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a una altura de 1850 metros sobre el nivel del mar. La región a una
distancia de 30 kilómetros de Bogotá, fue un área de alta infestación
domiciliar (mayor al 45%) durante la década de los años 90 antes
de que se adelantaran programas de control vectorial y por ende
de transmisión de Trypanosoma cruzi.
Los datos de serología positiva para T. cruzi en escolares de la
zona alcanzaron un promedio de 18%. Este rancho representa
una típica vivienda propicia para la infestación con triatominos,
construída en bahareque y techos de hojas de palma que ofrecen
refugio a los insectos transmisores de la enfermedad de Chagas.
Foto: Felipe Guhl, CIMPAT, Universidad de los Andes.
1
Biomédica Instituto Nacional de Salud
Volumen 27, Suplemento No. 1, Enfermedad de Chagas - Bogotá, D.C., Colombia - Enero, 2007
COMITÉ EDITORIAL
ELIZABETH CASTAÑEDA, editora jefe RUBÉN SANTIAGO NICHOLLS, coeditor CARLOS ARTURO HERNÁNDEZ, editor ejecutivo
Instituto Nacional de Salud Instituto Nacional de Salud Bogotá, D.C., Colombia
Bogotá, D.C., Colombia Bogotá, D.C., Colombia
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Biológicas Salud Bogotá, D.C., Colombia
Medellín, Colombia Washington, D.C., Estados Unidos ENRIQUE GONZÁLEZ
ARNOLDO BARBOSA RAMÍREZ PATRICIA DEL PORTILLO University of Texas Health Science
Hospital Clínic, Universidad de Corpogén Center at San Antonio
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1
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Corporación para Investigaciones GERZAÍN RODRÍGUEZ University of Texas
Biológicas Universidad de la Sabana Galveston, TX, Estados Unidos
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Universidad de los Andes Ludwig Institute for Cancer San Antonio, TX, Estados Unidos
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University of California Los Ángeles Instituto Venezolano de JOHN WALKER
Los Ángeles, CA, Estados Unidos Investigaciones Científicas Cideim
JUAN P. OLANO Caracas, Venezuela Cali, Colombia
University of Texas Medical Branch ÁLVARO SANABRIA MOISÉS WASSERMAN
Galveston, TX, Estados Unidos Pontificia Universidad Javeriana Universidad Nacional de Colombia
BLANCA RESTREPO Bogotá, D.C., Colombia Bogotá, D.C., Colombia
University of Texas
San Antonio, TX, Estados Unidos
URL: http://www.ins.gov.co
biomedica@ins.gov.co
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Contenido
3
Contents
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Biomédica Instituto Nacional de Salud
Volumen 27, Suplemento No. 1, Enfermedad de Chagas - Bogotá, D.C., Colombia - Enero, 2007
Editorial
La enfermedad de Chagas en 1909 y en 2006
Cuando Carlos Chagas fue comisionado por Oswaldo Cruz en 1907 para que viajara a Lassance en el
Estado de Minas Gerais a investigar y controlar una epidemia de paludismo, no podía imaginar que iba
a realizar un trabajo que lo inmortalizaría.
En efecto, al leer el informe científico de sus hallazgos, redactado magistralmente en un estilo claro y
elegante, el lector percibe que está ante las observaciones y las deducciones precisas de un grande de
la Medicina (1).
Chagas era en ese momento, a los 28 años, asistente de investigación en el Instituto Soroterápico de
Manguinhos dirigido por Oswaldo Cruz desde 1902, en donde estaba estudiando experimentalmente en
primates, un parásito flagelado al que inicialmente llamó Trypanosoma minasense, aislado de un insecto
reduvídeo proveniente del norte del Estado de Minas Gerias (2).
Cuando Chagas llegó a Lassance constató que estos mismos insectos habitaban en las hendiduras de
las paredes de barro de las habitaciones de los campesinos, a quienes picaban por las noches en la
cara y que, por ello, se conocían localmente como barbeiros.
Por otra parte, se enteró de que en esa área era frecuente una afección que aparecía en el hombre y
que atacaba principalmente a los niños. Consistía en un cuadro sintomático característico con episodios
febriles, anemia importante, esplenomegalia, edema palpebral y adenopatías ganglionares que, en la
gran mayoría de los casos, evolucionaba silenciosamente pero en una cierta proporción progresaba
hacia el desarrollo de lesiones cardíacas graves.
La descripción completa de este cuadro clínico la hace en una niña de dos años, Berenice, de cuya
sangre aisló los mismos tripanosomas que pudo inocular en los animales de laboratorio en los que,
posteriormente, describió las diferentes fases del ciclo evolutivo del parásito. Al describirlo en su
primera comunicación científica ya mencionada, lo denomina para siempre Trypanosoma cruzi, en
homenaje a su maestro.
Las alteraciones cardíacas, la forma más grave de las lesiones crónicas de esta enfermedad, ya las
había observado y las describe así:
“En la sintomatología verificada entonces, lo que más hondo me impresionó fue la frecuencia de las
alteraciones del ritmo cardíaco en extrasístoles en los habitantes de la región, especialmente en aquellos
de casas infestadas por el triatoma.”
El vínculo entre el agente causal, el insecto transmisor y el cuadro clínico estaba completo.
Estos notables descubrimientos los hizo Chagas en veinte meses, viviendo en un vagón del ferrocarril
central de Brasil donde había instalado su vivienda y su laboratorio de campo en Lassance.
A los 33 años, Carlos Chagas había completado sus descubrimientos y había publicado sus trabajos
científicos, por lo que entraría, con reconocimiento mundial, en la Historia de la Medicina.
En una secuencia que no tiene paralelo, Chagas descubre el agente etiológico, el insecto transmisor y
la enfermedad que lleva su nombre y la comunica en su artículo publicado en 1909 en el primer número
de las Memorias del Instituto Oswaldo Cruz.
- 5
Después de esta publicación y de las que siguieron, los homenajes y los reconocimientos mundiales se
suceden. Es nombrado director del Instituto de Manguinhos, director del Departamento Nacional de
Salud Pública y académico de la Academia Nacional de Medicina de Brasil y de otras Academias de
Medicina del continente, entre ellas la de Colombia, donde fue elegido en votación secreta y por
unanimidad como Miembro Correspondiente en la sesión del 27 de septiembre de 1918 (3).
En 1910, en la conferencia que presentó en la Academia Nacional de Medicina de Brasil, Carlos Chagas
dijo:
“Como veis, señores, el estudio de esta molestia presenta de curioso el hecho de que hemos partido
aquí del conocimiento previo del germen, de haberlo estudiado minuciosamente en su biología, para,
más tarde llegar, basado de alguna forma en esa misma biología, a demostrar que es el factor etiológico
de una especie mórbida humana. En el esclarecimiento etiológico de las otras especies mórbidas nada
de similar encontramos; en todas ellas, después de profundamente estudiada la molestia, en su
sintomatología, en sus condiciones epidemiológicas, se ha llegado a la verificación del agente
mórbido” (4).
Más adelante, previendo la necesidad y la factibilidad del control de la enfermedad con campañas de
salud pública, de fumigación y de mejoramiento de la vivienda rural, nos dice:
“¿Se podrá encontrar en la higiene pública medios eficaces de atenuación del mal? Creemos que sí, si
tal problema, seguramente problema de Estado y de humanidad, se convierte en preocupación de un
estadista científicamente bien orientado. En verdad, el hombre de Estado que haga de la campaña
contra ese mal un programa de administración y que obtenga éxito, habrá conquistado de mis
compatriotas, de las generaciones futuras de Minas, la mayor prenda de reconocimiento” (4).
Los notables adelantos en investigación sobre la enfermedad de Chagas deben acreditarse a los
investigadores de América Latina que han profundizado en el conocimiento de los componentes biológicos
y sociales de esta enfermedad.
Las publicaciones indexadas en bases de datos internacionales evidencian el alto nivel de los trabajos
científicos de los investigadores del continente.
Como ejemplo, analicemos los datos bibliométricos de la base de datos de la National Library of
Medicine de Washington, D.C. (www.nih.nlm.gov, 2005.). En 56 años, entre 1949 y 2005 se han publicado
8.976 artículos científicos sobre esta enfermedad que se reparten, según los temas, como aparece en
el siguiente cuadro:
El 97% del total de artículos indexados ha versado sobre temas de investigación básica sobre T. cruzi
y sobre dos de los más importantes de sus vectores, Triatoma infestans y Rhodnius prolixus. Es muy
contrastante esta proporción cuando se ve que solamente el 3% de los trabajos se refiere al tratamiento
y no se registran trabajos sobre el control de la enfermedad.
6
Sin embargo, los logros que se han obtenido para interrumpir la transmisión del parásito causante de la
enfermedad, T. cruzi, por medio de la eliminación del vector domiciliado, T. infestans, mediante programas
de fumigación con insecticidas de efecto residual, se deben a los compromisos políticos y financieros
de los gobiernos de los países endémicos, en particular, de los países que constituyen la Iniciativa del
Cono Sur, es decir, los ministerios de Salud de Brasil, Chile y Uruguay, donde la transmisión se ha
interrumpido.
El pasado 8 de julio de 2006 se celebró en el Ministerio de Salud de Brasil, en Brasilia, el acto de
declaración de la interrupción de la transmisión vectorial de la enfermedad de Chagas por T. infestans
en toda el área endémica de Brasil, certificada por una Comisión Internacional de Expertos convocada
por la Organización Panamericana de la Salud. Este es un triunfo de la salud pública brasilera y
continental, que honra al ministerio de Salud y a las instituciones de investigación biomédica de Brasil.
Por fortuna, este deseo de Carlos Chagas expresado –como vimos- en 1910 se ha cumplido en su país
y en otros del continente.
En Colombia, la investigación clínica y de laboratorio, particularmente en diagnóstico serológico,
bioquímica y caracterización del parásito y en estudios sobre genética de poblaciones vectoriales –
como lo demuestra este número de Biomédica–, han tenido importantes avances.
Sin embargo, no existe un programa de control vectorial a nivel nacional que marque las pautas de
acción, las implemente y las evalúe sistemáticamente. Creo que el gobierno nacional está en deuda
con las poblaciones de colombianos que están viviendo en zonas endémicas para controlar los vectores
y evitar la infección con el parásito causante de la enfermedad de Chagas.
Álvaro Moncayo Medina
Investigador asociado, CIMPAT, Universidad de los Andes, Bogotá, D. C., Colombia.
Académico, Academia Nacional de Medicina, Bogotá, D. C., Colombia.
Referencias
1. Chagas C. Nova tripanozomiase humana. Estudos sobre a morfolojía e o ciclo evolutivo de
Schizotrypanum cruzi n.gen., n.sp., ajente etiolójico de nova entidade morbida do homen. Mem Inst
Oswaldo Cruz 1909;1:159-218.
2. Brener Z. A descoberta: homenagem aos 80 anos da descoberta da doença de Chagas. Mem Inst
Oswaldo Cruz 1989;84(Suppl. II):1-6.
3. Academia Nacional de Medicina de Colombia. Libro de actas, 1914-1918. Bogotá: Archivos de la
Academia; 1919. p.156.
4. Chagas C. Nova entidade morbida do homem. Brazil Medico 1910;XXIV:443-7.
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Nicholls
BiomédicaR.S., Z.M., Knudson A. et al
Cucunubá1):8-17
2007;27(supl. Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
PRESENTACIÓN DE CASO
1
Grupo Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá, D.C., Colombia
2
Escuela de Medicina, Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Tunja, Boyacá, Colombia
2
Laboratorio Parasitología Molecular, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia
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Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17 Chagas agudo en Colombia 2002-2005
Casanare, Norte de Santander and one from Santander Province. The probable mode of
transmission was vector-borne. Seven cases presented in adults aged 18 to 50, three in children
aged 6 months to 2 years. Seven were male and three were female. The most frequent symptom
was fever in nine cases. Signs of portal of entry were rare; only one patient presented a possible
Romaña´s sign. Three patients presented myocarditis, two acute cardiac failure and one cardiac
tamponade. Parasitemia was evident in nine cases; five had positive IgG serological tests; five
cases were confirmed through parasite isolation; isoenzyme electrophoresis showed
Trypanosoma cruzi group I.
Conclusions. Clinical variability prevailed. In none of the cases was a clinical diagnosis
suspected. The diagnosis was made and confirmed through laboratory tests alone. The results
highlight the importance of including this disease in the differential diagnosis of febrile syndrome
in endemic regions due to its good response to etiological treatment and thereby preventing its
progression to the chronic phase.
Key words: Colombia, Chagas disease, Trypanosoma cruzi, acute phase, myocarditis, serology,
polymerase chain reaction.
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Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
de resultados de laboratorios y análisis de sangre años; la distribución por sexos correspondió a siete
de los diez pacientes, y se tabularon las variables casos en hombres y tres en mujeres.
demográficas y epidemiológicas, y los principales
El síntoma predominante en 90% de los casos
hallazgos clínicos, paraclínicos y de laboratorio.
fue la fiebre. Otros síntomas importantes fueron
Hubo limitantes metodológicas, pues los casos
cefalea, astenia y adinamia en el 40%. Los signos
se reportaron de distintas maneras y procedían
de puerta de entrada no fueron frecuentes, sólo
de diferentes fuentes, por lo que la información
un paciente presentó posible signo de Romaña,
suministrada no guardaba uniformidad. En los
que no se pudo confirmar, y otro, un posible
casos en que se remitieron muestras de sangre
chagoma. El 30% de los pacientes presentó
al Grupo de Parasitología del INS, se realizaron
miocarditis y el 20% desarrolló falla cardiaca, uno
extendidos de sangre periférica utilizando
de ellos con taponamiento cardiaco que requirió
coloraciones de Giemsa y gota gruesa, aislamiento
cirugía (ventana pericárdica) y manejo en cuidados
en cultivos con medio de NNN modificado y REI
intensivos.
modificado al 2% con suero bovino fetal y
antibiótico gentamicina 100 µg/ml (13), inoculación La parasitemia fue evidente con examen en fresco
en ratones Balb c (14), manteniendo durante un en el 90% de los casos, en los cuales se
mes en una sala de alta seguridad del bioterio del identificaron tripomastigotes circulantes; ésta fue
Instituto Nacional de Salud, análisis electroforético la principal herramienta diagnóstica. Las pruebas
para identificación de zimodemas en acetato de serológicas anti - IgG fueron reactivas en el 50%
celulosa con las enzimas malato deshidrogenasa, de los casos aún en la fase aguda. En el 50% se
glucosa fosfato isomerasa, isocitrato deshidroge- logró aislamiento del parásito por medio de
nasa y enzima málica (15), y reacción en cadena inoculación en ratones, cultivo y confirmación del
de la polimerasa (PCR) con los iniciadores parásito con PCR. El análisis isoenzimático
TcH2AF/R (16) y S35/S36 (17), el primero es una identificó T. cruzi grupo I. En ninguno de los casos
secuencia que se mantiene a lo largo de todos hubo sospecha clínica inicial de tripanosomiasis.
los tripanosomatidos, y el segundo es específico
A continuación se presenta una breve descripción
de Trypanosoma cruzi. Los métodos serológicos
de cada uno de los casos siguiendo el orden
para identificación de anticuerpos IgG fueron el
cronológico de la notificación.
ensayo inmuno-enzimático (Elisa) y la
inmunofluorescencia indirecta (IFI) (8), con puntos Caso 1
de corte en 0,4 y 1:32, respectivamente. El Niña de seis meses, natural y procedente de zona
tratamiento, benzonidazol (Rochagán R), fue rural del municipio de Puerto Guzmán, Putumayo,
suministrado por el INS a todos los pacientes. llevada a consulta por una lesión supurante en
Resultados cuello presente desde el nacimiento, la cual no
cedió con antibióticos. En el examen físico se
Todos los casos se presentaron en zonas
encontró una lesión que sugería una fístula, según
endémicas conocidas por su infestación con
lo referido en la historia clínica. Con este
triatominos; 30% de ello se informó en Putumayo,
diagnóstico se programó para cirugía. En
dos en cada uno de los departamentos de Arauca,
exámenes prequirúrgicos se reportó la presencia
Casanare y Norte de Santander, y uno en
de tripomastigotes de T. cruzi en extendido de
Santander, todos en residentes en zonas rurales,
sangre periférica. Se prescribió tratamiento
incluidos dos soldados en ejercicio. La presunta
etiológico con benzonidazol por 60 días. El
vía de transmisión fue vectorial, pero sólo en el
diagnóstico fue confirmado mediante aislamiento,
30% de los casos los pacientes manifestaron
cultivo, isoenzimas, inoculación en ratón y PCR.
convivir con el vector.
Caso 2
Setenta por ciento de los pacientes era adulto,
con edades entre los 18 y los 50 años, y 30% Mujer de 50 años, procedente de zona rural del
niños con edades entre los seis meses y los dos municipio de Saravena, Arauca. Presentó un
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cuadro clínico de 15 días de evolución consistente se envió suero para confirmación en el INS, como
en fiebre, deposiciones diarréicas y, posterior- tampoco información más detallada acerca de la
mente, disnea, el cual la obligó a consultar en historia clínica. Se prescribió tratamiento con
varias ocasiones. La sintomatología, especial- benzonidazol a dosis de 300 mg/día por 60 días.
mente la disnea, empeoró, por lo cual consultó
Caso 5
nuevamente, encontrándose en el examen físico
signos claros de insuficiencia cardiaca. En la Hombre de 26 años, procedente de zona rural del
radiografía de tórax se evidenció cardiomegalia y municipio de Tibú, Norte de Santander. Consultó
derrame pleural, y el ecocardiograma reportó por cuadro de cinco días de fiebre, escalofríos,
taponamiento cardiaco. Se la programó para dolores musculares, cefalea, artralgias, astenia y
cirugía, se le realizó ventana pericárdica, y en el adinamia. Se realizó estudio para hemoparásitos,
líquido pericárdico obtenido se encontraron encontrándose ocasionales tripomastigotes,
tripomastigotes de T. cruzi según lo reportado por según el reporte del Laboratorio Clínico del Hospital
el Laboratorio Clínico del Hospital Erasmo Meoz. Erasmo Meoz. El ecocardiograma mostró leve
Luego de un mes de hospitalización y tratamiento derrame pericárdico y leve dilatación ventricular
médico en cuidados intensivos, la paciente izquierda. Además, se encontró franca leucopenia
evolucionó hacia la mejoría y se inició tratamiento (3.200 leucocitos/µl) y plaquetopenia (69.000
etiológico con benzonidazol en dosis de 350 mg/ plaquetas/µl). Se administró tratamiento etiológico
día por 60 días. Se logró aislamiento del parásito, con benzonidazol en dosis de 350 mg/día por 60
cultivo, e identificación por isoenzimas y PCR. días. El diagnóstico se confirmó por lectura de
Caso 3 lámina de extendido de sangre periférica en el INS.
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Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
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pero una segunda, a las dos semanas, fue positiva interpretación en retrospectiva de la fase aguda
con resultado 1:64. En estudio de campo no se ocurrida un año atrás (caso siete). Adicionalmente,
identificaron vectores ni otros pacientes infectados en el caso uno, la fístula en el cuello pudo haber
cuyas muestras fueron sometidas a extendido de tenido su origen en un chagoma. A pesar de que
sangre periférica y serología. Se logró aislar en en otras publicaciones se ha encontrado una
cultivo hasta luego de seis meses. La PCR fue incidencia alta, en esta serie de diez casos, no
reactiva. fue común encontrar los signos de puerta de
entrada (19,20).
Discusión
La manifestación más frecuente es la fiebre (18)
Hallazgos epidemiológicos y demográficos
presentándose en esta serie en el 90% de los
En todos los casos descritos, el principal casos (Cuadro 1). Esta no tiene una característica
antecedente epidemiológico fue la residencia en específica, puede ser intermitente ó incluso
una zona endémica para transmisión de T. cruzi manifestarse como síndrome febril prolongado sin
por triatominos (8). Se ha descrito que la mayoría otra sintomatología (4). En cuanto a síntomas
de pacientes con manifestaciones agudas de la neurológicos, en un caso se registró cefalea
enfermedad de Chagas son niños (9) pero la intensa, asociada con caída desde su propia altura
mayoría de los casos aquí descritos ocurrieron y pérdida de conciencia, pero el paciente se
en adultos, al igual que en otras series (18-20). recuperó rápidamente. La meningoencefalitis
chagásica aguda es una manifestación
La vía de transmisión probablemente fue vectorial.
especialmente frecuente en lactantes (4, 22), pero
Solamente tres pacientes conocían los triatominos
no se evidenció en ninguno de los dos niños de
y convivían con estos, pero únicamente se realizó
esta serie.
estudio de convivientes en uno de los casos y no
se hallaron otras personas afectadas. Debido a La evolución de la enfermedad chagásica aguda
esto, y a la actividad predominante en regiones es generalmente benigna, a pesar de lo cual 20%
selváticas, es probable que la infección en los de los casos presentó manifestaciones graves de
soldados y en algunos pacientes se adquiriera a compromiso cardiaco. En la Guyana Francesa,
través de vectores selváticos. No hubo nexo de se reportaron seis casos entre 1994 y 1999, todos
tipo espacial ni temporal entre los casos. Por en adultos, con miocarditis aguda, pericarditis,
estudios previos sobre distribución geográfica de falla cardiaca grave, disfunción sistólica y derrame
triatominos en Colombia se sabe que en todos pericárdico (19). En Brasil, de cuatro casos
los sitios de procedencia de los casos hay reportados recientemente, tres pacientes
presencia de triatominos (2,8).
Variabilidad clínica Cuadro 1. Distribución de signos y síntomas en los casos
de Chagas agudo 2002 a 2005.
La variabilidad en las manifestaciones clínicas y
los hallazgos paraclínicos fue predominante, tal Signos y síntomas Frecuencia
como lo describieron otros autores (18-20), n/N
especialmente en un estudio realizado en Fiebre 9/10
Venezuela entre los años 1988 y 1996, el cual Astenia/adinamia 4/10
describió 59 casos de Chagas agudo con 19 Cefalea 3/10
patrones sintomáticos (18). Cardiomegalia 3/10
Falla cardiaca 2/10
Los signos de puerta de entrada aparente más Edemas 2/10
Hepatomegalia 2/10
frecuentemente reportados son el complejo Signos entrada 2/10
oftalmo-ganglionar o signo de Romaña (20,21) y Derrame pleural 2/10
el chagoma de inoculación (4,9), pero en este Diarrea 2/10
informe solo se describió un caso con un posible Esplenomegalia 1/10
Adenopatías 1/10
signo de Romaña, probablemente como una
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Chagas. Sexta Reunión de la Iniciativa Andina tiene una explicación, vale señalar que uno de
para el Control de la Enfermedad de Chagas. los pacientes en quien se comprobó el diagnóstico
Bogotá D.C.: Ediciones Uniandes; 2005). de Chagas agudo por medio de extendido de
sangre periférica, cultivo, isoenzimas y PCR,
En el 80% de los casos se realizó el diagnóstico
paradójicamente nunca presentó pruebas
por extendido de sangre periférica, observándose
serológicas positivas aún con tres mediciones
tripomastigotes de T. cruzi; inclusive en uno de
realizadas con un mes de intervalo entre cada
ellos se llegó al diagnóstico por examen en fresco
una de ellas.
de líquido pericárdico. Llama la atención que en
un caso se encontró parasitemia por gota gruesa En los cinco casos en que se obtuvo cultivo del
luego de cuatro meses de sintomatología. En el parásito, su caracterización molecular mediante
laboratorio se logró aislar y comprobar la presencia PCR permitió confirmar los aislamientos como T.
de la cepa de T. cruzi por medio de cultivo, cruzi y el análisis izoenzimático mostró que
inoculación en ratón, isoenzimas y PCR en seis correspondieron al grupo I, hallazgo esperado
casos. puesto que este es el grupo predominante en
Colombia (15,34).
