se puede asociar una elevacin de protenas y en qu patologas?
2. Realizar el procedimiento operativo estndar POE de Albmina
BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
- Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
- Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
- Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
- Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
- V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
- Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
- WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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I. FUNDAMENTACIN TERICA
La Bilirrubina es un compuesto de degradacin de la hemoglobina, es captada por el hgado para su
conjugacin y excrecin en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden
provocar hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una
patologa provocada por incompatibilidad materno-fetal en la que se produce una destruccin
excesiva de glbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina srica con el
consecuente riesgo de difusin del pigmento al sistema nervioso central, por lo que la determinacin
de la bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta sumamente importante.
Fundamento del mtodo: La bilirrubina reacciona especficamente con el cido sulfanlico diazotado
produciendo un pigmento color rojo-violcea (azo-bilirrubina) que se mide a 530 nm.
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no
conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso que posibilite su reaccin. De
forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la
muestra, debe agregarse benzoato de cafena al medio de reaccin.
II. PRCTICA
OBJETIVO
Realizar determinacin de las bilirrubinas en una muestra de suero normal y una ictrica
MATERIAL
-
Espectrofotmetro o fotocolormetro
Micropipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados
Reloj o cronometro
Gradillas
Tubos de Khan
Marcados para vidrio
Guantes
REACTIVOS.
Desarrollador: solucin acuosa de benzoato de cafena 0.13 mol/l, tamponada y estabilizada.
Nitritos de Sodio: solucin de nitrito de sodio 0.07mmol/l y cido clorhdrico 0.17mol/l.
PROCEDIMIENTO
1. Tcnica para el suero:
En tres tubos fotocolormetro marcados B (Blanco), D (Directa) y T (Total) Colocar:
Muestra (suero)
Agua destilada
Desarrollador
Reactivo Sulfanlico
Diazorreactivo
B
200 ul
2.5 ml
--200 ul
---
D
200 ul
2.5 ml
----200 ul
T
200 ul
--2.5 ml
--200 ul
Mezclar de inmediato cada tubo por inversin. Luego de 5 minutos, leer en espectrofotmetro a 530
nm o en fotocolormetro con filtro verde (520-550 nm), llevando el aparato a cero con agua destilada.
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Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto para la bilirrubina directa que debe
leerse a los 5 minutos exactos. Si se lee antes, habr valoracin previa de los resultados por reaccin
incompleta. Si se lee despus, habr nueva valoracin porque comienza a reaccionar la bilirrubina
libre.
Sueros Ictricos: debe emplearse la tcnica descrita pero con menores cantidades de muestra, de
acuerdo a la severidad de la ictericia. De tal forma, en caso de ictericia moderada se usaran 50 ul de
suero mientras que frente a una ictericia intensa se requiere solo 20 ul multiplicar los resultados
obtenidos por 3.79 y 9.38 respectivamente.
Clculo de los resultados
Bilirrubina total (mg/l)= (T-B) * F
Bilirrubina directa (mg/l)= (D-B) * F
Bilirrubina libre= Bilirrubina total- Bilirrubina directa
El factor colorimtrico (F) debe calcularse con el Estndar de Bilirrubina.
Valores de referencia
Bilirrubina en suero o plasma
ADULTOS:
Prematuros
.................
80 mg/l
120 mg/l
240 mg/l
Despus del nacimiento los valores comienzan a disminuir para alcanzar el nivel promedio del adulto
al mes de nacimiento. En los prematuros, los niveles de bilirrubina tardan mas en alcanzar la
normalidad, dependiendo del grado de inmadurez heptica.
CONCLUSIONES
EVALUACIN
2.
3.
4.
5.
6.
7.
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BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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MATERIALES.
-
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BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
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Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
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sea, en condiciones normales, alcanza su mayor actividad srica de fosfatasa alcalina ose, en
condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los nios en edad de crecimiento debido a que
esta isoenzima se localiza en los osteoblastos.
Entre las patologas que afectan la actividad srica de fosfatasa alcalina, se pueden citar: carcinomas
metastsicos en hgado y en hueso, colestasis biliar, fenmenos osteoblsticos, trastornos de mala
absorcin acompaados de lesiones ulcerosas, e incluso lesiones en vas de reparacin tales como
infarto agudo de miocardio, infarto pulmonar o renal.
Amilasa: producida en el pncreas excrino y en la glndulas salivales, escinde de los enlaces ax 1-4
glucosdicos de los polisacridos (almidn y glucgeno). Se encuentra elevada en el suero de
pacientes con pancreatitis aguda, alcanzando los valores mas elevadas entre las 24 y 30 horas
posteriores al ataque las 24 horas y 48 horas siguientes.
Tambin se ve aumentando ene este caso la excrecin urinaria de la enzima, persistiendo la
hiperamilasuria 3 a 5 das, luego de que la actividad srica ha alcanzado los niveles normales. Las
parotiditis bacterianas y paperas se asocian tambin con elevaciones en los niveles de amilasa
srica.
