Manual de Hematologia

MINISTERIO DE SALUD Instituto Nacional de
Salud INSTITUTO NACIONAL DE

SALUD
CENTRO
NACIONAL DE
SALUD PBLICA
(3 INS
MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS
DE LABORATORIO
EN TCNICAS
BSICAS DE
HEMATOLOGA
Red Nacional de Laboratorios de
Salud Pblica
o
VoO
S,
i INS
SERIE DE
NORMAS
TCNICAS N 40
r Instituto Nacional de Salud
Instituto Nacional de Salud
Calle Cpac Yupanqui 1400, Lima 11,

Per Apartado Postal 471 Telfono:
(0511) 471-9920 Fax: (0511) 471-0779 Correo
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INS
r Instituto
Nacional de Salud
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO EN TCNICAS BSICAS DE
HEMATOLOGA
ELABORACIN:
T. M. MARA MUOZ ZAMBRANO Dra.
CECILIA MORN CORTIJO
Catalogacin hecha por el Centro de Documentacin e

Informacin del Instituto Nacional de Salud (INS)
Muoz Zambrano, Mara E.; Morn Cortijo, Cecilia G.
Manual de procedimientos de laboratorio en tcnicas bsicas de
hematologa / Elaborado por Mara E. Muoz Zambrano y Cecilia
G. Morn Cortijo. -- Lima: Ministerio de Salud, Instituto
Nacional de Salud, 2005.
88 p.: 15 cm. -- (Serie de Normas Tcnicas; 40)
1. HEMATOLOGA / mtodos 2. LABORATORIOS/normas 3.

TCNICAS Y PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO 5.
PER
I. Muoz Zambrano, Mara E.
II.Morn Cortijo, Cecilia G.
III. Instituto Nacional de Salud (Per)
IV. Per. Ministerio de Salud
ISBN 9972- 857 - 26

- 3 (O.C.) ISBN 9972857 - 46 - 8 (N 40)
ISSN 1607- 4904
Hecho el Depsito Legal N 1501012005-1347
Ministerio de Salud, 2005
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Instituto Nacional de Salud, 2005

Cpac Yupanqui 1400, Jess Mara,
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aprobada con R.J. N 111-2005-JOPD/INS
Portada: A: Clulas rojas mostrando hipercroma.

B: Clulas blancas mostrando el "palillo de tambor".
Se autoriza su reproduccin total o parcial, siempre y cuando se
cite la fuente.
CONTENIDO
Presentacin.............................................................................7
Introduccin..............................................................................9
SECCIN 1: GENERALIDADES................................................... 11
1.1 Objetivo...................................................................................... 11
1.2 Campo de aplicacin.................................................................. 11
1.3 Responsabilidades...................................................................... 11
1.4 Documentos de referencia......................................................... 12
SECCIN 2: MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD.................................. 13
SECCIN 3: OBTENCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS.................14
3.1 Objetivo...................................................................................... 14
3.2 Obtencin de sangre venosa con jeringa................................... 14
3.3 Obtencin de sangre venosa en tubos al vaco.......................... 16
3.4 Obtencin de sangre de la vena yugular externa....................... 18
3.5 Obtencin de sangre capilar...................................................... 19
SECCIN 4: ANTICOAGULANTES................................................22
4.1 Caractersticas bsicas de los anticoagulantes ms usados
en hematologa..................................................................................22
4.2 Anticoagulantes slidos ............................................................. 22
4.3 Anticoagulantes lquidos ........................................................... 24
SECCIN 5: REALIZACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEO....25
5.1 Mtodo de los dos portaobjetos ................................................ 25
5.2 Coloraciones usadas....................................................................26
5.3 Tincin con colorante de Wright..................................................27
SECCIN 6: HEMOGRAMA- HEMOGLOBINA- HEMATOCRITO.........29

6.1 Recuento leucocitario..................................................................29
6.2 Recuento de glbulos rojos........................................................ 33
6.3 Determinacin del volumen globular (Hto).............................................. 35
6.4 Dosaje de hemoglobina.............................................................................38
6.5 Frotis de sangre perifrica.........................................................................40
6.6 Frmula leucocitaria..................................................................................41
SECCIN 7: VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN..............................43
7.1 Mtodo de Westergren .............................................................................43
7.2 Mtodo de Wintrobe..................................................................................44
SECCIN 8: PERFIL DE HEMOSTASIA..........................................45
8.1 Principios generales..................................................................................45
8.2 Mecanismo de coagulacin ..................................................................... 45
8.3 Exploracin de la coagulacin...................................................................46
8.4 Obtencin del plasma...............................................................................46
8.5 Tiempo de sangra.................................................................................... 47
8.5.1
Mtodo de Ivy...................................................................................48
8.5.2
Mtodo de Duke...............................................................................49
8.6 Tiempo de coagulacin de sangre total (TCST).........................................51

8.7 Tiempo de tromboplastina parcial activada (PTTK)...................................54
8.8 Tiempo de trombina..................................................................................55
8.9 Tiempo de protrombina (Prueba de Quick)................................................56
SECCIN 9: RECUENTO DE RETICULOCITOS Y PLAQUETAS ..........58
9.1 Recuento de reticulocitos .........................................................................58
9.2 Recuento de plaquetas..............................................................................60
SECCIN 10: LEUCOGRAMA.......................................................63
10.1
Granulocitos......................................................................................63
10.2
Agranulocitos....................................................................................65
10.3
Criterios para el desarrollo de un leucograma..................................67
SECCIN 11: ALTERACIONES ERITROCITARIAS............................79
Alteraciones en el tamao........................................................................70
Alteraciones en la forma ......................................................................... 71
Alteraciones de color .............................................................................. 72
Inclusiones anormales............................................................................. 73
BIBLIOGRAFA..........................................................................79
ANEXO A: Preparacin de colorantes y soluciones ms
usados en hematologa...............................................81
ANEXO B: Preparacin de anticoagulantes................................85
PRESENTACIN
Con el propsito de uniformizar los procedimientos hematolgicos que se
realizan en los diversos laboratorios clnicos, el Instituto Nacional de Salud
pone a disposicin de la comunidad tcnico-cientfica nacional el Manual
de Procedimientos de Laboratorio en Tcnicas Bsicas de Hematologa, en
el cual se incluyen todos los mtodos empleados en el campo
hematolgico bsico. De este modo se contribuye a mejorar la calidad de
diagnstico en los laboratorios de los servicios de salud.
El laboratorio de hematologa cuenta con dos reas bsicas: rea de
Hematimetra (hemograma, VSE, recuento de plaquetas, etc.) y rea de
Hemostasia. Partiendo de esta estructura, en este manual nos referiremos
a las tcnicas bsicas empleadas en estas reas partiendo de la toma de
muestra hasta la realizacin de las pruebas respectivas.
Es necesario enfatizar que para obtener resultados ms confiables es
importante, pero no imprescindible, automatizar el laboratorio, debido a
que ello evitar el posible error humano, sobre todo en lo referente a
recuentos celulares, valores de hemoglobina y constantes corpusculares
ya que en estas variables se trabaja con cantidades exactas de sangre,
hecho que es muy difcil de lograr cuando se usan los mtodos manuales,
lo mismo sucede al tratarse de las pruebas de hemostasia.
Esperamos que este manual constituya una herramienta de consulta en la
Red Nacional de Laboratorios de Salud, adems de una gua para el
personal de laboratorio en general.
INTRODUCCIN
El presente manual ha sido elaborado en forma simple, didctica y
eminentemente prctica para que su contenido sea fcil de entender por
el personal que labora en el laboratorio de hematologa.
Se divide en tres partes:
1.
En la primera parte se presentan los aspectos ms importantes de la

bioseguridad en el laboratorio.
2.
En la segunda parte se exponen las principales tcnicas bsicas del

laboratorio de hematologa.
3.
En la tercera parte se detallan las alteraciones ms frecuentes de la

serie roja y de la serie blanca de un hemograma.
El objetivo principal es protocolizar y estandarizar los procedimientos

hematolgicos que empiezan con la toma de muestra (siguiendo las
pautas de control de calidad preanaltica) hasta el procesamiento de sta
(fase analtica) en la determinacin correspondiente, y por ltimo, en la
emisin de los resultados (fase postanaltica). Debemos recalcar que
cuando se realizan pruebas de hemostasia debe tenerse en consideracin
los cuidados comunes a toda prueba de laboratorio, es decir, las muestras
deben obtenerse en condiciones apropiadas y rotularse debidamente.
Esperamos que el presente manual sirva de gua efectiva y que pueda ser
enriquecido con nuevos aportes con la finalidad de alcanzar un trabajo de
calidad.
9
SECCIN 1
GENERALIDADES
1.1 OBJETIVO
Establecer y estandarizar los procedimientos bsicos de un examen de
hemograma, hemoglobina, hematocrito, recuento de plaquetas, velocidad
de sedimentacin y recuento de reticulocitos que sirvan de ayuda
diagnstica al clnico.
1.2 CAMPO DE APLICACIN

La aplicacin de las tcnicas hematolgicas nos sirve para estandarizar los
procedimientos a nivel nacional y para que sea de utilidad al personal
tcnico y profesional de los laboratorios clnicos.
1.3 RESPONSABILIDADES
1.3.1
El Centro Nacional de Laboratorios en Salud Pblica, a
travs de su Direccin Ejecutiva de Laboratorios de Referencia, es
responsable de autorizar la elaboracin, la revisin y la
actualizacin del presente manual, de acuerdo con los
procedimientos aprobados por el Instituto Nacional de Salud.
1.3.2
Los directores de los establecimientos de salud son
responsables de autorizar, proporcionar los recursos necesarios, y
designar al personal responsable para la aplicacin de las
disposiciones contenidas en el presente manual.
1.3.3
El personal de los establecimientos de salud es responsable
de planificar las acciones, organizar, controlar y capacitar al
personal para cumplir las disposiciones contenidas en el presente
manual.
1.3.4
Los jefes o responsables de los laboratorios deben asegurar
el control interno de la calidad, la idoneidad del personal, equipos,
materiales, reactivos e instalaciones.
1.3.5
El personal mdico, profesional y tcnico, es responsable
de seguir las especificaciones contenidas en el presente manual y
aplicar los procedimientos especficos indicados.
MPR-CNSP-019
11
1.4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA

1.4.1 Manual de tcnicas bsicas para un laboratorio de salud.
Organizacin Panamericana de la Salud. Publicacin cientfica N 439.
N 2, 1983.
1.4.2 Manual de normas de bioseguridad. Instituto Nacional de Salud.
Serie de Normas Tcnicas N 18. 2.a ed., 1997.
MPR-CNSP-019
12
SECCIN 2
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
2.1 Para la obtencin de muestras, el personal involucrado en los diferentes
procesos para los exmenes hematolgicos debe aplicar las medidas de
bioseguridad establecidas en el Manual de Bioseguridad. Serie de Normas Tcnicas N 18.
2.2 se debe controlar sobre todo:

2.2.1 Al personal que trabaja en el laboratorio de hematologa.
2.2.2
El proceso de coloracin en el que se debe aplicar las
medidas de bioseguridad correspondientes al uso y manipulacin de
sustancias txicas o cancergenas.
2.2.3
Ver lo referente a medidas de proteccin en caso de
accidentes por inoculacin.
MPR-CNSP-019
13
SECCIN 3
OBTENCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS

3.1 OBJETIVO
Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento de obtencin de
muestras sanguneas con un adecuado control de calidad, ya que de ello
depende
que el resultado del anlisis de la muestra sea el correcto. Se efectuar en
ayunas o no, dependiendo de la prueba a usar.
3.2 OBTENCIN DE SANGRE VENOSA CON JERINGA

3.2.1
Materiales y equipos requeridos
3.2.1.1
Algodn.
3.2.1.2
Alcohol al 70%.
3.2.1.3
Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
3.2.1.4
Jeringas de 5 mL.
3.2.1.5
Viales con anticoagulante EDTA.
3.2.2
Obtencin de la muestra
3.2.2.1 Verificar que los elementos por utilizar estn listos,
y que el paciente se sienta cmodo.
3.2.2.2 Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro
dedos por encima de la flexin del codo o a 10 cm del
codo, sujetar con un medio nudo (Fig. 1).
3.2.2.3 Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol
yodado, en un rea de 2 pulgadas (Fig. 2).
3.2.2.4 El paciente deber abrir y cerrar la mano durante
unos segundos y despus la mantendr cerrada, esto
ayudar a visualizar las venas superficiales (Fig. 3).
3.2.2.5 Se retira el estuche protector de la aguja y se coge
la jeringa de tal manera que el bisel se encuentre hacia
arriba (Fig. 4).
3.2.2.6 Se coloca la aguja en direccin paralela a la vena,
se perfora la piel haciendo avanzar la aguja 0,5-1 cm
en el tejido subcutneo, luego se perfora la vena (Fig.
5).
MPR-CNSP-019
14
3.2.2.7
Se aspira la jeringa hasta el volumen requerido.

