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Mastitis Bovina

Vctor Cotrino DMV


Director Cientfico LMV Ltda. Bogot, Colombia

Contenido:

Introduccin
Prueba de Mastitis California (CMT)
Toma de Muestra de Leche
Recuento de Clulas Somticas
Anlisis Bacteriolgicos
Monitoreo

Introduccin
Por las caractersticas epidemiolgicas, clnicas y etiolgicas, las
diferencias en las polticas de tratamiento dependiendo del agente
involucrado y la variabilidad en la resistencia de los
microorganismos, el diagnstico de Mastitis Bovina debe estar
orientado al conocimiento de la prevalencia de la enfermedad en el
hato, tipo epidemiolgico de la enfermedad y la resistencia
bacteriana de los agentes involucrados.
Cuando conozcamos todos estos factores en un hato se podr
estimar las prdidas econmicas por disminucin en la produccin,
identificar y corregir los puntos crticos que favorecen la difusin de
la enfermedad, definir las polticas de tratamiento y establecer el
sistema de monitoreo que encienda las alarmas cuando se
sobrepasan los lmites establecidos.
Para el control de la mastitis bovina es necesario poner en marcha
un programa integrado que involucre la salud de los animales, el
sistema de manejo durante el ordeo, las condiciones ambientales
del alojamiento y del ordeo, las caractersticas y condiciones de

funcionamiento del equipo de ordeo, el control de los


microorganismos causantes y el nivel de capacitacin de las
personas responsables del ordeo. En un programa de esta
naturaleza, el diagnstico es pilar fundamental para definir las
acciones a tomar.
En muchas oportunidades se acude al diagnstico sobre muestras
individuales, casi siempre de animales que no han dado respuesta
positiva a uno o varios tratamientos y el objetivo es identificar el
agente causante y evaluar su sensibilidad a los antibiticos para
recomendar el principio activo ms apropiado in vitro, que no
necesariamente da resultados clnicos favorables debido al tiempo
de evolucin de la enfermedad y las lesiones de tipo fibroso que
caracterizan estos casos crnicos. Un plan de diagnstico integral
del hato, comprende:

Pruebas de Campo
Prueba de Mastitis California (CMT).
Toma de muestras para cultivo microbiolgico.
Pruebas de Laboratorio
Recuento de clulas somticas (RCS)
Cultivos microbiolgicos
Caracterizacin del microorganismo
Pruebas de sensibilidad antimicrobiana
Monitoreo
Recuento de Clulas Somticas del tanque ( RCS-T)

Prueba de Mastitis California (CMT)


Esta es una prueba de campo de fcil manejo y buena sensibilidad
que se fundamenta en la capacidad que tiene el reactivo Lauril
Sulfato de Sodio para reaccionar con el DNA celular produciendo
viscosidad directamente proporcional al nmero de clulas
somticas presentes en la muestra de leche.
Una vez la vaca est lista para ser ordeada con pezones limpios y
secos, se escurren los 3 4 primeros chorros de leche de cada
pezn en los compartimentos de la bandeja apropiada. Se inclina la
bandeja en un ngulo de 60 para igualar la cantidad de leche en
cada uno (deben quedar entre 2 y 4 mL de leche). Se agrega una
cantidad igual de reactivo y se inicia un proceso suave de agitacin
por rotacin durante 15 a 20 segundos. Leer e interpretar la prueba.

Los criterios bsicos de la interpretacin se resumen en la tabla


siguiente:
Grado
Tipo de Relacin
Celularidad / ml
Negativo
Mezcla se mantiene lquida
< 200.000
Trazas
Ligera viscosidad
200.000 - 500.000
1
Mezcla viscosa no adherida al fondo
400.000 -1.500.000
2
Mezcla viscosa que se adhiere al fondo
800.000 - 5.000.000
3
Mezcla muy viscosa fuertemente adherida que forma un solo
grumo.
>5.000.000
CMT mide en forma indirecta el nmero de clulas somticas / mL.
Normalmente la leche de una glndula mamaria sana tiene menos
de 100.000 cel/mL donde el 80% de las clulas son macrfagos y el
20% menos corresponden a Neutrfilos. Cuando hay inflamacin
originada en un proceso infeccioso el nmero de clulas somticas