Fundamento del mtodo:
La fosfatasa alcalina: del suero hidroliza el sustrato de fenilfosfato de sodio en medio alcalino a pH
9.8 liberando fenol. Este ltimo reacciona con el diazo reactivo de Gomori y el color desarrollado,
medido a 490nm, es directamente proporcional a la actividad enzimtica.
Amilasa: el sustrato, almidn tamponado, se incuba con la muestra, producindose la hidrlisis
enzimtica. Esta de detiene por el agregado de reactivo del yodo, que al mismo tiempo produce color
con el remanente de almidn no hidrolizado. La disminucin de color respecto de un sustrato color.
(Sin muestra) es la medida de la actividad enzimtica, que se expresa en Unidades Amilolticas.
II. PRCTICA
OBJETIVOS
-
Determinar los niveles sricos de fosfatasa alcalina en una muestra normal y una patolgica
Determinar los niveles sricos de amilasa en una muestra normal y una patolgica
MATERIALES.
-
Espectrofotmetro o fotocolorimetro.
Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo y de fotocolorimetro
Bao de agua a 37 C
Reloj o cronometro
Marcador para vidrio
Guantes
REACTIVOS
Fosfatas alcalina
- Sustrato: Comprimidos contenido cada uno 21.6 umol de fenilfosfato de sodio en buffer carbonato
de pH 9.8
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- Reactivo diazo: comprimidos contenidos cada uno 4.5 mg de naftalen 1.5 disulfonato de la sal
de diazonio del 5- nitro 2 aminoasinol
Amilasa
- Sustrato 1: solucin de almidn 500 mg/l, tamponada a pH 7 con buffer fosfatos 0.1 mol/l en CINa
0.15 MOL/L
- Reactivo de yodo 2: solucin 0.01 eq/l de yodo. En cido clorhdrico 0.02 mol/l
PROCEDIMIENTO.
Fosfatasa alcalina:
En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
B
Sustrato
0.5 ml
Preincubar en bao de agua a 37
Suero
-Standard
-Mezclar, incubar exactamente 10
agregar:
Reactivo de color
2.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
C unos minutos
-50 ul
50 ul
-minutos (cronmetro) y
2.5 ml
2.5 ml
Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del bao y leer es espectrofotmetro a 520 nm o en
fotocolormetro con filtro verde, llevando el aparato a cero de absorbancia con agua destilada.
Amilasa:
En dos tubos de fotocolormetro marcados C (Control) y D (Desconocido) colocar:
C
D
1 ml
1 ml
37C y agregar:
-----20 ul
exactos, agregar:
1 ml
1ml
tubos del bao y agregar:
8 ml
8 ml
SUSTRATO 1
Dejar unos minutos en bao de agua a
MUESTRA
Incubar a 37C .A los 7 minutos y medio
REACTIVO
DE
IODO
2
Mezclar por agitacin suave, retirar los
AGUA
DESTILADA
Mezclar por inversin. Leer en fotocolormetro con filtro rojo o en espectrofotmetro alrededor de 640
nm, llevando a cero el aparato con agua destilada.
Estabilidad de la mezcla de reaccin final: El color de la reaccin es estable durante 1 hora por lo que
la absorbancia debe ser leda dentro de ese lapso. Si la temperatura ambiente es superior a 25 C, la
lectura deber efectuarse dentro de los 20 minutos.
Clculo de los resultados
Fosfatasa alcalina UI/l = factor x (D-B)
factor= 200 UI/l
S-B
Amilasa
Amilasa (UA/dl) = C - D X 1000
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C
Unidades: Una unidad Amiloltica (UA) es la cantidad de enzima contenida en 10 ml de muestra, que
puede hidrolizar 10mg de almidn en 30 minutos, en las condiciones de la reaccin. En esta tcnica
se incuban 20ul de muestra con 0.5mg de almidn contenidos en 1ml se Sustrato 1 durante 7minutos
y medio, lo que equivale a incubar 100ml de suero con 10.000mg de almidn durante 30minutos.
Para obtener las unidades de actividad amilasica, la fraccin de almidn digerido se multiplica por
1000.
Valores de referencia
Fosfatasa alcalina:
Adultos: 68 240 UI/l
Nios: 100 400 UI/l
Amilasa:
CONDICIN CLNICA
SUERO (UA/dl)
Normal
120
Pancreatitis aguda
300 a 12.000
Pancreatitis crnica
hasta 200
Parotiditis
200-350
Parotiditis c/complicacin
mas de350
Procesos
abdominales
normal
agudos (sin pancreatitis)
ORINA (UA/hora)
260
mas de 900
mas de 300
350-750
mas de750
normal
CONCLUSIONES
EVALUACIN
1. Realizar el procedimiento operativo estndar POE de la determinacin de Fosfatasa Alcalina y
responder lo siguiente:
- Porqu en los nios los valores de fosfatasa alcalina son mas elevados que en los adultos?