3.2.2.8 Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje
de hacer puo. Se coloca el algodn seco encima de la
puncin y se retira la aguja (Fig. 6).
3.2.2.9 Retirar la aguja de la jeringa. Verter la muestra
lentamente por las paredes del vial con anticoagulante.
No olvidar colocar una gota en la lmina portaobjeto
para realizar el frotis.
3.2.2.10
Agitar el vial en crculos sobre la mesa
para homogeneizar la muestra con el anticoagulante.
PUNTOS PARA LA EXTRACCIN DE SANGRE (Toma de muestra)

se obtiene de las venas de la fosa cubital
PROCEDIMIENTO
MPR-CNSP-019
15
3.3 OBTENCIN DE SANGRE VENOSA EN TUBOS AL VACIO 3.3.1

Materiales requeridos
3.3.1.1
Algodn.
3.3.1.2
Alcohol al 70%.
3.3.1.3
Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
3.3.1.4
Tubos al vaco con anticoagulante EDTA (K3), EDTA (Na2) u
otro anticoagulante.
3.3.1.5
Agujas con dispositivo para extraccin de sangre al vaco:
N 21 para adultos.
N 22 para nios y neonatos.

De preferencia, ambas de bisel corto para evitar la coagulacin.
MPR-CNSP-019
16
3.3.2 Obtencin de la muestra

3.3.2.1
Repetir los pasos de 3.2.2.1 a 3.2.2.4.
3.3.2.2
Se retira el estuche protector de la aguja y ste se enrosca
al dispositivo para extraccin de sangre al vaco.
3.3.2.3
Colocar la ligadura cuatro dedos por encima de la flexin
del codo o 10 cm por encima de ste y pedir al paciente que abra y
cierre la mano varias veces, para favorecer la dilatacin de las
venas.
3.3.2.4
Una vez escogida la vena, desinfectarla con una pieza de
algodn embebido en etanol al 70%.
3.3.2.5
Se coloca la aguja en direccin paralela a la vena, se
perfora la piel haciendo avanzar la aguja entre 0,5 cm y 1 cm en el
tejido subcutneo, se inserta el tubo al vaco por la parte posterior y
no preocuparse por la cantidad de sangre extrada ya que el mismo
sonido del vaco avisar que la extraccin termin (Fig. 8).
3.3.2.6
Retirar la ligadura tirando del extremo doblado.
3.3.2.7
Colocar un pedazo de algodn seco sobre la parte donde se
encuentra oculta la aguja. Sacar la aguja con un movimiento rpido
y depositarla en el recipiente de metal con desinfectante (Fig. 9).
3.3.2.8
Pedir al paciente que presione firmemente el algodn
durante 3 minutos, con el brazo extendido. No se recomienda que
se flexione el brazo a causa del riesgo que se forme un hematoma.
3.3.2.9
Mezclar por inmersin suave la sangre con
anticoagulante contenido en el tubo. No agitar el contenido.
MPR-CNSP-019
17
el
3.3.3
Ventajas de una extraccin de sangre venosa
3.3.3.1
Pueden hacerse repetidos exmenes con la misma muestra.
3.3.3.2
Parte de la muestra (plasma o suero) puede congelarse
para referencia futura.
3.3.4
Desventajas de una extraccin de sangre venosa
3.3.4.1
La puncin venosa, por su largo procedimiento, requiere
mayor preparacin que el mtodo capilar.
3.3.4.2
El mtodo es tcnicamente difcil en nios, individuos
obesos y pacientes en shock.
3.3.4.3
La hemlisis debe ser evitada, pues se puede obtener una
disminucin en el recuento de eritrocitos.
3.3.4.4
Debe evitarse prolongada estasis venosa producida por el
torniquete, pues produce hemlisis y otros cambios que ponen la
sangre en un estado inadecuado para el anlisis de gases,
recuentos celulares, determinacin de pH sanguneo y algunas
pruebas de coagulacin.
3.3.4.5
La sangre anticoagulada si no es de obtencin reciente no
debe ser utilizada en extensiones de sangre, pues algunos
anticoagulantes producen cambios en las plaquetas que pueden
causar aglutinaciones, agregacin plaquetaria y dificultan la
identificacin de leucocitos.
3.3.4.6
Puesto que algunos de los componentes de la sangre no
son estables, los recuentos de leucocitos y plaquetas e ndice de
sedimentacin deben realizarse antes de que pasen dos horas
desde que se obtuvo la muestra.
3.4 OBTENCIN DE SANGRE DE LA VENA YUGULAR EXTERNA
3.4.1
Materiales requeridos
3.4.1.1
Algodn.
3.4.1.2
Alcohol al 70%.
3.4.1.3
Jeringas de 5 mL.
3.4.1.4
Viales con anticoagulante EDTA.
3.4.2
Obtencin de la muestra
3.4.2.1 El paciente es cubierto por una sbana de manera que los brazos
permanezcan inmovilizados a lo largo del cuerpo.
MPR-CNSP-019
18
3.4.2.2
Al paciente se le coloca de cbito dorsal sobre la mesa de
examen o una camilla, de manera que la cabeza cuelgue sobre el
final de la mesa y el cuerpo sea sujetado por un asistente.
3.4.2.3
Cuando el paciente grita la vena yugular externa se marca
claramente.
3.4.2.4
Limpiar la zona en un rea de 2 pulgadas con alcohol al
70% o alcohol yodado.
3.4.2.5
Se repiten los pasos de 3.2.2.5 a 3.2.2.7 de la extraccin de
sangre venosa con jeringa.
3.4.2.6
Retirar la aguja de la vena y presionar suavemente con un
algodn seco, aproximadamente de 3 a 5 minutos. Pedir al paciente
que permanezca echado diez minutos.
3.4.2.7
Se repiten los pasos de 3.2.2.9.
3.4.2.8
Se repiten los pasos de 3.2.2.10.
3.4.3
Ventajas
constituye un buen mtodo para la obtencin de sangre en pacientes con

shock con venas colapsadas.
3.4.4
Desventajas
Por lo delicado en su procedimiento no se recomienda como rutina, slo en

casos en que no se pueda obtener la muestra por mtodos convencionales.
3.5 OBTENCIN DE SANGRE CAPILAR

Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequea o cuando por
diferentes motivos no pueda practicarse una puncin venosa, debe
recurrirse a la puncin capilar.
3.5.1 Materiales requeridos
3.5.1.2
Algodn.
3.5.1.3
Alcohol al 70%.
3.5.1.4
Lancetas desechables (Fig. 10).
MPR-CNSP-019
19
3.5.1.5 Papel filtro N 2.

3.5.2
Procedimiento (Fig. 11):
3.5.2.1
La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo
medio o anular en los adultos y del dedo gordo del pie o taln en los
nios.
3.5.2.2
estril.
Desinfectar la zona con alcohol al 70%, secar con algodn
3.5.2.3
Punzar la piel con una lanceta estril desechable (2 mm de
profundidad).
3.5.2.4
Usar gasa estril para desechar la primera gota y recoger
las siguientes en tubos capilares. Evitar comprimir la extremidad
para obtener sangre porque se altera la composicin sangunea.
3.5.3
Ventajas
3.5.3.1
Puede obtenerse con facilidad.
3.5.3.2
Es preferible cuando han de realizarse extensiones de
sangre perifrica.
3.5.4
Desventajas
3.5.4.1
Slo se pueden obtener pequeas cantidades de sangre y
los exmenes de repeticin requieren nuevas muestras.
3.5.4.2
La sangre en microtubos (capilares) frecuentemente se
hemoliza interfiendo con la mayora de pruebas de laboratorio.
3.5.4.3
Los resultados obtenidos en pruebas con sangre capilar no
pueden ser comparados con los resultados de las pruebas con
sangre venosa.
3.5.4.4
El dedo no slo es delicado sino difcil de desinfectar
adecuadamente en el tiempo disponible.
3.5.4.5
En pacientes con resistencia disminuida a la infeccin
(aquellos con leucemia, agranulocitosis, diabetes, uremia y
enfermedades con deficiencias inmunolgicas), una muestra
tomada del dedo es mucho ms probable que conduzca a una
infeccin que otra tomada del brazo.
3.5.4.6
El recuento de eritrocitos y leucocitos, as como el recuento
de plaquetas y reticulocitos, no debe realizarse en sangre capilar
debido a la difcil estandarizacin del flujo sanguneo capilar.
MPR-CNSP-019
20
EXTRACCIN DE SANGRE CAPILAR
MPR-CNSP-019
21
SECCIN 4
ANTICOAGULANTES
una vez extrada la sangre, sta puede conservarse coagulada o mantenida
incoagulable mediante la adicin de un anticoagulante.
4.1 CARACTERSTICAS BSICAS DE LOS ANTICOAGULANTES MS USADOS EN

HEMATOLOGA
No alterar el tamao de los hemates.
No producir hemlisis.
Evitar al mximo la agregacin plaquetaria.
No alterar la morfologa de los leucocitos.

La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible,
incluso mantenida bajo refrigeracin (4 C) si no pasan de las 2 horas. El
tiempo mximo entre la extraccin de la sangre y su procesamiento
depende del coagulante de eleccin y no debe ser ms de 4 horas, a
excepcin del anticoagulante EDTA (etilendiaminotetractico) que puede ser
hasta 24 horas (en refrigeracin a 4 C).
Los anticoagulantes pueden emplearse en forma slida o lquida. Los prime ros estn indicados para la determinacin de los parmetros hematolgicos,
ya que no producen, como los anticoagulantes lquidos, dilucin de la
sangre.
4.2 ANTICOAGULANTES SLIDOS

4.2.1 EDTA
Es la sal disdica o tripotsica del cido etilendiaminotetractico. La sal
disdica (Na2EDTA) es menos soluble que la sal tripotsica (K 3EDTA). Estos
compuestos realizan su accin a travs de un efecto quelante sobre el
calcio, al fijarlo impiden su activacin y, por ende, la coagulacin sangunea.
MPR-CNSP-019
22
4.2.1.1
4.2.1.2
Ventajas
Respeta la morfologa eritrocitaria (especialmente la sal tripotsica)

y leucocitaria, de manera que permite una demora de dos horas en
la realizacin del frotis sanguneo despus de la extraccin
sangunea.
Asegura la conservacin de los elementos formes sanguneos

durante 24 horas si la sangre se mantiene a 4 C.
Al inhibir la aglutinacin de las plaquetas, facilita su recuento o su

expresin semicuantitativa a partir del frotis.
La concentracin recomendada de EDTA es de 1,5 mg/mL. de

sangre. Una mayor cantidad de anticoagulante puede producir
retraccin celular, con disminucin del hematocrito, y un aumento
de la concentracin media de la hemoglobina. Un exceso de sangre
con
relacin
al
anticoagulante
produce
formacin
de
microagregados que pueden alterar los resultados. El em pleo de
tubos al vaco con una gota (50mL) de EDTA tripotsica comercial
para 5 mL de sangre es de inters prctico dado que es cien veces
ms soluble facilitando la mezcla de sangre con anticoagulante.
Desventajas
usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos, a los cuales les
produce encogimiento y cambios en su forma, por ello debe cuidarse de
agregar la cantidad correcta de sangre al anticoagulante.
4.2.2
Anticoagulante de Wintrobe
Es una mezcla de oxalato de amonio y potasio. Acta por precipitacin del

calcio, es fcil de preparar. se emplea en forma de polvo en proporcin de 2
de oxalato de amonio por 1 de oxalato de potasio. La cantidad recomendada
es de 2 mg x mL de sangre. Este anticoagulante no afecta el volumen
globular medio y puede usarse para determinaciones de hemoglobina,
hematocrito y recuento globular, pero para los extendidos queda limitada a
los primeros minutos, tampoco es til para el recuento plaquetario porque
produce formacin de agregados plaquetarios.
4.2.3
Heparina
El nombre de heparina proviene del griego hepar, que significa hgado, ya

que fue aislado por primera vez de las clulas de este tejido. Es un
mucopolisacrido cido. Presenta el inconveniente de que si no se agita
rpidamente con la sangre despus de extrada pueden formarse
microcogulos, aunque no altera el volumen eritrocitario ni la morfologa de
los leucocitos. No es recomendable para el frotis sanguneo porque produce
un fondo azul en la lmina.
MPR-CNSP-019
23
La heparina de sodio o litio puede usarse en forma slida o lquida, en

proporcin de 0,1 - 0,2 mg de heparina por 1 mL de sangre.
4.3 ANTICOAGULANTES LQUIDOS

