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INTRODUCCIN
El mtodo de Sanger para la determinacin de
aminocidos terminales es un mtodo til y
tardado para determinar el N-terminal de los
polipeptidos, fue descrito por Sanger, quien
encontr el grupo alfa amino libre de la
insulina.
El
1-fluoro-2,4-dinitrobenceno
(DNFB) reacciona con pptidos protonados ,
formando
derivados
2,4-dinitrofenilados.
Cuando tales derivados de un pptido se
someten a hidrlisis con HCl 6N, todos los
enlaces peptidicos se hidrolizan, pero el
enlace entre el grupo 2,4-dinitrofenilo y el
grupo alfa amino del aminocido N-terminal es
estable frente a la hidrlisis acida, por lo
consiguiente, el hidrolizado del pptido
dinitrofenilado contiene todos los restos de
aminocidos de la cadena peptidica en forma
de aminocidos libres, a excepcin del resto
N-terminal, el cual aparece como derivado
2,4-dinitrofenilado, de color amarillo, este
resto puede separarse e identificarse por
medio de una cromatografa en papel en
donde se hace la comparacin con los
aminocidos conocidos.
OBJETIVO
Identificar el aminocido alfa-amino terminal
de las cadenas de la molcula de
hemoglobina mediante el mtodo de Sanger.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
En la determinacin de Aminoacidos
terminales se usa el DNFB para que pueda
reaccionar con el N-terminal, acondicionando
el medio, el cual se le agrega NaHCO3 para
tener
condiciones
alcalinas
y
poder
desprotonar el grupo amino,
el cual al
enlazarse con
el DNFB
genera la
dinitrofenilacion, el HCl protonara al grupo
amino y reforzara el enlace del DNFB con la
hemoglobina, se elimina el exceso de reactivo
con las extracciones de ter y el bao maria,
el tercer paso es la hidrlisis y se lleva a cabo
CALCULOS
Resultados de los valores de Rf obtenidos
Distancia del frente = 31cm
Frmula:
Rf =
PRACTICA N 1
Determinacin de aminocidos terminales con grupo alfa amino libre
Mtodo de Sanger.
Sustitucin
ANLISIS DE RESULTADOS
DNP-PHE
Rf =
20.2cm
31cm
Rf = 0.65
Rf =
DNP-ALA
21.4 cm
31 cm
CONCLUSINES
Rf = 0.69
Rf =
DNP-VAL
21.9 cm
31cm
En la dinitrofenilacion, el reactivo de
Sanger se une a la protena
Rf = 0.70
16.5 cm
Rf =
31.5 cm
Rf =
Problema
21.8 cm
30 cm
Compuesto
Rf
Rf = 0.70
BIBLIOGRAFA
DNP-PHE
0.65
DNP-ALA
0.69
DNP-VAL
0.70
PROBLEMA
0.70
DNFB
0.49