- Cul es el valor diagnstico de la fosfatasa alcalina?
- Qu otras pruebas de laboratorio contribuyen al diagnostico del dao heptico?
2. Realizar el procedimiento operativo estndar POE de la determinacin de Amilasa y responder
lo siguiente:
- Cul es el comportamiento de la amilasa en una pancreatitis?
- Qu otras pruebas qumicas se relacionan con un aumento de amilasa?
- En un ataque de pancreatitis hasta qu tiempo se puede tomar la muestra para que tengan
valor los resultados?
- Cmo influye la pancreatitis en el metabolismo de la glucosa?
- Sobre qu enlaces glucosdicos acta la amilasa?
BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
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edicin.
Editorial
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
-
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
WIENER. Tcnicas de Laboratorio. Buenos Aires Argentina
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El lquido cefalorraqudeo (LC) se forma por una filtracin del plasma en lo plexos coroideos de
cerebro. Este evento no es de simple filtracin, sino que requiere la secrecin activa por parte de las
clulas de los plexos coroideos. El LC normal es completamente transparente. Con una densidad
entre 1003 -1008 normalmente el contenido en protenas es bajo 20 45 mg/100ml Con una relacin
albmina/globulina de 3:1 patolgicamente hay un caracterstico aumento de las protenas,
especialmente de la globulina. En las meningitis: el contenido de protenas puede elevarse a 125 mg
o a ms de 1 g/100ml.
Diversos padecimientos cerebrales muestran elevaciones de protenas por encima de los normal, que
fluctan entre 20 y 30 mg/100ml. La prueba de globulina de Pandy y la prueba de oro coloidal de
lange son pruebas diagnosticas que se basan en las alteraciones de las protenas del lquido
cefalorraqudeo.
El azcar en LC es un poco menor que en la sangre 50 85 mg/100ml se encuentra elevado en la
encefalitis. En la sfilis del sistema nerviosa central, en los abscesos y en los tumores. Est
disminuido en las meningitis purulentas.
Normalmente la concentracin de cloruros es de 700 750 mg/100ml o de 120 130 mEq/litro. Por lo
general se encuentran disminuidos en las meningitis y no muestran alteraciones en la sfilis, en las
encefalitis, en la poliomielitis y en otras enfermedades del sistema nervioso central. Los cloruros son
especialmente bajos en las meningitis tuberculosas. La concentracin de calcio en el LC humano
normal es de 2043 +/- 0.005 mEq/ litro, la del magnesio es de 2.40 +/- 0.14 mEq/l. Como se ve, el
contenido en calcio del LC es considerablemente menor que el del suero, mientras que el contenido
en magnesio es ligeramente mayor, Se ha encontrado que la relacin entre calcio y el magnesio es
de 1.01+/- 0.06
II. PRCTICA
OBJETIVO
Realizar los exmenes fsico, qumico, citolgico y bacteriolgico.
MATERIALES.
-
REACTIVOS.
-
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cido actico
Agua destilada
Liquido de Turk
Giemsa
Alcohol
Reactivo para tincin de Gram
Reactivo para tincin de Ziehl Neelsen
PROCEDIMIENTO.
Se entregar un formato al estudiante
RESULTADOS.
CONCLUSIONES.
EVALUACIN.
Qu caractersticas fsicas son importantes en la muestra?
En caso de accidente traumtico que es lo que esperamos encontrar?
Una alteracin de un LC con qu patologas se puede asociar?
Cmo se presenta un LC normal?
Realizar el Procedimiento operativo estndar POE para Liquido cefalorraqudeo
1.
2.
3.
4.
5.
BIBLIOGRAFA
- Angel, M. Angel, M. Interpretacin Clnica del Laboratorio. Quinta edicin. Editorial
Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topogrfica COD 616.075 8 M47 c.2
- Balcells Alfonso La clnica y el laboratorio Ed. Masson. Espaa 2001. Signatura topogrfica COD
616.075 8 B18 c.4
-
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Chernecky Berger.1999. Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnsticos, 2 Edicin,
MexicoDF.
Ergurta Collao, J. Tcnicas de Laboratorio Clnico. Tercera edicin. Editorial Urquizo. La Paz
Bolivia. 1986.
Jhon B. Henry. 2005. El laboratorio en el Diagnostico Clnico, 1 Edicin Madrid Espaa.
Lynch, M. Mtodos de Laboratorio. Segunda edicin. Editorial Interamericana. Mxico. 1988.
Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. Anlisis de orina y de los lquidos corporales, 5ta.
Edicin, Editorial mdica Panamericana.
V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. Vademcum clnico del diagnstico al tratamiento. Editorial El
Ateneo.
Wallach Jacques. 2007. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8va. Edicin. USA.
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