4.3.1
Citrato trisdico
Es de eleccin para las pruebas de hemostasia y la velocidad de sedimenta cin. Acta a travs de la precipitacin del calcio. La concentracin depende
de la prueba por realizar.
Para pruebas de hemostasia se emplea en proporcin de 1: 9 (0,5 mL de

anticoagulante para 4,5 mL de sangre total).
Para la determinacin de la VSG (Velocidad de Sedimentacin Globular) es

1:4 (0,5 mL de anticoagulante para 2 mL de sangre).
4.3.2
Oxalato sdico
Recomendado tambin para las pruebas de hemostasia. Se emplea en pro porcin de un volumen de anticoagulante para 4 vol. de sangre.
MPR-CNSP-019
24
SECCIN 5
REALIZACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEO

La prctica del frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran
importancia en hematologa ya que el diagnstico de muchas enfermedades
hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas
morfolgicas de las clulas sanguneas, de manera que ste no debe ser
excesivamente grueso ni excesivamente fino. Todas las lminas por usar,
sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con algodn y alcohol al 70% para
eliminar la grasa que viene adherida.
5.1 MTODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS

5.1.1
Materiales
Alcohol al 70%.
Algodn.
Lanceta descartable.
Portaobjetos de vidrios limpios y desgrasados (25 x 75 mm).
5.1.2
Fundamento
consiste en la extensin de una gota de sangre sobre un portaobjeto (25 x

75),
empleando el canto biselado de otro portaobjeto de igual dimensin (Fig.
12).
5.1.3
Procedimiento
5.1.3.1
Una vez extrada la sangre con cualquiera de las
metodologas, se coloca una pequea gota de sangre (5mL) (aprox.
3 mm de dimetro) sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente
de uno de los extremos.
5.1.3.2
Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la
superficie del primer portaobjeto (en la que se encuentra la gota de
sangre) formando un ngulo de 45.
5.1.3.4 Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre
el otro en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede
bien extendida sobre la superficie del primer portaobjeto. El grosor
del
25
Instituto Nacional de Salud frotis
sanguneo puede variar segn sea el ngulo que formen entre s
ambos portaobjetos. As, si es superior a 45, la extensin obtenida
ser gruesa y corta, si es inferior a 45 ser larga y fina. El secado
del frotis es a temperatura ambiente y en posicin horizontal.
MPR-CNSP-019
Zona excesivamente gruesa: Se halla en la regin inmediata al

punto de partida de la extensin (cabeza). En ella se aprecia
siempre un aumento de linfocitos.
Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensin y

termina en un rea donde las clulas adoptan una posicin
acartonada (barbas). En esta regin existe un exceso de
granulocitos y monocitos.
Zona ideal: Corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella

existe un reparto equilibrado de clulas.
5.2 COLORACIONES USADAS

Una vez seco el frotis, se procede a la tincin hematolgica con el colorante
de
Romanowsky, constituido por la mezcla de eosina y azul de metileno.
Dentro
de stas tenemos:
5.2.1
colorante de Giemsa.
5.2.2
Colorante de May-Grunwald.
5.2.3
Colorante de Wright.
5.2.4
Colorante de Leishman.
26
MPR-CNSP-019
Preparacin de colorantes (Anexo A)
Para el estudio de las clulas sanguneas utilizar el colorante 5.2.3 y

5.2.4.
Para el estudio de hemoparsitos utilizar el colorante 5.2.1.

Utilizar el colorante 5.2.2 para casos especiales en que se desee
observar con mayor claridad y especificidad los grnulos de los
neutrofilos.
5.3 TINCIN CON COLORANTE DE WRIGHT

5.3.1
Fundamento
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la

sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y
tamao de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades
de coloracin. La informacin obtenida de un frotis de sangre perifrica
depende en gran parte de la calidad del extendido y la coloracin.
5.3.2
Materiales
5.3.2.1
Colorante de Wright (Anexo A).
5.3.2.2
Frasco gotero.
5.3.2.3
Solucin amortiguada tamponada (Anexo A).
5.3.3
Procedimiento
5.3.3.1
Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dejar secar
entre 15 y 20 minutos.
5.3.3.2
Luego se coloca la preparacin en un soporte y se cubre
con el colorante de Wright, dejndolo por espacio de 5 minutos.
5.3.3.3
Posteriormente se aade solucin amortiguada tamponada
en partes iguales hasta obtener un brillo metlico, dejando 6
minutos adicionales.
5.3.3.4
Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
5.3.3.5
Se coloca en el microscopio y, con pequeo aumento, se
revisa la calidad de la coloracin, la cantidad aproximada de
glbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se
coloca una gota de aceite de inmersin y se enfoca a un aumento
de 100x
La forma de los glbulos rojos se examinar detenidamente obser vando adems del color (cantidad de hemoglobina), presencia de
plaquetas, su agrupacin y distribucin.
MPR-CNSP-019
27
5.3.3.6 Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glbulos blancos
en 100 clulas, para lo cual se deber conocer las diferencias entre
neutrfilos, eosinfilos, linfocitos y monocitos.
una extensin de sangre bien teida debe caracterizarse por una

buena diferenciacin de las estructuras subcelulares en los
leucocitos, una coloracin rosada de los hemates y la ausencia de
precipitados. Los defectos ms frecuentes observados en la tincin
del frotis sanguneo son:
coloracin excesivamente azul, debido a:
Frotis excesivamente grueso.
Lavado insuficiente.
Tincin muy prolongada.
Empleo de colorante excesivamente alcalino.
coloracin con una tonalidad rosada:
El colorante, el tampn o el agua de lavado tienen un pH

demasiado cido.
Presencia de precipitados:
Obedecen a una accin excesiva del colorante. Esto se puede evi tar con la filtracin.
MPR-CNSP-019
28
SECCIN 6
HEMOGRAMA-HEMOGLOBINA-HEMATOCRITO
El hemograma de Shilling constituye uno de los exmenes de laboratorio
ms usados en el campo de la hematologa. Comprende las siguientes
pruebas:
6.1 RECUENTO LEUCOCITARIO

Principio
La sangre anticoagulada se deposita en un lquido que permite evidenciar
los leucocitos, mantenindolos visibles, mientras que los eritrocitos son
hemolizados. El recuento del nmero de leucocitos o glbulos blancos se ex presa por mm3 (milmetro cbico).
6.1.1 Equipos
-
Microscopio.
-
Hemocitmetro (Cmara de
Neubauer). consta de los siguientes
elementos:
Una lmina portaobjeto gruesa, en el centro se hallan dos
superficies cuadriculadas iguales separadas del resto de la lmina
por surcos y dos barras transversales algo ms elevadas.
Una laminilla cubreobjetos pticamente plana, que, al colocarse
sobre las barras elevadas de la lmina forma una cmara entre el
cubreobjetos y la superficie cuadriculada.
La altura entre el cubreobjetos y la lmina portaobjetos es de 0,1 mm.

cada cuadrcula mide 3 mm de lado y se divide en 9 cuadrados grandes.
cada uno de los cuales mide 1 mm 2 de superficie, que se subdivide a su
vez en 16 cuadrados medianos. El cuadrado grande central se divide en
25 cuadrados pequeos y cada uno de ellos en 16 cuadraditos. Cada
cuadrado pequeo mide 0,2 mm de lado (0,04 mm 2 de superficie), y
cada cuadradito mide 0,05 mm de lado (0,0025 mm 2 de superficie).
MPR-CNSP-019
29
6.1.2 Materiales y reactivos requeridos

6.1.2.1
Pipeta de glbulos blancos (De Thoma) o pipeta automtica
(de 0 a 100 mL). Presenta cerca del extremo superior una marca de
11, inmediatamente contina una dilatacin (bulbo) que contiene
una perla que funciona como mezcladora, luego sigue el extremo
ms largo de la pipeta (tallo) que est dividida en 10 partes, con 2
marcas: 1 (parte final del bulbo) y 0,5 (a la mitad del tallo). se le
acopla a su extremo superior 1 tubo de goma y una bombilla para
aspirar.
6.1.2.2
Diluyente de glbulos blancos: Solucin de Turk al 1%.
6.1.2.3
Contador manual (Slo si fuera necesario).
6.1.2.4
Papel filtro.
6.1.3 Procedimiento
6.1.3.1
Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre
capilar del dedo, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de
glbulos blancos hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con
papel absorbente.
6.1.3.2
Introducir la pipeta en el tubo que contenga solucin de
Turk y absorber hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).
6.1.3.3
Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente
o en un rotador automtico por 2 3 minutos.
6.1.3.4
Monte la laminilla de vidrio en la cmara para recuento que
debe estar limpia y seca.
6.1.3.5
Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para
luego colocar una gota pequea de esta solucin en la cmara.
6.1.3.6
Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las clulas
se sedimenten.
6.1.3.7
Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados
grandes angulares. Cuando se usa la pipeta automtica, se toma 20
mL (0,02 mL) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar
con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de
solucin de Turk (aqu tenemos una dilucin 1:20).
MPR-CNSP-019
30
La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como est indicado en la

figura. Adems de los leucocitos contados dentro de cada uno de los
cuadrantes, se deben contar todos los leucocitos que se encuentren
adheridos en la lnea horizontal superior y vertical exterior, o de lo
contrario, todos los leucocitos, adheridos a la lnea horizontal inferior y
vertical interior.
6.1.4 Resultados
N de leucocitos x mm3 =
altura x dilucin x rea
Reemplazando
leucocitos contados en
cam
ps
leucocitos contados en 4 campos 1/10 x 1/20 x

4
leucocitos contados en 4 campos 4/200

y/1
= N leucocitos contados x 50
4/200
MPR-CNSP-019
31
MPR-CNSP-019
3
2
6.2 RECUENTO DE GLBULOS ROJOS

Principio
La sangre se diluye en un lquido que nos permite observar claramente los
hemates, luego esta dilucin se coloca en una cmara de Neubauer con la
ayuda de una pipeta automtica o pipeta Pasteur y se cuentan en el
microscopio a un objetivo de 40x para calcular el nmero de glbulos rojos
por mm3.
6.2.1
Equipos
Microscopio.
Hemocitmetro (cmara de Neubauer).
6.2.2
Materiales y reactivos requeridos
6.2.2.1
Pipeta de glbulos rojos (De Thoma) o pipeta automtica
(de 0-100 mL). Presenta cerca del extremo superior una marca de
101, inmediatamente contina una dilatacin (bulbo) que contiene
una perla roja mezcladora, luego sigue el tallo (extremo ms largo),
el cual est dividido en 10 partes con 2 marcas: 1 acabando el
bulbo y 0,5 a la mitad del tallo. Se requiere igual que el recuento de
leucocitos una boquilla para aspirar.
6.2.2.2
Diluyente de glbulos rojos: Cloruro de Sodio al 0,9% (ver
anexo).
Diluyente de Hayem (ver anexo).
6.2.2.3
Contador manual (slo si fuera necesario).
6.2.2.4
Papel filtro.
6.2.3
Procedimiento
6.2.3.1
Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar
sangre capilar.
6.2.3.2
Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca
de 0,5 para realizar una dilucin de 1/200, y si se carga hasta 1, la
dilucin ser 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
6.2.3.3
Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo
diluyente (Hayem) y llenar de lquido de dilucin hasta la marca de
101.
6.2.3.4
Se coloca en un rotador automtico o se hace rotar
manualmente de 2 a 3 minutos.
6.2.3.5
Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego
colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para
que por capila- ridad se llene exactamente.
6.2.3.6
MPR-CNSP-019
Hacer el recuento con objetivo de 40x.
33
Se puede realizar con la pipeta automtica, se toma 20 mL

(0,02mL) de sangre total con anticoagulante, o sangre capilar y se
deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de solucin de
Hayem (aqu se tiene una dilucin de 1:200). Se deja reposar
aproximadamente 5 minutos y se procede a cargar la cmara con la
misma pipeta usando un nuevo tip. El inconveniente aqu es el gasto
de reactivo (4 mL) pero las medidas son mas exactas.
6.2.3.7
Dejar en reposo por 3 minutos.
6.2.3.8
Enfocar la cuadrcula a 10x, luego con el objetivo de 40x
contar sobre el cuadrado grande central de la cmara slo en 5
cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80
cuadraditos en total).
6.2.3.9
En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan
por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el
cuadrado pequeo de recuento y no se consideran los
correspondientes a los lmites inferior y derecho.Se hace el recuento
en los puntos ABCD y E y se sigue los mismos parmetros del
recuento de leucocitos.
LECTURA
MPR-CNSP-019
34
6.2.4 Resultados
N de hemates x mm3 = hemates contados en 5 cuadrados pequeos
altura x dilucin X rea
Reemplazando
= hemates contados en 5 cuadrados pequeos

