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UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS BSICAS
ASIGNATURA DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA N 05
INTEGRANTES:

BARBA BARBA MAYRA ALEJANDRA


SANTISTEBAN CHICLAYO STPHANY
SIGUENCES CERCADO CINTHIA
VASQUEZ COLETER DAVID
VASQUEZ TORRES MARIA FIORELLA
MILAGROS

ASIGNATURA:
BIOLOGIA
DOCENTES:

Blgo.
Blga.
Blgo.
Blgo.

UNIDAD:

2DA

JUAN LUIS RODRIGUEZ VEGA


ADITA HERNANDEZ CENTURION
MARTIN WALTERSDORFER MENDOZ
OSCAR CURO FANING

DEL

INTRODUCCION
La coloracin implica la penetracin del colorante por fenmeno osmtico y su fijacin se debe a fenmenos
de absorcin de partculas o iones. Qumicamente la coloracin es la unin de las molculas del colorante
con los elementos constituyentes de la clula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tien con
los colorantes cidos; otros tienen pH cido y se tien con colorantes bsicos. Sin embargo es necesario
sealar que tanto el ncleo como el citoplasma tienen caractersticas anfotricas de manera que se pueden
teir, el ncleo con algunos colorantes cidos y el citoplasma con algunos colorantes bsicos.
El mecanismo de coloracin de las muestras biolgicas pueden ser afectados por:

Pureza del colorante

Concentracin del colorante

pH de la solucin del colorante

Temperatura del medio ambiente

Sustancias adicionales (mordientes)

Tiempo de coloracin.

Los preparados microscpicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que tienen por
objeto identificar en forma rpida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la finalidad de
resolver algn problema de inters particular. Los preparados microscpicos ms frecuentes en Biologa son:

Preparados en fresco
Preparados en seco
Los preparados en Fresco son preparaciones microscpicas acuosas, que se caracterizan por que la
sustancia examen, no est adherida de un modo fijo a la superficie de la lmina portaobjeto y por lo tanto, al
ser manipulada sta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado.
Los preparados en seco son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensin, fijacin y
coloracin), y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lmina
portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada sta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la
muestra.
Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicacin de estos factores que inciden bsicamente en
la complementacin del aprendizaje del estudio de estructuras celulares, identificacin de tejidos y
microorganismo.

OBJETIVOS:
1. Identificar los diferentes tipos de coloracin aplicados.
2. Identificar microscpicamente los tipos de coloracin.

FUNDAMENTO
La principal caracterstica de la clula procariota es que carece de ncleo
celular. Las bacterias, los organismos procariotes ms representativos,
comprenden por una parte, especies de importancia mdica puesto que
producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los
animales pero, por otra parte, una gran mayora representa beneficios para la
agricultura, la industria y la salud humana y animal.
Para observar este tipo de clulas se utiliza la Tincin Gram, tcnica diseada
por el mdico dans Hans Christian Gram. Esta consiste en poner en contacto
las clulas bacterianas con colorantes bsicos como violeta de genciana,
utilizando la solucin de lugol como mordiente. Esto forma un compuesto
yodado que se fija fuertemente en determinadas bacterias. Segn la coloracin
que adquieran, las bacterias se clasifican en:
GRAM POSITIVAS: se tien fuertemente con violeta de genciana y adquieren una
coloracin violeta. GRAM NEGATIVAS: se tien muy superficialmente por lo que
fcilmente se decoloran con solventes orgnicos. Se utiliza adicionalmente la
safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste, adquierendo
una coloracin rosada.
La diferente tincin de bacterias se debe a la composicin diferencial de sus
paredes bacterianas. Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular
con mureina y cido teitoico. En cambio, las Gram negativas tienen una pared
mucho ms compleja que contiene, adems del peptidoglucano, una asociacin
de protenas lpidos y lipopolisacridos. Adems de la coloracin esta tcnica
nos permite distinguir en las bacterias:
a) morfologa: cocos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc)
Forma de caa o bacilos
Forma redonda o cocos: estreptococos, estafilococos, diplococos
Forma de espirales: espirilos
Forma de coma: vibrios
b) agrupacin: pares, cadenas ttradas, racimos, sarcina

En pares: diplococos.
En cadenas o e lnea: estreptococos
En racimo o acmulos: estafilococos

MATERIAL
MATERIAL INDIVIDUAL:

Un frasco vaco pequeo con gotero.

Un frasco de vidrio mbar reciclable (de jarabe que ya no uses)

5 Lminas y 5 laminillas

Una caja de Fsforo

Un marcador de tinta indeleble

Gorro

Mandil

Guantes

Mascarilla

MATERIAL GRUPAL:

Colorante Azul de metileno un frasco pequeo

Colorante Eosina

Colorante Violeta de genciana

Colorante Wright

Colorante Fucsina

Paos limpiadores

Muestra de orina normal expuesta de 2 a 4 das al medio ambiente

Una ampolla de enterogermina (lo venden en cualquier botica)

Una caja de mondadientes.