aumenta por incremento de los Neutrfilos que acuden a cumplir su


accin fagoctica en el sitio de la infeccin llegando a representar
hasta el 90% del recuento de clulas somticas.
En la literatura no hay coincidencia sobre el nmero de clulas a
partir del cual se considera que una glndula mamaria esta afectada
de mastitis, pero en trminos generales recuentos superiores a
500.000 cel/mL con ms del 50% de Neutrofilos se deben
considerar como cuadros de mastitis. Nmero que se ver
incrementado hasta varios millones segn la intensidad y extensin
de la lesin.
El CMT es una prueba que tiene una alta sensibilidad pero presenta
algunas deficiencias en especificidad, dando falsos positivos
durante la primera semana despus del parto pero muy
especialmente en vacas que tienen ms de 7 meses de produccin
y varios partos. En estos casos el grado de viscosidad es similar en
los 4 pezones.
Toma de Muestra de Leche
Las condiciones de toma de muestra de leche son determinantes
para el xito del diagnstico especialmente para el aislamiento e
identificacin del agente infeccioso. Previo a la toma se debe lavar,
secar y desinfectar muy bien el pezn, escurrir 3 4 chorros y en un
recipiente estril, descargar +/- 5 ml de leche. Las muestras deben
ser transportadas al laboratorio en refrigeracin teniendo cuidado
que la humedad no altere la identificacin de cada tubo.
Para un estudio completo se recomienda tomar muestra a todos y
cada uno de los pezones que tengan una reaccin de 1 ms a
CMT. A criterio del profesional, dependiendo de la prevalencia de la
enfermedad y del conocimiento que se tenga del hato, se puede
reducir el nmero de muestras hasta en un 50% de los pezones
positivos a CMT.
Recuento de Clulas Somticas
Diferentes metodologas se aplican para el recuento de clulas
somticas (RCS); las ms utilizadas son el recuento microscpico
directo (RMD), el recuento electrnico como contadores de
partculas
y
el
recuento
automatizado
soportado
en
epifluorescencia.

Por disponibilidad de equipos y posibilidades de aplicacin se


analizan los pasos fundamentales del recuento microscpico
directo:

Determinacin del dimetro del campo microscpico (d) en


milmetros utilizando una lmina micromtrica .
Clculo
del
factor
microscpico
FM
FM = 40.000 / 3.1416 x d
Volumen de leche examinado 10l extendido en un cm .

Por ejemplo, un microscopio que tenga un campo de 0.140 mm de


dimetro en aumento 100X tiene un factor microscpico de 600.000
y uno con dimetro de 0.180 mm tiene un FM de 400.000.
La descripcin completa de la muestra esta descrita en Standard
Methods for The Examination of Dairy Products, 16 Edicin.
El procesamiento de las muestras se inicia con una buena
homogeneizacin y luego extender 10l de leche en un rea de 1
cm en una lmina portaobjetos (caben 5 extendidos por lmina). Se
fija al aire, se puede ayudar con un flameo sobre el mechero. Las
muestras fijadas se desengrasan con un lavado con Xilol y las
lminas se colorean con Azul de Metileno al 1% durante un minuto.
Los frotis coloreados se observan al microscopio utilizando objetivo
100X, y se deben recorrer como mnimo 10 campos en diferentes
puntos del frotis. El promedio del nmero de clulas por campo, se
multiplica por el FM y el valor obtenido corresponder al nmero de
clulas/ml. Tambin es posible hacer la diferenciacin morfolgica
de macrfagos, clulas epiteliales y neutrfilos para aclarar el
diagnstico por tipo de clulas; de igual manera se puede observar
la morfologa bsica de los microorganismos causantes de la
infeccin.
Anlisis Bacteriolgicos
El objetivo del anlisis microbiolgico es hacer el aislamiento y
caracterizacin de los microorganismos causantes de la mastitis del
hato que permita su agrupacin en causantes de:
Mastitis
contagiosa:
Streptococcus
agalactiae,
Staphylococcus aureus, Corynebacterium bovis, Mycoplasma
spp.