=
1/10 x 1/200 x 1/5
hemates contados en 5 cuadrados pequeos 1/10 000
= hemates contados x 10 000
6.2.5 Valores de referencia

(unidades tradicionalesmillones de clulas/mm3).
Hombres
4 500 000 - 5 500 000
Mujeres
4 000 000 - 5 000 000
Nios (4 aos)
4 200 000 - 5 200 000
Lactantes (1 - 6 meses)
3 800 000 - 5 200 000
Recin nacidos
5 000 000 - 6 000 000
Fuente: Manual de tcnicas bsicas para un laboratorio de salud. OPS, N 2.
6.3 DETERMINACIN DEL VOLUMEN GLOBULAR (Hematocrito)

Mide la fraccin que comprende a los glbulos rojos (masa globular),
respecto al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar.
Puede expresarse en porcentaje o como valor decimal.
MPR-CNSP-019
35
Hto =
6.3.1
altura de la columna de glbulos rojos

altura de la columna de sangre total
(glbulos rojos ms plasma)
Mtodo de Wintrobe
Materiales requeridos:
-
Tubo de Wintrobe graduado de 0 - 100 mm.
Pipetas Pasteur o pipetas de transferencia.
Tapn de goma. Procedimiento:

Llenar la sangre extrada con anticoagulante con una pipeta pasteur, co menzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo
cuidado de no provocar espuma.
Tapar el tubo con un tapn de goma para evitar la evaporacin.
Centrifugar a 3000 rpm por 30
minutos. Resultados (lectura):

Del tubo graduado se mide directamente el nivel de la columna de glbulos
rojos.
Valores de referencia:
Hombres : 40% - 54%
Mujeres : 38% - 48%
6.3.2
Mtodo de
microhematocrito
Materiales requeridos:
-
Capilares rojos y azules (75 mm x 1,5 mm).
Plastilina.
MPR-CNSP-019
Procedimiento:
36
Ocluir (tapar) un extremo del capilar con plastilina.
Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del

pulpejo del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre
venosa con anticoagulante de Wintrobe o EDTA. Debe llenarse
aproximadamente 70% - 80% del capilar.
Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrfuga
de microhematocrito, con el extremo ocluido adherido al reborde
externo de la plataforma.
Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 - 12 000 rpm.
Resultados (lectura)
La lectura se realiza con una escala estandarizada que expenden en el
comercio.
Uso de la escala:
Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la
columna de eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede
exactamente al mismo nivel de la lnea horizontal correspondiente
al cero.
Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada

con el nmero 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma.
Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos contine sobre la
lnea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posicin
vertical.
La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos

indicar la fraccin de volumen de stos.
Hombres
Mujeres
Nios (5 aos)
Lactantes (3 meses)
Recin nacidos
4
0
%
3
8
%
3
8
%
3
7
%
5
0
50
%
44
%
44
%
42
%
58
MPR-CNSP-019
37
6.4 DOSAJE DE HEMOGLOBINA

Principio
La sangre se diluye en lquido de Drabkin, el cual hemoliza los hemates y
convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de
hemiglobina). La solucin que se produce se lee por medio de un
espectrofotmetro o fotocolormetro. Su grado de absorbancia es
proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre.
6.4.1 Materiales y reactivos
6.4.1.1
Un colormetro fotoelctrico o un espectrofotmetro.
6.4.1.2
Pipetas:
Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mL,
con tubo de goma y boquilla.
Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL.
6.4.1.3
Tubos de ensayo.
6.4.1.4
Reactivo de Drabkin para dilucin.

Este reactivo se puede adquirir en tabletas o polvos para disolver en
1 litro de agua destilada. si se dispone de una balanza analtica la
plaquetas.
eritrocitos (Fig. 15).
preparacin se puede hacer en el laboratorio. Esta solucin se puede
conservar durante un mes en un frasco de vidrio oscuro. Deschese
si se enturbia.
MPR-CNSP-019
38
El lquido de Drabkin no debe enfriarse demasiado, pues puede cau sar una decoloracin con reduccin del ferrocianuro.
Referencia para cianometahemoglobina (estandarizada):
Esta solucin se puede adquirir en el comercio o en un laboratorio de
referencia.
En las soluciones de referencia comerciales casi siempre indica la
concentracin en miligramos por 100 mL (generalmente en mg%).
Se preparan diluciones con reactivo de Drabkin de tal manera que
los patrones contengan concentraciones de 60 mg, 40 mg, 20 mg de
CNHi.
Leer los tubos en absorbancia con filtro verde a 540 nm, llevando el
fotmetro a cero con el reactivo de Drabkin.
Para calcular la concentracin de hemoglobina en cada tubo, realizar
el siguiente clculo:
P x D 1000
Hb en g/100 mL
P = Concentracin del patrn. D = Dilucin de la muestra de sangre,
que es 251 veces.
Para una concentracin de patrn de :

60 mg 15 g/100 mL
40 mg 10 g/100 mL
20 mg 5 g/100 mL
Luego graficar una curva patrn colocando en el eje de las

ordenadas las lecturas en absorbancia y en la abcisa la
concentracin de hemoglobina en g/100 mL.
6.4.2 Calibracin del colormetro
Antes de usar el colormetro para calcular la hemoglobina se debe elaborar
una curva de calibracin. Con esta curva se puede preparar un grfico y un
cuadro de valores de hemoglobina.
MPR-CNSP-019
6.4.3
Procedimiento
39
6.4.3.1
En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de
reactivo de Drabkin.
6.4.3.2
La sangre que puede utilizarse es de puncin del dedo
(sangre capilar) o de sangre venosa recin extrada.
6.4.3.3
Con una pipeta automtica o pipeta de Salhi se toma
exactamente 0,02 mL (20 mL) de sangre total, limpiar luego la
punta de la pipeta y se vierte en el tubo que contenga reactivo de
Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.
6.4.3.4 Dejar en reposo por espacio de 5 a 15 minutos.
6.4.3.5
Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a
cero el fotmetro con agua destilada / Drabkin.
6.4.4 Resultados
La lectura en absorbancia del problema debe ser comparada en la curva
patrn para encontrar a que concentracin de hemoglobina corresponde ex presndose en g/100 mL.
6.4.5
Nios al nacer
Nios de 1 ao
Nios de 10 -12 aos
Mujeres
Hombres
13
,6
11
,3
11
,5
11
,5
14
,0
-
19,6
g/dL
13,0
g/dL
14,8
g/dL
16,5
g/dL
18,0
g/dL
6.5 FROTIS DE SANGRE PERIFRICA

Se debe considerar lo siguiente:
6.5.1 Calidad del frotis
Debe abarcar 80% de la lmina con cabeza, cuerpo y cola. Extensiones
gruesas dificultan la visualizacin e identificacin celular, mientras que las
delgadas originan una distribucin anormal de los elementos.
MPR-CNSP-019
6.5.2
Eritrocitos
40
Se estudia su tamao, forma, color y si existen inclusiones o elementos

extraos como se ver ms adelante.
6.5.3
Plaquetas
Estudiar tanto cualitativa como cuantitativamente, debiendo observarse de

3 a 10 plaquetas aproximadamente por 100 glbulos rojos o varias
plaquetas y grupos ocasionales por campo. Visto con objetivo de inmersin,
no debe existir menos de una plaqueta por campo.
6.6 FRMULA LEUCOCITARIA
La frmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las
distintas clases de leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de
los porcentajes puede incluso calcularse el nmero real de cada clase de
leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto), conocindose el total de
leucocitos.
Por ejemplo:
Si se tiene 60% de neutrfilos segmentados y el recuento total de leucocitos
total es de 20 000, entonces la cifra absoluta de neutrfilos segmentados
sera:
60/100 x 20 000 = 12 000 (valor absoluto)
Valores de referencia absolutos de neutrfilos segmentados = 3000 - 5000

Conclusin: Los valores relativos slo nos sirven cuando los valores totales
de leucocitos se encuentran dentro del valor normal. En caso contrario
(leucocitosis o leucopenia) se debe emplear la frmula para obtener el valor
real, y as determinar que elemento celular se encuentra fuera del rango
normal, sea elevado o disminuido.
6.6.1 Procedimiento
6.6.1.1
Se examina la lmina a pequeo aumento para comprobar
si los elementos celulares estn bien distribuidos.
6.6.1.2
Si es favorable se examina con el objetivo de inmersin. La
parte ideal para visualizar clulas para la frmula leucocitaria es en
la parte final del cuerpo y comienzos de la cola, recorriendo la
lmina de izquierda
41
Instituto Nacional de Salud a
derecha o de arriba hacia abajo hasta contar 100 leucocitos inclui dos
los agranulocitos y granulocitos. Aqu no se incluyen los elemen tos
inmaduros de sangre roja.
6.6.1.3
A medida que se va contando, se va anotando el nmero
de cada una de las clases de glbulos blancos observados.
MPR-CNSP-019
6.6.1.4
Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos
para luego comparar con los porcentajes normales.
6.6.1.5
Si se tiene en el recuento de leucocitos valores por encima
de 10 000 y por debajo de 5000 se debe repetir el recuento.
6.6.2 Valores de referencia
LEUCOCITOS
VALORES RELATIVOS (%)
VALORES ABSOLUTOS
(%)
Neutrfilos
segmentados
Neutrfilos
abastonados
Eosinfilos
55-65
3000-5000
3-5
150-400
0,5-4,0
20-350
Basfilos
0-0,5
10-60
Monocitos
4-8
100-500
Linfocitos
25-35
1500-4000
MPR-CNSP-019
42
SECCIN 7
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN
La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est in cluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy
importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermeda des funcionales, as como en los procesos inactivos o estrictamente locales.
7.1 MTODO DE WESTERGREN

Fundamento
Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar
sangre anticoagulada en un tubo en posicin vertical. Se lee
macroscpicamente la columna de plasma al cabo de una hora de reposo.
Materiales
-
Tubos de Westergren.
-
Soporte para tubos de
Westergren. Procedimiento
En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8%
se extrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre
una superficie lisa.
Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de
Westergren, el cual tiene una graduacin de 0 a 200 mm de arriba hacia
abajo y presenta ambos extremos abiertos.
La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posicin vertical
sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos.
7.1.2
Resultados
Medir los milmetros descendidos de glbulos rojos mediante la columna de

plasma por encima del paquete globular.
7.1.3
Valores de referencia
Hombres : 1 - 10 mm de altura/hora
Mujeres : 3 - 14 mm de altura/hora
MPR-CNSP-019
43
7.2 MTODO DE
WINTROBE Fundamento
Al igual que el mtodo de Westergren, este mtodo mide la tendencia de
los eritrocitos a la sedimentacin al colocar sangre anticoagulada en un
tubo pequeo. Se lee la columna de plasma al cabo de una hora de
reposo.
7.2.1 Procedimiento
El mismo que para el mtodo de Westergren.
7.2.3
Resultados
Medir los milmetros descendidos de glbulos rojos mediante la columna
de plasma por encima del paquete globular.
7.2.4
Hombres : 0 - 5 mm/hora
Mujeres : 0 - 10 mm/hora
MPR-CNSP-019
44
SECCIN 8
PERFIL DE HEMOSTASIA
8.1 PRINCIPIOS GENERALES
cuando se realizan pruebas de hemostasia se debe considerar los cuidados
comunes a toda prueba de laboratorio. Entre estos tenemos:
8.1.1
Uso de anticoagulantes indicados: El tipo y la proporcin
del anticoagulante deben ser evaluados para cada muestra.
8.1.2
Luego de centrifugar la sangre, el plasma obtenido es
activado por contacto con el vidrio. Esto puede alterar algunas
pruebas, por ello se sugiere usar recipientes de superficies "no
humedecibles", como el plstico o el vidrio siliconizado.
8.1.3
El material debe estar escrupulosamente lavado, ya que
residuos de protenas pueden contener sustancias tromboplsticas.
8.1.4
El material de vidrio debe lavarse tres veces con
detergente y luego ser puesto en mezcla sulfocrmica por lo menos
durante seis horas, luego debe enjuagarse con agua destilada
varias veces.
8.1.5
Las pruebas deben realizarse lo antes posible y, si hay
demora, las muestras se podrn en congelacin a 4 C.
8.1.6
Las pruebas se realizan siempre en duplicado y usando
controles. Las muestras controles sern obtenidas usando la misma
tcnica empleada para obtener las muestras problema (pool de
plasmas) o en forma comercial.
8.2 MECANISMO DE COAGULACIN

Didcticamente podemos dividir el mecanismo de activacin de la coagula cin en tres etapas:
8.2.1
La generacin de la tromboplastina o activador de la
protrombina (primera fase de la coagulacin sangunea).
8.2.2
La generacin de la trombina (segunda fase de la
coagulacin sangunea).
8.2.3 La formacin de la fibrina (tercera fase de la coagulacin
sangunea).
MPR-CNSP-019
45
MPR-CNSP-019
4
6
8.4.1 Tiempo de incubacin

El tiempo de incubacin del plasma con los reactivos correspondientes debe
ser muy exacto y la temperatura siempre a 37 C. Cuando no se empleen
mtodos automatizados, el tiempo se medir mediante un cronmetro, el
cual debe dispararse simultneamente con la adicin del reactivo y pararse
en el instante en que se inicia la coagulacin.
8.4.2 Causas de error
8.4.2.1 En la obtencin del plasma
Estasis venosa prolongada. Favorece la fibrinlisis local.
Puncin venosa inadecuada.
Dilucin errnea del plasma. Proporcin de sangre-anticoagulante

inexacta. Esta proporcin (una parte de citrato trisdico + nueve
partes de sangre) debe mantenerse con toda exactitud.
Tiempo de centrifugacin inadecuado.
Presencia de hemlisis en el plasma.
Conservacin prolongada del plasma antes de realizar la prueba.