Las pruebas serológicas son útiles especialmente
en las fases indeterminada y crónica, en las La enfermedad de Chagas aguda es un indicador
cuales se requieren dos pruebas positivas indirecto de la intensidad de transmisión en una
mediante técnicas de diferente principio para hacer zona. Teniendo en cuenta que el pronóstico y la
el diagnóstico (33,Luquetti A. El diagnóstico de la respuesta al tratamiento mejoran con un
enfermedad de Chagas. Diagnóstico serológico, diagnóstico oportuno, la detección de casos
xenodiagnóstico, hemocultivo, PCR y examen agudos es una estrategia para prevenir la fase
directo”. P 227-30. En: Guhl F. Editor. Memorias. crónica. Por esto, es de vital importancia la
Primer Taller Internacional sobre Control de la búsqueda de casos en todas sus presentaciones
Enfermedad de Chagas.Curso de Diagnóstico, tanto sintomáticas como asintomáticas. Por tal
Manejo y Tratamiento de la Enfermedad de razón, siempre debe realizarse una búsqueda
Chagas. Sexta Reunión de la Iniciativa Andina activa de casos de infección en los familiares o
para el Control de la Enfermedad de Chagas. convivientes con el caso índice.
Bogotá D.C.: Ediciones Uniandes; 2005). Las más Finalmente, es fundamental enfatizar en la calidad
frecuentemente utilizadas son Elisa, IFI y de historias clínicas y las muestras que son
hemaglutinación indirecta (8,33). La determinación enviadas al INS para confirmación diagnóstica,
de IgM por IFI se ha utilizado para definir la fase ya que esta es una fuente de información muy
aguda de la enfermedad de Chagas; su nivel de- importante que permite tomar decisiones en
tectable en sangre aparece a partir de los días 10 cuanto al manejo y seguimiento clínico de los
a 15 de sintomatología (4,30), con un pico entre pacientes, y constituye un elemento esencial para
los días 17 a 45 (34). Sin embargo, se sabe que la vigilancia en salud pública de este evento en
la IgG detectada por IFI puede positivizarse desde Colombia.
la fase aguda incluso en el primer mes, mientras
que por Elisa en general sólo se positivizan luego Adendo
de 30 días de sintomatología (4). Esto coincide En el período 1 de enero a 10 de octubre de 2006,
con los hallazgos en algunos de los casos se informaron cinco casos de enfermedad de
informados, pues se encontraron pruebas Chagas aguda en los departamentos de Vaupés
positivas de IFI para IgG en cinco de los (2), Casanare (2), y Putumayo. El primero fue una
pacientes. Este dato es de gran utilidad en nuestro niña de dos años procedente de Mitú, Vaupés,
medio, pues generalmente los Laboratorios quien presentó fiebre y signo de Romaña. El
Departamentales de Salud Pública cuentan con segundo, un soldado de 25 años procedente
la técnica de IFI para IgG más no para IgM. Como también de Mitú, quien presentó fiebre, astenia y
hallazgo llamativo, y para el cual todavía no se esplenomegalia. El tercero y cuarto casos se
15
Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
presentaron en dos hermanas de dos y cuatro años 6. Guhl F, Vallejo GA. Interruption of Chagas disease
transmission in the Andean Countries: Colombia. Mem
procedentes de Paz de Ariporo, Casanare, ambas
Inst Oswaldo Cruz 1999;94 (Suppl. 1):413-5.
presentaron mal estado nutricional, fiebre y
7. Rosas F, Guhl F, Velasco V, Jumbo L, Jaramillo C,
miocarditis con falla cardiaca grave. El quinto
Rodríguez D et al. Morbilidad de la enfermedad de
caso en una niña de 13 años procedente de zona Chagas en fase crónica en Colombia. Detección de
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positivas. Los estudios de PCR fueron positivos enfermedad de Chagas. Rev Argent Cardiol 2002;70
para T. cruzi en los primeros cuatro casos. Hasta (Suppl. 1):13-39.
el momento no se ha logrado aislar ninguna de 10. Rodriques Coura J, de Castro SL. A critical review
estas cepas. Se realizó estudio de campo en los on Chagas disease chemotherapy. Mem Inst Oswaldo
casos de los niños, encontrando vectores en los Cruz 2002;97:3-24
hogares. 11. Kirchhoff LV. Chagas disease. American trypanoso-
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Conflicto de intereses
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Los autores manifestamos expresamente que Slait E, Dib J et al. Investigación de un brote de
durante la realización del presente trabajo no síndrome febril con miocarditis aguda en Guamal,
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existió conflicto de interés alguno que pudiera Nac 1999;4:170-8.
afectar los resultados obtenidos.
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Santander
Biomédica S.P., Cuéllar A.,
2007;27(supl. Thomas M.del C. et al
1):18-27 Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
ARTÍCULO ORIGINAL
18
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27 Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
Materials and methods. Monocyte-derived dendritic cells from seven chronic chagasic patients
and seven healthy individuals were stimulated with the KMP-11 protein and the K1 peptide.
Seven days after culturing, the CD83, CD86, and HLA-DR membrane expression as well as
the production of cytokines were evaluated by flow cytometry.
Results. Neither KMP-11 protein nor K1 peptide elicited the expression of the maturation
marker CD83 on dendritic cells of patients or healthy control individuals. Dendritic cells from
chronic chagasic patients exposed to K1 and LPS at the same time presented a significant
reduction in CD86 and CD83 membrane expression in contrast to the cells exposed to LPS
alone, whereas dendritic cells from healthy individuals did not show this behavior. The secretion
of interleukin-12 was decreased in the cultures of dendritic cells from chronic chagasic patients
but not from healthy controls.
Conclusions. KMP-11 protein does not affect the maturation of dendritic cells, but in the presence
of LPS the K1 peptide leads to a decreased expression of CD86 and CD83 as well as interleukin-
12 production, This phenomenon may be associated with an impaired T cell stimulation.
Key words: Chagas disease, Interleukin-12, Trypanosoma cruzi
Las células dendríticas estimulan linfocitos T La mayoría de humanos infectados por este
maduros que no han tenido contacto con el parásito sobreviven a la fase aguda inicial, pero
antígeno gracias a la alta expresión de moléculas algunos desarrollan enfermedad crónica, lo cual
del complejo mayor de histocompatibilidad, indica que la respuesta generada en estos
moléculas coestimuladoras como CD80 y CD86 individuos no es capaz de controlar la infección,
y moléculas de adhesión como ICAM-1 e ICAM-3 permitiendo la supervivencia del parásito en los
(1). En la periferia, las células dendríticas se tejidos y dando lugar al desarrollo de lesiones
especializan para capturar antígenos por focales inflamatorias, características de la fase
endocitosis mediada por receptor o macro- crónica de la enfermedad (6).
pinocitosis, y una vez activadas por antígenos, Varias líneas de evidencia sugieren que la función
migran a los órganos linfoides proximales (2). de las células dendríticas es alterada por T. cruzi.
Durante esta migración pierden capacidad Es así como células dendríticas derivadas de
fagocítica y aumentan la expresión de las monocitos pueden ser infectadas por el parásito,
moléculas relacionadas con la presentación permitiendo su multiplicación intracelular con
antigénica, proceso conocido como maduración. consecuencias funcionales en células dendríticas
Una vez en los órganos linfoides, las células inmaduras y alteración de su maduración inducida
dendríticas maduras tienen un papel importante por el lipopolisacárido (LPS) (7). Estas alteraciones
en la instrucción de las células T para definir su funcionales incluyen disminución de la producción
polarización hacia una respuesta Th1 o Th2 (3). de la interleucina-12 (IL-12), factor de necrosis
Trypanosoma cruzi es un parásito protozoo tumoral α (TNFα) y de la expresión de moléculas
hemoflagelado, agente causal de la enfermedad de superficie tales como HLA-DR y CD40. También
de Chagas, entidad que afecta a 18 millones de se ha visto que células dendríticas infectadas con
personas en 15 países endémicos, con una T. cruzi tienen poca capacidad para presentar
incidencia anual de 200.000 nuevos casos (4). péptidos antigénicos a células T CD8+ y, por lo
En Colombia, se estima que hay cerca de 700.000 tanto, inducen bajos niveles de interferón gamma
personas infectadas, un 23% de la población en (IFNγ), efecto probablemente relacionado con la
riesgo de contraer la enfermedad y entre 30 y 40 disminución en la expresión de moléculas de clase
mil nuevos casos anuales (5). I del sistema mayor de histocompatibilidad (8).
19
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Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27 Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
21
Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
Figura 1. Expresión de marcadores en células dendríticas de 7 pacientes chagásicos (gris) y 7 controles sanos (blanco)
expuestas a LPS. Células dendríticas inmaduras (CDi) fueron diferenciadas a partir de monocitos CD14+ en presencia de
IL-4 y GM-CSF durante cinco días de cultivo. Para la obtención de células dendríticas maduras (CDm), las CDi previamente
obtenidas fueron expuestas durante 48 h a LPS. Los datos se muestran como promedio del porcentaje de células que
expresan los distintos marcadores analizados. Las barras sobre las columnas indican el error estándar de la media (ESM).
La significancia estadística de la diferencia de la expresión de los marcadores entre CDi y CDm fue de p = 0,007 para CD86
y CD83 en células de pacientes y controles, p = 0,02 para HLA-DR en las células de los pacientes y p = 0,007 en las de los
controles.
Figura 2. Expresión de marcadores en células dendríticas inmaduras de 7 pacientes chagásicos (gris) y 7 controles sanos
(blanco) estimuladas con la proteína KMP-11 (A) y el péptido K1 (B) el día 5 de cultivo durante 48 h. Los datos se muestran
como promedio del porcentaje de células que expresan los distintos marcadores analizados. Las barras sobre las columnas
indican el error estándar de la media (ESM).
de pacientes chagásicos y controles sanos no las moléculas CD86 (p = 0,004) y CD83 (p = 0,003)
indujo la expresión del marcador de maduración frente a la que mostraron las células dendríticas
CD83. La adición del péptido K1 a células incubadas únicamente con LPS (figuras 3A y 3B).
dendríticas inmaduras indujo en las células de los Sin embargo, los resultados obtenidos no
pacientes chagásicos un incremento estadística- mostraron diferencias en la expresión de HLA-DR
mente no significativo en la expresión de CD86 y en las células de pacientes o individuos sanos
HLA-DR comparado con los niveles observados incubadas con K1 y LPS con respecto a lo
en controles sanos (figura 2B). observado en células dendríticas expuestas
únicamente a LPS (figura 3C).
Con el propósito de evaluar el efecto del péptido
K1 en la maduración de células dendríticas Determinación de las citocinas secretadas por
inducida por la adición de LPS, se expusieron las células dendríticas
células dendríticas inmaduras simultáneamente Con el fin de evaluar la actividad funcional de las
al péptido K1 y a LPS en el día 5 de cultivo. Los células dendríticas frente a los diferentes
resultados obtenidos mostraron que la adición del estímulos, se procedió a cuantificar la producción
péptido K1 dio lugar a una disminución de varias citocinas (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-
estadísticamente significativa en la expresión de 10 e IL-12) en el sobrenadante de los cultivos. Al
22
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27 Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
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Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
Figura 4. Cuantificación de citocinas por citometría de flujo de células dendríticas de 7 pacientes (gris) y 7 controles sanos
(blanco) expuestas a LPS o al péptido K1 y LPS (K1+LPS) el día 5 de cultivo durante 48 h. Los datos se muestran como
promedio del porcentaje de células que expresan los distintos marcadores analizados. Las barras sobre las columnas
indican el error estándar de la media (ESM). La significación estadística de la diferencia de la producción de IL-12 e IL 10
entre las células dendríticas de pacientes y controles estimuladas con K1 y LPS fue de p = 0,02 y p>0,05, repectivamente.
de la respuesta inmune por estos agentes y explica esta proteína se considera una estructura crítica
en parte la cronicidad de algunas enfermedades para la movilidad del parásito y para su unión a la
infecciosas (22,23). célula hospedera (27,28). La presencia de la KMP-
11 ha sido demostrada en varias especies de
Los estudios sobre la interacción de las células
leishmanias y tripanosomas, y no ha sido descrita
dendríticas y T. cruzi muestran que el parásito
en otros organismos diferentes a los cineto-
puede infectar dichas células y multiplicarse en
plástidos, lo cual respalda el concepto de un rol
su interior alterando el programa de maduración
específico en estos parásitos (28).
de la célula dendrítica mediante la inhibición de la
producción de citocinas, disminución de moléculas Con base en los estudios que demuestran la
coestimuladoras (7), disminución de la expresión importancia de la proteína KMP-11 y de su péptido
de moléculas de clase I y, por lo tanto, alteración K1 en la respuesta inmune frente a la infección
de la capacidad para presentar péptidos (9,12,13,15), en este trabajo se evaluó la
antigénicos a linfocitos T CD8+ (8). Algunas expresión de marcadores de maduración en
moléculas, como los glicoinositolfosfolípidos células dendríticas derivadas de monocitos de
(GIPL), han sido relacionadas con esta pacientes chagásicos crónicos e individuos sanos
hiporreactividad inmune del parásito (24). Sin estimuladas con la proteína KMP-11 y el péptido
embargo, otras moléculas como la proteína Tc52, K1 de T. cruzi. Vale la pena anotar que estudios
que es una oxidorreductasa necesaria para la preliminares realizados por nuestro grupo indican
supervivencia y la virulencia del parásito, induce que el péptido K1 induce una respuesta inmune
maduración de células dendríticas derivadas de humoral específica en pacientes infectados
monocitos y protege ratones in vivo frente a una independientemente de su tipo de HLA (29), a
infección letal con T. cruzi (25), lo cual indica que pesar de haber sido reportado como un epítope
aunque la infección de la célula dendrítica por T. restringido al HLA-A*0201 en trabajos previos
cruzi altera su actividad en términos de (9,13).
estimulación de células T, algunas moléculas
Los resultados obtenidos en este estudio
derivadas de éste podrían considerarse como
muestran que si bien la proteína KMP-11 no induce
buenos candidatos para la generación de vacunas
la maduración de células dendríticas, su péptido
específicas contra el parásito.
amino terminal K1 en presencia de LPS se asocia
La proteína 11 de membrana de cinetoplástidos con una menor expresión de los marcadores CD83
(KMP-11) fue descrita en Leishmania donovani y CD86 en las células dendríticas de los pacientes.
asociada al lipofosfoglicano (LPG) (26), localizada Por otra parte, la respuesta in vitro frente al péptido
en el bolsillo flagelar y asociada al citoesqueleto; K1 en presencia de LPS muestra niveles
24
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27 Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
25
Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
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López D.C.,
Biomédica Jaramillo C.,
2007;27(supl. Guhl F.
1):28-39 Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
ARTÍCULO ORIGINAL
28
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
Results. Rhodnius prolixus shows a moderate genetic variability (Fst 0.06–0.15). Among
domestic populations, the migration rates found were adequate (Nm>1) to maintain gene flow.
A moderate to large degree of genetic differentiation was observed between the sylvatic
population from Casanare and the domestic populations from the centre of the country (Tolima
and Cundinamarca).
Conclusion. The domestic populations of R. prolixus are homogeneous because genetic flow
exists between them, and this is favourable to chemical control, while the sylvatic population
clusters apart from the domestic populations. Hence the need to study the genetic structure of
the sylvatic foci, their possible dispersion routes and the epidemiological risk that they represents.
Key words. Chagas disease, epidemiologic surveillance, vector control, Rhodnius, DNA,
ribosomal spacer, polymerase chain reaction, polymorphism, restriction fragment length, random
amplified polymorphic DNA technique.
29
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Figura 1. Ubicación geográfica de los sitios de captura de las poblaciones domiciliadas y silvestre de R. prolixus.
30
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
31
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
minuto, a 36°C por 1 minuto y a 72°C por 2 generados con el programa NEIGHBOR de
minutos. Las reacciones se visualizaron en geles PHYLIP 3.5C.
de poliacrilamida al 6% con un tiempo de corrido
El estadístico F (Fst) y la tasa efectiva de
electroforético de 3 horas a 80 V. En cada pozo migración (Nm) entre poblaciones se estimaron
se sembraron 7 ml del producto previamente con RAPDFST mediante tres metodologías:
mezclado con 2 ml de buffer de carga. Los geles Wright (21), Weir & Cockerham (22) y Lynch &
fueron teñidos usando el estuche Silver Stain Plus Milligan (23). El Fst es la razón de la varianza
de Pharmacia®. observada en la frecuencia de un alelo en un lo-
Análisis de datos RAPD cus RAPD entre subpoblaciones y su máxima
varianza en la población total; el programa computa
El análisis se realiza bajo tres supuestos: a) las los valores Fst para cada locus RAPD asumiendo
poblaciones están en equilibrio de Hardy - que las subpoblaciones están en equilibrio de
Weinberg, o sea que se asume que no hay Hardy-Weinberg y la dominancia de cada loci.
presiones de selección que favorezcan a alguna
población; b) los marcadores RAPD segregan en Los valores Fst y Nm son estimaciones indirectas
forma mendeliana con tasas constantes de del flujo genético y la migración entre poblaciones,
evolución y sustitución, y c) los alelos recesivos en las cuales se asume que no hay selección, ya
son idénticos entre los individuos. que ésta puede incrementar o disminuir el Fst, y
que no hay mutaciones si la tasa de mutación es
Se elaboró una matriz binaria con la información alta en relación a la tasa de migración, como
genética obtenida de cada individuo bajo el criterio sucede con microsatélites o en ADN mitocondrial;
de presencia [1] y ausencia [0] de bandas de puede haber desviaciones en la estimación.
acuerdo con Welsh et al. (16). Teniendo en cuenta
Resultados
que en los marcadores RAPDs el fenotipo
dominante de un locus se considera como la Amplificación del ITS-2
presencia de una banda, y el fenotipo recesivo es
Todos los R. prolixus presentaron una única banda
la ausencia de esa banda, los individuos se
de 1.180 pb (figura 2A). Se analizaron también
comparan fenotípicamente en cada locus.
ejemplares de R. colombiensis, R. pallescens y
La matriz binaria se analizó con los programas T. dimidiata, usados como grupos de exclusión
RAPDPLOT (17) y SYNTAX 2000 (18). En en la técnica RAPD. R. colombiensis presentó
RAPDPLOT se generó una matriz de distancias una banda de 1.175 pb, R. pallescens una de 709
a partir de la matriz binaria usando el índice de pb y T. dimidiata una de 964 pb (figura 2B).
similitud de Nei y Li (19), y en SYNTAX se empleó Restricción con Rsa I
el índice de disimilitud de Jaccard para datos
binarios; en los dos programas se generaron Se encontró el mismo patrón de restricción en
dendrogramas con el algoritmo de agrupamiento todos los individuos de las poblaciones
UPGMA (unweighted pair-group method using an estudiadas, y dos fragmentos, uno de 833 y otro
arithmetic average). de 343 pb. El espécimen R. prolixus de Venezu-
ela mostró un patrón de restricción idéntico al de
Se usó el programa RAPDDIST para calcular las las poblaciones colombianas (figura 3A). T. dimidiata
distancias genéticas de Nei (20) entre las mostró un sitio de corte y generó dos fragmentos,
poblaciones y se realizó un análisis bootstrap de uno de 738 y otro de 239 pb; R. pallescens no fue
1000 réplicas, método estadístico que se usa para cortado por la enzima y R. colombiensis mostró
evaluar la confiabilidad de un árbol y permite un patrón de restricción con un fragmento de 804
examinar qué tan frecuentemente se forma un pb y otro de 362 pb (figura 3B).
conglomerado particular; el árbol consenso
Restricción con Nhe I
resultante se da por el número de veces que una
ramificación o nodo se presenta y esto es producto Todos los individuos R. prolixus analizados
de la proporción bootstrap. Los árboles fueron mostraron el mismo patrón de restricción
32
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
Figura 2. Amplificación del ITS-2 de R. prolixus (RP): A. 1. RP de Cundinamarca (CUN). 2. RP de Tolima (TOL). 3. RP de
Sierra Nevada de Santa Marta (SNSM). 4. RP de Casanare (CAS). 5-6. RP de Venezuela (VEN). 7. R. colombiensis. B. 1-
2. RP CAS. 3. T. dimidiata. 4. R. colombiensis. 5. R. pallescens. 6. RP CUN. MP: marcador de peso (100 pb); señalada
la banda de 500 pb. Geles de agarosa al 1,5%.
conformado por dos bandas de 1.030 y 153 pb sí tres bandas de 728, 320 y 136 pb. En T.
(figura 3C). También hay restricción en R. dimidiata se encontraron cuatro bandas producto
colombiensis, generando dos fragmentos de 1.020 de la restricción: de 707, 534, 306 y 143 pb. R.
y 153 pb; R. pallescens presenta un sitio de pallescens presentó tres bandas: de 430, 269 y
restricción para esta enzima generando fragmentos 125 pb (figura 3H).
de 647 pb y 71 pb. En T. dimidiata no hay
restricción (figura 3D). RAPD
33
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Figura 3. Resultados de PCR/RFLP. A. Restricción con Rsa I, bandas de 833 y 343 pb obtenidas para R. prolixus: 1. Control
ADN sin digerir, 2. RP TOL, 3. RP SNSM, 4. RP CUN, 5. RP CAS, 6. RP VEN. B. Restricción con Rsa I: 1. T. dimidiata
digerido (bandas de 738 y 239 pb), 2. T. dimidiata control sin digerir, 3. RP VEN digerido (bandas de 833 y 343 pb), 4. RP VEN
control, 5. RP TOL (bandas de 833 y 343 pb), digerido, 6. RP TOL control, Geles de agarosa al 2%. C. Restricción con Nhe
I, bandas de 1030 y 153 pb obtenidas para R. prolixus: 1. RP CAS, 2. RP SNSM, 3. RP TOL, 4. RP CUN, 5 y 6. RP VEN
(duplicado), 7. R. colombiensis (bandas de 1020 y 153 pb). D. Restricción con Nhe I: 1. R. pallescens digerido (bandas de
647 pb y 71 pb), 2. R. pallescens control, 4. T. dimidiata digerido (no hay restricción), 5. T.dimidiata control. Geles de
agarosa al 1,5%. E. Restricción con Dde I, bandas de 751 pb, 212 pb y 150 pb, obtenidas para R. prolixus: 1-2. RP CAS, 3-
4. RP CUN, 5. RP TOL. F. Restricción con Dde I: 1. T. dimidiata digerido (bandas de 334, 218, 178 y 93 pb), 2. T. dimidiata
control, 3. R. pallescens digerido (bandas de 293, 238 y 178 pb), 4. R. pallescens control, 6. R. colombiensis digerido (751
pb, 212 pb y 150 pb), 7. R. colombiensis control. Geles de agarosa al 2%. G. Restricción con Hpy 188 I, bandas de 915, 735,
314 y 125 pb obtenidas para R. prolixus: 1. RP SNSM control, 2. RP SNSM digerido, 3. RP CUN control, 4. RP CUN digerido,
5. RP TOL control, 6. RP TOL digerido. H. Restricción con Hpy 188 I: 1. RP SNSM digerido, 2. R. colombiensis digerido
(bandas de 728, 320 y 136 pb), 3. R. colombiensis control, 4. T. dimidiata digerido (bandas de 707, 534, 306 y 143 pb), 5. T.
dimidiata control, 6. R. pallescens digerido (bandas de 430, 269 y 125 pb), 7. R. pallescens control. Geles de agarosa al 2%.
Para todos los geles MP: marcador de peso (100 pb).
34
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
Comparaciones
Metodología TP Cun/Tol Cun/Cas Cun/SNS Tol /Cas Cas/SNS Tol/SNS
TP: entre las 4 poblaciones. Cun: Cundinamarca, Tol: Tolima, SNS: Sierra Nevada, Cas: Casanare.
Nm > 1 indica homogeneidad genética, Nm < 1 no es suficiente para mantener homogeneidad genética.
Valores Fst de 0,05 a 0,15 indican poca diferenciación genética, de 0,05 a 0,15, diferenciación genética moderada, de 0,15
a 0,25, diferenciación genética grande, > 0,25, diferenciación genética muy grande.
35
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Figura 5. Dendrograma generado con SYNTAX para R. prolixus usando el coeficiente de disimilitud de Jaccard y el
algoritmo UPGMA. En la parte inferior aparece el código de cada insecto y su lugar de origen (Cun: Cundinamarca, Tol:
Tolima, Cas: Casanare, SNSM: Sierra Nevada, Ven: Venezuela). Grupos de exclusión: R. colombiensis, R. pallescens y
T.dimidiata.
36
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
37
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
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Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
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39
Rendón D.A.,
Biomédica Genes C.M., Triana O.
2007;27(supl.1):40-9 Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
ARTÍCULO ORIGINAL
1
Facultad de Ciencias, Laboratorio de Biofísica, Universidad Nacional de Colombia sede Medellín,
Medellín, Colombia.