* Mastitis originada en la piel de los pezones: Staphylococus


no aureus S. hyicus, S. chromogenes y otros, Streptococcus
no agalactiae S. dysgalactiae, S. bovis, S. uberis, entre otros.
Mastitis ambiental. Escherichia coli, Enterobacter spp,
Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella spp, Serratia spp,
Citrobacter freundii.
Mastitis iatrognica. Asociada al uso inadecuado de cnulas
intramamarias con la etiologa de Mohos Levaduras de los
gneros: Candida, Cryptococcus y Trichosporum. El aspecto
cremoso de la secrecin lctea, el largo periodo de evolucin
de la enfermedad, la no respuesta clnica a antibiticos y el
uso repetido de los mismos por va intramamaria son factores
que se deben tener en cuenta para sospechar de estos
microorganismos.

Todas las bacterias causantes de mastitis se multiplican bien en


Agar Sangre convirtindose en el medio bsico para el proceso de
aislamiento del agente etiolgico. Con el fin de aumentar las
posibilidades de xito del aislamiento y aprovechando las
propiedades de la leche como medio de cultivo, las muestras
pueden ser preincubadas a 37 C durante 6 a 8 horas y
posteriormente sembrar en Agar Sangre. Cuando se toma esta
alternativa se debe estar seguro que la muestra ha sido tomada en
condiciones aspticas, de lo contrario microorganismos
contaminantes van a enmascarar el diagnstico.
El esquema adjunto sintetiza los procedimientos bacteriolgicos
utilizados en el laboratorio. La descripcin ms detallada de todos
los pasos puede ser consultada en el manual Microbiological
Procedures for the Diagnostics of Bovine Udder Infection del
National Mastitis Council, de Estados Unidos.
Pruebas de Sensibilidad Antimicrobiana
Por facilidad de manejo y disponibilidad de reactivos la prueba de
sensibilidad antimicrobiana ms usada es el mtodo de difusin con
discos sobre Agar Mueller Hinton. La seleccin de principios activos
a probar depender de: la disponibilidad de productos comerciales
en el mercado local, la legislacin del pas sobre uso de antibiticos,
el tipo de microorganismo aislado, si es para vaca en lactancia o en
el periodo seco y si se va a usar va parentenal o va intramamaria.
En una caja de Agar de 100 mm de dimetro se pueden colocar 8
sensidiscos como mximo.

Como pauta general en la tabla adjunta, se listan los principios


activos que presentan una buena, limitada o pobre distribucin en la
glndula mamaria segn la va de aplicacin.
En nuestro laboratorio usamos 7 sensidiscos seleccionados de la
lista adjunta segn el tipo de microorganismo. Tenemos en cuenta
el inters particular que tenga el solicitante sobre un determinado
principio activo siempre y cuando cumpla con los requisitos
farmacolgicos, segn va de aplicacin.

Principio Activo

Bacterias Gram Positivo

Ident

AMP

Ampicilina 10 g

AMX

Bacterias
Negativo

Gram

R < 13 S > 17

R < 19 S > 20
Amoxacilina 10 g

R < 13 S > 18

CL

Cafalexina 30 g

R < 14 S > 18

CF

Cefalotina 30 g

R < 14 S > 18

CEQ

Cefquinome 10 g

R < 14 S > 18

OB

Cloxacilina 5 g

S > 20

Eritromicina 15 g

R < 13 S > 23

ENO

Enrofloxacina 5 g

S 20

GN

R 14 S 18

R 12 S 15
Gentamcina 10 g

L/MY

Lincomicina 2 g

S > 21

NF

Neomicina 30 g

R < 12 S > 17

PS
TE

Penicilina 10 UI

R < 28>29

Tetraciclina 30 g

SX

Trimetropim25 g

CPF

Cefoperazona 75 R 15 S 21

R 14 S 19
R 15 S 21

00000000000000

Clasificacin de antimicrobianos segn su potencial distribucin en


la ubre despus de la aplicacin parenteral o intramamaria:
Parenteral
Intramamaria
Buena Distribucin
Eritromicina
Tilosina
Espiramicina
Lincomicina
Pirlimicina
Florofenicol
Trimetropin
Oxitetraxiclina
Enrofloxacina
Penetamato
Eritromicina
Tilosina
Espiramicina
Lincomicina
Pirlimicina