Ello conduce a un descenso de la actividad de los factores lbiles (V
y VIII) y, por tanto, el plasma debe ser analizado dentro de las dos o
cuatro horas de practicada la extraccin.
8.4.2.2 En la realizacin de la tcnica
Errores de pipeteo.
Empleo de los reactivos inadecuados o caducados.
Empleo de los reactivos mal preparados.
Empleo de una temperatura inadecuada.
Tiempos de incubacin inexactos.
Empleo de agua no destilada.
Mtodo de exploracin
in vivo
8.5 TIEMPO DE SANGRA: Mtodo de Ivy.

Mtodo de Duke.
MPR-CNSP-019
47
8.5.1 Mtodo de Ivy

Principio
Mediante esta prueba se estudia la adhesin de las plaquetas al endotelio
vascular y su capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la
hemorragia a nivel de un vaso de pequeo calibre. Consiste, por tanto, en
realizar una pequea herida y medir el tiempo que tarde en dejar de
sangrar.
Materiales
Esfingomanmetro o tensimetro de mercurio.
Lanceta (dispositivo descartable estandarizado para tiempo de sangra).
Cronmetro.
Papel Wathman N 1, cortado en crculos.
Vendita compresiva.
Algodn y alcohol.
Tcnica
Exponer el antebrazo del paciente y escojer una zona libre de
vnulas, hematomas, heridas y otros. Si el paciente tiene marcada
cantidad de vellos, afeite la zona.
Limpie con alcohol la zona escogida.
Coloque el tensimetro en el brazo del paciente y reglelo a 40 mm Hg.
Se extrae la lanceta de su reservorio estril y se quita el seguro. No

deben pasar ms de 30 a 60 segundos entre la inflada del
tensimetro y la produccin de la incisin.
Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronmetro y un

segundo despus retire el dispositivo.
Cada 30 segundos secar con el papel de filtro, no tocar los bordes

de la incisin para no interferir con el tapn plaquetario. Se anota el
tiempo que tarda en cesar la hemorragia, lo que corresponde al
tiempo de sangra.
Interpretacin del resultado

El valor normal del tiempo de sangra segn esta metodologa es de 2 a 8
minutos, por lo que los valores superiores a 10 minutos pueden ser ya
considerados patolgicos. Cuando el tiempo se alarga ms de 20 minutos,
puede detenerse la hemorragia aplicando sobre la herida una compresa de
algodn o gasa estril si es muy profunda.
MPR-CNSP-019
48
Limitaciones
Si existe trombocitopenia menor de 50 000/mm 1 el tiempo debe ser

prolongado.
Debe tenerse cuidado de que el paciente no haya ingerido

medicamentos que interfieran la funcin plaquetaria, como aspirina
u otros, hasta 7 a 8 das antes de la prueba.
Interpretacin
El tiempo de sangra por este mtodo es la mejor valoracin de la funcin
plaquetaria. La prolongacin del tiempo en esta prueba se encuentra en
trombocitopenias o las enfermedades de alteracin funcional de las
plaquetas, como son la enfermedad de Von Willebrand, la tromboastenia de
Glasmann, el Sndrome de Bernard-Soulier, la enfermedad de Storage Pool y
otras. Mide in vivo la adhesin, la agregacin y la liberacin plaquetaria
como respuesta del organismo a la lesin vascular.
Al realizar esta prueba, debe tenerse siempre en cuenta que la ingesta
previa de cido acetilsaliclico puede alterar los resultados.
8.5.2 Mtodo de Duke
Con una lanceta se hace una pequea incisin en el lbulo de la oreja. La
sangre fluye por esta incisin y se mide el tiempo que transcurre hasta que
se detiene el sangrado.
Este ensayo se lleva a cabo:
>
Para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrgicos.
>
Antes de realizar operaciones quirrgicas.

>
Antes de efectuar una puncin en el hgado o el

bazo. Materiales
Una lanceta estril.
ter.
Filtro de papel (o papel secante).
Si es posible, un cronmetro o, en su lugar, un reloj con segundero.
Despus de 30 segundos. Reco ja la primera gota de sangre en una esquina

del papel secante. No toque la piel con el papel (Fig. 4).MPR-CNSP-01951
1
MPR-CNSP-019
49
Mtodo
1.
Limpie
con
suavidad
el lbulo
de
la
oreja
utilizand
o
una
pieza de
algodn
embebid
a
en
ter. No
frote.
Djese
secar
(Fig. 2).
Haga
la
incisin en
4.
Espere
otros
30
segundos
y recoja la
segunda
gota
de
sangre
con
el
el
lbulo
de la oreja
con cierta
profundida
d,
al
mismo
tiempo
cronometr
ar.
La
sangre
deber
fluir
libremente
sin que se
necesite
exprimir el
lbulo de
la
oreja
(Fig. 3).
papel
secante,
un
poco
ms
adelante
de
la
primera
(Fig. 5).
MPR-CNSP-019
50
5. cuando las gotas de sangre de jen de fluir, detener el cronmetro (o

anote el tiempo transcurri do segn el reloj, o contar el n mero de gotas
recogidas en el papel secante y multiplicarlo por 30 segundos) (Fig. 6).
Resultados
comunique el tiempo de sangrado redondendolo al medio minuto ms
cercano.
Observaciones
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensin de sangre
teida segn el mtodo de Romanowski para observar si las plaquetas
son escasas.
Interpretacin del resultado
El valor de referencia del tiempo de sangra segn este mtodo es de 1 a
4 segundos.
8.6TIEMPO DE COAGULACIN DE SANGRE TOTAL (TCST): Mtodo de LeeWhite

Principio
Se observa la formacin del cogulo en tubos de vidrio en condiciones
estandarizadas; esta prueba mide el mecanismo intrnseco de la
coagulacin.
Materiales (Fig. 1)
Un bao mara a 37 C, o un matraz al vaco, con agua a la misma
temperatura.
Dos tubos de ensayo limpios, de 10 x 75 mm, del mismo calibre,

marcados en el nivel de 1 mL.
Un cronmetro.
Utensilios y materiales para puncin venosa.
Mtodo
1. Mediante una jeringa de material plstico extraiga poco ms de 3 mL
de sangre venosa, puncione la vena rpidamente, de la manera
adecuada. cronometrar el tiempo desde el momento que la sangre entre a
la jeringa (Fig. 2).
MPR-CNSP-019
3. Despus de 3 a 5 minutos sa car el primer tubo del bao

mara. Inclinar hacia un plano
de
90
en
rotacin
a
intervalos de 30 segundos
hasta que la sangre coagule
(la sangre no fluye cuando el
tubo est en posicin horizontal) (Fig. 4).
4. Examine el segundo tubo

inmediatamente despus que
haya coagulado la sangre del
primero, lo que por lo general
es inmediato. Cronometrar. Se
notifica como tiempo de
coagulacin la media de los
dos tubos.
Resultados
El tiempo normal de coagulacin en tubo es de 5 a 15 minutos a 37 C.
Interpretacin
El tiempo de coagulacin est prolongado cuando hay severa
deficiencia de todos los factores de coagulacin, excepto en la
trombocitopenia y deficiencia de factor VII o XIII. Tambin est
prolongado en presencia de heparina o anticoagulantes
52
circulantes endgenos. Un tiempo de coagu lacin normal no

excluye un desorden de la hemostasia.
Es una prueba muy poco dolorosa y es prolongada apenas cuando

la deficiencia es severa.
El factor deficiente puede estar a 5% de lo normal sin afectar la

prueba.
MPR-CNSP-019
53
8.7 TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (PTTK)

Principio
Esta prueba mide la fase intrnseca de la coagulacin, en presencia de
una "tromboplastina parcial" (cefalina), la cual sustituye la accin del
factor plaquetario tres. Se obtiene mximo efecto de contacto por la
adicin del kaoln.
Materiales:
Plasma citratato del paciente.
Plasma citratado control.
Cefalina kaoln (comercial).
Cloruro de calcio 0,025 M.
Pipetas automticas de 0,1 mL.
Cron
metro
.
Mto
do:
Precalentar el cloruro de calcio a 37 C en bao mara por 5 minutos.

En un tubo de 12 x 75 mm a 37 C, aadir 0,1 mL de plasma y 0,1
mL de la solucin de cefalina kaoln previamente agitada.
Accionar el cronmetro. Agitar. Incubar a 37 C por 10 minutos.
Aadir 0,1 mL de cloruro de calcio (Ca Cl 2). Accionar el segundo

cronmetro. Agitar los tubos suavemente a intervalos de 10
segundos, hasta 30 segundos, y agitar rpidamente hasta la
formacin del cogulo. Anotar el tiempo.
Estudiar el plasma del paciente y control por duplicado. Varias

pruebas pueden ser realizadas simultneamente a intervalos de
dos minutos.
Resultados
Se anota el tiempo que tarda en
coagular. Interpretacin
El PTTK es una prueba importante de despistaje, detectando las
deficiencias ms insignificantes (debajo de 25% de los niveles normales)
de los factores XII, XI, IX, VIII, X, V. Esta prueba es mucho ms sensible
que el TCST para la deteccin de estas deficiencias. Su utilidad ms
importante es en la deteccin de las deficiencias congnitas de los
factores VIII y IX. No detecta deficiencias del factor plaquetario tres y
factores VII y XIII. Esta prueba est alargada tam bin en presencia de
heparina.
MPR-CNSP-019
54
De 30 a 45 segundos.
Observacin
En el mercado existen varios preparados comerciales. Si se utiliza
cualquiera de estos preparados, seguir estrictamente las indicaciones del
fabricante.
8.8 TIEMPO DE TROMBINA Principio

Mide el tiempo durante el cual el fibringeno presente en el plasma se
transforma en fibrina por la adicin de una cantidad estandarizada de
trombina. Explora la ltima fase de la coagulacin con excepcin del
factor XIII.
Material
Plasma citratato del paciente.
Plasma citratado control.
Trombina en solucin salina 0,9% diluir con 6 mL.
Cron
me
tro.
Mt
odo
Colocar en un tubo de 12 x 75 mm en bao mara a 37 C 0,2 mL de

plasma.
Incubar un (1) minuto.
Aadir 0,1 mL de trombina y poner en marcha el cronmetro.
Medir el tiempo de coagulacin.
Hacer igual con plasma control normal (ambos por

duplicado). Resultados

Son causas comunes de prolongacin del tiempo de trombina: presencia
de heparina o aumento de los productos de degradacin del
fibringeno/fibrina, hipofibrinogenemia, disfibrinogenemia o presencia de
una paraprotena que interfiera con la polimerizacin del fibringeno.
55
MPR-CNSP-019
De19 2 segundos.
En los casos en que se desea demostrar si existe exceso de heparina se
realiza el tiempo de trombina con adicin de sulfato de protamina.
8.9 TIEMPO DE PROTROMBINA (Prueba de Quick) Principio

Mide el tiempo que tarda en coagular una muestra de plasma, desprovisto
de plaquetas y anticoagulado con citrato sdico, al ponerlo en contacto
con una suspensin de tromboplastina clcica (sustituto de la
tromboplastina tisular fisiolgica). El resultado se da en porcentaje
referido al de un plasma testigo.
Segn la relacin:
INR
1MPR-CNSP-01956
= R1
En la que R = Tiempo de Quick muestra