2
Grupo de Chagas, Instituto de Biología, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.
40
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas
The histopathological and molecular results showed that the Colombian Mg8 strain has tropism
to the cardiac tissue and causes considerable cellular injury of the myocardium in rats during
both phases. Despite the lesions observed in infected rats, no statistical difference in the
activity of the mitochondrial ATPsynthase was observed between them and the non-infected
rats.
Conclusion. Mitochondrial energy metabolism of the cardiomyocites does not appear to change
during cellular injury of rat myocardium associated with infection by the Colombian Mg8 T. cruzi
strain.
Key words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, Chagas cardiomyopathy, energy
metabolism, mitochondria.
Trypanosoma cruzi, agente causal de la producción de energía por parte de las mito-
enfermedad de Chagas, afecta aproximadamente condrias (síntesis del ATP), pueden desembocar
a 17 millones de personas de diferentes regiones en lesiones importantes del miocardio (6).
de Centro y Suramérica, de las cuales probable- En la producción de energía en los cardiomiocitos
mente entre el 20 y el 35% desarrolla la juega un gran papel la enzima ATPsintasa
enfermedad. En Colombia, la enfermedad de mitocondrial, la cual cataliza la síntesis de ATP
Chagas se encuentra ampliamente distribuída en utilizando la energía almacenada en el potencial
las zonas rurales y se estima que el 5% de la electroquímico de la membrana mitocondrial
población asentada en las zonas endémicas está interna. Por su importancia, esta enzima mito-
infectada (1). condrial se ha estudiado ampliamente en las
La cardiomiopatía es la afección más importante últimas tres décadas, tanto en condiciones
secundaria a esta enfermedad, ya que puede fisiológicas como patológicas (7-10). Uyemura et
producir muerte súbita o discapacidad física, lo al. (2) y Vyatkina et al. (3) mostraron una disfunción
que representa grandes costos socioculturales y en la síntesis de ATP por parte de la ATPsintasa
económicos. Para esclarecer la génesis de la mitocondrial del miocardio durante la infección con
cardiomiopatía chagásica se ha prestado gran Trypanosoma cruzi utilizando mitocondrias
atención a las alteraciones en el metabolismo aisladas.
energético mitocondrial del miocardio (2,3). Las Considerando que las cepas colombianas de T.
mitocondrias se consideran uno de los organelos cruzi tienen tropismo hacia el tejido cardiaco (11),
más importantes de los cardiomiocitos, ya que es importante evaluar la posible lesión celular del
en condiciones fisiológicas generan más del 90% miocardio durante una infección con estas cepas
de la energía necesaria para su funcionamiento y la asociación de tal lesión con el metabolismo
(4). Además, pueden ser blanco de múltiples energético mitocondrial. En el presente trabajo
daños, producto de la respuesta inmunológica del se determinó la lesión celular del miocardio de
hospedero a la infección (5). La importancia de ratas infectadas con una cepa colombiana de T.
las mitocondrias en el funcionamiento de las cruzi y se evaluó la actividad de la ATPsintasa
células cardiacas también se manifiesta en el mitocondrial en homogeneizados de este tejido.
hecho de que entre el 25 y 35% del volumen de Materiales y métodos
los cardiomiocitos está ocupado por ellas. Es así
como los eventos patofisiológicos que alteran la Animales de laboratorio e infección con el
parásito
Correspondencia: Se inocularon subcutáneamente ratas hembras
Omar Triana Chávez, Calle 67 N. 53-108, Instituto de Biología, de la cepa Wistar de aproximadamente 200
Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia. Telefax: gramos con 2 x 105 tripomastigotes sanguíneos
2105622
obtenidos de ratones Balb/c previamente
otriana@matematicas.udea.edu.co
irradiados con 450 rad de rayos gamma en un
Recibido: 10/08/05; aceptado: 24/03/06 volumen total de sangre de entre 50 y 100 µl.
41
Rendón D.A., Genes C.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
Para la infección se usó la cepa colombiana Mg8, 100%) y finalmente en xilol. Luego, los cortes se
perteneciente al grupo I de Trypanosoma cruzi. incluyeron en parafina y se cortaron con el
Esta cepa se aisló en el año 2003 a partir del micrótomo en secciones tisulares de tres a cinco
vector Triatoma dimidiata de origen silvestre micrómetros de espesor. Las muestras se tiñeron
procedente del departamento del Magdalena, y con hematoxilina-eosina para detectar la presencia
se mantuvo por repiques sucesivos cada siete del parásito y el nivel de inflamación del tejido, y
días en medio de cultivo líquido LIT a 28°C (12) y con coloración de tricrómico para determinar el
por infección en ratones Balb/c. Los ensayos grado de fibrosis del tejido cardiaco.
realizados en este estudio se iniciaron en el mismo
Extracción de ADN
año de aislamiento de la cepa, después de 18
pases por medio de cultivo y varios pases por El ADN se extrajo a partir de una preparación de
ratón. tejido cardiaco de animales infectados, utilizando
el método de Salting Out (14), y en algunos casos
Todos los animales se mantuvieron de acuerdo a
el método de fenol-cloroformo (15). Las muestras
la reglamentación establecida por el Comité de
de ADN se disolvieron en 50 ml de agua destilada
Ética para la Experimentación con Animales de
desionizada estéril a 37°C por cinco minutos (16)
la Universidad de Antioquia.
y se guardaron a -20°C.
Caracterización de la infección
Detección del parásito por PCR
Se utilizó un grupo de seis ratas para seguir el
Se utilizaron dos marcadores diferentes para
curso de la infección y determinar la fase aguda
detectar la presencia del parásito en los tejidos
(máxima parasitemia en sangre circulante) y
cardiacos a partir de una preparación de corazón
crónica de la enfermedad (desaparición de la
empleada en la determinación de la actividad de
parasitemia en sangre circulante). La evaluación
la ATPsintasa mitocondrial: el ADN del
de los animales infectados se realizó día por
cinetoplasto (kDNA) y el espaciador intergénico
medio haciendo conteo de tripomastigotes
de los genes mini-exón. Para la amplificación de
sanguíneos en placa en un microscopio óptico
la región variable del kDNA se utilizaron los
con objetivo de 40X (13). Adicionalmente, se
iniciadores S35 y S36, que amplifican un
inocularon dos grupos de cinco ratas cada uno
fragmento de 330 pb (17). La mezcla de reacción
para determinar la actividad de la ATPsintasa
para PCR se llevó a cabo en un volumen final de
mitocondrial y se hizo evaluación por reacción en
25 µl que contenían 2,5 µl de ADN molde a una
cadena de la polimerasa (PCR) en la fase aguda
concentración de 50ng/µl, 2mM MgCl2, 2mM
y crónica de la enfermedad; así mismo, se inoculó
dNTPs, 10 pmol/µl iniciadores, 0,05 unidades de
un grupo de dos animales, para realizar los
Taq ADN polimerasa (Fermentas), buffer 10X
estudios histopatológicos tanto en la fase aguda
(750mM Tris-HCl pH 8,8; 200mM (NH4)2SO4 y
como crónica de la enfermedad. Cada grupo de
0,1% Tween 20), y agua tridestilada estéril.
animales infectados tuvo un grupo control no
infectado de igual número de animales mantenido Los ciclos de la reacción se realizaron a una
en las mismas condiciones de laboratorio. temperatura inicial de 94°C por tres minutos,
seguida por 35 ciclos a 94°C por 45 segundos, a
Lesión celular del miocardio
63 °C por 45 segundos y a 72°C por 45 segundos,
Para determinar la lesión celular del miocardio, a y un último ciclo a 72°C por 10 minutos. El
dos grupos de animales infectados y a sus espaciador intergénico de los genes mini-exón se
respectivos controles se les extrajo el corazón a amplificó utilizando los iniciadores TC1, TC2 y
26 y 60 dpi., e inmediatamente se fijó en formol al TCC, los cuales amplifican un fragmento de 300
10%. Los corazones se seccionaron en su totalidad pb para el grupo T. cruzi II y un fragmento de 350
en cortes seriados transversales de 2 a 3 mm, y pb para el grupo T. cruzi I (18). La PCR se realizó
se deshidrataron empleando una serie de en un volumen final de 25 µl que contenían 2,5 µl
alcoholes de gradación ascendente (50, 70, 80 y de ADN molde a una concentración de 50ng/µl,
42
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas
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Rendón D.A., Genes C.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
Figura 2. Corte histológico de tejido cardiaco de ratas infectadas con la cepa Mg8.
⇒ ) e infiltrado
A. Rata control no infectada: no hay presencia de infiltrado inflamatorio, fibrosis o miocitolisis. B. Miocitólisis (⇒
inflamatorio mononuclear observado en ratas a los 26 días pi (40X) ( ). C. Seudoquiste de T. cruzi observado 26 días pi
→ ). La tinción de los cortes fue realizada con hematoxilina-eosina.
(40X) (→
44
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas
→ ) e infiltrado
Figura 3. Corte de tejido cardiaco de rata infectada con la cepa Mg8 a los 60 días pi. A. Quiste de T. cruzi (→
inflamatorio mononuclear ( ) (10X). B. Nido de amastigotes (→→) (40X). C. Fibrosis (→
→ ) (40X). La tinción de los cortes
en las figuras 3A y 3B se realizó con hematoxilina-eosina. El corte de la figura 3C se tiñó con coloración de tricrómico.
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Rendón D.A., Genes C.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
Figura 5. Actividad de la ATPsintasa mitocondrial en tejido cardiaco de rata a los 26 días pi (A) y 60 días pi (B) con T. cruzi.
Los datos son los promedios de cinco mediciones independientes ± SEM (n = 5); p < 0,05 fue el criterio de diferencias
estadísticamente significativas. Cada medición independiente se realizó tres veces.
los 60 pi, no se evidenciaron diferencias tejido cardiaco la presencia del parásito (ADN) o
estadísticamente significativas en la actividad de restos de éste, lo que garantiza que en todos los
la ATPsintasa mitocondrial (figura 5B). casos en que se evaluó la actividad de la
Discusión ATPsintasa mitocondrial del miocardio, el parásito
manifestó tropismo por el tejido cardiaco. Esto
La enfermedad de Chagas se presenta con una es importante ya que los tejidos de los animales
gran variedad de manifestaciones clínicas y es la infectados y usados para la determinación de la
mayor causa de miocarditis aguda y de actividad de la ATPsintasa mitocondrial del
cardiomiopatía crónica en las regiones endémicas miocardio no fueron sometidos a estudios
de Latinoamérica (21,22). Considerando que las histopatológicos debido a que todo el corazón se
cepas colombianas de T. cruzi muestran tropismo necesitó para preparar las suspensiones cardiacas.
hacia el tejido cardiaco (11), es importante
establecer si este tropismo está asociado con la Los resultados permiten concluir que la cepa Mg8
lesión celular del miocardio en el hospedero. Para de Colombia produce importantes lesiones
esto, la lesión celular del miocardio del hospedero celulares en el tejido cardiaco, activación de la
se estudió en ratas infectadas con la cepa respuesta inmunológica a nivel de este órgano y
colombiana Mg8 de Trypanosoma cruzi aislada presencia de las formas replicativas de T. cruzi,
del vector Triatoma dimidiata silvestre en el mismo tanto a los 26 dpi como a los 60 dpi. Además, la
año de inicio de este estudio, lo que implica que cepa Mg8 es una cepa virulenta y altamente
conserva sus características naturales de patogénica, hecho corroborado por la mortalidad
virulencia y patogenicidad. antes de los 20 dpi que presentaron los ratones
utilizados como fuente de tripomastigotes (50%
Los análisis histopatológicos (figuras 2 y 3) de mortalidad), y la presentada por las ratas
revelaron la capacidad de la cepa colombiana Mg8 utilizadas en la determinación de la curva de
para producir lesiones celulares en el miocardio parasitemia (30% de mortalidad). Ello permite
del hospedero, características de la cardiomiopatía concluir que esta cepa generó en los individuos
chagásica (22-25), lo que muestra que se está infectados un importante proceso degenerativo a
frente a una manifestación típica de la enfermedad nivel celular en el miocardio del hospedero,
de Chagas. Así, la presencia continua del parásito característico de la cardiopatía chagásica, lo que
en las zonas de lesión del corazón puede ser implica la presencia del parásito o de su ADN en
importante en el origen de la cardiomiopatía el tejido cardiaco o en las células inflamatorias
chagásica (26). como un factor que probablemente contribuye en
Los resultados moleculares permiten asegurar que la producción de las lesiones y en la mortalidad
todos los organismos infectados tenían en su observada en los hospederos estudiados (26). Es
46
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JA. Ajmaline-induced electrocardiographic changes in J. Succinate-dependent metabolism in Trypanosoma
chronic Trypanosoma cruzi-infected rats. Trans R Soc cruzi epimastigotes. Mol Biochem Parasitol 1992;54:
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49
Rojas W., Caro
Biomédica M.A., Lopera
2007;27(supl. J.G. et al
1):50-63 Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
ARTÍCULO ORIGINAL
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Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia
Results. Three genotypes were identified for trypanothione reductase with Acy I and Hae III
enzymes and six genotypes for cruzipain with the Rsa I, Ban I and Bsu 36I enzymes.
Conclusions. For trypanothione reductase ,an association was not established with biological
or geographical origin; however, alleles at positions 102 and 210 allowed discrimination with
groups I and II. For cruzipain, specific genotypes were associated with group, biological and
geographic origin. The usefulness of molecular markers on these genes was demonstrated
for the determination and differentiation of genetic varieties in T. cruzi.
Key words: Trypanosoma cruzi, genes, protozoan polymorphism, restriction fragment length
polymorphism; Colombia.
Trypanosoma cruzi, el flagelado que causa la sería útil estudiar los genes involucrados en
enfermedad de Chagas, realiza su ciclo de vida procesos como la infección de la célula hospedera,
entre reservorios mamíferos e insectos de la la supervivencia y la progresión del ciclo de vida
familia Reduviidae. Para este protozoario se ha del parásito, así como aquellos útiles en evadir la
propuesto un modo de reproducción predominante- respuesta inmune del hospedero, podrían ser un
mente clonal (1), con lo cual se esperaría blanco importante.
encontrar una baja diversidad. Sin embargo, al
El genoma de T. cruzi consta de aproximada-
evaluar marcadores fenotípicos, morfológicos y
mente 22.570 genes, de los cuales casi el 50%
bioquímicos (2), muchos estudios muestran, por
conforma grupos parálogos. Entre ellos se
el contrario, una alta heterogeneidad. Es razonable
encuentra la cruzipaína (Crp), que pertenece a una
pensar que esta diversidad pueda estar influyendo,
familia de cisteín peptidasas compuesta por 20
por lo menos en parte, en el rango variable de las
miembros por genoma haploide (17). El porcentaje
manifestaciones clínicas de la enfermedad (2).
restante corresponde a genes de copia única como
Con este planteamiento se han emprendido
la tripanotión reductasa (TriR) (18).
estudios que buscan asociaciones entre la
heterogeneidad genética del parásito y la Los tripanosomátidos carecen de la enzima
heterogeneidad clínica de la enfermedad (3-9). glutatión peroxidasa y para defenderse del estrés
oxidativo utilizan el tripanotión reducido en un
Con el uso de marcadores de ADN anónimos
sistema propio de estos organismos (19). Esta
(Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD) o
reducción es catalizada por la tripanotión
en los genes kADN, espaciadores intergénicos
reductasa, una flavoproteína dependiente de
del gen mini-exón, y en el ADN ribosomal se ha
NADPH, la cual además participa en el
logrado determinar grupos y subgrupos de T. cruzi
metabolismo y detoxificación de drogas y en la
e incluso establecer un patrón regional en relación
reducción de precursores para la síntesis de ADN
con estas divisiones (10-15). Sin embargo, hasta
(20,21). En Leishmania spp. este sistema está
la fecha existe mucha controversia sobre las
involucrado en la supervivencia intracelular del
reales asociaciones entre los grupos y las
parásito (22). El gen que codifica para esta enzima
características clínicas y epidemiológicas de la
también ha demostrado ser útil en la determinación
enfermedad, puesto que ambos grupos se han
de grupos dentro de T. cruzi, pues ha revelado la
encontrado en todos los estados de transmisión,
existencia de cuatro grupos principales en lugar
en diversas fases de la enfermedad y en sus
de las dos divisiones ya conocidas (18).
diferentes rasgos fenotípicos (16). Es también
razonable pensar que, de existir una asociación, La cruzipaína pertenece a la familia de las cisteín
proteinasas, y es codificada por un alto número
de genes organizados como grupos localizados
Correspondencia:
Winston Rojas, Calle 62 # 52-59, Sede de Investigación
en diferentes cromosomas (23,24). Por tener un
Universitaria (SIU), 4 piso- 430, Medellín, Colombia. Tel. (4) elevado número de copias se ha encontrado una
2106464, fax: (4) 210 64 69. variabilidad que va desde la ausencia de
winstonrojas@yahoo.com diferencias entre las copias (25) hasta formas muy
Recibido: 20/12/05; aceptado: 07/04/06 divergentes, como es el caso de la cruzipaína 2
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Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
(26,27). El dominio C terminal de la cruzipaína es (nueve de Crp1 y una de Crp2, cuadro 3), las
responsable del carácter inmunodominante cuales fueron alineadas usando el algoritmo Clustal
antigénico de esta proteína en infecciones W (39). Para Crp2 se cuenta con mayor número
humanas naturales (28), en las que la gran de caracteres y por ello se usó como referencia
mayoría de los anticuerpos detectados en el suero para el alineamiento. La identificación de sitios
de pacientes chagásicos crónicos está dirigida polimórficos y su posible discriminación en
contra este dominio (29). La cruzipaína y su ensayos de reacción en cadena de la polimerasa-
actividad como proteasa se ha implicado en polimorfismos de longitud de fragmentos de
funciones tan importantes como la supervivencia restricción (polymerase chain reaction-restriction
y la progresión en el ciclo de vida del parásito fragment lenght polymorphisms, PCR-RFLP) se
(30,31), la penetración e invasión del tripomastigote realizó usando los programas pDRAW32
en la célula hospedadora (32-34), la protección (www.acaclone.com), DAMBE (39) y DnaSP (40).
contra la respuesta inmune del hospedero (35) y Con las secuencias disponibles se diseñaron los
la diseminación del parásito (2). cebadores para el fragmento de TriR (TriR directo:
5´AGTGTTACTTTCGAGAGCG3´; TriR inverso:
El análisis de las secuencias disponibles en las
5´GTAGAAGTCGGATATTTTGG3´), los cuales
bases de datos para estos dos genes muestra un
amplifican una región de 564 pb, correspondiente
nivel de polimorfismo que no se ha evaluado en
a las posiciones 726 a 1.290 de la secuencia
cepas de Colombia. Dada la importancia de estos
AF359000, pero numeradas en el cuadro 2 como
genes en el ciclo de vida del parásito se propuso
posiciones 1 a 564 según el fragmento amplificado,
examinar la variabilidad genética de tripanotión
y para el fragmento del gen Crp (Crp directo:
reductasa (TriR) y cruzipaína (Crp) en relación con
5´GTTGAGTGCCAGTGGTTTC3´; Crp reverso:
el origen geográfico y biológico en cepas de T.
5´TGGTCAGGAGACACTGACC3´), los cuales
cruzi de Colombia. Conociendo la variabilidad de
producen un fragmento de 700 pb correspondiente
estos genes en cepas que circulan en nuestro
a las posiciones 1.346 a 2.046 de la secuencia
país, se podrá en el futuro proponer estudios de
M90067 (cuadro 3).
asociación entre esta variabilidad y la
enfermedad. Las reacciones de amplificación se realizaron en
un volumen de 25 µL (Tris-HCl 10mM, pH 8.0,
Materiales y métodos
KCl 50mM, MgCL2 2.4 mM, dNTP 0.1mM, 0.1 µM
Se analizaron 36 cepas colombianas de T. cruzi de cada cebador, 1 U Taq ADN polimerasa
y 7 clones de la cepa Cas15, provenientes de Promega® y 50 ng de ADN molde). El perfil térmico
diferentes hospederos, vectores y regiones de para ambos marcadores fue de un minuto de
Colombia (cuadro 1). Se incluyeron las cepas de desnaturalización a 94°C, un minuto de alinea-
referencia Tulahuen y CL clasificadas como T. miento a 54°C para Crp y 56°C para TriR y
cruzi II. Todas las cepas y los clones provinieron extensión del cebador por un minuto a 72°C, para
del banco de cepas del Laboratorio de Chagas de un total de 35 ciclos para Crp y 30 ciclos para
la Universidad de Antioquia, donde son TriR. Las reacciones de amplificación se
mantenidas en medio de cultivo LIT suplementado observaron en electroforesis en geles de agarosa
con suero bovino fetal a 27,5°C (36). El ADN del al 1,5% seguida de tinción con bromuro de etidio.
parásito se obtuvo por el método salting out (37)
Los fragmentos amplificados incluyen regiones
y su concentración se midió por densidad óptica
polimórficas que pueden ser resueltas con las
a 260 nm (38). El ADN se disolvió en 50 µl de H2O
enzimas mostradas en las cuadros 2 y 3. Para
dd y se almacenó a -20°C para su posterior
cruzipaína, las enzimas Rsa I, Bsu 36I y Ban I
genotipificación.
permiten la diferenciación de polimorfismos en
El diseño experimental incluyo un análisis de las tercera posición, mientras que Dra III permite la
secuencias disponibles en www.ncbi.nlm.nih.gov identificación de una transición A:G en la posición
y www.tigr.org. Para TriR se usaron 41 secuencias 457, la cual da lugar a un cambio de alanina por
de ADN (cuadro 2) y para Crp, 10 secuencias serina. Ambas formas de la cruzipaína poseen
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Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia
Cuadro 1. Origen geográfico, biológico y clasificación previa de los aislamientos de Trypanosoma cruzi. ID se refiere al
código de identificación.
los tres sitios de corte identificados para la enzima I, Hae III y Bsm AI - sólo identifican polimorfismos
Rsa I. Sin embargo, a diferencia de la Crp1, la en la tercera posición.
Crp2 carece de diana de corte en la posición 142 Para verificar la presencia de ambas formas de la
para la enzima Ban I (cuadro 3). Las enzimas Bsu cruzipaina se usó la enzima Apa I según el
36I y Dra III carecen de sitios de corte en esta protocolo descrito por Lima et al, 1994 (26);
isoforma (cuadro 3). Las enzimas utilizadas en el cruzipaína 2 cuenta con un sitio de corte en
análisis de RFLP de tripanotión reductasa - Acy la posición 298, distinguiendo el sitio variante
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Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
Cuadro 2. Posiciones evaluadas y enzimas que las reconocen en las secuencias disponibles en las bases de datos
públicas para el gen tripanotión reductasa.
TC10727 - G C A G A C
Z13958 I G C A G A C
AF358981 I G C A G A C
M38051 I G C A T A C
AF358975 I G C A G A C
AF358982 I G C A G A C
AF358987 I G C A G A C
AF358971 I G C A G A C
AF358973 I G C A G A C
AF358972, AF35976 I G C A G A C
AF358985,AF358984,
AF358983,AF358977, I G C A G A C
AF358979,AF358980
AF358978,AF358970, I G C A G A C
AF358969,AF358974
AF358989, AF358988 II G T A G A C
AF358986 II G C A G A A
M97953 II G C A G A C
AF359003,AF358997,
AF358994, AF358993, II G C A T A C
AF358992,AF359001,
AF358999,AF359005
AF359002,AF358996,
AF359000,AF358998, II G T A G A C
AF359004,AF358991
AF358990 II G T A G A C
AF358995 II G C A T A C
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Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia
Cuadro 3. Posiciones evaluadas y enzimas que las reconocen en las secuencias disponibles en las bases de datos
públicas para el gen cruzipaína.