MATERIAL QUE ENCONTRARS EN EL LABORATORIO:

Batera GRAM (Alcohol acetona, fucsina o safranina, cristal violeta, lugol)

Microscopio ptico

Aceite de cedro

Pipetas pasteur

Goteros

Agua destilada

Mechero de alcohol

Verde de Janus

Hematoxilina

Escobilla Giemsa

lava tubos

Detergente

PROCEDIMIENTO
PREPARADOS EN FRESCO

Con un gotero tomar una gota de la muestra (orina expuesta por 2 a ms das el medio ambiente), si
es necesario centrifugar y usar el sedimento, colocarlas sobre una lmina portaobjetos y cubrirla con
laminilla.

Llevarla al microscopio y observar con pequeo; mediano y mayor aumento.

Observar la bacteria que presenta movimiento zigzagueante.

Esquematizar y explicar lo observado

PREPARADOS EN SECO

Colocar la muestra en la lamina

Realizar la coloracin respectiva

Secar al medio ambiente

Observa la microscopio

La Tincin Gram

Se realizar sobre las muestras de sarro dentario que los alumnos se

extraern. Pasos para la tincin Gram:

Con mondadientes extraer una pequea muestra de substancia examen y realizar una extensin o frotis
sobre una lmina portaobjetos.

Fijarlas al calor moderado.

Agregar violeta de genciana hasta cubrir el preparado y dejarlo en reposo durante 1 a 2 minutos.

Eliminar el exceso de colorante y lavar la lmina

Agregar lugol hasta cubrir el preparado y dejarlo en reposo durante 1 minutos.

Decolorar con Alcohol - Acetona (80/20) hasta que el preparado est incoloro

Lavar el preparado en agua destilada.

Aadir safranina y dejarlo en reposo durante 1 minutos.

Lavar el preparado con agua destilada.

Secar el preparado al medio ambiente o al calor moderado.

Llevar la lmina portaobjetos al microscopio y observar con objetivos de inmersin utilizando aceite de
cedro e identificar los diferentes tipos de bacterias.

Esquematizar y explicar lo observado.

Observacin con otras tinciones

Colocar una gota de enterogermina sobre una lmina portaobjetos

Extender la muestra con un mondadientes

Secar al ambiente o al calor moderado

Agregar 2 a 5 gotas de azul de metileno por un periodo de 1 a 2 minutos

Lavar N con agua

Secar nuevamente

Llevar al microscopio aplicar aceite e cedro sobre la muestras y observar con objetivo de inmersin

Esquematizar y explicar lo observado

RESULTADOS (grficos con sus medidas de aumento al microscopio)

CONCLUSIONES
1. Identificamos tres tipos de coloraciones, la ms trabajosa para realizar fue la
tincin Gram
2. Mediante el microscopio se identific a las bacterias Gram positivas y Gram
negativas, donde eran moradas y rojas respectivamente.

La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen que
supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tien la pared de las
bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Despus de
eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer
caso permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram positivas y, en el
segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram negativas.

CUESTIONARIO:
1.

Qu es la enterogermina, cul es su composicin y para qu sirve?

COMPUESTO: billones de esporas de Bacillus clausii resistentes a poli-antibiticos


SIRVE: Administradas por va oral, las esporas de Bacillus clausii, gracias a su alta
resistencia a los agentes tanto qumicos como fsicos, atraviesan la barrera de los jugos
gstricos alcanzando, indemnes, el tracto intestinal donde son transformadas en
clulas vegetativas metablicamente activas.
La administracin de ENTEROGERMINA contribuye a la recuperacin de la flora
microbiana intestinal alterada por diversas causas, gracias a la accin del Bacillus
clausii. Adems, en vista de que el Bacillus clausii es capaz de producir diversas
vitaminas, en particular vitaminas del grupo B contribuye a corregir las disvitaminosis
causadas
por
agentes
antibiticos
y
quimioteraputicos
en
general.
ENTEROGERMINA hace posible obtener una accin antignica y antitxica inespecfica,
estrechamente vinculada con la accin metablica del Bacillus clausii.

2.

Diferencias marcadas entre bacterias Gram Positivas y Gram Negativas y


dibujar a ambos tipos de bacterias

GRAM NEGATIVA
TIENE 2 A 3 CAPAS
SOPORTA TEMPERATURAS DE 60
CONTIENE LPS QUE LAS AYUDA A
SOBREVIVIR
LA PENICILINA NO LAS MATA A CAUSA DE
LA CAPA DE LIPOPOSICARIDOS SITUADA
EN LA PARTE EXTERNA DE LA PARED
CELULAR

SE TIE ROJA O ROSADA, YA QUE DESTIE


CONSERVAN EL COMPLEJO DE
YODOCLORANTE

GRAM POSITIVA
TIENE DE 40 A 50 CAPAS
SOPORTA TEMPERATURAS DE 180
A 185
SON MAS PESADAS
PENICILINA MATA A LAS GRAM
POSITVAS, YA QUE BLOQUEA LA
INFORMACON DEL ENLACE
PEETIDICO ENTRE LAS
DIFERENTES CADENAS DE
PEPTIDO GLUCANO
SE TIE MORADA, PORQUE
RETIENE EL COLORANTE
PIERDEN EL COMPLEJO DE
YODOCOLORANTE

BIBLIOGRAFIA
1.

Castillo P por JS. Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas [Internet].


[citado el 21 de septiembre de 2016]. Disponible en:

http://biologiamedica.blogspot.com/2010/09/bacterias-gram-positivas-ygram.html

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