Tiempo de Quick testigo
La prueba de Quick tambin se conoce con el nombre de tiempo de

protrombina, explora la va extrnseca y comn de la coagulacin en las
que intervienen los factores I (fibringeno), II (protrombina), V, VII y X.
Es una prueba de gran inters y muy utilizada con fines de screening,
diagnstico y control del tratamiento con anticoagulantes orales.
Materiales
Plasma citratado del paciente.
Plasma normal de control.
Pipetas de 0,1 mL y 0,2 mL.
Cronm
etro.
Mtod
o
El tubo conteniendo la tromboplastina clcica (Ortho) debe ser
incubado a 37 C (dependiendo del volumen 5 a 10 minutos).
En un tubo de 10 x 75 mm aadir 0,1 mL de plasma del paciente.
Incubar a 37 C por 1 2 minutos.
Aadir 0,2 mL de tromboplastina previamente calentada en el

tubo con el plasma del paciente; simultneamente, disparar el
cronmetro. Mover el tubo para mezclar los reactivos. Dejar el
tubo en reposo a 37 C por aproximadamente 8 10 segundos.
Remover el tubo del bao mara y mover el tubo por inclinacin

hasta que el cogulo se forme. Anotar el tiempo.
Repetir duplicado del paciente y

control. Resultados

El tiempo de protrombina es expresado en segundos con el valor del
control (cada cual es la media de pruebas duplicadas). El valor del control
(y paciente) depende de la tromboplastina y de la concentracin del
citrato y hematocrito. Un tiempo de protrombina prolongado indica
deficiencia de los factores II, V, Vii o X tambin est prolongado en la

hipofibrinogenemia y heparinemia.
El tiempo de protrombina es utilizado como una prueba de despistaje y
tambin como control para pacientes anticoagulados con drogas
antagonistas de la vitamina K.
12 a 14 segundos.
MPR-CNSP-019
57
SECCIN 9
RECUENTO DE RETICULOCITOS Y PLAQUETAS

9.1 RECUENTO DE RETICULOCITOS
Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros formados por ARN y
protoporfirina en el citoplasma.
Fundamento
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se
puede teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin
con una misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la
ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos
eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por
microscopa.
Materiales
Lminas portaobjetos.
Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
Embudo.
Filtro de papel.
Pipetas Pasteur con chupones.
contador manual (no imprescindible).
Solucin saturada de azul de cresil brillante

(filtrada). Procedimiento
En
el
tubo
de
ensayo
colocar
dos
gotas
de
sangre
total
con
anticoagulante.
Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la
misma cantidad de colorante.
Mezclar la solucin.
Se coloca luego en bao mara por espacio de 10 a 15 minutos.
Se realizan frotices sanguneos.
Se lee con objetivo de 100x.
MPR-CNSP-019
Resultados
58
Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersin. Cuente

cuidadosamente:
Cantidad total de glbulos rojos.
Nmero total de reticulocitos que haya entre ellos.
El recuento se ha venido haciendo clsicamente de forma manual

mediante la observacin en el microscopio ptico. El resultado se da en
porcentaje sobre cada 100 hemates. Es ms til calcular el nmero de
reticulocitos por litro, mediante la frmula:
Reticulocitos/L - % reticulocitos x nmero hemates/L = 100
Observacin
En la actualidad existe la posibilidad de hacer el recuento rutinario de
forma automtica, mediante aparatos especficamente diseados al
respecto, bien a travs de adaptaciones de los clsicos autoanalizadores

para hemogramas. En estos casos se puede conocer, adems, las
distintas proporciones de reticulocitos segn su grado de maduracin, su
volumen medio y el ndice de maduracin.
Adultos 0,5 - 1,5% Al
nacer 2,5 - 6,0% Causas de
aumento
El nmero de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que
existe un incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemlisis, como
respuesta a sangrados o tras el inicio de un tratamiento antianmico que
ha resultado eficaz.
Causas de disminucin
Como la produccin de reticulocitos es necesaria para compensar las
prdidas fisiolgicas de glbulos rojos maduros, una disminucin de su
nmero es la expresin de un estado arregenerativo o hiporregenerativo
de la serie
59
roja. Esta circunstancia es tpica de anemias aplsicas, anemias
carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplsicas.
MPR-CNSP-019
9.2 RECUENTO DE
PLAQUETAS Principio
El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de
contraste de fases, previa lisis de los hemates, o tambin se puede
observar en un microscopio convencional.
Recuento en cmara
Materiales
Hemocitmetro o cmara de Neubauer.
Solucin de procana (Anexo A).
Pipetas automticas de 100 a 1000
Cmara hmeda.
Tubos de plstico de 12 x 75.
mL y 0 a 100 mL.
Microscopio
convencional.
Mtodo
Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA.

Hacer una dilucin de 20 uL de sangre total con 380 uL de solucin de
procana en un tubo de plstico de 12 x 75 (dilucin 1/20).
Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla.
De esta dilucin, llenar en cmara de Neubauer.
Dejar en reposo por 15 minutos en cmara hmeda.

Enfocar con objetivo de 45x y contar las plaquetas en el retculo
central de 1 mm2 cuadrado.
calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a

continuacin:
Resultados
Se aplica la siguiente frmula:
60
N de plaquetas x mm3 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
altura x dilucin x rea
MPR-CNSP-019
Reemplazando
- plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos

=
1/10 x 1/20 x 1/5
plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos 1/1000
plaquetas contadas x 1000
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
Recuento en lmina
Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que

es la
frmula convencional para recuento de plaquetas.
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
Causas de aumento (trombocitosis)
La trombocitosis puede ser secundaria a un estmulo medular
inespecfi- co (posthemorrgica o tras una crisis hemoltica),
paraneoplsica o posquirrgica. Es especialmente importante la
que se produce tras la esplenectoma.
La trombocitopenia esencial aislada es muy rara, pero puede

aparecer asociada a trastornos mieloproliferativos. En estos
casos, las plaquetas pueden ser funcionalmente inoperantes y
cursar, paradjicamente, con hemorragias.
MPR-CNSP-019
61
Causas de disminucin (Trombopenia)
Es fundamental descartar que no se haya producido un error de lectura

como consecuencia de una agregacin parcial de las plaquetas en la
muestra estudiada. Especialmente llamativos son los casos en los que
existe una agregacin precisamente en presencia de EDTA, que es el
anticoagulante utilizado para mantener incoagulable la muestra de
sangre en la que se ha de realizar la lectura.
Las verdaderas trombopenias pueden obedecer a una causa central

(generalmente asociada a leucopenia y anemia), perifrica
(inmunolgica, secuestro, consumo) o mixta (vrica). La prpura
trombocitopnica idioptica es relativamente frecuente.
MPR-CNSP-019
62
SECCIN 10
LEUCOGRAMA
Los leucocitos de dividen
en: 10.1 GRANULOCITOS
Aquellos que tienen grnulos especficos: neutrfilos, eosinfilos y
basfilos. Los grnulos observados en extendido estn cargados de
lisosomas y enzimas hidrosolubles que son agentes antibacterianos
necesarios para la digestin de partculas fagocitarias. Aqu tenemos:
10.1.1 Neutrfilos
Neutrfilos abastonados (Fig. 1)
Es el granulocito en banda. Mide de 10m a 14m, ncleo condensado que
puede presentar una dos constricciones, pero no tiene puente de
cromatina. El citoplasma presenta grnulos especficos e inespecficos,
membrana celular lisa, citoplasma de color ligeramente rosado
dependiendo de la coloracin.
Neutrfilos segmentados (Fig. 2)
Mide igualmente de 10m a 14m, ncleo que presenta mayor
condensacin y est formado por varios lbulos (hasta 4) unidos por
puentes de cromatina. El citoplasma est cargado de grnulos.
Alteraciones leucocitarias de los neutrfilos
Granulaciones txicas
Son grnulos basfilos ms oscuros que lo normal y se observan
durante el transcurso de infecciones severas y estadios txicos.
Vacuolas txicas (Fig. 4)

Se observan en el citoplasma de los neutrfilos durante infecciones
severas y estados txicos.
Cuerpos de Dohle (Fig. 5)

Son reas teidas de azul en el citoplasma de los polimorfonucleares
neutrfilos y se encuentra en infecciones, especialmente en
neumonas.
Palillo de tambor (Fig. 6)

Es un pequeo apndice (cromatina sexual) que permite conocer el
sexo del individuo mediante una simple observacin en un frotis de
sangre
63
perifrica en los neutrfilos. Se presenta en las mujeres.
MPR-CNSP-019
Polisegmentacin (Fig. 7)
Son neutrfilos con 5 o ms lobulaciones. Se observa en las anemias
por deficiencia de vitamina B-12 y cido flico, Sndrome de Down y
otras anomalas.
Adems existe aumento (neutrofilia) en: O
Infecciones bacterianas por agentes piognicos. O
Abscesos y septicemias. O Procesos inflamatorios
y necrosis tisular. O Trastornos metablicos por
intoxicacin. O Procesos malignos: Carcinoma. O
Hemorragias y hemlisis. O Postesplenectoma.
Desviacin a la izquierda
Significa el aumento de las formas inmaduras (en banda o cayado, y
juveniles) dentro de los neutrfilos. Constituye un importante valor
diagnstico y pronstico. Puede observarse en: infecciones e
intoxicaciones.
Desviacin a la derecha
Corresponde a la hipersegmentacin nuclear. La mayora de PMN
presentan ms de 5 lobulaciones. Ocurre en:
O Anemia perniciosa.
O Hipersegmentacin constitucional hereditaria. O
Reacciones mieloides de la sepsis. O Afecciones
hepticas. O Leucemia mieloide. O En la agona.
Existe disminucin (neutropenia)
en: O Aplasia medular O
Mieloptisis de la mdula sea O
Agentes citotxicos
64
O Granulopoyesis inefectiva (anemias megaloblsticas).
MPR-CNSP-019
10.1.2
Eosinfilos (Fig. 8)
Son parecidos a los neutrfilos, pero son algo mayores. Generalmente el

ncleo es bilobulado y lo que ms caracteriza a esta clula es la presencia
de grnulos color naranja-marrn vistos claramente, muchas veces estos
grnulos hacen que se pierda la membrana celular por el rompimiento
de sta, ya que estas clulas son muy frgiles.
Patologa: Existe aumento en:
Infecciones parasitarias.
Reacciones alrgicas.
Enfermedades cutneas.
Neoplasias.
10.1.3
Basfilos (Fig. 9)
La caracterstica ms importante de esta clula es la cantidad de grnulos
de color azul negruzco que se encuentra ocupando toda la clula (esto
cuando la clula es madura) y parte de la clula cuando sta es inmadura.
Presenta un ncleo que muchas veces no logra observarse por la cantidad
de grnulos que contienen histamina y heparina.
Patologa: Existe aumento en:
Leucemia por basfilos.
10.2 AGRANULOCITOS
No poseen grnulos. Aqu tenemos a los linfocitos y
monocitos. 10.2.1 Linfocitos. Pueden ser:
-
Linfocitos grandes.
Linfocitos pequeos.
O Linfocitos grandes (Fig. 11a)
Miden de 15m a 25m, presentan generalmente un ncleo ligeramente
oval discretamente indentado, la cromatina es densa pero no tanto
como en el linfocito pequeo (esto lo puede confundir con el
monocito). Citoplasma abundante, azul plido y puede contener
grnulos azurfilos inespecficos.
MPR-CNSP-019
65
MPR-CNSP-019
6
6
10.3 CRITERIOS PARA EL DESARROLLO DE UN LEUCOGRAMA

10.3.1
Se considera leucocitosis cuando la cifra de glbulos
blancos excede de 10 000.
10.3.2
Se considera leucopenia cuando la cifra de glbulos
blancos es inferior a 5 000.
10.3.3
No olvidar que el ejercicio produce leucocitosis fisiolgica
de consideracin, de all que el recuento debe hacerse en
condiciones basales.
10.3.4
En los granulocitos debe informarse el nmero de
lobulaciones del ncleo. A mayor edad de la clula mayor el
nmero de lbulos y lo contrario.
Fig. 6. Palillo de tambor
1Linfocitos vacuolados (Fig. 14)En caso de linfocitos que reaccionan por

efecto de la radiacin ultravioleta o respuesta a tratamientos de
quimioterapia.
O Linfocitos pequeos (Fig. 11b)
Miden de 9m a 15m, presentan un ncleo que ocupa casi toda la

clula, excntrico, cromatina fuertemente densa. El citoplasma es
escaso, basfilo y puede contener grnulos azurfilos inespecficos.
10.2.2 Monocitos (Fig. 10)

Son los leucocitos
es generalmente
nuclear es laxa,
generalmente es
de mayor tamao en la sangre (14 m a 20m). Su ncleo

excntrico, aunque puede ser central. Su cromatina
distribuida en forma regular, la forma del ncleo
de una madeja de lana o arrionada, aunque puede
MPR-CNSP-019
67
tener forma de un abastonado. El citoplasma es de color gris y puede

presentar grnulos inespecficos (azurfilos) que carecen de significado
clnico.
Patologa: Estn elevados en:
Tuberculosis.
Endocarditis bacteriana.
Enfermedades virales como sarampin, rubola, etc.
colagenosis, neoplasias, etc.
Fig. 7. Polisegmentacin
Fig. 11. Linfocitos atpicos
Fig. 12. Linfocitos en mitosis Fig. 13.