M84342 II C T G C T T C G G
TC10685 I C T G C G T C G G
AF314930 II C T G C T T C G C
AF314929 II C T G C T T C G G
AY0317 II C T G C T T T G G
AF265227 I C T G T G T C T G
AF265226 I C T G C G T C G G
U41454 I C T G C G T C G G
AF004594 II C T T C T T C G G
M90067
(Cruzipaína2) I T T G C G G‡ C T G
210, respectivamente; este genotipo, presente en encontró en las dos cepas de referencia, de
35 de 38 cepas, se encuentra en las cepas acuerdo con lo reportado en las bases de datos
caracterizadas como T. cruzi I, en las cuales es (cuadro 2, identificaciones de acceso: AF358997
definido por la ausencia del alelo T en ambas y AF359002 para Tulahuen y AF358999 y
posiciones (cuadro 4). El genotipo TriR 1, AF358998 para CL), mientras que el genotipo TriR
heterocigótico para ambas posiciones, se 2 se encontró en la cepa AF1 proveniente de
Amalfi, Antioquia (cuadro 4). Para estos dos
genotipos se infiere el alelo T en ambas posiciones
debido a que es el polimorfismo alternativo
presente en las secuencias analizadas y a que
no se reporta otro sitio polimórfico alrededor de la
diana de reconocimiento de la enzima. La
distribución de estos genotipos no mostró ninguna
asociación con origen geográfico o biológico
(datos no mostrados).
En los ensayos de digestión para Crp, la enzima
Apa I permitió identificar la cruzipaína 2
diferenciada por el polimorfismo en la posición 297
(figura 3). La presencia de por lo menos dos copias
resulta en patrones de digestión complejos, en
los que es posible obtener más de dos alelos para
cada posición; para facilitar el análisis,
denominamos como genotipo “heterocigoto” a aquel
que poseía más de un alelo en un locus, lo cual
puede corresponder a diferencias entre copias de
Figura 1. Productos de amplificación obtenidos para Crp o a una condición heterocigótica en sentido
cruzipaína (izquierda) y tripanotión reductasa (derecha). Sólo estricto.
se muestra el producto para algunas cepas del grupo I
(Cas15) y grupo II (AF1, Tulahuen y CL). MP = marcador de Basados en las secuencias reportadas para Crp,
peso de 100 pb. los sitios 150 a 153 representan una diana de
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Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
Figura 2. Patrones RFLP para TriR con la enzima Acy I (A) y Hae III (B) en algunas cepas de los grupos I (Mag1, HA y
Mag5) y grupo II (CL, Tulahuen y AF1). MP = Marcador de peso de 50 pb. Los tamaños de los fragmentos se muestran en
los electroferogramas (A y B) y en los mapa de restricción (C y D), para cada una de las enzimas y su diana de
reconocimiento (y= Purina; r=Pirimidina). Sólo los perfiles para las enzimas que produjeron patrones polimórficos entre
cepas son mostrados.
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Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia
Figura 3. Digestión simple de cruzipaína con la enzima Apa Figura 4. Patrones RFLP para Crp con la enzima Bsu 36I
I en cepas del grupo I (Mag5) y del grupo II (Tulahuen) para en cepas del grupo I (Cas15) y II (Tulahuen). Los tamaños
distinguir la presencia de más de una copia del gen usando de los fragmentos se muestran en el electroferograma (A) y
el protocolo descrito por Lima et al., 1994. en el mapa de restricción (B).
reconocimiento para la enzima Rsa I con corte en 26 cepas clasificadas como T. cruzi I (cuadro 5).
la posición 151 (cuadro 3); estos sitios se reportan El genotipo Crp 1 se encontró en las cepas del
monomórficos en todas las secuencias (datos no grupo T. cruzi II y es diferenciado por la presencia
mostrados), pero en algunas cepas analizadas en del alelo T en la posición 258 (cuadro 5). Éste y el
este estudio dicha diana se perdió originando genotipo Crp 3 son los más polimórficos; los
genotipos heterocigotos; sus alelos se representan genotipos Crp 2, Crp 4 y Crp 6 mostraron
como 1/0 debido a que no se puede comprobar polimorfismo en la diana alrededor del sitio 151;
cuál es el sitio polimórfico dentro de la diana de adicionalmente, Crp 2 varió en la posición 432, y
reconocimiento de la enzima (cuadro 5). Los alelos Crp 4 y Crp 6 variaron en la posición 231 (cuadro 5).
Ban I-C y Rsa I-C en las posiciones 231 y 432,
Para Crp fue posible establecer algunas asociacio-
respectivamente, se definen con certeza porque
nes entre los genotipos y el origen geográfico y
la enzima sólo corta cuando éstos están
biológico de las cepas (cuadro 6). Cuando se
presentes. Los alelos Ban I-T, Bsu 36I-G y Rsa I-
consideró el origen geográfico, la región del oriente
T en las posiciones 231, 258 y 432 se infieren
(departamento de Casanare) mostró ser más
debido a que es el polimorfismo alternativo
diversa, con cuatro de los seis genotipos; dos de
reportado en las secuencias analizadas y a que
ellos, Crp 3 y Crp 6, son específicos de esta región
no se reporta otro polimorfismo alrededor de la
y son diferenciados por el alelo T en el sitio 231.
diana de reconocimiento para cada enzima. Los
El genotipo Crp 2 se encuentra en el noroccidente
sitios evaluados con la enzima Dra III fueron
(Sucre, Magdalena, Sierra Nevada) y oriente de
monomórficos y por esto no se consideran en los
Colombia (Casanare); este genotipo también se
genotipos compuestos.
encontró en aislamientos de Rhodnius prolixus,
A diferencia de TriR, y probablemente por la Pastrongylus geniculatus y Eratyrus cuspidatus;
presencia de más de una copia, para Crp se entre los hospedadores mamíferos este genotipo
obtuvieron seis genotipos compuestos represen- sólo se encontró en Didelphis marsupialis (cuadro
tados como Crp 1 a Crp 6 (cuadro 5). El genotipo 6). El genotipo Crp 4 tiene una distribución similar
Crp 5, homocigótico para todos los loci, agrupa al genotipo Crp 2, pero está ausente en la Sierra
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Cuadro 6. Distribución de genotipos compuestos de acuerdo con el departamento o región de procedencia y con el
origen biológico de las cepas estudiadas.
*1 = corte; 0 = no corte
Nevada de Santa Marta; este genotipo está previamente descritos con otros marcadores
asociado a R. prolixus y Triatoma dimidiata, moleculares. Las cepas del grupo T. cruzi I
principales vectores domiciliados. evaluadas en este estudio mostraron en las
posiciones 102 y 211 ausencia del alelo T (cuadro
El genotipo Crp 5 fue el más frecuente; se presentó
4). Al considerar las secuencias reportadas, el
en todas las regiones del occidente de la cordillera
alelo T en la posición 102 está ausente de todas
oriental, en la totalidad de los hospederos
las cepas del grupo I, como también en algunas
mamíferos y en la mayoría de los insectos
del grupo II; el alelo T en la posición 211 fue
vectores, a excepción de E. cuspidatus; es el
consistente con las cepas del grupo T. cruzi II en
único genotipo encontrado en los 10 aislamientos
nuestros ensayos; sin embargo, los datos de
de Rhodnius pallescens. En R. prolixus se
secuencias muestran que este alelo también
encontró el mayor número de genotipos (Crp 2,
puede estar presente en cepas de T. cruzi I
Crp 4, Crp 5 y Crp 6).
(cuadro 2), por lo que no puede considerársele un
Discusión alelo específico de grupo.
La evaluación de TriR con las enzimas Acy I y El gen TriR es codificado por un locus único en
Hae III permitió distinguir cepas de los grupos el genoma de T. cruzi (18) y la condición
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Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia
principal vector de la enfermedad de Chagas en 3. Brener Z. Biology of Trypanosoma cruzi. Annu Rev
el país, se encontró el mayor número de genotipos; Microbiol 1973;27:347-82.
éste es un insecto ampliamente distribuido en 4. Melo RC, Brener Z. Tissue tropism of different
regiones distantes de Colombia; la importancia Trypanosoma cruzi strains. J Parasitol 1978;64:475-
82.
de este aspecto también puede evaluarse en
relación con sus implicaciones por sus hábitos 5. Andrade Z, Brener ZE. Trypanosoma cruzi e Doença
de Chagas. Rio de Janeiro: Ed. Guanabar Koogan; 1979.
antropofílicos y su domiciliación. Las cepas
provenientes de P. geniculatus, aunque con una 6. Andrade SG, Andrade V, Brodskyn C, Magalhaes
distribución más restringida, también mostraron JB, Netto MB. Immunological response of Swiss mice
to infection with three different strains of Trypanosoma
tres de seis genotipos; esta diferencia en la cruzi. Ann Trop Med Parasitol 1985;79:397-407.
diversidad genotípica entre especies podría reflejar
7. de Castro SL, de Meirelles M de N. Effect of drugs on
el efecto de filtros biológicos selectivamente Trypanosoma cruzi and on its interaction with heart
diferentes (59,60). muscle cell in vitro . Mem Inst Oswaldo Cruz
1987;82:209-18.
Usando marcadores de isoenzimas, RAPDs y
ADNr, se ha podido demostrar la mayor prevalencia 8. Neal RA, van Bueren J. Comparative studies of drug
susceptibility of five strains of Trypanosoma cruzi in
del grupo T. cruzi I en el país (53-55,61). Con dos vivo and in vitro . Trans R Soc Trop Med Hyg
sistemas diferentes en genes codificadores de 1988;82:709-14.
proteínas también fue posible en este estudio
9. Vago AR, Andrade LO, Leite AA, d’Avila Reis D,
reproducir esta observación, agrupándose la Macedo AM, Adad SJ, et al. Genetic characterization
mayoría de cepas del grupo I dentro de los of Trypanosoma cruzi directly from tissues of patients
genotipos TriR 3 y Crp 5; esta consistencia de with chronic Chagas disease: differential distribution of
genetic types into diverse organs. Am J Pathol
agrupación con diferentes sistemas refuerza así
2000;156:1805-9.
la estructura clonal de las poblaciones de T. cruzi.
10. Morel C, Chiari E, Camargo EP, Mattei DM, Romanha
Los resultados de este estudio sugieren que estos AJ, Simpson L. Strains and clones of Trypanosoma
genes son útiles como posibles marcadores cruzi can be characterized by pattern of restriction
endonuclease products of kinetoplast DNA minicircles.
moleculares para determinar y diferenciar
Proc Natl Acad Sci USA 1980;77:6810-4.
variedades genéticas en T. cruzi, y permiten
plantear la futura evaluación de la hipótesis sobre 11. Souto RP, Zingales B. Sensitive detection and strain
classification of Trypanosoma cruzi by amplification of
la interacción parásito-hospedero. a ribosomal RNA sequence. Mol Biochem Parasitol
1993;62:45-52.
Conflicto de intereses
12. Tibayrenc M, Neubauer K, Barnabe C, Guerrini F,
Los autores declaramos que no existe ningún Skarecky D, Ayala FJ. Genetic characterization of six
conflicto de intereses. parasitic protozoa: parity between random-primer DNA
typing and multilocus enzyme electrophoresis. Proc
Financiación Natl Acad Sci USA 1993; 90:1335-9.
El estudio fue desarrollado como parte del 13. Souto RP, Fernandes O, Macedo AM, Campbell
proyecto 1115-04-14387 financiado por DA, Zingales B. DNA markers define two major
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Botero L.A.,2007;27(supl.1):64-74
Biomédica Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
ARTÍCULO ORIGINAL
Introducción. T. cruzi I y T. cruzi II son grupos genéticamente diferentes y se cree que dicha
variabilidad es determinante del tropismo tisular en el hospedero vertebrado y responsable de
las diversas manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas.
Objetivo. Caracterizar biológica y genéticamente dos clones colombianos de los grupos T.
cruzi I y II en el modelo murino.
Materiales y métodos. Las cepas CAS15 y AF1 pertenecientes a los grupos T. cruzi I y II
fueron clonadas en medio semisólido. Un clon de cada una de ellas y una mezcla de ambos se
utilizaron para infectar ratones, los cuales se sacrificaron a diferentes tiempos post-infección.
Para analizar la presencia del parásito en sangre y diferentes órganos, se utilizaron el
microhematocrito y la reacción en cadena de la polimerasa con los marcadores de la secuencia
satélite del ADN nuclear y con el espaciador intergénico del gen mini-exón.
Resultados. El clon T. cruzi I fue más infectivo, observándose un tropismo preferencial por
corazón, recto y músculo esquelético, mientras que el clon T. cruzi II presentó un tropismo
preferencial por bazo e hígado. Durante la infección con la mezcla de los clones, se observó
que el clon T. cruzi I predominó sobre el T. cruzi II tanto en sangre como en órganos.
Conclusiones. Los resultados confirman que las diferencias genéticas entre los grupos de T.
cruzi podrían estar determinando el tropismo tisular y de esta manera jugar un papel fundamental
en el entendimiento de las manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas en Colombia.
Palabras claves: Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chagas, variación (Genética), tropismo.
Biological and genetic characterization of two Colombian clones of Trypanosoma cruzi
groups I and II
Introduction. Genetic differences between T. cruzi I and T. cruzi II may determine differences in
their tissue tropism in the vertebrate host and may also be responsible for the differences in
clinical manifestations of Chagas disease.
Objective. Two Colombian clones of the T. cruzi groups I and II were characterized biologically
and genetically in a murine model.
Materials and methods. Strains Cas15 and AF1 belonging to the T. cruzi groups I and II were
cloned in semisolid medium. A clone of each strain and a mix of both were used to infect mice;
the mice were subsequently sacrificed at selected post-infection intervals. In order to identify
the parasite presence in blood and organs, two methods were used (a) microhematocrit and (b)
polymerase chain reaction with primers for satellite DNA and the intergenic region of mini-
exon.
Results. The T. cruzi I clone was more infectious, with a preferential tropism observed in heart,
rectum and skeletal muscle, whereas clone T. cruzi II exhibited a preferential tropism for spleen
and liver. During the infection with the clone mixture a predominance of the T. cruzi I clone over
clone II in blood as well as in organs was observed.
Conclusions. The results corroborate that the genetic differences between the T. cruzi groups
correlate with their tissue tropism, and can play an essential role in explaining the clinical
manifestations of Chagas disease observed in Colombia.
Key words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, variability (Genetics), tropism.
64
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74 Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
La enfermedad de Chagas, causada por el mientras que el grupo T. cruzi II predomina en los
parásito Trypanosoma cruzi , se encuentra países del sur y se encuentra asociado a los
ampliamente distribuida en países de Centro y humanos y, por ende, al ciclo doméstico de
Sur América, afectando aproximadamente a 20 transmisión (15). Por otra parte, se ha visto que
millones de individuos (1). En Colombia, afecta a áreas con gran morbilidad presentan la circulación
cerca del 5% de la población y aproximadamente del grupo T. cruzi II, mientras que en donde circula
el 11% está en riesgo de contraer la infección (2). el grupo T. cruzi I es poco frecuente la enfermedad
(7). Sin embargo, estudios recientes muestran que
La enfermedad presenta un curso clínico variable
los dos grupos están circulando en ambos
que inicia con una fase aguda asintomática,
ambientes (13-16); en Venezuela, por ejemplo, un
caracterizada por alta parasitemia y detección de
estudio realizado durante el año 2004 reveló un
T. cruzi prácticamente en todos los órganos del
mayor número de pacientes infectados con el
hospedero (3). La enfermedad avanza a una fase
grupo T. cruzi I que presentaban la fase aguda de
crónica, caracterizada por baja parasitemia y un
la enfermedad con manifestaciones clínicas
impredecible curso clínico que puede involucrar similares a las observadas en pacientes
problemas cardiacos o gastrointestinales (4). En infectados con el grupo T. cruzi II (16). Así mismo,
esta fase el parasitismo en tejidos es muy alto y en infecciones experimentales se ha encontrado
restringido a algunos órganos como corazón, que el grupo al que pertenecen los parásitos
músculo esquelético, hígado, esófago, bazo y determina el tropismo a tejidos, la parasitemia y
recto (5,6). La habilidad del parásito para sobrevivir la patogénesis de la enfermedad (1,7,17).
a la fase aguda y avanzar hacia la fase crónica e
invadir determinados órganos depende tanto de En Colombia también se ha reportado
factores genéticos del parásito como del hospedero recientemente la presencia simultánea de los dos
(7-11). Por esto, diversas investigaciones han grupos filogenéticos en varias de las cepas
estudiado la variabilidad genética del parásito y estudiadas, evidenciando una mezcla de ambos,
su posible relación con las manifestaciones pero con predominio del grupo I en medios de
clínicas de la enfermedad (7). En T. cruzi se han cultivo (18). Este resultado, junto con el hallazgo
utilizado diferentes marcadores bioquímicos y de los dos grupos de T. cruzi en las heces de
moleculares para tratar de correlacionar la vectores recolectados de poblaciones silvestres
diversidad genética del parásito con sus del norte de Colombia (datos no publicados),
características biológicas. El uso del espaciador sugiere la posibilidad de que ambos grupos
intergénico de los genes mini-exón genera dos circulan de manera simultánea en la naturaleza,
claras divisiones filogenéticas conocidas como generando una epidemiología más compleja, pues
T. cruzi I y T. cruzi II (12), las cuales permiten tanto vectores como hospederos podrían estar
establecer algunas asociaciones importantes entre infectados con los dos grupos y, en éstos últimos,
la taxonomía y la biología del parásito, el darse un tropismo diferencial a tejidos ocasionan-
desarrollo de la enfermedad y diferentes do manifestaciones clínicas diversas (1,18,19).
parámetros epidemiológicos, entre otros (13,14). Por lo anterior, y teniendo en cuenta que en Colombia
Tradicionalmente, el grupo T. cruzi I se ha se ha reportado la presencia de los dos grupos
asociado al ciclo selvático de transmisión y se de T. cruzi, el objetivo del presente trabajo fue
dice que predomina en los países ubicados al norte caracterizar biológica y genéticamente dos clones
de la cuenca amazónica, entre ellos Colombia, de T. cruzi aislados de cepas colombianas
pertenecientes a los grupos I y II. Para esto, se
evaluó el tropismo a órganos de ratones infectados
Correspondencia:
Omar Triana Chávez, Calle 62 N° 52-59, Sede de
individualmente con cada uno de ellos y durante
Investigación Universitaria SIU, U de A, Medellín, Antioquia, una infección mixta con ambos clones. Este
Colombia, teléfono 2106520, fax 2105622, aspecto es de gran importancia para entender
otriana@gmail.com las manifestaciones clínicas y la epidemiología
Recibido: 19/12/05; aceptado: 24/04/06 de la enfermedad de Chagas en Colombia.
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Botero L.A., Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
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Biomédica 2007;27(supl.1):64-74 Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
de KCl, 10 mM Tris-HCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 cloroformo-alcohol isoamilico (25:24:1), previa
mM de MgCl2, 120 pmoles del iniciador S35, 200 homogenización en solución de digestión (SDS
mM de cada dNTP y 4 unidades de Taq 10%, NaCl 5 M, EDTA 0,5M, Tris-HCL 1M pH
polimerasa. Los ciclos de amplificación se 7,5) y proteinasa K (100mg/ml), con posterior
realizaron a una temperatura inicial a 94°C por 3 precipitación con etanol (27).
minutos, seguida de 35 ciclos a 94°C por 45
Detección del parásito por PCR
segundos, 30°C por 45 segundos y 72°C por 45
segundos y un ciclo final a 72°C por 10 minutos Para determinar si el parásito se encontraba
(5). Los productos amplificados se analizaron en presente en los diferentes órganos de los tres tipos
geles de poliacrilamida al 6% (25) teñidos con de infección se usó una secuencia satélite del
nitrato de plata (1). Este procedimiento se realizó ADN nuclear de T. cruzi (Sat-ADN).
por duplicado con el fin de evaluar la
Para amplificar el Sat-ADN se utilizaron los
reproducibilidad de la técnica.
iniciadores TcZI (5´-CGAGCTCTTGCCCACACG
Infección experimental de ratones GGTGCT-3´) y TcZII (5´-CCTCCAAGCAGCGG
ATAGTTCAGG-3´), los cuales amplifican un
Tres grupos de dieciocho ratones machos suizos
fragmento de 188 pb (28). La PCR se llevó a cabo
de 20 días de nacidos fueron inoculados
en un volumen final de 50 µL de reacción que
intraperitonealmente con tripomastigotes
contenía 1 µl de ADN molde, 50 mM de KCl, 10
obtenidos de medio de cultivo de cada clon y con
mM Tris-HCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 mM de
una mezcla de ambos. El inoculo utilizado fue de
MgCl2, 20 pmol de cada iniciador, 200 mM de
800.000 tripomastigotes de cada clon, tanto en
dNTPs, y 2,5 unidades de Taq ADN polimerasa.
las infecciones individuales como en la mixta. Para
Los ciclos de amplificación se realizaron a una
determinar la presencia de parásitos en sangre,
temperatura inicial de 94°C por 3 minutos, seguida
al séptimo día de infección se revisaron los
de 35 ciclos de 94°C por 45 segundos, 60°C por
ratones por el método del microhematocrito y se
1 minuto y 72°C por 1 minuto, y un ciclo final de
tomó una muestra de sangre de la cola de los
72°C por 10 minutos.
ratones infectados con la mezcla de los clones
en un trozo de tela para su posterior análisis por Además, para determinar el grupo filogenético
PCR (26). Para determinar la presencia de los presente en las muestras de sangre y órganos de
clones en órganos, se sacrificaron grupos de tres la infección con la mezcla de los clones se utilizó
ratones de cada infección y se les extrajo el marcador mini-exón mediante el procedimiento
corazón, hígado, bazo, recto y músculo descrito anteriormente.
esquelético tomado del fémur de cada ratón. Estos
Los productos amplificados fueron analizados en
procedimientos se repitieron cada siete días hasta
geles de agarosa al 2%, teñidos con bromuro de
llegar al día 28 y luego se hicieron a los días 60 y
etidio y visualizados bajo un transiluminador UV
90 de la infección (pi). Como control negativo se
(29). Cada uno de estos ensayos se hizo por
utilizó un ratón macho suizo no infectado al que
duplicado.
se le tomaron las mismas muestras. El sacrificio
de los ratones se llevó a cabo por el método de Resultados
inhalación de CO2, el cual fue aprobado por el
Aislamiento y caracterización genética de los
Comité de Bioética de la Universidad de Antioquia.
clones
Extracción del ADN
Para la cepa CAS15 se aislaron 7 clones, los
La obtención del ADN de la tela impregnada con cuales se denominaron como CAS15 cl1 hasta
sangre de los ratones se hizo por el método de CAS15 cl7. Todos los clones amplificaron la
Chelex®, que consiste en adicionar a la sangre banda de 350 pb para el marcador del gen mini-
una resina y someterla a altas temperaturas que exón, característica del grupo T. cruzi I (figura 1).
liberan el ADN en el sobrenadante (26). El ADN Para la cepa AF1 se aislaron dos clones a los
de los órganos fue extraído por el método de fenol- que se les denominó AF1 cl1 y AF1 cl2, los cuales
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Botero L.A., Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
amplificaron la banda de 300 pb, característica positivas. A los días 21, 28 y 60 pi, todas las
del grupo T. cruzi II (figura 1). El análisis de los muestras analizadas para el clon CAS15 cl3
patrones electroforéticos con la técnica LSSP-PCR fueron positivas, mientras que para el clon AF1
indicó que los clones CAS15 cl1, CAS15 cl3, cl1 se encontró al día 21 pi un 41% de muestras
CAS15 cl4, CAS15 cl5 y CAS15 cl6 presentaron positivas y a los días 28 y 60 pi un 100%. Para la
un patrón de bandas idéntico, mientras que los infección con la mezcla de los clones se encontró
clones CAS15 cl2 y CAS15 cl7 presentaron que los parásitos aparecieron en sangre el mismo
perfiles únicos (figura 2). Debido al bajo número día que el clon CAS15 cl3, presentando un 100%
de clones obtenidos para la cepa AF1 no se de muestras positivas. Al día 90 pi se observó
realizó el análisis por LSSP-PCR. Para realizar la ausencia de parásitos en todas las muestras
caracte-rización biológica de los clones (cuadro 1).
pertenecientes a estos dos grupos de T. cruzi se
Detección del parásito por PCR en sangre y
seleccionaron al azar los clones CAS15 cl3 y AF1
órganos de ratones
cl1.
Las muestras de sangre positivas por PCR
Detección de parásitos en sangre por
amplificaron sólo la banda de 350 pb, indicando
microhematocrito
la predominancia del grupo T. cruzi I (figura 3).
