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FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS BSICAS
ASIGNATURA DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
PRACTICA N 05
INTEGRANTES:
ASIGNATURA:
BIOLOGIA
DOCENTES:
Blgo.
Blga.
Blgo.
Blgo.
UNIDAD:
2DA
DEL
INTRODUCCION
La coloracin implica la penetracin del colorante por fenmeno osmtico y su fijacin se debe a fenmenos
de absorcin de partculas o iones. Qumicamente la coloracin es la unin de las molculas del colorante
con los elementos constituyentes de la clula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tien con
los colorantes cidos; otros tienen pH cido y se tien con colorantes bsicos. Sin embargo es necesario
sealar que tanto el ncleo como el citoplasma tienen caractersticas anfotricas de manera que se pueden
teir, el ncleo con algunos colorantes cidos y el citoplasma con algunos colorantes bsicos.
El mecanismo de coloracin de las muestras biolgicas pueden ser afectados por:
Tiempo de coloracin.
Los preparados microscpicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que tienen por
objeto identificar en forma rpida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la finalidad de
resolver algn problema de inters particular. Los preparados microscpicos ms frecuentes en Biologa son:
Preparados en fresco
Preparados en seco
Los preparados en Fresco son preparaciones microscpicas acuosas, que se caracterizan por que la
sustancia examen, no est adherida de un modo fijo a la superficie de la lmina portaobjeto y por lo tanto, al
ser manipulada sta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado.
Los preparados en seco son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensin, fijacin y
coloracin), y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lmina
portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada sta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la
muestra.
Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicacin de estos factores que inciden bsicamente en
la complementacin del aprendizaje del estudio de estructuras celulares, identificacin de tejidos y
microorganismo.
OBJETIVOS:
1. Identificar los diferentes tipos de coloracin aplicados.
2. Identificar microscpicamente los tipos de coloracin.
FUNDAMENTO
La principal caracterstica de la clula procariota es que carece de ncleo
celular. Las bacterias, los organismos procariotes ms representativos,
comprenden por una parte, especies de importancia mdica puesto que
producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los
animales pero, por otra parte, una gran mayora representa beneficios para la
agricultura, la industria y la salud humana y animal.
Para observar este tipo de clulas se utiliza la Tincin Gram, tcnica diseada
por el mdico dans Hans Christian Gram. Esta consiste en poner en contacto
las clulas bacterianas con colorantes bsicos como violeta de genciana,
utilizando la solucin de lugol como mordiente. Esto forma un compuesto
yodado que se fija fuertemente en determinadas bacterias. Segn la coloracin
que adquieran, las bacterias se clasifican en:
GRAM POSITIVAS: se tien fuertemente con violeta de genciana y adquieren una
coloracin violeta. GRAM NEGATIVAS: se tien muy superficialmente por lo que
fcilmente se decoloran con solventes orgnicos. Se utiliza adicionalmente la
safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste, adquierendo
una coloracin rosada.
La diferente tincin de bacterias se debe a la composicin diferencial de sus
paredes bacterianas. Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular
con mureina y cido teitoico. En cambio, las Gram negativas tienen una pared
mucho ms compleja que contiene, adems del peptidoglucano, una asociacin
de protenas lpidos y lipopolisacridos. Adems de la coloracin esta tcnica
nos permite distinguir en las bacterias:
a) morfologa: cocos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc)
Forma de caa o bacilos
Forma redonda o cocos: estreptococos, estafilococos, diplococos
Forma de espirales: espirilos
Forma de coma: vibrios
b) agrupacin: pares, cadenas ttradas, racimos, sarcina
En pares: diplococos.
En cadenas o e lnea: estreptococos
En racimo o acmulos: estafilococos
MATERIAL
MATERIAL INDIVIDUAL:
5 Lminas y 5 laminillas
Gorro
Mandil
Guantes
Mascarilla
MATERIAL GRUPAL:
Colorante Eosina
Colorante Wright
Colorante Fucsina
Paos limpiadores
Microscopio ptico
Aceite de cedro
Pipetas pasteur
Goteros
Agua destilada
Mechero de alcohol
Verde de Janus
Hematoxilina
Escobilla Giemsa
lava tubos
Detergente
PROCEDIMIENTO
PREPARADOS EN FRESCO
Con un gotero tomar una gota de la muestra (orina expuesta por 2 a ms das el medio ambiente), si
es necesario centrifugar y usar el sedimento, colocarlas sobre una lmina portaobjetos y cubrirla con
laminilla.
PREPARADOS EN SECO
Observa la microscopio
La Tincin Gram
Con mondadientes extraer una pequea muestra de substancia examen y realizar una extensin o frotis
sobre una lmina portaobjetos.
Agregar violeta de genciana hasta cubrir el preparado y dejarlo en reposo durante 1 a 2 minutos.
Decolorar con Alcohol - Acetona (80/20) hasta que el preparado est incoloro
Llevar la lmina portaobjetos al microscopio y observar con objetivos de inmersin utilizando aceite de
cedro e identificar los diferentes tipos de bacterias.
Secar nuevamente
Llevar al microscopio aplicar aceite e cedro sobre la muestras y observar con objetivo de inmersin
CONCLUSIONES
1. Identificamos tres tipos de coloraciones, la ms trabajosa para realizar fue la
tincin Gram
2. Mediante el microscopio se identific a las bacterias Gram positivas y Gram
negativas, donde eran moradas y rojas respectivamente.
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen que
supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tien la pared de las
bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Despus de
eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer
caso permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram positivas y, en el
segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram negativas.
CUESTIONARIO:
1.
2.
GRAM NEGATIVA
TIENE 2 A 3 CAPAS
SOPORTA TEMPERATURAS DE 60
CONTIENE LPS QUE LAS AYUDA A
SOBREVIVIR
LA PENICILINA NO LAS MATA A CAUSA DE
LA CAPA DE LIPOPOSICARIDOS SITUADA
EN LA PARTE EXTERNA DE LA PARED
CELULAR
GRAM POSITIVA
TIENE DE 40 A 50 CAPAS
SOPORTA TEMPERATURAS DE 180
A 185
SON MAS PESADAS
PENICILINA MATA A LAS GRAM
POSITVAS, YA QUE BLOQUEA LA
INFORMACON DEL ENLACE
PEETIDICO ENTRE LAS
DIFERENTES CADENAS DE
PEPTIDO GLUCANO
SE TIE MORADA, PORQUE
RETIENE EL COLORANTE
PIERDEN EL COMPLEJO DE
YODOCOLORANTE
BIBLIOGRAFIA
1.
http://biologiamedica.blogspot.com/2010/09/bacterias-gram-positivas-ygram.html