Linfocitos vacuolados
MPR-CNSP-019
68
Fig. 8. Tres
eosinfilos, una
clula basfila y un
linfocito
Fig.
Linfocitos
grandes
pequeos
10.
y
SECCIN 11 ALTERACIONES ERITROCITARIAS

Aqu se encuentran incluidas las clulas progenitoras de la serie roja que
normalmente se encuentra en la mdula sea, pero cuando stas pasan a
sangre perifrica antes de su maduracin en normocitos o hemates
pueden indicar alguna patologa como leucemias, anemias u otras
alteraciones celulares. Aqu tenemos:
PRONORMOBLASTO (Fig. 1a)

Es una clula primitiva (inmadura) de aproximadamente 25m a 35m de
dimetro, citoplasma basfilo, presencia de 1 a 2 nucleolos, existe una
condensacin ligera de la cromatina, citoplasma ligeramente excntrico.
Esta clula se divide en:
NORMOBLASTO BASFILO (Fig. 1b)

Es ligeramente menor que el pronormoblasto, 12m a 18m, citoplasma
igualmente basfilo, pero, se diferencia del anterior en que ya no
presenta nucleolos y su cromatina nuclear es ms condensada ya que es
un elemento menos inmaduro. El siguiente paso en la maduracin es:
NORMOBLASTO POLICROMATFILO (Fig. 1c)

Es una clula que mide de 12m a 16m, aunque usualmente puede ser
mayor que el normoblasto basfilo, presenta ncleo excntrico y lo que
ms caracteriza a esta clula es que ya presenta pequeas cantidades de
hemoglobina citoplasmtica que se traduce en un color violeta (azul y
rojo). Su cromatina es ms condensada que la anterior.
NORMOBLASTO ORTOCROMTICO (Fig. 1d)

Mide de 10m a 14m, esta clula es bien caracterstica y no debe
confundirse con el linfocito ya que prcticamente es un hemate nucleado,
como tambin se le conoce. Presenta su citoplasma rosado, ncleo
totalmente excntrico
69
como una bola maciza. Este normoblasto ya no se divide, sino que pierde
su ncleo por un mecanismo de expulsin y se convierten en:
MPR-CNSP-019
RETICULOCITOS (Fig. 2)
Estos todava presentan en su citoplasma restos de ARN y protoporfirina
resultados de la conversin del normoblasto ortocromtico a reticulocito y
solo se pueden observar con coloraciones especiales. En sangre perifrica
se les puede observar como elementos macrocticos y policromatfilos.
NORMOCITOS O HEMATES (Fig. 3)

Discos cuya biconcavidad hace que aparezcan con cierta palidez central
al no captar el colorante en esa zona. Miden aproximadamente de 7,2m a
7,4m y puede llegar hasta ocho. Presenta un pigmento respiratorio que le
da el color rosado caracterstico que es la hemoglobina que se encarga
del transporte de oxgeno. Ms adelante se explicarn las alteraciones
ms frecuentes de estos elementos celulares.
Se dividen en:
Alteraciones en tamao.
Alteraciones en su forma.
Alteraciones de color.
Inclusiones anormales.
Alteraciones en el tamao
Llamadas tambin anisocitosis. Pueden ser de dos tipos:
Macrocitos (Fig. 4): Hemates que presentan un tamao superior al
normal (ms de 9m) y su expresin mxima es el megalocito. Suelen
aparecer en la anemia megaloblstica debida a dficit de vitamina B 12
o cido flico. Se suele observar cuando hay un aumento de la
actividad eritropoytica, como un mecanismo de compensacin a la
prdida de los hemates, sea por anemia severa o hemorragias. En la
sangre perifrica se pueden ob servar como hemates grandes
policromatfilos o reticulocitos.
70
Microcitos (Fig. 5): Hemates que presentan un tamao inferior al
normal (menos de 6m) y se encuentran en pacientes con anemia
ferropnica y talasemias.
MPR-CNSP-019
Alteraciones en la forma
Llamadas tambin poiquilocitosis. Entre stos tenemos:
Esferocitos (Fig. 6): Son hemates esfricos como unas pelotas, no
son bicncavos, presentan un dimetro inferior al normal pero ms
grueso. Su vida media es de 14 das, producen taponamiento de los
vasos sanguneos. Se encuentran en la enfermedad esferocitosis
hereditaria o enfermedad de Mihkowski-Chauffard (defecto congnito
de la membrana eritrocitaria). Tambin pueden ser adquiridos por
factores extraeritrocitarios.
Codocitos (Fig. 7): Llamados tambin dianocitos. En la regin
central presentan un rea con mayor contenido hemoglobnico (zona
densa). La interfase entre la membrana celular y el centro es
transparente. Se encuentran en hemoglobinopatas, talacemias,
anemia ferropnica y en algunas hepatopatas crnicas con aumento
de colesterol y fosfolpidos.
Drepanocitos (Fig. 8): Son hemates cuya membrana hemtica se
altera y se hace falciforme (forma de hoz o media luna). Su apariencia
es propia del estado homocigoto de la hemoglobina S. Su enfermedad
se conoce como drepanocitosis hereditaria.
Eliptocito (Fig. 9): Los hemates son alargados (ovalocitos). Se
encuentran en la enfermedad llamada ovalocitosis hereditaria. Su
presencia se debe a una alteracin congnita de la membrana del
hemate, aunque puede ser adquirida en caso de una anemia
megaloblstica, ferropnica o arregenerativa.
Crenocitos (Fig. 10): Son aquellos que presentan membrana
ondulante e irregular. Se encuentran en algunas anemias hemolticas.
Este fenmeno puede ser inducido in vitro exponiendo los hemates a
una solucin hipertnica. cuando la caracterstica es muy notable
puede emplearse el trmino equinocito.
Equinocitos (Fig. 11): Tambin llamados acantocitos. Las
prominencias de la membrana eritrocitaria son ms aguzadas
(alargadas) y distribuidas irregularmente. Se encuentran en la
acantocitosis que se caracteri zan por la ausencia de lipoprotenas
plasmticas.
MPR-CNSP-019
71
Dacriocitos (Fig. 12): Son hemates en forma de lgrima. Se

encuentran en la anemia ferropnica, anemia megaloblstica y
talasemia.
Esquistocitos (Fig. 13): Son fragmentos hemticos. Se encuentran
en anemias hemolticas, microangiopatas, quemaduras y con ms
evidencias en individuos esplenectomizados.
Estomatocitos (Fig. 14): Son hemates que en lugar de una
deplecin central clara tienen una banda plida central que les da un
aspecto de boca. Se hereda como carcter autosmico dominante.
Esta enfermedad es causada por anormalidad hereditaria de la
membrana eritrocitaria.
Selenocitos (Fig. 15): Son eritrocitos alterados que adoptan forma
semilunar. Es un artificio de tcnica que aparece especialmente en
frotices sanguneos de pacientes anmicos.
Excentrocitos: Son hemates con distribucin irregular de la
hemoglobina. Su tamao es inferior al normal y se caracteriza por
poseer contornos parcialmente arrugados, pero adems se observa
una distribucin irregular de la hemoglobina que aparece desplegada
de la parte interna hacia uno de los extremos.
Qnizocito: Son hemates que presentan un estoma o boca en la
regin central completamente coloreada y lo dems incoloro.
Morfolgicamente es todo lo contrario a las caractersticas del
estomatocito. Se encuentran en algunas anemias como las
ferropnicas.
Alteraciones de color
Aqu observamos las diferentes tonalidades de color de los hemates
dependiendo del contenido hemoglobnico. Tenemos:
Hipocroma (Fig. 16): Son hemates con disminucin del contenido
de la hemoglobina y dependiendo de la cantidad de este pigmento es
que observamos a los hemates con diferentes caracteres de color.
Aqu estn incluidos los
que son hemates en forma
de anillo en que solo la membrana eritrocitaria est coloreada y que
se traduce en una hipocroma de grado severo (+++).
anulocitos,
Hipercroma (Fig. 17): Son hemates vidos de hemoglobina.

Pueden encontrarse en caso de enfermedades como la policitemia
vera o la policitemia fisiolgica y esferocitosis hereditaria.
MPR-CNSP-019
72
Policromatofilia (Fig. 18): Presencia de hemates con tonalidad

(azul y rojo) morada. Se le relaciona con inmadurez celular, clulas
nucleadas, presencia de reticulocitos, macrocitos, etc. Esto debido a
su elevada cantidad de ARN.
Anisocroma: Diferentes tonalidades de color como hemates
hipocrmicos, hipercrmicos, normocrmicos y policromatfilos. Se
encuentran en ciertas anemias refractarias.
Inclusiones anormales
Punteado basfilo (Fig. 19): Son grnulos basfilos presentes en el
citoplasma de los hemates. Puede tratarse de un reticulocito por su
elevado contenido de ARN. Se encuentra en una intoxicacin por
plomo llamada saturnismo.
Cuerpos de Heinz (Fig. 20): Son formaciones redondeadas de hasta
3m de dimetro localizadas habitualmente en la periferia de la clula.
Se observan con colorantes para reticulocitos. Estos cuerpos son
abundantes en sujetos esplenectomizados.
Anillos de Cabot (Fig. 21): Se cree que sean restos de membrana
nuclear eritroblstica o restos despus de una mitosis anormal. Se
observan en forma de anillo u ocho invertido. Pueden ser precipitados
de ARN o protena carente de importancia diagnstica.
Cuerpos de Howel-Jolly (Fig. 22): Son restos de cromatina nuclear,
resultados de la prdida del ncleo por parte del normoblasto
ortocromtico hasta la conversin del hemate. Se les considera
signos de regeneracin celular. Se observan en pacientes
esplenectomizados.
Siderocitos (Fig. 23): Son hemates con contenido de hierro libre no
hemoglobnico de color verde azulado.
Grnulos de Shuffner: Son grnulos que presentan algunos
hemates en caso de parasitismo por plasmodium vivax.
Grnulos de Maurer: Son grnulos de color violeta oscuro que se
encuentran en pacientes con parasitismo por plasmodium falciparum.
Granulacion azurfila: Son pequeas granulaciones eritrocitarias
color violeta prpura y corresponden a restos de normoblastos
ortocromticos producto de la cariorrexis y del paso de un elemento
inmaduro a otro maduro. Se observa tanto en sndromes
diseritropoyticos congnitos o adquiridos.
MPR-CNSP-019
73
Elementos progenitores de la serie roja

1
2
Fig. 1.
Fig. 2.
Fig. 3.
Pronormoblasto (a)
Reticulocitos
Hemates normales
Normoblasto basfilo (b)
2 Normoblasto policromatfilo (c) 6 Normoblasto ortocromticos (d)
Oc
QocP o>0<|
Mr
Alteraciones eritrocitarias en tamao (Anisocitosis)
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74
Alteraciones en la forma (Poiquilocitosis)
Fig. 7. Dianocitos.
G Q^O -
<
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Fig. 12. Dacriocitos
Fig. 13. Esquistocitos
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Fig. 15. Selenocitos
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Fig. 14. Estomatocitos
, j.
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o
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o,
I'o
O'-'Ofc
Alteraciones de color
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Inclusiones anormales
Fig. 19. Punteado basfilo
MPR-CNSP-019
Fig. 20. Cuerpos de Heinz
77
MPR-CNSP-019
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80
ANEXOA
PREPARACIN DE COLORANTES Y SOLUCIONES MS

USADOS EN HEMATOLOGA
A.1 SOLUCIN DE GOWER A.1.1 Reactivos
Sulfato de sodio
12,5 g
cido actico glacial
33,3 mL
Agua destilada c.s.p
200 mL A.1.2
Procedimiento
A.1.2.1 Disolver el sulfato de sodio y el cido actico glacial en el agua
destilada. Guardar en lugar fresco.
A.2 SOLUCIN DE HAYEM A.2.1 Reactivos

Bicloruro de mercurio
0,5 g
Sulfato de sodio
5,0 g
Cloruro de sodio
1,0 g
Agua destilada
200 mL
A.2.2 Procedimiento
A.2.2.1 Se mezclan todos los reactivos y se guarda en frasco de vidrio en
lugar fresco.
A.3 SOLUCIN SALINA FISIOLGICA AL 0,9% A.3.1 Reactivos

cloruro de sodio
0,9 g
Agua destilada c.s.p.
100 mL
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A.3.2 Procedimiento
Mezclar el cloruro de sodio en el agua destilada. Guardar en lugar
fresco.
A.4 SOLUCIN DE TURK