Durante la infección individual con el clon Cas15 Con el marcador sat-ADN se observó que el
cl3 se observó que los parásitos en sangre porcentaje de órganos parasitados disminuyó con
comenzaron a aparecer al día 7 de la infección el transcurso de la infección, encontrándose a los
(pi), con un 78% de muestras positivas, mientras días 7, 14 y 21 pi un tropismo por casi todos los
que para la infección con el clon AF1 cl1 los órganos, tanto en infecciones individuales como
parásitos en sangre empezaron a aparecer al día en la mixta, mientras que a partir del día 28 pi se
14 pi, encontrándose sólo un 28% de muestras observó un histotropismo preferencial de cada
clon. En las infecciones individuales se encontró
la presencia del clon CAS15 cl3 en el 88,8% de
los corazones y en el 100% de los músculos
esqueléticos analizados, mientras que en recto,
hígado y bazo se observó el 66,6, 44,4 y 38,8%
de infección, respectivamente. Con el clon AF1
cl1 se observó un porcentaje de infección en bazo,
Figura 1. Amplificación por PCR de la región intergénica del hígado, músculo esquelético y recto del 83,3,
gen mini-exón para los clones aislados de las cepas CAS15 61,1, 50 y 27,7%, respectivamente, mientras que
y AF1. M: marcador de tamaño molecular, escalera de 100 el corazón de estos ratones no presentó infección.
pb. CN: control negativo. CAS15 y AF1: cepas parentales.
Con la infección mixta se encontró un porcentaje
Carriles 1 a 7: clones 1 al 7 de la cepa CAS 15. Carriles 8 a
9: clones 1 y 2 de la cepa AF1. de infección en corazón y músculo esquelético
del 100%, mientras que en recto, hígado y bazo
se encontró una infección del 94,4, 72,2 y 11,1%,
respectivamente (cuadro 2 y figuras 4a, 4b y 4c).
La caracterización molecular con el marcador mini-
exón de los parásitos presentes en órganos
durante la infección mixta reveló en todos los
órganos positivos un amplificado de 350 pb,
mostrando un 88,9% de corazones y un 66,7%
de músculos esqueléticos positivos, mientras que
Figura 2. LSSP-PCR de los siete clones aislados de la cepa
CAS15. M: marcador de tamaño molecular, escalera de 50
el recto e hígado mostraron un porcentaje de
pb. Carriles 1 a 7: clones 1 al 7 de la cepa CAS 15. infección del 44,4 y 11,1%, respectivamente. Sin
* Diferencias en el perfil de bandas. embargo, las muestras de bazo positivas con
68
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74 Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
Cuadro 1. Detección por microhematocrito del parásito en sangre de ratones infectados con los clones CAS15 cl3, AF1 cl1
y con la mezcla de ambos.
Ratones
Parásitos Día pi. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Clon 7 + + + + - + - + + - - + + + + + + +
CAS15 cl3 14 - - - - - - - - - - - - - - -
21 + + + + + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
60 + + + + + +
90 - - -
ClonAF1 cl1 7 - - - - - - - - - - - - - - - - - -
14 - - - - - - - + - + - + + - +
21 + - - - + - - + - + - +
28 + + + + + + + + +
60 + + + + + +
90 - - -
Mezcla 7 + + + + + + + + + + + + + + + + + +
14 - - - - - + - - + + - + + + -
21 + + + + + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
60 + + + + + +
90 - - -
+: Positivo; -: negativo. La región en blanco corresponde a ratones sacrificados el día indicado. pi: post-infección
69
Botero L.A., Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
Figura 4. Amplificación de la secuencia satélite del ADN nuclear de T. cruzi en órganos de ratones inoculados con los
clones CAS15 cl3 (a), AF1 cl1 (b), con la mezcla de ambos, y de ratón negativo no infectado (c). M: marcador de tamaño
molecular, escalera de 100 pb. CN: control negativo. CAS 15 y AF1: cepas parentales. Ratones 1 y 10: sacrificados a los
días 7 y 60 después de la infección, respectivamente. c: corazón. h: hígado. b: bazo. r: recto. m: músculo esquelético.
Cuadro 2. Detección del parásito por PCR en órganos de ratones infectados con los clones CAS15 cl3, AF1 cl1 (marcador
Sat-ADN) y con la mezcla de ambos.
Clon CAS15.3 7 2 3 3 3 3
14 3 3 2 3 3
21 3 2 1 1 3
28 2 0 1 2 3
60 3 0 0 2 3
90 3 0 0 1 3
Clon AF1.1 7 0 3 3 3 0
14 0 0 1 2 1
21 0 2 2 0 2
28 0 2 3 0 2
60 0 2 3 0 2
90 0 2 3 0 2
Órganos de ratones inoculados con la mezcla que amplificaron por mini-exón la banda de 350 pb correspondiente al grupo
T. cruzi I. Número de ratones positivos con Sat-ADN/número de ratones positivos con mini-exón.
70
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Botero L.A., Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
las formas digestivas de la enfermedad (7), hígado fueron muy interesantes, ya que a pesar
mientras que en Colombia la manifestación clínica de que el parasitismo en dichos órganos se
más frecuente es la cardiaca. Nuestros resultados observó en las dos infecciones individuales,
aportan evidencia que confirma que la forma durante la infección mixta sólo se encontró la
cardiaca de la enfermedad en Colombia puede ser presencia del grupo T. cruzi I (clon CAS15 cl3).
causada por T. cruzi I, puesto que el clon AF1 Esto podría explicarse por diferencias entre los
cl1, representante de T. cruzi II en Colombia, no dos clones en la cinética de la fase aguda, ya
invadió corazón, mientras que el clon del grupo I que las respuestas inmunes estimuladas por una
se encontró en la mayoría de los corazones. Sin población de T. cruzi podrían favorecer la invasión
embargo, es necesario que en futuros estudios y colonización tisular de la otra (16). Además,
se evalúe el tropismo tisular de un mayor número como se ha informado anteriormente, algunos
de clones pertenecientes a T. cruzi II para verificar clones pueden ser eliminados por su inhabilidad
lo anterior. para competir y propagarse en el hospedero, o
por la acción de sus mecanismos de defensa (36).
Nuestros resultados concuerdan con lo planteado Se podría pensar también en la posibilidad de que
por N. Añez y col (16), quienes encontraron que ambos grupos lleguen a infectar los órganos, pero
la infección con T. cruzi I presenta parasitemias al igual que ocurre con las cepas, T. cruzi II no se
mucho más altas que las causadas por T. cruzi II puede detectar por estar presente en menor
y que, además, T. cruzi I genera en pacientes proporción. A pesar de que el mini-exón es un
durante la fase crónica un alto grado de daño en buen marcador para diferenciar los dos grupos de
miocardio y músculo esquelético (34). Por el T. cruzi, los resultados obtenidos mostraron que
contrario, otros autores han encontrado que las no fue muy sensible en la detección del parásito,
infecciones con T. cruzi II son bastante graves y posiblemente por su bajo número de copias
que comprometen algunos tejidos como recto y comparado con el marcador sat-ADN.
esófago (1,16,31). Los resultados encontrados en
este estudio muestran que la parasitemia y el Finalmente, nuestro trabajo aporta evidencia que
tropismo por órganos de parásitos pertenecientes sugiere que en Colombia el grupo T. cruzi I es
al grupo T. cruzi II es menor que la de parásitos más virulento que T. cruzi II y probablemente por
del grupo T. cruzi I, con tropismo preferencial por ello es que predomina en las infecciones. Además,
bazo e hígado. Consideramos que estas se comprueba que el polimorfismo genético de
diferencias pueden deberse al alto polimorfismo las poblaciones de T. cruzi puede ejercer influencia
encontrado en parásitos pertenecientes al grupo sobre el tropismo tisular y consecuentemente
T. cruzi II, ya que se ha comprobado que los sobre las manifestaciones clínicas de la
diferentes subgrupos en los que se encuentra enfermedad. Estos aspectos son de gran
dividido difieren en su infectividad, virulencia y importancia para una mejor comprensión de la
patogenicidad. Como ejemplo está el clon CL- epidemiología de la enfermedad de Chagas.
Brener, perteneciente al grupo T. cruzi IIe, que Agradecimientos
después de ser inoculado en ratas presentó una
alta tasa de mortalidad al sobrevivir a la fase Luz Adriana Botero recibió apoyo del CODI–
aguda de la infección (31). Universidad de Antioquia a través del programa
de jóvenes investigadores.
Es importante destacar que diversos estudios han
reportado el músculo esquelético como uno de Conflicto de intereses
los órganos que más se encuentra parasitado con Los autores declaramos que no existe ningún
T. cruzi tanto en la fase aguda como en la fase conflicto de intereses.
crónica de la enfermedad (35). Lo encontrado en
este estudio corrobora lo anterior, pues en las Financiación
infecciones individuales ambos clones se Este proyecto fue financiado por el programa de
encuentran parasitando dicho músculo. Además, sostenibilidad 2005–2006 del CODI, Universidad
los resultados obtenidos en este órgano y en el de Antioquia.
72
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74 Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
73
Botero L.A., Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
26. Campos RF, Goncalves MS, dos Reis EA, dos Reis strain of Trypanosoma cruzi after long lasting
MG, Andrade SG. Comparative analysis by maintenance in the laboratory. Mem Inst Oswaldo Cruz
polymerase chain reaction amplified minicircles of 1996;91:795-800.
kinetoplast DNA of a stable strain of Trypanosoma cruzi
32. Di Noia JM, Buscaglia CA, De Marchi CR, Almeida
from Sao Felipe, Bahia, its clones and subclones:
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possibility of predominance of a principal clone in this
molecule provides the first immunological evidence that
area. Mem Inst Oswaldo Cruz 1999;94:23-9.
Chagas disease is due to a single parasite lineage. J
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74
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82 Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata
ARTÍCULO ORIGINAL
1
Escuela de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad Industrial de Santander, Piedecuesta, Santander,
Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales de la Universidad Industrial de Santander,
CINTROP-UIS, Piedecuesta, Santander, Colombia.
75
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
Results. The values of the LD50 in nymphs of first instar for T. maculata, expressed in nanograms
per insect (ng/i), were 0.07, 0.05 and 4.12 for deltamethrin, β-cypermethrin and fenitrothion
respectively. The corresponding LD99 values were 1.08, 0.37 and 17.89 ng/i. In T. dimidiata,
the LD50 values were 0.44, 0.46 and 16.45 ng/i; the LD99 values were 2.22, 1.97 and 36.07
ng/i. In nymphs of fifth instar T. dimidiata, the LD50 values were 510.7, 1,623.6 and 838.9 ng/i;
the LD99 values were 9,607.5, 11,717.9 and 1,525.0 ng/i, respectively.
Conclusion. In first instar nymphs of T. dimidiata and T. maculata, the pyrethroid insecticides
were more effective; in fifth instar nymphs of T. dimidiata, the effectiveness of the pyrethroids
and the organophosphate differed in the LD50 comparison—the nymphs required much higher
doses compared with the other triatomines and suggested a low susceptibility. The LD99 for
the organophosphate (fenitrothion) was significantly lower and may indicate its greater
effectiveness in field. Studies of synergistic effects amonst insecticides are important to clarify
the role of biochemical mechanisms that determine tolerance to the pyrethroids. Insecticide
tolerance represents a new challenge for control campaigns in the Andean and Central American
countries where Chagas disease is endemic.
Key words: Triatominae, Triatoma, Chagas disease, insecticides, organophosphate, pyrethrins,
La enfermedad de Chagas afecta a una población Las experiencias de control vectorial en América
de 16 a 18 millones de personas, y más de 100 Central, los países Andinos y del Cono Sur han
millones se encuentran en riesgo de infección en demostrado que una de las pocas alternativas
21 países (1). En Latinoamérica las especies prácticas para controlar la enfermedad de Chagas
domiciliadas más importantes implicadas en la es a través del control de los triatominos
transmisión de Trypanosoma cruzi son Triatoma domiciliarios (10,11). En 1996 se creó en Colombia
infestans, en los países del Cono sur, Rhodnius el Programa Nacional de Control Vectorial de la
prolixus, en Centro América y el Norte de Sur enfermedad de Chagas (12); en su marco se han
América, y Triatoma dimidiata, que se extiende a iniciado actividades de aspersión de insecticidas
lo largo de la costa Pacífica desde México hasta piretroides y organofosforados y políticas de
el Ecuador y el norte de Perú (2-4). En Colombia, mejoramiento de vivienda en Boyacá, Casanare,
durante los últimos 20 años, T. dimidiata ha Santander, Norte de Santander y Arauca (12,13).
ocupado hábitats domiciliarios, peridomiciliarios, Dichos departamentos forman parte de las zonas
silvestres y viviendas de buena construcción en catalogadas como de alto y mediano riesgo de
cabeceras municipales. Este fenómeno ha infección, donde el uso de la deltametrina se ha
ocurrido también en algunas ciudades de hecho extensivo como medida de control (14).
Centroamérica (4-8).
Algunos países de Centroamérica han tenido éxito
Triatoma maculata se distribuye en la zona utilizando piretroides en la eliminación de colonias
nororiental de Sur América, colonizando de T. dimidiata intradomiciliarias (15-7). Sin
ambientes domésticos, peridomésticos, silvestres embargo, las zonas infestadas con triatominos
y urbanos del país con altos niveles de infestación de algunos países de Suramérica han mostrado
(2,9) Mojíca MT, Cuervo LA, Ariza K, Chacón E, diferencias en la susceptibilidad y la resistencia
Chacón R, Dib JC, et al. Distribución de Triatoma a insecticidas en poblaciones de T. infestans de
maculata e infestación domiciliaria en Santa Brasil y Argentina, así como en una población de
Marta, Colombia. Biomédica 2003;23:96). R. prolixus en Carabobo, Venezuela (18-21). En
Correspondencia:
Colombia, estudios recientes muestran altos
Marlene Reyes Jerez, Laboratorio de Entomología, niveles de infestación postratamiento; una de las
Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales de causas sugeridas por los investigadores es la
la Universidad Industrial de Santander, Km 2 vía El Refugio, presencia de poblaciones de esta especie con
Piedecuesta, Santander, Colombia.
Tel: 6563971, fax: 6540177.
menor susceptibilidad al piretroide usado (5).
marejez1@hotmail.com Teniendo en cuenta que en la actual situación
Recibido: 22/08/05; aceptado: 02/06/06 colombiana una de las estrategias que hacen parte
76
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82 Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata
del control integrado de los triatominos es el uso y T. maculata; las ninfas I tenían entre 24 y 36
de sustancias químicas insecticidas, se hace horas (24), con un peso entre 1,4±2,1mg y
necesario evaluar el efecto triatomicida en el 0,6±1,1mg, respectivamente, y las ninfas de
laboratorio con el fin de monitorizar la quinto estadio de T. dimidiata tenían 10 a 12 días
susceptibilidad y la resistencia de las poblaciones de edad, no recibieron alimento y su peso era de
blanco a los insecticidas en uso. 97± 30 mg (datos no publicados, CINTROP-UIS).
En el país son pocos los estudios sobre este tema Insecticidas
que se reportan en la literatura, y todos han estado
Los insecticidas (grado técnico) utilizados en este
dirigidos a evaluar la susceptibilidad y resistencia
estudio fueron deltametrina al 99,1% (Agrevo S.A,
en R. prolixus (22,23).
Argentina), β-cipermetrina al 99,4% (Chemotecnica
Si el conocimiento de T. dimidiata en este aspecto Sintyal, Argentina), y fenitrotión al 98,5% (Lab
es escaso, también lo es en cuanto a la determi- Dr.Ehrenstorfer-Schafers,Germany). Las
nación de factores que influyen en la respuesta a diluciones seriales de insecticidas se prepararon
los insecticidas como por ejemplo el estado en acetona (JT Baker, México).
nutricional; las observaciones sobre la actividad
Ensayos biológicos
insecticida con β-cipermetrina aplicada por vía
tópica en ninfas de V estadio muestran diferencias Evaluación del efecto insecticida. Las ninfas de
que indican una muy baja absorción insecticida primer estadio de T. dimidiata y T. maculata y las
asociada con mecanismos de detoxificación de quinto estadio de T. dimidiata se trataron con
(datos no publicados, CINTROP-UIS). aplicación tópica de principios activos (fenitrotión,
β-cipermetrina y deltametrina) diluidos y aplicados
En este estudio se propuso establecer la línea de
con microjeringas Hamilton de 5 y 25 µl provistas
base de susceptibilidad en T. dimidiata y T. de descargador repetitivo. En la región dorsal del
maculata con dos piretroides y un organofosforado abdomen de cada ninfa en estadios I y V se
como inicio de los estudios de monitorización de aplicaron 0,1 y 0,5 µl de la solución, respectiva
la susceptibilidad y la resistencia a insecticidas mente. En los ensayos biológicos se seleccionaron
en poblaciones de campo, ante todo para orientar cuatro niveles de dosis que registraron entre 10 y
las políticas de control en el país y, además, para 90% de mortalidad; se utilizaron 10 ninfas por
contribuir a la extensión de los protocolos de dosis con mínimo tres réplicas en diferentes días;
evaluación de la actividad insecticida de los como grupo control se utilizaron 10 insectos en
triatominos en Latinoamérica. cada réplica con igual volumen de acetona.
Materiales y métodos Después del tratamiento, los insectos se colocaron
en frascos plásticos y se mantuvieron en una
Material biológico incubadora bajo condiciones ambientales
Se utilizaron cepas de T. dimidiata y T. maculata constantes a 25 ± 2°C, 70 a 80% de HR. La lectura
provenientes de San Joaquín y San José de de mortalidad para el insecticida organofosforado
Miranda, municipios del departamento de fenitrotión se realizó a las 48 horas y para los
Santander, áreas éstas sin tratamiento piretroides β-cipermetrina y deltametrina a las 72
sistemático de control estatal en el momento de horas de aplicación del tratamiento.
la recolección. La cría de las cepas se inició en Criterio de muerte. Se consideró muerto el insecto
1998, manteniéndolas sin aporte de material que colocado sobre un papel de filtro no tuviera
externo en condiciones ambientales constantes
actividad locomotora propia, ya fuera en forma
de laboratorio a 25 ± 2°C, 70 a 80% de HR y
espontánea o al ser estimulado con un pincel o
fotoperíodo de 12:12, y alimentándolas cada 15
una pinza según lo establecido por el protocolo
días con sangre de gallina.
de evaluación de la actividad insecticida en
En los ensayos biológicos con insecticidas se triatominos de la Organización Mundial de la
utilizaron ninfas de primer estadio de T. dimidiata Salud (24).
77
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
Cuadro 1. Nivel de susceptibilidad en ninfas de estadios I y V sin alimentar de Triatoma dimidiata y Triatoma maculata, cepa
referencial susceptible a la aplicación tópica de los principios activos deltametrina, β-cipermetrina y fenitrotión.
DL50 = dosis que ocasiona el 50% de mortalidad de los insectos expuestos, expresada en nanogramos por insecto;
DL99 = dosis que ocasiona el 99% de la mortalidad de los insectos expuestos, expresada en nanogramos por insecto.
b = pendiente de la recta; DE = desviación estándar; n = número total de insectos.
78
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82 Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata
En ninfas de quinto estadio de T. dimidiata, los las diferencias de efectividad entre los insecticidas
valores de las pendientes encontrados (cuadro 1) piretroides y el organofosforado en estudio, lo que
muestran que la respuesta de la población fue se asemeja a lo reportado en ninfas I de T.
heterogénea para la deltametrina (1,8) y para la β- infestans susceptibles (deltametrina 0,13 ng/i; β-
cipermetrina (2,7). En cambio se observó una cipermetrina 0,24 ng/i, y fenitrotión 21,6 ng/i) (20),
respuesta homogénea (8,9) para el fenitrotión con y concuerda con la reconocida acción triatomicida
diferencias significativas (p < 0,05) respecto a los de los piretroides (25). Todos los insecticidas
piretroides. mostraron mayor toxicidad en ninfas de primer
estadio que en ninfas de quinto estadio; estas
La efectividad insecticida, medida por el potencial
diferencias de toxicidad pueden ser atribuidas a
insecticida, se muestra en el cuadro 2. En ninfas
diferencias en los procesos de toxicocinética en
de primer estadio de T. dimidiata, la toxicidad
cada uno de los estadios (26). Considerando las
intrínseca de la deltametrina fue similar a la de la
dos especies y todos los insecticidas estudiados
β-cipermetrina, pues sólo fue 1,02 veces más
en ninfas de primer estadio, T. maculata es más
efectiva, pero respecto al fenitrotión mostró una
susceptible que T. dimidiata en cuanto a los
efectividad 37,1 veces mayor. En ninfas de quinto
parámetros de toxicidad expresados en peso de
estadio, y en el marco de la acentuada tolerancia
ingrediente activo por insecticida con relación al
observada a los insecticidas estudiados, la
peso del insecto vivo; esta condición fue
toxicidad intrínseca de la deltametrina sólo fue
observada por Oliveira Filho para R. prolixus al
3,2 veces mayor que la de la β-cipermetrina y
compararlo con T. infestans y Panstrongylus
1,6 veces mayor que la del fenitrotión. En ninfas
megistus (21).
I de T. maculata, la β-cipermetrina presentó 1,2
veces más potencial insecticida que la Los resultados obtenidos en ninfas de quinto
deltametrina; la deltametrina fue 63 veces más estadio de T. dimidiata mostraron su sorprendente
efectiva que el fenitrotión. tolerancia a los insecticidas estudiados,
particularmente a la deltametrina, aunque si bien
Discusión
éste fue el insecticida más efectivo, las dosis
El análisis de los valores de DL50 obtenidos para necesarias para causar volteo al 50% de los
cada insecticida en ninfas de primer estadio de insectos tratados fueron altas en comparación con
T. dimidiata y T. maculata muestra claramente las requeridas en otras especies (27). En este
Cuadro 2. Potencial insecticida por aplicación tópica de la β-cipermetrina y fenitrotión versus deltametrina en ninfas I de
Triatoma dimidiata y Triatoma maculata y ninfa V de Triatoma dimidiata.
DL50 o CL 50 deltametrina
Potencial insecticida= X100
DL50 o CL50 β-cipermetrina o fenitrotión
DL: dosis letal
CL: concentración letal
79
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
estudio se reportó una DL50 de 510 ng/i para esta dimidiata y T. maculata la intoxicación producida
especie; con T. infestans se presentó una DL50 por piretroides se manifiesta por incoordinación,
de 215 ng/i (25). Es posible plantearse la pregunta parálisis del tercer par de patas y convulsiones.
sobre qué mecanismos enzimáticos con rol clave
Al analizar los resultados obtenidos a través del
en la detoxificación de insecticidas, particular-
cálculo del potencial insecticida en ninfas de
mente de los piretroides, podrían tener una
primer estadio de T. dimidiata y T. maculata, se
actividad marcada en ninfas V de T. dimidiata
observa nuevamente una mayor efectividad
como para conferirles tolerancia frente a la acción
insecticida de los piretroides frente al organo-
triatomicida.
fosforado. En las ninfas de quinto estadio de T.
Al comparar los valores estadísticos DL50 1623,59 dimidiata, la toxicidad intrínseca de la deltametrina
ng/i en ninfas V de T. dimidiata sin alimentar con fue mayor comparada con la β-cipermetrina. Con
los DL50 432,57 ng/i en ninfas V alimentadas se las DL50 se observaron diferencias entre los
observa una menor respuesta tóxica a la β- piretroides y el fenitrotión; sin embargo, con la
cipermetrina en las ninfas de V estadio sin DL99 se encontró una mayor efectividad del
alimentar que en las alimentadas, lo cual evidencia organofosforado. Si bien este resultado hace
mayor susceptibilidad de las ninfas V alimentadas pensar en una mayor efectividad del fosforado en
y sugiere una baja absorción de este insecticida condiciones de campo, es necesario plantear que
en ninfas sin alimentar. Este hallazgo es similar la tolerancia de las ninfas V de T. dimidiata a
a lo reportado en ninfas de segundo estadio de T. piretroides y fenitrotión representa un problema
infestans, en las cuales se encontró un importante para las campañas de control de vectores de la
incremento en la penetración y mortalidad con DDT enfermedad de Chagas en los países andinos y
en insectos tratados después de la alimentación centroamericanos.