Florofenicol
Trimetropin
Penetamato
Ampicilina
moxacilina
Novobiocina
Enrofloxacina
Distribucin Limitada
Sulfametazina
Penicilina
Ampicilina
Amoxacilina
Cloxacilina
Meticilina
Cefalotina
Cefapirina
Cefuroxime
Penicilina
Cloxacilina
Oxacilina
Cefalotina
Cefacetrila
Cepacetril
Cefuroxime
Cetiofur
Cefaperasona
Oxitetraciclina

Distribucin Pobre
Cefalexina
Cetiofur
Cefoperazona
(Dihidro)
Neomicina
Apramicina
Kanamicina
Amikacin
Gentamicina
Polimixina
Vancomicina

Estreptomicina

Estreptomicina
Neomicina
Apramicina
Kanamicina
Amikacina
Gentamicina
Tobramicina
Espectinomicina
Aminosidina
Polimixina
Colistina
Rifaximina

* Adaptado por Dr. Ziv G. Y tomado de The Veterinary Clinical of


North
America.
Volumen
8:1
** De la lista original se eliminaron algunos principios activos porque
no tienen presentaciones para uso veterinario en Colombia.
Monitoreo
El recuento de clulas somticas de la leche de tanque RCS - T
una muestra representativa de todos los porongos que se producen
en la finca es el mejor indicador para monitorear la situacin de
mastitis en el hato y estimar las prdidas por produccin. Hay una
alta coincidencia en el literatura mundial que un RCS - T de 200.000
clulas/ml es una cifra apropiada para un hato que tiene una
prevalencia inferior al 6% de cuartos afectados de mastitis
subclnica y que su produccin no se ve afectada por esta
enfermedad.

Relacin entre el RCS-T, el porcentaje de cuartos infectados y


el porcentaje de merma de produccin
(RCS - T)/ml
Porcentaje cuartos infectados
Porcentajes merma
200.000

6
0
500.000
16
6
500.000
16
6
1.000.000
32
18
1.500.000
48
29
Para estimar las prdidas econmicas se puede aplicar el criterio de
una disminucin en la produccin de leche del 2.5% por cada
100.000 clulas que aumenten el RCS - T sobre 200.000.
Toma de Muestra de Leche para el RCS - T. El grado de
homogeneizacin de las muestras es fundamental para que el
recuento sea confiable. Cuando se toma del tanque de enfriamiento
se debe encender el agitador como mnimo 10 minutos antes de la
toma de la muestra que se recolecta por la parte superior (nunca
tomar muestras utilizando el sifn del tanque). Cuando la leche del
hato est almacenada en varios porongos cada una debe ser
homogeneizada por agitacin fuerte mnimo durante 2 minutos. Con
la ayuda de una jeringa o una pipeta se toman cantidades iguales
de cada recipiente que se depositan en un frasco limpio para tomar
una submuestra previa homogeneizacin.

La cantidad de muestra y condiciones de transporte depender de


la tcnica que use el laboratorio.
Cuando se usa un contador de partculas se toman 5 ml de leche
sobre un fijador que entrega el laboratorio y el transporte se hace
bajo refrigeracin. Para los recuentos microscpicos y contadores
automatizados las muestras se deben transportar en agua con hielo
a 3 C. Normalmente de las muestras que se envan para anlisis
microbiolgicos se practica el recuento.
En muchos pases el RCS - T se encuentra incorporado al esquema
de pago y se practica una vez a la semana. Esta periodicidad es
ideal cuando se utiliza en el monitoreo de la mastitis del hato porque
permite una reaccin rpida y oportuna cuando el nmero de
clulas se ve incrementado. Sin embargo, pueden utilizarse otros
planes de muestreo con periodicidad no mayor a un mes.

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