A.4.1 Reactivos
cido actico glacial 2,0 mL

Solucin acuosa de violeta de genciana al 1% 1,0 mL Agua
destilada c.s.p.
100 mL
A.4.2 Procedimiento
Mezclar los reactivos y guardar en frasco mbar en lugar fresco.
A.5 REACTIVO DE DRABKIN A.5.1 Reactivos

Bicarbonato de sodio
1,0 g
Cianuro de potasio (KCN)
50 mg
Ferricianuro de potasio (K3Fe2 (CN)6)
200 mg
1000 mL
A.5.2 Procedimiento
Mezclar todo y guardar en frasco oscuro protegido de la luz. Es
estable un mes.
A.6 SOLUCIN AMORTIGUADORA TAMPONADA A.6.1 Reactivos

Hidrofosfato disdico (Na2HPO4 2H20)
3,76 g
Fosfato de potasio dihidrogenado
2.10 g
1000 cc
Ajustar a un pH de 7,2 para coloraciones de Wight o Leishman.
82
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A.6.2 Procedimiento
fresco.
Mezclar todos los reactivos y guardar en frasco de vidrio en lugar
A.7 COLORANTE DE GIEMSA A.7.1 Reactivos

Colorante Giemsa en polvo
Metanol (CH3 OH)
Glycerol
colorante con el glicerol.
1,0
66,0 mL
66,0 mL A.7.2 Procedimiento A.7.2.1 Disolver el
A.7.2.2 Adicionar el metanol, mezclar bien y dejar a temperatura ambiente

de 7 a 14 das (maduracin).
A.7.2.3 Filtrar antes de su empleo. Guardar en frasco color caramelo.
A.8 COLORANTE DE LEISHMAN A.8.1 Reactivos
Colorante de Leishman
1,5 g
Metanol (CH3 OH)
100 mL.
A.8.2 Procedimiento
A.8.2.1 Disolver el colorante en metanol y trasvasarlo a un frasco oscuro o
color caramelo, agitar, luego filtrar.
A.9 COLORANTE DE WRIGHT A.9.1 Reactivos

Colorante de Wright
0,3 g
Metanol (CH3 OH)
97,0 mL
Glycerol
3,0 mL
MPR-CNSP-019
83
A.9.2 Procedimiento
A.9.2.1 Disolver en un mortero el colorante con el glicerol. Una vez disuelto
se adiciona el metanol trasvasndolo a un frasco oscuro (color
caramelo), luego agite. Filtrar antes de usar.
A.10 COLORANTE DE MAY-GRUNWALD A.10.1

Reactivos
Colorante May-Grunwald en polvo
0,3 g
Alcohol metlico absoluto
100 mL
A.10.2 Procedimiento
A.10.2.1 Calentar la mezcla a 56C hasta la disolucin completa del
colorante. Dejar enfriar en nevera a 4C durante 24 horas, agitando
de vez en cuando. Filtrar antes de su empleo.
A.11 COLORANTE DE MAY-GRUNWALD-GIEMSA

A.11.1 Es el resultado de combinar el colorante de Giemsa con la de MayGrunwald y se le conoce con el nombre de tincin panptica. En
esta coloracin resalta especialmente las granulaciones de los
neutrfilos, eosinfilos y basfilos.
A.12 SOLUCIN DE PROCAINA

A.12.1 Reactivos
Procana (polvo)
3g
cloruro de sodio
200 mg
1000 mL
A.12.2 Procedimiento
A.12.2.1 Mezclar los reactivos en agua destilada y completar hasta llegar a
un litro. Guardar en refrigeracin a 4C.
MPR-CNSP-019
84
B.1 ANTICOAGULANTE DE WINTROBE

B.1.1 Reactivos
Oxalato de Amonio (NH4)2 C2O4 H2O) Oxalato de Potasio (K2C2O4 H2O) Agua
destilada c.s.p.
B.1.2 Procedimiento
B.1.2.1 Mezclar y disolver todos los reactivos en el agua destilada y colocar
en frasquitos 0,1 mL de la solucin por cada mL de sangre;
usualmente 0,3 a 0,4 mL y poner a secar en estufa hasta que se
observe un polvo blanco por aproximadamente 20 minutos.
B.2 ANTICOAGULANTE CITRATO DE SODIO al 3,8% B.2.1 Reactivos

citrato de sodio
3,8 g
100 mL
B.2.2 Procedimiento
B.2.2.1 Se mezcla el citrato de sodio en el agua destilada.
B.2.2.2 Para pruebas de hemostasia se emplea a razn de 1/9 (1 volumen
de anticoagulante para 9 volmenes de sangre) y para la VsG la
proporcin de 1/4 (un volumen de anticoagulante para 4 volmenes
de sangre).
B.3 SOLUCIN DE ACD (CIDO CTRICO-DEXTROSA) B.3.1 Reactivos

Acido ctrico monohidratado
8g
citrato trisdico dihidratado
22 g
ANEXO B
PREPARACIN DE
ANTICOAGULANTES
1,2
(3
partes) 0,8 g
(2 partes) 100
mL
Dextrosa
25 g
1000 mL
Se emplea en proporcin de % (1 vol. de ACD + 4 vol. de

sangre). B.3.2 Procedimiento
B.3.2.1 Se mezcla todos los reactivos con el agua destilada.
B.3.2.2 Se emplea en proporcin de 1:4 (1 volumen de ACD + 4
volmenes de sangre.
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86
RESULTADOS
Recuento de hemates :...................... (/mm3)
Recuento de leucocitos :..................... (/mm3)
Determin. de hemoglobina:................. (g/dL)
Vol. globular (hematocrito) :................ (%)
FRMULA LEUCOCITARIA
Neutrfilos
...... %
Blastos :
: ....................
Eosinfilos:
...... %
Promielocit
......................
os
Basfilos : ..... ...... %
Mielocitos
Monocitos :
...... %
Linfocitos :
...... %
Metamieloc
itos:
Abastonado
s
Segmentad
os :
OBSERVACIONES:
Observar el nmero aproximado de plaquetas (normales,

disminudas, elevadas). Asimismo las alteraciones cualitativas y
cuantitativas.
Ver la morfologa, tamao, inclusiones y contenido hemoglobnico

en los hemates.
observar la morfologa, tamao, inclusiones granulocitarias y

agranulocitarias.
otras observaciones (presencia de normoblastos, hemoparsitos, etc).
FORMATO PARA EXPEDICIN DE RESULTADOS
Nombre del
paciente Nombre
del mdico Muestra
Examen
:................. (/mm3)
na:................. (g/dL)
o) :................. (%)
Se termin de imprimir en el mes de

marzo de 2005 en los talleres grficos
del
Centro de Produccin Editorial e Imprenta
de la Universidad Nacional Mayor de San
Marcos Jr. Paruro 119. Lima 1. Telefax:
428-5210 Correo electrnico:
CEPEDIT@UNMSM.EDU.PE Tiraje: 1000
ejemplares
6.1.5
Valor
es
de
referencia
500
010
000
leuc
ocito
s/
mm3
6.1.6
Corre
ccin
de
valores
para restar
eritrocitos
nucleados
Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el lquido de d
recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal
Clculo:
La
concentrac
in
del
nmero de
normoblast
os
(por
litro) es:
Nmero de
normoblat
os
contados x
concentrac
in
nmero de
leucocitos
100 + N
de
normoblast
os
contados
Ejemplo:
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentracin del nm
nmero de normoblastos ser:
--50
100 + 50
y la concentracin de leucocitos
corregida ser: 16 - 5,3 = 10,7 x 109/l
--x
1
6
=
5,
3
x
1
09
/l
En unidades tradicionales las

concentraciones de normoblastos y
leucocitos se expresan por milmetro
cbico. En tales unidades el clculo
correspondiente al ejemplo que se ha
dado sera: 50
x 16 000 =
5300 / mm3
100 + 50
Recuento corregido de glbulos blancos o

leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 /
mm3
Fuente: Manual de tcnicas bsicas para un

laboratorio de salud. OPS, N 2.
8.3 EXPLORACIN DE LA COAGULACIN INTRODUCCIN

La exploracin global de la coagulacin sangunea puede re
que tarda en coagular la sangre o el plasma. No sirve para e
suministra una idea general sobre el estado de la va intrnse
Para ello existe un conjunto de principios elementales y com

evitar errores en las determinaciones.
8.3.1
Limpi
eza
del
material de
vidrio
Las pipetas y los tubos de hemlisis deben estar muy lim

sensiblemente en el anlisis.
8.3.2
Disol
ucin
y
conservaci
n de los
reactivos
Para disolver los reactivos debe emplearse agua bidestilada

burbujas). Cuando se emplee plasma control, el tiempo ind
respetado.
Los
reactivos
que deben
conservars
e a unos 4
C
se
guardarn
en
la
nevera.
Si existe algn tiempo de caducidad, ste
viene siempre indicado en el lote
correspondiente. Asimismo, la estabilidad
de los reactivos una vez disueltos est
indicada
en
cada
una
de
las
correspondientes
metodologas
de
trabajo. Antes de su empleo, los reactivos
deben estabilizarse a la temperatura
indicada
en
correspondiente.
la
normativa
8.4 OBTENCIN DEL PLASMA

A una parte de citrato trisdico estril 0,1
mol/L se le aade nueve partes de
sangre (1/10). La puncin debe ser
directa en la vena. No debe aspirarse
violentamente para evitar la formacin
de espuma y con ello la existencia de un
cierto grado de hemlisis, lo que hara

inservible el plasma para la realizacin
de las diferentes pruebas.
Una vez extrada la sangre, se centrifuga
durante 15 minutos a 3500 rpm. El
plasma
sobrenadante
se
trasvasa
cuidadosamente a otro tubo de hemlisis
y puede conservarse hasta cuatro horas
a 4 C antes de su utilizacin.
Patologa
Linfocitos
atpicos
(Fig. 12)
Llamados tambin virus linfocitos, clulas linfomonocitoides

inmunoblastos, etc. Miden de 15 m a 30m, ncleo irregular, i
citoplasma es amplio, color azul tenue, y puede presentar
observarse en mononucleosis infecciosa, hepatitis viral, herp
pueden hallarse hasta en 5%.
Linfocitos con mitosis o binucleados (Fig. 13) Pueden encontrarse en enfermedades

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Centro Nacional de Control de

Graciela Rengifo Garca

Vargas Dr. Javier Vargas

Medio Ambiente para la Salud

Catalogacin hecha por el Centro de Documentacin e

1. HEMATOLOGA / mtodos 2. LABORATORIOS/normas 3.

ISBN 9972- 857 - 26

Instituto Nacional de Salud, 2005

Portada: A: Clulas rojas mostrando hipercroma.

SECCIN 6: HEMOGRAMA- HEMOGLOBINA- HEMATOCRITO.........29

8.6 Tiempo de coagulacin de sangre total (TCST).........................................51

Criterios para el desarrollo de un leucograma..................................67

SECCIN 11: ALTERACIONES ERITROCITARIAS............................79

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En la primera parte se presentan los aspectos ms importantes de la

En la segunda parte se exponen las principales tcnicas bsicas del

En la tercera parte se detallan las alteraciones ms frecuentes de la

El objetivo principal es protocolizar y estandarizar los procedimientos

1.2 CAMPO DE APLICACIN

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1.4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA

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2.2 se debe controlar sobre todo:

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OBTENCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS

3.2 OBTENCIN DE SANGRE VENOSA CON JERINGA

Materiales y equipos requeridos

Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.

Viales con anticoagulante EDTA.

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Se aspira la jeringa hasta el volumen requerido.

PUNTOS PARA LA EXTRACCIN DE SANGRE (Toma de muestra)

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3.3 OBTENCIN DE SANGRE VENOSA EN TUBOS AL VACIO 3.3.1

Agujas con dispositivo para extraccin de sangre al vaco:

N 22 para nios y neonatos.

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3.3.2 Obtencin de la muestra

Repetir los pasos de 3.2.2.1 a 3.2.2.4.

Retirar la ligadura tirando del extremo doblado.

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Ventajas de una extraccin de sangre venosa

Pueden hacerse repetidos exmenes con la misma muestra.

Desventajas de una extraccin de sangre venosa

Viales con anticoagulante EDTA.

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Se repiten los pasos de 3.2.2.9.

Se repiten los pasos de 3.2.2.10.

constituye un buen mtodo para la obtencin de sangre en pacientes con

Por lo delicado en su procedimiento no se recomienda como rutina, slo en

3.5 OBTENCIN DE SANGRE CAPILAR

Lancetas desechables (Fig. 10).

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3.5.1.5 Papel filtro N 2.

Procedimiento (Fig. 11):