(28); estas diferencias de penetración en ninfas
Recientemente, en Colombia se han reportado
sin alimentar sugieren baja absorción del
altas prevalencias de infestación intradomiciliarias
insecticida, lo que asociado a los caminos
y peridomiciliarias desde los primeros meses
metabólicos de desintoxicación ya establecidos,
postratamiento por parte de adultos y ninfas de
podrían explicar la muy baja actividad del
cuarto y quinto estadio de T. dimidiata, con un
insecticida.
aumento creciente del número de triatominos
Una población de insectos susceptible a capturados por mes de vigilancia en zonas
insecticidas presenta valores elevados de rociadas con deltametrina (5) (Turriago BC,
pendiente (población homogénea), que van Pinto N, Guhl F. Evaluación de deltametrina K-
disminuyendo cuando la respuesta se hace más Othrine SC50 y K-Othrine WP 50 como alternativa
heterogénea (29). Esta homogeneidad de de control de Triatoma dimidiata. Biomédica
respuesta de una población susceptible concuerda 2005;25:195).
con los resultados obtenidos para el fenitrotión
Nuevos estudios con sinergistas podrían
en ninfas de primer y quinto estadio de T.
demostrar algún mecanismo que justifique esta
dimidiata y ninfas de primer estadio de T.
tolerancia, lo cual ayudaría a mejorar las
maculata. Sin embargo, no concuerda con la
formulaciones de los insecticidas que se destinan
respuesta heterogénea detectada para los
al control de T. dimidiata.
insecticidas β-cipermetrina y deltametrina en las
dos especies. Probablemente esta heterogeneidad Este estudio contribuye a la extensión del
de respuesta en las especies estudiadas podría protocolo, evaluación de la actividad insecticida
atribuirse al particular modo de acción de los de los triatominos en Latinoamérica y permite el
piretroides en triatominos, en los que el efecto desarrollo de estudios en la siguiente etapa, es
letal no tiene una muy clara manifestación y puede decir, comparar la línea de base de susceptibilidad
superponerse con un volteo prolongado, tal como con poblaciones de campo que hayan sido
se ha encontrado en R. prolixus (28). En T. sometidas a control con los insecticidas probados.
80
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82 Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata
81
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
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82
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
ARTÍCULO ORIGINAL
83
Gil J., Pavía P., Montilla M. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
Materials and methods. An agreement study was carried out by comparing the PCR with
ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay) and IFAT (indirect immunofluorescence) tests.
In addition, the PCR sensitivity and specificity were determined. A sample of 156 individuals
was tested with the H2A PCR primers after a Chagas disease classification based on clinical,
epidemiological and serological data associated with each patient. In addition, 97 out of 156
samples were also compared with the S35/S36 PCR primers.
Results. Eighty-nine of 156 samples (57%) were positive by both IFAT and ELISA and 84
(53.8%) presented the expected 234 bp amplification fragment. The sensitivity of the TcH2AF/
R PCR was 88% (95% C.I.: 75%--95%) and its specificity 92.5% (95% C.I.: 87.7%--97.2%). The
kappa index for concordance between serological tests and TcH2AF/R PCR was 0.8 (95% C.I.:
73%--86%), and between the TcH2AF/R and S35/S36 PCR primers was 0.9 (95% C.I.: 84%--
96%). These indices indicated a “good” and “almost perfect” agreement, respectively.
Conclusions. The TcH2AF/R PCR is a promising diagnostic tool for the detection of T. cruzi and
is suggested as a tool complementary to the classical serological tests.
Key words: polymerase chain reaction, histones, Chagas myocardiopathy, Trypanosoma cruzi
Trypanosoma cruzi es un parásito protozoo ciclo de transmisión (7, Dib J, Restrepo M, Parra
hemoflagelado, agente causal de la enfermedad G, Tibayrenc M, Barnabe C, Triana O. Definición
de Chagas, entidad que afecta a 18 millones de de dos poblaciones de Trypanosoma cruzi I en el
personas en 15 países endémicos, con una norte de Colombia mediante análisis de RAPD y
incidencia anual de 200.000 nuevos casos (1). el gen de la proteína flagelar. Memorias XII
En Colombia se estima que hay cerca de 700.000 Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina
personas infectadas con un 23% de la población Tropical. Biomédica 2005;25:207-8.). Por otra
en riesgo de contraer la enfermedad y entre 30 y parte, T. cruzi presenta morfología similar y
40 mil nuevos casos anuales (2). reacción inmunológica cruzada con Trypanosoma
rangeli, parásito con el cual también comparte
T. cruzi se distribuye ampliamente en Sur América,
zonas endémicas, vectores y reservorios (14,15).
presentando un amplio rango de vectores,
Debido a lo anterior, se hace necesario el
hospederos y reservorios, así como un amplio
desarrollo de pruebas específicas que disminuyan
pleomorfismo genético y biológico (3-6). En
o eliminen el riesgo de falsos negativos por
Colombia se ha visto que aun cuando la mayoría
variabilidad intra-cepa y falsos positivos por la
de las cepas del parásito pertenecen al grupo T.
presencia de T. rangeli.
cruzi I o zimodema Z1 (7-13, Dib J, Restrepo M,
Parra G, Tibayrenc M, Barnabe C, Triana O. Algunos estudios han demostrado la utilidad y el
Definición de dos poblaciones de Trypanosoma alto potencial de la prueba de reacción en cadena
cruzi I en el norte de Colombia mediante análisis de la polimerasa (PCR) para el diagnóstico de la
de RAPD y el gen de la proteína flagelar. enfermedad de Chagas, tanto en su etapa aguda
Memorias XII Congreso Colombiano de como en la crónica (16,17). Una de las pruebas
Parasitología y Medicina Tropical. Biomédica más usadas es la PCR basada en los iniciadores
2005;25:207-8.), éstas varían en sus caracterís- S35/S36, los cuales amplifican los minicírculos
ticas genéticas dependiendo especialmente de su del ADN del cinetoplasto (kADN) del parásito (18).
Sin embargo, estos iniciadores también amplifican
Correspondencia: el kADN de T. rangeli, presentándose perfiles que
Concepción Puerta, Laboratorio de Parasitología Molecular, sólo pueden ser distinguidos en geles de
Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, poliacrilamida y que, en caso de infecciones
Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá
D.C., Colombia.
mixtas por ambos tripanosomas, pueden
Teléfono:(+571) 3208320 ext. 4024, fax (571) 3208320 ext. enmascarar la presencia de T. rangeli haciéndolo
4021 pasar por T. cruzi (19). Además, recientemente
cpuerta@javeriana.edu.co se ha visto que el kADN es capaz de integrarse
Recibido: 15/02/06; aceptado: 09/06/06 al ADN de la célula hospedera, de manera que
84
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
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Gil J., Pavía P., Montilla M. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
15 ciclos con el siguiente perfil: denaturación a PCR. Ambos ensayos se realizaron tres veces
95°C por 30 segundos, anillaje y extensión a 72°C para asegurar la reproducibilidad de los resultados.
por 30 segundos cada uno. Luego, se realizaron
Análisis estadístico
30 ciclos con denaturación a 95°C por 30
segundos, anillaje a 65°C por 30 segundos y Los datos fueron consignados en una base de
extensión a 72°C por 30 segundos, seguidos de datos elaborada con el paquete estadístico EPI-
la extensión final a 72°C por 5 min. Como blanco INFO 6.0. El análisis estadístico descriptivo de
de reacción se reemplazó el ADN de la muestra las pruebas diagnósticas se realizó a través del
por agua o por TE; como control negativo se utilizó paquete estadístico Stata 6.0. Se analizaron las
ADN humano y como positivo ADN de la cepa características operativas de la prueba
Munantá (IRHO/CO/98/MTA) del parásito. Los (sensibilidad y especificidad) y se realizó el cálculo
productos de amplificación fueron analizados del índice de concordancia kappa con sus
mediante electroforesis en gel de agarosa al 1,5% respectivos intervalos de confianza (25).
teñido con bromuro de etidio (23). La prueba de Resultados
PCR S35/S36 se realizó de acuerdo a lo descrito
por Vallejo y colaboradores (18). Con el fin de Determinación de la capacidad de detección
eliminar la posibilidad de inhibición de la reacción de la prueba de PCR TcH2AF/R
de PCR en las muestras negativas, éstas fueron Se observó el producto de amplificación esperado
amplificadas nuevamente tras la adición de 50 ng de 234 pb con la PCR TcH2AF/R hasta con una
ADN de la cepa Munantá (IRHO/CO/98/MTA) del forma del parásito en ambas cepas a partir del
parásito. ADN extraído por el método de triple extracción
con fenol-cloroformo-alcohol isoamílico en tres
Determinación del poder de detección de la
réplicas del experimento (figura 1). Igualmente,
PCR
con la PCR S35/S36 se pudo detectar hasta un
Se determinó la cantidad mínima de parásitos a parásito utilizando el método de extracción de
detectar por ambas reacciones de PCR mezclando triple fenol-cloroformo-alcohol isoamílico,
cantidades en base 10 de formas epimastigotas independientemente de la cepa empleada. No
del parásito con sangre humana libre de infección, obstante, con el estuche comercial disminuyó el
seguida de la extracción de ADN y ensayos de poder de detección de ambas pruebas de PCR de
Figura 1. Prueba de PCR basada en los iniciadores TcH2AF/R a partir de epimastigotes de la cepa Munanta de T. cruzi
mezclados con sangre humana libre de infección y extracción de ADN por el método triple fenol: cloroformo: alcohol
isoamílico. Gel de agarosa al 1,5%, teñido con bromuro de etidio: marcador de peso molecular 100 pb (Promega) (1); 10 2
parásitos (2); 102 parásitos diluidos 1/5 (3); 102 parásitos diluidos 1/10 (4); 101 parásitos (5); 101 parásitos diluidos 1/5 (6); 101
parásitos diluidos 1/10 (7); 100 parásitos (8); 100 parásitos diluidos 1/5 (9); 100 parásitos diluidos 1/10 (10); agua milli-Q como
blanco de reacción (11) y ADN de la cepa Munantá de T. cruzi como control positivo (12).
86
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
1 a 100 parásitos en el caso de la cepa D.A. y de enfermedad de Chagas, utilizando cepas nativas
1 a 10 parásitos en el caso de la PCR S35/S36 colombianas (22). Ambas pruebas serológicas en
usando el ADN de la cepa Munantá como blanco este estudio arrojaron resultados idénticos.
de amplificación.
Del total de 156 muestras, 89 (57%) fueron
Con el fin de corroborar los resultados anteriores, positivas por IFI y Elisa y 84 (53,8%) presentaron
se realizó una prueba piloto con 31 muestras de el perfil de amplificación correspondiente a la
pacientes chagásicos y 26 de individuos sanos, banda esperada de 234 pb, presentándose 79
en la cual se observó que de 57 muestras a las muestras positivas por ambos métodos (figura 2).
cuales se les realizó la prueba de PCR TcH2AF/ Por su parte, de las 67 muestras negativas por
R a partir del ADN extraído con ambos métodos ambas pruebas serológicas, 62 de ellas también
de extracción, 18 (31,5%) fueron positivas para fueron negativas por la prueba de PCR TcH2AF/
ambos métodos, dos (3,5%) fueron positivas R (figura 2).
únicamente para el estuche comercial y 13 (22,8%)
para el de triple extracción con fenol-cloroformo- Se obtuvo una sensibilidad de 88% (IC 95%: 75 -
alcohol isoamílico. Se obtuvo un índice de 95%) y especificidad de 92,5% (IC 95%: 87,7 -
concordancia kappa de 0,49 (IC 95%: 36 - 62%), 97,2%) al comparar la prueba de PCR TcH2AF/R
interpretado como una concordancia moderada con las pruebas serológicas.
entre estos dos métodos de extracción. Con base El índice de concordancia kappa entre la prueba
en estos resultados, se seleccionó el método de de PCR TcH2AF/R y ambas pruebas serológicas
triple extracción con fenol-cloroformo-alcohol fue de 0,8 (IC 95%: 73 - 86%), interpretado como
isoamílico para la extracción del ADN de las una buena concordancia.
muestras a analizar.
El análisis del desempeño de la PCR TcH2AF/R
Comparación de la prueba de PCR TcH2AF/R en cada grupo de estudio fue el siguiente: en el
con las pruebas serológicas y la PCR S35/S36 grupo control de pacientes no infectados (A), de
Se realizó un estudio de concordancia en donde un total de 55 muestras, cuatro (7,3%) fueron
se comparó la PCR TcH2AF/R con las pruebas positivas por PCR y 51 (92,7%) fueron negativas.
serológicas de IFI y Elisa, técnicas utilizadas en En el grupo de pacientes infectados asintomáticos
el Instituto Nacional de Salud como referencia (B), de un total de 16 muestras, 15 (93,7%) fueron
para el diagnóstico y confirmación de la positivas por la PCR TcH2AF/R. En el grupo de
Figura 2. Detección de T. cruzi en sangre total de pacientes colombianos mediante la PCR TcH2AF/R. Gel de agarosa al
1,5%, teñido con bromuro de etidio: marcador de peso molecular de 100 pb (Promega) (1); muestra 085, negativa (2); muestra
085 diluida 1/5 (3); muestra 085 diluida 1/10 (4); muestra 079, positiva (5); muestra 079 diluida 1/5, (6); muestra 079 diluida
1/10 (7); muestra 074, positiva (8); muestra 074 diluida 1/5 (9), muestra 074 diluida 1/10 (10); ADN de la cepa Munantá de T.
cruzi como control positivo (11); ADN humano como control negativo (12) y agua Milli-Q estéril como blanco de reacción (13).
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Gil J., Pavía P., Montilla M. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
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Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
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Gil J., Pavía P., Montilla M. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
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Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
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91
Arroyo
Biomédica
C.M.,
2007;27(Supl.
Esteban L.,1):92-100
Catalá S., Angulo V.M. Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
ARTÍCULO ORIGINAL
1
Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales (CINTROP), Universidad Industrial de Santander,
Piedecuesta, Santander, Colombia.
2
Centro Regional de Investigaciones Científicas y Transferencia Tecnológica (CRILAR) Anillaco, La Rioja,
Argentina.
Introducción. Triatoma dimidiata es uno de los triatominos más ampliamente distribuidos en
Colombia, la caracterización fenotípica antenal de poblaciones de diferentes hábitats
proporcionaran conocimientos sobre su biología y comportamiento que podrán ser utilizados
en nuevas propuestas metodológicas para su control.
Objetivo. Estudiar el comportamiento de poblaciones de Triatoma dimidiata en diferentes
hábitats utilizando el fenotipo antenal.
Materiales y métodos. Se analizaron un mecanorreceptor y tres quimiorreceptores antenales
de 60 individuos de Triatoma dimidiata provenientes de diferentes hábitats en Santander
utilizando análisis univariados y multivariados.
Resultados. Los análisis multivariados diferenciaron significativamente las poblaciones de
las hembras, estas diferencias estuvieron asociadas a variaciones en el número de tricoides
de pared gruesa, con aumento de los tricoides de pared fina en hábitats cercanos al domicilio
humano. Los machos con mayor número de sensilla y de tricoides de pared fina, no se
diferenciaron, sin embargo tendencias similares fueron apreciadas. Se observó dimorfismo
sexual entre todas las poblaciones y fue menor en el del domicilio.
Conclusiones. El fenotipo de sensilla antenal fue útil en la diferenciación intraespecífica de
Triatoma dimidiata en diferentes hábitats. Las diferencias en hembras ponen de manifiesto
nuevos arreglos sensoriales para la explotación del hábitat a diferencia de los machos, que
por su mayor capacidad de dispersión, no se diferenciaron entre los ecotopos. La similitud
entre hembras de zona urbana, con hembras de peridomicilio rural permite proponer al fenotipo
antenal como un sencillo y eficiente indicador para la determinación del origen de triatominos
que intentan colonizar nuevos hábitats.
Palabras claves: Triatoma, Triatominae, hábitat, enfermedad de Chagas, Colombia.
Antennal phenotype variation in sylvatic, peridomestic and domestic populations of
Triatoma dimidiata (Hemiptera: Reduviidae) from Santander, Colombia.
Introduction. Triatoma dimidiata is one of the widely distributed triatomines in Colombia. The
phenotype of the antenna is a characteristic of populations that can differ among habitats and
can give information concerning its biology and behavior. This information in turn can be used
in the development of new methodological proposals for its control.
Objective. The behavior of populations of Triatoma dimidiate was studied in several different
habitats, using the antennal phenotype.
Materials and methods. A mechanoreceptor and three chemoreceptors were compared in the
antennae of 60 Triatoma dimidiata adults from several defined habitats in Santander, using
unvariate and multivariate analyses.
Results. The multivariate analysis differentiated the female populations significantly. These
differences were associated with variations in the number of thick-walled trichoids and with the
numerical increase of the thin walled trichoids in habitats close to human housing. The males,
with a larger number of sensilla and thin walled trichoids, were not differentiated significantly,
although, similar tendencies were observed. Sexual dimorphism was clear in these characters
92
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100 Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata
La enfermedad de Chagas afecta a una población dimidiata se convierte en una especie cuya
de entre 16 y 18 millones de personas en 21 países erradicación no puede realizarse utilizando los
de América (1); su agente causal es Trypanosoma métodos disponibles (12, Schofield CJ. Evolución
cruzi , protozoo transmitido por insectos y control del Triatoma dimidiata. Taller para el
hematófagos de las subfamilia Triatominae establecimiento de pautas técnicas en el control
(Hemiptera: Reduviidae) (2); las especies de mayor de Triatoma dimidiata. San Salvador; 2002. OPS/
importancia epidemiológica debido a su adaptación HCD/HCT/214/02. p.12-8).
en el ambiente domiciliario son Triatoma infestans,
Rhodnius prolixus y Triatoma dimidiata. El estudio de la estructura poblacional y el uso de
marcadores fenéticos y genéticos de las
Esta última especie está distribuida en Centro poblaciones de este vector es indispensable para
América y Colombia, en donde ocupa una gran obtener información sobre su biología y
diversidad de hábitats: domicilio, peridomicilio y comportamiento y puede contribuir a una mejor
silvestres en áreas rurales y urbanas (3-5). Por planificación de la acciones de control vectorial,
otra parte, en regiones costeras de Ecuador y norte como se ha demostrado con esta especie y R.
de Perú se ha encontrado sólo en el domicilio prolixus (13,14). El análisis de la estructura
humano (6). genética de T. dimidiata con RAPDS realizado en
En Colombia ha aumentado su distribución de 4 a Boavita, Colombia, sugiere una baja diferenciación
13 departamentos en las últimas décadas (7), y genética, indicando que las poblaciones extradomi-
al igual que en Centro América, se ha detectado ciliarias representan un riesgo epidemiológico en
en viviendas de zonas urbanas con buena la transmisión de la enfermedad de Chagas (15).
construcción. Esta distribución y su gran capacidad En triatominos, el fenotipo antenal refleja
para colonizar varios hábitats han favorecido las modificaciones de los patrones ancestrales por
reinfestaciones observadas después de la la adaptación a diferentes hábitats y hospederos
aplicación de insecticidas piretroides (8-11)
(16-18) y es útil en la diferenciación intra-
(Turriago B, Pinto N, Ghul F. Evaluación de
específica, Este estudio, primero en poblaciones
deltametrina (K-Otrine SC 50® y K-Otrine WP 50®)
de T. dimidiata de Colombia, se realizó para
como alternativa de control de Triatoma dimidiata.
detectar variaciones en cuatro receptores
Biomédica 2005;25(Suppl.1): 195). Estas pobla-
antenales en los diferentes hábitats conocidos
ciones reinfestantes probablemente no fueron
de una misma área geográfica y como contribu-
alcanzadas por la acción insecticida y constituyen
ción al conocimiento de la bioecología y
poblaciones peridomiciliarias o silvestres que
ecoepidemiología de esta especie, y como
incursionan en el domicilio humano; por ello, T.
orientación para metodologías de control vectorial
en la zona endémica.
Correspondencia:
Corina María Arroyo, CINTROP, Universidad Industrial de Materiales y métodos
Santander, Km 2 vía Guatiguará, Piedecuesta, Santander,
Colombia. Teléfono: (57) 76563971, fax (57)76540177. Área de estudio
corina_arroyo@yahoo.com
El estudio se realizó en los años 2003 y 2004 en
Recibido: 20/10/05; aceptado: 13/07/06 áreas rurales de los municipios de Macaravita y
93
Arroyo C.M., Esteban L., Catalá S., Angulo V.M. Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
94
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100 Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata
Withney (21) cuando las variables mostraron y el mayor número de sensilias se presentó en el
heterocedasticidad. Para reducir el error flagelo en hembras y en el pedicelo en machos.
experimental, se corrigió el valor de significación
Dimorfismo sexual
usando el método secuencial de Bonferroni (21).
Se encontró un significativo dimorfismo sexual
Se realizó un análisis discriminante para cada en patrón de sensilias antenales de T. dimidiata,
sexo y segmento antenal usando el programa diferenciación que se debió a la variación del
Statistica versión 6. Este análisis se hizo con base número de TPF del pedicelo, el cual fue mayor en
en el modelo discriminante forward stepwise, en los machos (p < 0,0317). El dimorfismo entre
el cual todas las variables se incluyeron en el hábitats varió según las distancias de Mahanalobis
modelo y en cada paso se eliminó la variable que así: domicilio (d2 = 24,56), silvestre (d2 = 73,62) y
menos contribuyó a la predicción de los miembros peridomicilio (d2 = 361,06).
del grupo. La significación de las distancias de
Mahalanobis (d2) se demostró utilizando los Comparación entre hábitats
programas PADwin versión 65 (después de 1.000 Debido al dimorfismo sexual de T. dimidiata los
permutaciones) y NTSYS versión 2.02. análisis se hicieron por separado para cada sexo.
Resultados Análisis univariado. El ANOVA entre las hembras
Características generales de la antena mostró diferencias significativas (p = 0,0046) en
los TPG del flagelo uno; en los machos no se
Los promedios y la desviación estándar de la observaron variaciones signficativas en ningún
longitud de cada segmento se muestran en el receptor (figura 1).
cuadro 1.
Análisis multivariado. Para resolver el problema
Los machos presentaron antenas más largas y de multicolinealidad, las variables se agruparon
con mayor cantidad de sensilias que las hembras, en 12 componentes principales obtenidos a partir
con un promedio de 12,04 mm, 1170,77 y 11,85mm de una matriz de covarianza. Estas 12 nuevas
922,07, respectivamente. Las hembras se diferen- variables con independencia lineal se usaron en
ciaron significativamente según la longitud de la el análisis discriminante. En hembras, el modelo
antena en cada hábitat (p = 0,0014). No se observó excluyó la variable PBR con un Partial λ = 0,946.
correlación del número de quimiorreceptores con Las variables que contribuyeron significativamente
la longitud total de la antena (n = 60, r = 0,05, al análisis (Wilks λ = 0,006; F (22.34) = 3,432; p ‹ 0,006)
p = 0,701). El segmento más largo fue el pedicelo produjeron dos funciones discriminantes (FD1 =
Cuadro 1. Media y desviación estándar del número de sensilias y la longitud de cada segmento antenal de T. dimidiata.
Domicilio 4,6 4,0 3,3 67,0 170,0 62,2 8,9 16,6 71,7 250,2 42,2 11,0 20,2 188,8 36,7 945,5
0,2 0,2 0,2 5,7 49,5 21,0 3,0 3,2 22,9 32,2 12,3 3,0 6,3 59,5 10,6 141,3
4,6 3,9 3,3 68,3 302,6 56,9 10,0 19,2 113,5 231,2 47,7 11,8 28,4 218,9 45,5 1154,0
0,3 0,3 0,2 12,0 78,0 12,5 2,2 4,5 24,1 38,5 13,8 2,9 5,7 30,1 11,4 171,3
Peridomicilio 4,4 3,8 3,2 71,2 146,7 47,6 8,3 19,1 57,5 262,3 34,2 11,8 20,0 227,0 42,2 947,9
0,2 0,2 0,3 8,3 27,9 14,0 2,4 3,1 11,5 30,7 9,6 2,1 5,8 22,7 13,5 56,5
4,6 3,9 3,4 65,5 363,0 69,5 8,9 17,3 104,7 231,4 39,3 11,7 28,9 213,8 42,0 1196,0
0,2 0,2 0,2 11,5 50,3 14,5 2,6 4,6 38,9 34,5 14,6 2,2 8,0 41,5 6,7 146,9
Silvestre 4,6 3,9 3,5 71,1 164,4 58,2 8,7 15,6 54,6 216,8 28,8 10,6 21,1 186,5 36,4 872,8
0,2 0,2 0,3 8,3 39,5 21,7 3,4 2,0 9,1 25,0 9,1 2,0 5,3 29,4 6,0 106,2
4,7 4,0 3,5 67,9 345,1 61,3 9,6 16,8 119,9 218,4 37,7 10,4 27,0 205,7 43,3 1163,1
0,2 0,2 0,4 9,5 63,8 26,0 2,5 3,9 40,5 57,3 12,7 3,0 9,9 38,0 11,4 125,9
95
Arroyo C.M., Esteban L., Catalá S., Angulo V.M. Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
Figura 1. Análisis discriminante de hembras de T. dimidiata Figura 2. Análisis discriminante de hembras de T. dimidiata
recolectadas en D: domicilio, P: peridomicilio, S: silvestre incluidos individuos de vivienda urbana (VU). D: domicilio, P:
(cueva). DF1 y DF2, función discriminante 1 y 2, peridomicilio, S: silvestre (cueva). DF1 y DF2, función
respectivamente. discriminante 1 y 2, respectivamente.
0,0004; FD2 = 0,0137) con una asignación correcta contribuyeron significativamente en este análisis
al grupo de origen de 96,67%, indicando que los produjeron dos funciones discriminantes con 80%
caracteres estudiados fueron altamente de asignación a cada grupo (Wilks λ = 0,29521;
discriminantes entre las tres poblaciones. La F (6.50) = 7,0041; p ‹ 0,0000.), las cuales se
discriminación de las poblaciones se relacionó con relacionaron con las siguientes variables: F1BR,
las siguientes variables: PTPF + F1TPF (parcial PTPF, F2BA + F2TPG + F1TPG con un Partial
λ = 0,505), F1BA + F1BR (Partial λ = 0,684), λ = 0,599, 0,640 y 0,665, respectivamente, donde
F1TPG (Partial λ = 0,686), F2BA (Partial λ = F2BA + F2TPG + F1TPG se combinaron en una
0,651), PTPF (Partial λ = 0,666), F1BA (Partial λ función matemática (combinación lineal) (cuadro 2c).
= 0,689), F2BR (Partial λ = 0,718), PTPG (Partial El análisis multivariado entre los machos no
λ = 0,856), F1BR (Partial λ = 0870), PTPG + PBA diferenció significativamente las poblaciones; sin
+ F1BA (Partial λ = 0,874) (en orden decreciente embargo, se observó una tendencia similar a las
de Wilks λ ). Las distancias de Mahalanobis hembras (Wilks λ = 0,3511; F(16.42) = 1,8047; p ‹
diferenciaron significativamente cada uno de los 0,0636, figura 3).
hábitats (cuadro 2a), donde PTPF + F1TPF; F1BA
+ F1BR; PTPG + PBA + F1BA se combinaron Cuadro 2. Distancia de Mahalanobis (d2) y valores de
dentro de una función matemática. significación (p) obtenidos del análisis discriminante de
hembras de T. dimidiata en: a. las poblaciones de estudio,
Un nuevo análisis discriminante entre las hembras b. individuos de zona urbana y c. en el primer segmento
antenal.
se realizó incluyendo a los individuos de viviendas
urbanas (Wilks λ = 0,7493; F(30.62)= 2,9446; p ‹ a. d2 p
0,0002). El 85,29% de estos individuos fue peridomicilio-silvestre 16,21 0,0043
asignado correctamente a su grupo de origen y domicilio-peridomicilio 13,52 0,0105
agrupado en el peridomicilio (figura 2); además domicilio-silvestre 10,95 0,0269
se observó una leve asociación con el hábitat b. d2 p
silvestre (cuadro 2b). domicilio-VU 16,23 0,0336
silvestre-VU 13,96 0,0617
Al utilizar en los análisis multivariados solamente peridomicilio-VU 6,48 0,4596
las sensilias del flagelo 1 en hembras, las c. d2 p
distancias de Mahalanobis concordaron con las peridomicilio-silvestre 6,86 0,0002
obtenidas cuando se utilizaron todos los domicilio-silvestre 5,11 0,0013
domicilio-peridomicilio 3,63 0,0073
segmentos antenales. Las variables que
96
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100 Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata
97
Arroyo C.M., Esteban L., Catalá S., Angulo V.M. Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
Entre ecotopos, el dimorfismo sexual fue menor asociarse, además, con la presencia de cabras y
para la población del domicilio, seguida por la animales de pastoreo en la región. Por otra parte,
silvestre. Los machos de estos hábitats presen- el aumento de los BR en hembras del peridomicilio
taron menor cantidad de tricoides de pared fina podría relacionarse con la alta densidad de
en el pedicelo, lo cual tiene relación con especies insectos observada en campo, ya que estas
adaptados a un rango limitado de hábitats como sensilias han mostrado ser susceptibles a la
T. infestans (18). La reducción del número de densidad poblacional (23), perciben estímulos
receptores que intervienen en la reproducción mecánicos relacionados con el micro hábitat (18)
podría ser consecuencia de la domiciliación (38). y se han asociado con la selección del hábitat
Por el contrario, en la población peridomiciliada, más que con la del huésped (20).
el aumento de estos sensilias podría involucrar la
La asociación entre las hembras domiciliadas de
necesidad de detectar olores para identificar
T. dimidiata de la zona urbana con el peridomicilio
nuevos hábitats y compañero sexual.
rural podría explicarse por el transporte e
Variación entre hábitats intercambio que hace el hombre de animales desde
En los triatominos una serie de cambios una zona a otra en los días de mercado. Otros
morfológicos y genéticos se han asociado a la estudios sugieren que insectos del peridomicilio
adaptación a hábitats domésticos, y se ha y silvestres de T. dimidiata vuelan estacional-
señalado que la densidad de sensilias antenales mente hacia las viviendas debido a cambios en
disminuye progresivamente en el pedicelo y sobre la disponibilidad de alimento (39).
el total de la antena en especies que viven en Las poblaciones peridomiciliadas y silvestres de
“hábitats estables” como la vivienda humana (16- T. dimidiata representan un riesgo epidemiológico
18,22,23); sin embargo, este término puede usarse para la población humana debido a su dispersión
de manera ambigua, puesto que, además de las pasiva o activa hacia las viviendas rurales y
fluctuaciones ambientales, en un hábitat urbanas en esta zona del país. El control de estas
intervienen la explotación de diferentes recursos poblaciones es actualmente un reto para los
tróficos, espaciales y reproductivos, los cuales programas de control vectorial (12).
podrían modificar en forma particular el fenotipo
de las sensilias antenales. Finalmente, el fenotipo antenal de las sensilias
fue útil en la diferenciación intraespecífica de T.
Las variaciones observadas en hembras se dimidiata según el hábitat. El estudio de los nichos
asociaron con los TPG y BR; una reducción de dentro de los hábitats es escaso y su estructura,
los primeros se observó a medida que disminuía junto con factores bióticos y abióticos, debe
la amplitud del nicho y se incrementaba la estudiarse en profundidad para el conocimiento
estabilidad del hábitat, lo que podría indicar una de la relación del sistema sensorial y la explotación
reducción de la sensibilidad y superficie del área del hábitat.
para la captura de moléculas olorosas.
Las diferencias del fenotipo antenal observado en
En el domicilio humano y en las cuevas las hembras revelan una mayor plasticidad fenotípica
variaciones climáticas son pocas, y la ausencia en la diferenciación y adaptación a diferentes
de luz es característica, por lo que insectos que hábitats, como también se observó en estudios
ocupan estos hábitats podrían tener una selección de morfometría de la cabeza de T. dimidiata y T.
más acusada de sensilias olfatorias que de infestans (40,41). La rápida adaptación de las
mecanorreceptores y quimiorreceptores de hembras a las nuevas condiciones ecológicas
contacto. pone de manifiesto nuevos arreglos sensoriales
En el peridomicilio, el incremento espacial del característicos de ese hábitat; por otra parte, la
hábitat podría generar un comportamiento ausencia de diferenciación en el fenotipo antenal
exploratorio con una selección menos de machos podría ser un indicador de mayor
especializada de sus hospederos, lo que puede dispersión entre hábitats.
98
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100 Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata
La similitud entre las hembras de zona urbana y resistencia a insecticidas en triatominos en América
las hembras de peridomicilio rural permite proponer Latina. Serie enfermedades transmisibles. Buenos
Aires: Fundación Mundo Sano; 2001. p.21-6.
el fenotipo antenal como un sencillo y eficiente
indicador para el reconocimiento del origen de 8. Dumonteil E, Ruiz- Piña H, Rodríguez Félix E,
Barrera Pérez M, Ramírez Sierra MJ, Rabinovich
triatominos que intentan colonizar nuevos hábitats. JE, et al. Re-infestation of houses by Triatoma dimidiata
Estas metodologías podrían utilizarse en los after intra domicile insecticide application in the Yucatán
programas de vigilancia entomológica. Peninsula, México. Mem Inst Oswaldo Cruz
2004;99:253-6.
Agradecimientos
9. Schofield CJ. Challenges of Chagas disease vector
A Jean Pierre Dujardin por su asesoría y control in Central America: Global collaboration for
colaboración en el análisis de datos; a development of pesticides for public health. Geneva:
World Health Organization (WHO/CDS/WHOPES/
COLCIENCIAS por el apoyo financiero; a las GCDPP/2000.1); 2000.
comunidades de Macaravita y Capitanejo, y a los
10. Marinkelle CJ. Colombian Triatominae and their
técnicos de la Secretaria de Salud de Santander
infestation with trypanosomatid flagellates. Mitt Inst
por la colaboración en el trabajo de campo. Colombo Alemán Invest Cient 1972;6:13-29.
Conflicto de interés 11. Angulo VM. Ensayo de estrategias de control y
vigilancia de Triatoma dimidiata en Colombia. En: Guhl
Los autores declaramos que no existe ningún F editor. Primer Taller Internacional sobre Control de
conflicto de intereses en este trabajo. la Enfermedad de Chagas. Bogotá: Universidad de los
Andes; 2005. p.91-102
Financiación
12. Schofield CJ. Propuestas de estrategias para el control
Financiado por Colciencias, proyectos códigos de Triatoma dimidiata en Colombia. En: Guhl F editor.
1102-04-13009, 1102-04-13010 y 1102-04-13029. Primer Taller Internacional sobre Control de la
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100
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
ARTÍCULO ORIGINAL
101
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
(3) the number of interruptions and defecations during the feeding, (4) the time between the
end of the feeding and the first defecation, (5) the number of defecations during 10, 60 and 95
minutes of observation after feeding, and (6) the quantity of blood ingested.
Results. The mean time of feeding initiation of the fifth instar nymphs, males and females,
showed significant differences between the two species. The average of insects that defecated
within 10 minutes after feeding was higher for each successive stage of R. prolixus and showed
significant differences with Rhodnius colombiensis . In contrast, the mean weight of blood
ingested by each stage of R. colombiensis and R. prolixus was significantly different between
the N1, N2, N5 and females of these species.
Conclusion. Rhodnius colombiensis produced fewer defecations than R. prolixus during feeding.
A higher percentage of R. prolixus defecated within 10, 60 and 95 minutes after feeding.
However, R. colombiensis remains a longer time in contact with the vertebrate host, thus raising
the probability of its role in transmission considering its occasional entry to human dwellings
and its higher prevalences of infection withT. cruzi and T. rangeli.
Key words: Rhodnius, physiology, defecation, growth and development, Trypanosoma, Chagas
disease.
El género Rhodnius incluye 16 especies, en gran importancia para comprender la dinámica de
algunas de las cuales se han descrito las transmisión de T. cruzi. Varios autores han demos-
características biológicas, bioquímicas y trado que algunas especies de triatominos no
moleculares (1). R. colombiensis es una especie defecan durante, ni tampoco inmediatamente
recientemente descrita, que con R. pallescens y después de la comida, mientras que otras especies
R. ecuadoriensis conforman el grupo “pallescens” son muy eficientes en la transmisión de T. cruzi
de la cordillera de los Andes en el noroeste de debido a las altas tasas de defecación durante el
América del Sur (2). Por otro lado, R. colombiensis alimento y durante los primeros minutos después
se ha encontrado asociada a las palmas de vino de la alimentación (4). Estas diferencias en los
(Attalea butyraceae) en la cuenca alta del valle patrones de alimentación y de defecación podrían
del río Magdalena en la región central de Colombia explicar, al menos en parte, las diferencias en las
(3), constituyendo un posible riesgo en la prevalencias de T. cruzi en humanos y en reservorios
transmisión de la enfermedad de Chagas, pues en diferentes regiones de América Latina.
esta especie ocasionalmente ingresa a las
viviendas, presentando elevadas prevalencias de Para contribuir al conocimiento de la biología y el
T. cruzi y T. rangeli (Vallejo GA, Lozano LE, papel de R. colombiensis en la transmisión de la
Carranza JC, Sánchez JL, Jaramillo JC, Guhl F, enfermedad de Chagas en la región central de
et al. Ecología de los triatominos no domiciliados Colombia, se estudió para cada estadio de
en Colombia con especial referencia a Rhodnius desarrollo el tiempo promedio para iniciar la picada,
colombiensis en el departamento del Tolima. En: el tiempo de alimentación hasta la repleción, el
Vallejo GA, Carranza JC y Jaramillo JC editores. número de interrupciones y defecaciones durante
Curso Taller Internacional: Biología, Epidemiología la comida, el intervalo entre el fin de la alimentación
y Control de la Tripanosomosis Americana y y la primera defecación, el número de defeca-
Leishmaniosis. Ibagué, Colombia 2000; p.1-134). ciones durante 10, 60 y 95 minutos de observación
después de la comida y la cantidad de sangre
Los estudios sobre el comportamiento de los ingerida. Con fines comparativos, estos mismos
triatominos durante la toma del alimento son de parámetros se estudiaron en los diferentes
estadios de desarrollo de R. prolixus, especie
Correspondencia:
Gustavo Adolfo Vallejo, Laboratorio de Investigaciones en domiciliada que se encuentra en simpatría con R.
Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad colombiensis en la cuenca alta del río Magdalena.
del Tolima, A.A. 546, Ibagué, Colombia. Fax (+57-8)
2669176. Materiales y métodos
gvallejo@ut.edu.co R. colombiensis fueron capturados en palmas de
Recibido: 14/03/06; aceptado: 19/05/06 Attalea butyracea y R. prolixus domiciliados
102
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
103
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
Cuadro 1. Comparación del tiempo para iniciar la comida (tiempo de ataque), tiempo de comida hasta repleción, interrupciones y defecaciones
durante la alimentación de Rhodnius colombiensis y Rhodnius prolixus sobre ratón Mus musculus. El tiempo está expresado en minutos:segundos.
Tiempo de ataque Tiempo para comer hasta repleción Interrupciones por insecto Defecaciones durante la comida
Estadio (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%)
Rhodnius Rhodnius Valores Rhodnius Rhodnius Valores Rhodnius Rhodnius Valores Rhodnius Rhodnius Valores
colombiensis prolixus p colombiensis prolixus p colombiensis prolixus p colombiensis prolixus p
diferencias significativas entre las dos especies durante los primeros 10 minutos fue mayor en
(cuadro 1). todos los estadios de R. prolixus, presentando
diferencias significativas con los estadios de R.
De acuerdo a las observaciones realizadas, la
colombiensis . Así mismo, el promedio de
mayoría de los estadios de desarrollo de R.
defecaciones acumuladas por insecto durante 60
colombiensis y R. prolixus interrumpieron la toma
minutos de observación fue mayor en R. prolixus,
del alimento; la única excepción fue N1 de R.
presentando diferencias significativas con las N1,
colombiensis, pues ningún insecto de este estadio
N3, N4, N5 y hembras de R. colombiensis. De
interrumpió su alimentación. El promedio de
igual manera, después de 95 minutos de
interrupciones por insecto entre R. colombiensis
observación, el promedio de defecaciones
y R. prolixus presentó diferencias significativas
acumuladas por insecto fue mayor en R. prolixus,
en N1 y N3.
presentando diferencias significativas con N1, N3,
Por otro lado, el promedio de defecaciones por N4, N5, hembras y machos de R. colombiensis
insecto durante la comida fue mayor en R. prolixus, (cuadro 2).
presentando diferencias significativas con los
Cantidad de sangre ingerida
mismos estadios de R. colombiensis; los N1, las
hembras y los machos no presentaron diferencias La comparación de la sangre ingerida por los
significativas al comparar el promedio de defeca- distintos estadios de R. colombiensis y de R.
ciones durante la comida en las dos especies. prolixus se muestra en el cuadro 3. El peso
promedio y el volumen promedio de sangre ingerida
Patrones de defecación después de la comida
presentó diferencias significativas entre N1, N2,
El cuadro 2 presenta los patrones de defecación N5 y hembras de las dos especies; las ninfas N3,
de R. colombiensis y R. prolixus después de la N4 y los machos no presentaron diferencias
toma del alimento. El tiempo promedio para significativas en el peso y volumen de sangre
defecar por primera vez después de la toma del ingerida. Con relación al número de veces que
alimento fue mayor en todos los estadios de R. cada estadio aumentó su peso inicial después de
colombiensis , presentando diferencias la comida, se observaron diferencias significativas
significativas con los estadios de R. prolixus. Por entre las N2, N5 y hembras; los demás estadios
otro lado, el promedio de defecaciones por insecto no presentaron diferencias significativas. Las N5
104
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
Cuadro 2. Comparación del tiempo para defecar por primera vez después de la comida; defecaciones después de diez
minutos, una hora y noventa y cinco minutos entre Rhodnius colombiensis y R. prolixus. El tiempo está expresado en
minutos:segundos. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.
Tiempo para defecar por primera vez Defecaciones por insecto durante Defecaciones por insecto durante Defecaciones por insecto durante
después de la comida. los primeros 10 minutos la primera hora durante los 95 minutos
(intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%)
Cuadro 3. Comparación de la cantidad de sangre ingerida por cada estadio de desarrollo de Rhodnius colombiensis y
Rhodnius prolixus. El nivel de significación es de 0,05. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.
Estadios Promedio de sangre ingerida (mg) Volumen de sangre ingerida (µl) Número de veces que aumenta su
Variables (Intervalo de confianza del 95%) (Intervalo de confianza del 95%) peso inicial después de la comida
(Intervalo de confianza del 95%
105
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
patrones de alimentación y defecación entre las difícil debido a las diferencias en variables
dos especies y entre los diferentes estadios dentro experimentales como la temperatura ambiente,
de cada especie. Una interesante observación fue humedad relativa y fuente de alimento, o al uso
que las ninfas N1, N2, N3 y N4 de R. colombiensis de pequeños números de insectos, entre otras.
y R. prolixus no presentaron diferencias Adicionalmente, existen variaciones inter e
significativas en el tiempo promedio para iniciar intraespecíficas en el comportamiento de
la picada sobre ratones ICR, mostrando el mismo triatominos como Triatoma dimidiata, en la que
grado de avidez por la toma del alimento en las se observó que las ninfas de primer estadio son
condiciones experimentales utilizadas. Por otro más tímidas para iniciar la picada que los
lado, las N5, los machos y las hembras de R. restantes estadios (4). Por otro lado, Rocha da
prolixus iniciaron más rápido la toma del alimento Silva D. et al mostraron que los adultos de R.
que los mismos estadios de R. colombiensis pictipes presentan mayor timidez y que, por lo
(cuadro 1). Aunque los adultos de R. colombiensis tanto, en ellos transcurre mayor tiempo entre el
son más tímidos para la toma del alimento, ofrecimiento de la comida y la picada (6).
ingresan a las viviendas atraídos por la luz o por Igualmente se observó en los adultos de T.
diferentes fuentes de alimento. La frecuencia con brasilensis un mayor tiempo entre el ofrecimiento
que los adultos de R. colombiensis ingresan a las de la comida y la picada que en los demás estados
viviendas fue confirmada en la encuesta ninfales; en T. pseudomaculata las N4 fueron más
entomológica realizada en el departamento del tímidas para la toma del alimento que los demás
Tolima en el año 2000, en la cual se capturaron estadios ninfales (7). Una posible causa de esta
adultos de R. colombiensis en el interior de las variabilidad en el comportamiento de los
viviendas de los municipios de Alvarado, Carmen triatominos con relación al tiempo transcurrido
de Apicalá, Coyaima, Coello, Guamo, Ibagué, entre el ofrecimiento de la comida y la picada
Icononzo, Lérida, Libano, Ortega, Prado, podría ser la fuente de alimento, como fue sugerido
Purificación, Santa Isabel y San Luis, los cuales por Martínez-Ibarra et al., quienes observaron que
constituían el 33% de los municipios encuestados cuando Meccus picturatus es alimentado sobre
(Guhl F et al. Implementación de la Etapa III del gallinas, los adultos son más tímidos para iniciar
Programa Nacional de Prevención y Control de la la picada que los restantes estadios ninfales, pero
Enfermedad de Chagas y la Cardiopatía Infantil. cuando esta misma especie es alimentada sobre
Región Centro Oriental: Departamento del Tolima. conejos, las N4 son las más tímidas (8).
Informe Final. Universidad de los Andes). Previas
observaciones en el municipio de Coyaima, El tiempo desde la picada hasta la repleción total
Tolima, mostraron que en R. colombiensis adultos del insecto fue mayor en R. colombiensis, que
capturados en el interior de las viviendas y en presentó diferencias significativas con las N2 y
adultos capturados en las palmas aledañas a las N5 de R. prolixus; en los demás estadios de
viviendas, la infección por T. cruzi alcanzó una desarrollo no se presentaron diferencias
prevalencia del 98% (datos no publicados). Por significativas. En el presente trabajo se destaca
otro lado, el examen de 396 R. prolixus el hecho de que las N5 de R. colombiensis y de
domiciliados en la misma área geográfica mostró R. prolixus presentaron el mayor tiempo para
una prevalencia general del 3,03% de T. cruzi (5). obtener la repleción; otros autores también han
reportado que las N5 de diferentes especies gastan
De conformidad con lo anterior se podría esperar mayor tiempo para la repleción, como fue
que cualquier adulto de R. colombiensis que logre observado en N5 de T. dimidata y R. prolixus (4),
picar y defecar sobre un vertebrado del domicilio N5 de T. brasiliensis y T. seudomaculata (7) y N5
humano presentaría mayor probabilidad para la de M. picturatus (8). Una explicación a este
transmisión de T. cruzi que las ninfas y los adultos especial comportamiento de las N5 estaría
de R. prolixus domiciliados en esta región. relacionada con que precisamente las N5 son los
La comparación de los datos obtenidos en el estadios que mayor cantidad de sangre ingieren
presente estudio con datos de otros autores es con relación a todos los demás estadios de
106
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
desarrollo, lo que a su vez demanda mayor tiempo machos. Así mismo, el mayor promedio de
para alcanzar la repleción, pues las N5 requieren interrupciones durante la comida lo exhibieron las
una suficiente cantidad de alimento para la N5 y las hembras, pero en estos estadios no se
adquisición de nuevas estructuras anatómicas llevó a cabo ninguna defecación durante la toma
durante la muda al estado adulto. Los tiempos del alimento (cuadro 1). El patrón descrito mostró
para alcanzar la repleción disminuyeron en los que no existe una relación directa entre el número
adultos de ambos sexos de R. colombiensis y R. de interrupciones y el número de defecaciones
prolixus; de igual manera, se observó disminución durante la comida en R. colombiensis, es decir
en los adultos de T. dimidiata, T. infestans y R. que existieron individuos que defecaron durante
prolixus (4), T. brasiliensis y T. pseudomaculata (7). la alimentación sin interrumpir tal proceso, o que
Trabajos previos también mostraron una extensa lo interrumpieron sin efectuar ninguna defecación
variación, puesto que el tiempo hasta la repleción durante éste. En R. prolixus se observó que el
se ve afectado por el tipo de alimento y por el promedio de defecaciones durante la toma del
tamaño de la especie del insecto, entre otras alimento fue mayor y presentó diferencias
variables. En este orden de ideas, Zeledón et al. significativas con N2, N3, N4 y N5 de R.
(4) mostraron que los promedios generales del cololombiensis . Por otro lado, en todos los
tiempo para alcanzar la repleción son mayores estadios de R. prolixus se presentaron
en T. dimidiata y T. infestans que en R. prolixus. interrupciones durante la comida, indicando una
posible relación entre las interrupciones y las
Algunos autores plantean una relación directa
defecaciones durante la comida. Esta diferencia
entre los patrones de defecación antes de finalizar
entre R. prolixus y R. colombiensis en relación
la comida y las frecuentes interrupciones durante
ésta, como sucede con T. dimidiata (4). Por otro con el número de defecaciones durante la toma
lado, se pueden presentar variaciones en las del alimento indica que durante la toma del
interrupciones durante el proceso de alimentación, alimento R. prolixus tiene mayor probabilidad de
incluso entre las mismas especies, posiblemente transmisión de T. cruzi que R. colombiensis.
por el origen de la cepa o por la temperatura bajo Patrones de defecación después de la comida
la cual se realizan las observaciones (4,9). Para
explicar la razón de las interrupciones se han Como se observó en el cuadro 2, el promedio de
observado las señales eléctricas de la bomba defecaciones por insecto durante los primeros 10,
cibarial de varias especies de Rhodnius cuando 60 y 95 minutos después de la comida fue mayor
ésta se contrae para succionar la sangre. Se en R. prolixus y presentó diferencias significativas
concluyó que las interrupciones probablemente se con R. colombiensis. Por otro lado, al igual que
deben al hallazgo de otro vaso sanguíneo por parte en otros estudios, se observó que los patrones
del vector, ya que en muchas ocasiones el proceso más bajos de defecación los presentaron los
de alimentación fue interrumpido aun sin retirar el machos en las dos especies estudiadas (4,10-12).
rostro del huésped, lo cual se verificó por señales Sin embargo, el comportamiento de las dos
eléctricas irregulares en la bomba cibarial (Viana especies después de la toma del alimento puede
Sant’ Anna MR, Diotaiuti L, Figueiredo Gontijo A, afectar la eficiencia de la transmisión de T. cruzi.
Figueiredo Gontijo N, Pereira MH. Feeding Se observó que independientemente del estadio,
behaviour of morphologically similar Rhodnius cuando R. prolixus finaliza la toma del alimento
species (Hemiptera: Reduviidae): influence of
huye velozmente, pues está adaptado para
mechanical characteristics and salivary function.
refugiarse en grietas o en estructuras anexas al
En: Guhl F, Schofield CJ, editors. Cuarto Taller
domicilio, de manera que las defecaciones
Internacional sobre Genética Poblacional y Control
después de la toma del alimento son depositadas
de Triatominos (ECLAT 4). Punta Iguana,
lejos del huésped vertebrado, principalmente en
Cartagena, Colombia, 2002. p. 139-50).
paredes y techos de palma. Por el contrario,
Los únicos estadios de R. colombiensis que cuando R. colombiensis finaliza la toma del
defecaron durante la comida fueron las N1 y los alimento, permanece junto al huésped. Este
107
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
108
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
probabilidad de transmisión al hombre y a los main vectors of Chagas disease in northeastern Brazil.
animales domésticos. De conformidad con lo Mem Inst Oswaldo Cruz 2000;95:151-5.
anterior, es de gran importancia estudiar el posible 8. Martínez-Ibarra JA, Novelo López M, Hernández
papel de R. colombiensis en la transmisión de T. Robles MR, Grant Guillén Y. Influence of the blood
meal source on the biology of Meccus picturatus Usinger
cruzi, especialmente en aquellas áreas en donde 1939 (Hemiptera: Reduviidae:Triatominae) under
R. prolixus se ha controlado. laboratory conditions. Mem Inst Oswaldo Cruz
2003;98:227-32.
Conflicto de intereses
9. Wood SF. Importance of feeding and defecation times
Los autores del presente artículo declaramos que of insect vectors in transmission of Chagas’ desease.
no teníamos conflictos de intereses de orden J Econ Entomol 1951; 44: 52-54.
académico, institucional u operacional en el 10. Dias E. Obsevações sôbre eliminação de dejeções e
momento de realización de la investigación. tempo de sucção em alguns triatomineos
sulamericanos. Mem Inst Oswaldo Cruz 1956;54:115-
Financiación 24.
Este trabajo recibió financiación del Instituto 11. Pipkin AC Sr. Domiciliary reduviid bugs and the
Colombiano "Francisco José de Caldas" epidemiology of Chagas’ disease in Panama
(Hemiptera: Reduviidae: Triatominae). J Med Entomol
(Colciencias), proyecto 105-05-279-99, y del Fondo 1968;5:107-24.
de Investigaciones de la Universidad del Tolima.
12. Pippin WF. The biology and vector capability of
También recibió apoyo internacional de la red Triatoma sanguisuga texana Usinger and Triatoma
ECLAT (European Community–Latin-American gerstaeckeri (Stal) compared with Rhodnius prolixus
Network for Research on the Biology and Control (Stal) (Hemiptera: Triatominae). J Med Entomol
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109
Vallejo G.A.,
Biomédica Guhl F., Carranza
2007;27(Supl. J.C. et al
1):110-8 Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
ARTÍCULO ORIGINAL
110
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8 Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
that were isolated from different species of Rhodnius and maintained in different vertebrate
species.
Materials and methods. Nineteen strains of T. rangeli were isolated from R. prolixus, R.
pallescens and R. colombiensis in Colombia, R. ecuadoriensis in Peru and R. pallescens in
Panama. Polymorphism of blood trypomastigotes in ICR mice was evaluated and pleomorphism
of P53 strain of T. rangeli KP1(-) inoculated in mouse, marsupial and canine was studied.
RAPD analysis (randomly amplified polymorphic DNA analysis) of 12 strains isolated from four
species of Rhodnius was performed.
Result. Based on the total length of blood trypomastigotes, three discrete groups were observed.
The P53 strain showed significant differences in the size of blood trypomastigotes in mouse,
marsupial and canine. RAPD analysis showed that the strains segregated into two branches
corresponding to strains of T. rangeli KP1(+) and T. rangeli KP1(-). All strains of T. rangeli KP1
(-) clustered according to the species of Rhodnius from which they were isolated .
Conclusion. These data reveal, for the first time, a close association amongst T. rangeli strains
and Rhodnius species, confirming that each species of Rhodnius transmits to vertebrate hosts
a parasite population with clear phenotypic and genotypic differences. This is further evidence
that supports the concept of clonal evolution of these parasites.
Key words: Trypanosoma , Rhodnius , trypanosomiasis/epidemiology, random amplified
polymorphic DNA technique, Chagas disease.
111
Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
112
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8 Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
de los tripomastigotes sanguíneos de las cepas de dNTPs 200 mM dNTPs, MgCl2 3,5 mM,, KCL
de T. rangeli en el quinto día posinfección con los 25 mM y 25 mM del iniciador ,1 unidad de Taq
respectivos intervalos de 95% de confianza y se DNA polimerasa (INVITROGEN) y 10 ng de ADN.
efectuó análisis multivariado de varianza (MANOVA) La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se
utilizando el programa STATISTICA V4.5. corrió en una termociclador M.J. Research PTC-
150-16 y se sometió a 35 ciclos de amplificación.
Estudio morfológico de Trypanosoma rangeli
Los perfiles de temperatura para denaturación del
en diferentes hospederos vertebrados
ADN, hibridación y extensión del iniciador fueron
Para evaluar pleomorfismos de las formas 95°C por un minuto (con un tiempo inicial de 5
sanguíneas se seleccionó la cepa P53 de T. min), 30°C por un minuto y 72°C por un minuto,
rangeli KP1(-) para infectar dos individuos de Mus respectivamente, y una extensión final de 5
musculus, Didelphis marsupialis y Canis minutos. Los productos amplificados fueron
familiaris, a los que se les inocularon formas de separados en geles de poliacrilamida al 6% y
cultivo que contenían 2x106 parásitos por gramo coloreados con nitrato de plata (22). Los perfiles
de peso corporal. Los tripomastigotes sanguíneos de RAPD se usaron para la construcción de una
se aislaron de la sangre de cada uno de los matriz binaria de acuerdo con la presencia (1) o
mamíferos, concentrándolos por centrifugación en ausencia (0) de las bandas. El análisis se efectuó
tubo capilar, extendiéndolos y coloreándolos con con el programa RAPDPLOT versión 3.0 y se
Giemsa. Se dibujaron 30 tripomastigotes calculó la matriz de distancias a partir del índice
sanguíneos circulantes en ratón, canino y didélfido de bandas compartidas (1-MATCH). El índice de
durante el tercer día posinoculación. A cada una bandas compartidas (M) se calculó usando la for-
de las formas dibujadas se les efectuó la toma de mula: M = NAB/NT, donde NAB es el número to-
las medidas morfométricas y se realizaron tal de apareamientos entre los individuos A y B y
estimaciones de las medias de la longitud total NT es el número total de loci registrados (23).
de los tripomastigotes sanguíneos de la cepa P53 Con base en los resultados de los perfiles de RAPD
de T. rangeli en el tercer día posinfección en cada se construyó un dendrograma por el método
uno de los mamíferos utilizados con los respec- UPGMA (Unweighted Pair-Group Method with
tivos intervalos de 95% de confianza; se efectuó Arithmetic Means) utilizando un bootstrap con 100
análisis multivariado de varianza (MANOVA) pseudoréplicas. Las distancias entre los grupos
utilizando el programa STATISTICA V4.5. de parásitos se obtuvieron con el programa
RAPDIST, con el cual se compararon las
Purificación de ADN y obtención de RAPD distancias genéticas de Nei (24), y se comprobó
El ADN genómico se extrajo de los cultivos de la consistencia de los datos de RAPD que
parásitos mediante el método de fenol-cloroformo soportan las ramas del dendrograma usando
seguido de precipitación con etanol y acetato de análisis de bootstrap con 100 pseudoréplicas.
sodio. La concentración del ADN se determinó Resultados
por electroforesis mediante comparación con
Morfología de los tripomastigotes sanguíneos
patrones de concentración conocidos. Para la
en ratones ICR
obtención del ADN polimorfo amplificado aleatorio
(RAPD) se ensayaron 12 iniciadores a partir de Los resultados del estudio morfológico de 10 cepas
los cuales se seleccionaron OPBG-02 (5´- de los tripomastigotes sanguíneos de T. rangeli
GGAAAGCCCA-3´) y OPBG-013 (5´-GGTTGGGC en la sangre de ratones infectados experimental-
CA-3´) (Operon Technologies, Inc.), los que mente mostró un elevado grado de polimorfismo
permitieron obtener los patrones más discrimi- de los parásitos en el quinto día de infección. Se
nantes para analizar todas las cepas. Para las observaron promedios en las longitudes totales
amplificaciones se utilizó un volumen final de de los tripomastigotes desde 32 hasta 39 µm
reacción de 20 µl que contenía 2 ml de buffer de mostrando diferencias significativas entre las
Taq Polimerasa 10X (INVITROGEN), una mezcla diferentes cepas analizadas (figura 1).
113
Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
Figura 1. Comparación de las medias de la longitud total de Figura 2. Comparación de las medias de la longitud total de
30 tripomastigotes sanguíneos de cada una de cuatro cepas 30 tripomastigotes snaguíneos de la cepa de T. rangeli P53
estudiadas en ratones ICR en el quinto día posinoculación. detectada en el tercer día posinoculación en ratón, zarigüeya
Se compararon las cepas Gal 57, aislada de R. pallescens, y perro.
P53, aislada de R. colombiensis, Perú 1, aislada de R.
ecuadoriensis, y P19, aislada de R. prolixus.
114
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8 Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
115
Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
puede infectarse con T. rangeli KP1(-) y KP1(+), rangeli cuando se infectan diferentes vertebrados
pero sólo transmite a KP1(-) a través de la picadura con un mismo aislamiento. El pleomorfismo de
y que R. prolixus se infecta con T. rangeli KP1(-) los tripomastigotes sanguíneos detectado en el
y KP1(+), pero solo transmite por picadura a la presente trabajo en ratón, Didelphis y perro al
subpoblación KP1(+) (17,18). Estos resultados tercer día posinoculación revela que la longitud
demuestran que R. prolixus es susceptible a la total de estas formas de T. rangeli sería
infección de T. rangeli KP1(+), pero presenta una dependiente del vertebrado en el cual se examina
respuesta refractaria a la invasión de cepas de T. (figura 2). Estos resultados preliminares indican
rangeli KP1(-) aisladas de R. pallescens, R. que probablemente el vertebrado también
colombiensis y R. ecuadoriensis. El compor- selecciona diferentes subpoblaciones del parásito,
tamiento diferencial en la transmisión de estas o que la morfología de T. rangeli sería dependiente
dos subpoblaciones se relaciona con la activación de la respuesta inmune del hospedero vertebrado.
de la respuesta inmune del vector, en la que El hallazgo de este carácter pleomorfico en T.
factores intrínsecos como la producción de rangeli podría contribuir a aclarar la posición
hemocitos, nódulos y factores tripanolíticos limitan taxonómica de los tripanosomas semejantes a T.
la infección parasitaria (25). Recientemente se rangeli, tales como T. (H.) mesnilbrimontí, T. (H.)
detectó en la hemolinfa de R. prolixus un factor preguici, T. (H.) myrmecophague, T. (H.) mycetae,
tripanolítico contra las cepas de T. rangeli KP1(-) T. (H.) diasi, T, (H.) cebus, T. (H.) saimiri, y T.
que corresponde a una proteína termolábil, la cual (H.) advieri, entre otros, pues como se sabe, estos
sería un factor inmunológico para que R. prolixus parásitos fueron clasificados como especies
actúe como filtro biológico de subpoblaciones de diferentes con base en diferencias de tamaño al
T. rangeli KP1(-) (datos no publicados). ser comparados con cepas de T. rangeli aisladas
En el presente trabajo se detectó un elevado de R. prolixus.
polimorfismo de los tripomastigotes sanguíneos Los resultados de la caracterización molecular
medidos en el quinto día posinoculación. El preliminar mediante RAPD de las cepas de T.
tamaño promedio de las cepas varió entre 32 y rangeli (figura 4) muestran una clara divergencia
39 µm, mostrando en general la existencia de entre el grupo de cepas KP1(+) y KP1(-), indicando
grupos discretos (figura 1). Es interesante el hecho la existencia de cuatro grupos de T. rangeli
de que tres cepas aisladas de R. pallescens genéticamente divergentes y asociados con R.
mostraron siempre tamaños promedios muy prolixus, R. pallescens, R. colombiensis y R.
cercanos a los 40 µm (datos no mostrados), ecuadoriensis. Estos grupos difieren de los cuatro
mientras que las cepas asiladas de R. grupos de T. rangeli previamente detectados por
colombiensis, R. ecuadoriensis y R. prolixus Maia da Silva et al. (26), quienes utilizando
mostraron tamaños variables entre 32 y 39 µm. análisis de RAPD encontraron un grupo formado
Esta observación sugiere la existencia de por lo por cepas de T. rangeli de Colombia, Venezuela,
menos dos grupos morfológicos de T. rangeli. Por Honduras, la Isla de Marajó, Pará y Rondonia en
otro lado, estos polimorfismos podrían ser el Brasil, un segundo grupo formado por las cepas
resultado de la transmisión selectiva de aisladas en Acre y Pará (Brasil), un tercer grupo
subpoblaciones del parásito, de manera que en formado por cepas aisladas en Panamá y el Sal-
las glándulas salivares del vector se desarrollaría vador y un cuarto grupo formado por la cepa SC58
cada vez una subpoblación con características aislada en Santa Catarina (Brasil). Los resultados
morfológicas diferentes. del presente trabajo, en conjunto con los de otros
Dentro de una misma especie de tripanosoma autores (26), indican que T. rangeli está formado
pueden encontrarse variaciones morfológicas por varios grupos genéticamente divergentes,
significativas que pueden conducir a la separación probablemente asociados a diferentes especies
de una misma especie en dos o más especies de Rhodnius. Posteriores estudios filogenéticos
diferentes (21). Varios autores han señalado en el grupo de cepas KP1(-), utilizando otros
pleomorfismos o variaciones morfológicas de T. marcadores moleculares, podrían indicar si estas
116
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8 Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
Los autores del presente artículo declaramos que 10. Vallejo GA, Marinkelle CJ, Guhl F, De Sánchez N.
no teníamos conflictos de intereses de orden Comportamiento de la infección y diferenciación
morfológica entre Trypanosoma cruzi y T. rangeli en el
académico, institucional u operacional en el intestino del vector Rhodnius prolixus. Rev Bras Biol
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Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
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118
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29 Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
ARTÍCULO ORIGINAL
119
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
Materials and methods. Ninety-two individuals for each species were studied. The mean
duration time of each stage, the number of bloodmeals for each stage, the percentage of
mortality, the cause of death, the mean of eggs laid by female, the number of fertile eggs and the
longevity of adults were recorded.
Results. The mean duration time of all stages of R. colombiensis was higher than in R. prolixus,
producing significant differences in the overall time from egg to adult. The mean of total eggs
and fertile eggs showed significant differences, being higher in R. prolixus than in R.
colombiensis. The total mortality was 31.5% for R. colombiensis and 6.5% for R. prolixus. The
longevity of females was higher in R. prolixus.
Conclusions. The stages of R. prolixus are of relatively short duration. In general, the nymphs
take fewer bloodmeals than R. colombiensis, the adults take more bloodmeals and oviposit a
larger number of fertile eggs, and females have a greater longevity. These parameters indicated
that R. prolixus has superior reproductive success in comparison with R. colombiensis under
the experimental conditions used. These new life cycle data of R. colombiensis will be useful
for maintenance of laboratory colonies.
Key words: Rhodnius, life cycle stages, longevity, mortality rate.
120
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29 Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
en América Latina depende en parte del insectos. Para cada individuo se verificó el número
conocimiento de su biología, de su evolución y de comidas necesarias para mudar de un estadio
genética, puesto que estas especies constituyen a otro. De los 92 R. prolixus estudiados, 86
un riesgo potencial en el desarrollo de procesos alcanzaron el estadio adulto y de ellos se
de domiciliación. Por este motivo, en el presente seleccionaron aleatoriamente 60 individuos para
trabajo se describe el ciclo de vida de R. el análisis estadístico.
colombiensis, la mortalidad, el número de comidas
Promedio de huevos e índice de fertilidad
de cada estadio de desarrollo y el número de
huevos puestos por las hembras durante su vida, Se establecieron 32 matrimonios con adultos
y se compara en las mismas condiciones vírgenes de cada especie. Diariamente, y hasta
experimentales con el ciclo de vida de R. prolixus, la muerte de las hembras, se contabilizaron los
principal vector domiciliado en Colombia. huevos y se calculó el promedio de los índices
Adicionalmente, los resultados inéditos de la de ovipostura, establecidos como la relación entre
bionomía de R. colombiensis serán de utilidad para el número de huevos puestos por cada hembra
el mantenimiento de las colonias en el laboratorio. durante el período de vida. También se calculó el
promedio de los índices de fertilidad, o sea, la
Materiales y métodos
relación entre el número de huevos fértiles y el
Los especímenes de R. colombiensis se número total de huevos puestos por cada hembra.
capturaron en palmas de Attalea butyracea y los
Análisis estadístico
de R. prolixus en domicilios humanos en el
municipio de Coyaima, departamento del Tolima, En cada una de las variables del estudio se
Colombia. hicieron estimaciones de medias con los
respectivos intervalos de 95% de confianza. Se
Las colonias de ambas especies se mantuvieron
utilizó una técnica de análisis multivariado de
a 28 ± 1°C, 75 a 80% de humedad relativa y
varianza (MANOVA) para comparar los promedios
fotoperiodicidad de 12/12 horas en una incubadora de las diferentes variables entre las dos especies
automática B.O.D. Lab-Line. Los triatominos en cada uno de los estadios de desarrollo. Los
fueron alimentados con sangre de gallina softwares utilizados fueron STATISTICA V. 4,5 y
semanalmente. Treinta y seis hembras y doce ESM PLUS V. 8.2,0.
machos de cada especie se emplearon para
obtener la descendencia con la cual se efectuó el Resultados
estudio del ciclo de vida. Los huevos se colocaron Duración del ciclo de vida
individualmente en recipientes transparentes de
5 cm de altura y 3 cm de diámetro. Se estudió el La duración desde huevo hasta adulto en R.
desarrollo de 92 insectos de cada especie. A las colombiensis fue de 144,4 días con un mínimo
N1 se les ofreció sangre de gallina diariamente de 96 y máximo de 268 días. Por otro lado, la
hasta su primera comida y luego se les alimentó duración del ciclo de vida de R. prolixus fue de
semanalmente con la misma fuente. Se revisaron 117,7 días en promedio, con un mínimo de 73 y
diariamente para determinar la duración de cada máximo de 206 días. El tiempo promedio de
estadio, y así mismo se determinó la mortalidad incubación de los huevos de R. colombiensis fue
de 16,2 días, mientras que el de R. prolixus fue
por estadio y la causa de muerte.
de 15,4 días (cuadro 1).
Número de comidas en cada estadio de
El tiempo de duración para cada uno de los
desarrollo
estadios de desarrollo de R. colombiensis fue de
De los 92 R. colombiensis estudiados, 63 de ellos 14,9 días para N1-N2, 18,5 días para N2-N3, 32,9
alcanzaron el estadio adulto, sin embargo, tres días para N3-N4, 29,4 días para N4-N5 y 32,5
de ellos no realizaron ninguna comida durante su días para el N5-adulto. Por su parte, los estadios
fase adulta y murieron por inanición, lo que explica de desarrollo de R. prolixus tuvieron un tiempo
que en los análisis estadísticos se utilizaran 60 promedio de duración de 12,4 días para N1-N2,
121
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
15,3 días para N2-N3, 19,8 días para N3-N4, 25,1 adulto. Para R. prolixus, el número promedio de
días para N4-N5 y 29,7 días para el N5-adulto. comidas fue de 1,3 para N1; 1,9 para N2; 2,3 para
Todos los estadios mostraron diferencias N3; 2,9 para N4; 3,2 para N5, y 28,1 para el adulto
significativas entre R. colombiensis y R. prolixus (cuadro 2). Los promedios del número de comidas
(figura 1). Las N1 de R. colombiensis demoraron para los estadios N1, N3, N4 y adulto de ambas
en promedio 5,6 días, con un mínimo de 2 y un especies presentaron diferencias significativas.
máximo de 13, para la toma de su primer alimento, A excepción de los adultos, cada uno de los
mientras que las N1 de R. prolixus necesitaron estadios de R. colombiensis presentó un mayor
4,2 días en promedio, con un mínimo de 3 y un número promedio de comidas que los de R.
máximo de 8. prolixus (figura 2).
Número de comidas por estadio Longevidad, fertilidad y mortalidad
El promedio del número de comidas por estadio La longevidad del adulto de R. colombiensis
de R. colombiensis fue de 1,8 para N1; 2,1 para presentó un promedio de 194,6 días, con un
N2; 3,7 para N3; 3,4 para N4 y N5, y 19,9 para el mínimo de 24 y máximo de 357. Para R. prolixus
Cuadro 1. Ciclo de vida de 60 R. colombiensis y 60 R. prolixus desde huevo hasta adulto expresado en días. Desviación
estándar (S) y varianza (S2). El nivel de significación es de 0,05. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.
Figura 1. Comparación entre las medias del tiempo (días) de eclosión A (huevo-N1) y de muda de cada estadio de
desarrollo (B: N1-N2, C: N2-N3, D: N3-N4, E: N4-N5 y F: N5-adulto) con sus respectivos intervalos de confianza de 95% para
Rhodnius colombiensis y Rhodnius prolixus.
122
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29 Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
Cuadro 2. Número de comidas de 60 R. colombiensis y 60 R. prolixus durante el ciclo de vida. Desviación estándar (S) y
varianza (S2). El nivel de significancia es de 0,05. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.
Figura 2. Comparación entre las medias del número de comidas y los intervalos de confianza de 95% para cada uno de los
estadios de desarrollo (A: N1, B: N2, C: N3, D: N4, E: N5, F: adulto) para R. colombiensis y R. prolixus.
el período de longevidad fue de 226,4 días, con para R. colombiensis fue de 30,9 (rango 0 a 105)
un mínimo de 136 y máximo de 318, dándose y de 59,9 (rango 0 a 202) para R. prolixus. El
diferencias significativas entre las dos especies. promedio del índice de ovipostura para R.
Se observó que el promedio de huevos colombiensis fue de 1,1 y para R. prolixus de 2,6.
ovipositados por R. colombiensis fue de 214,5, Por otro lado, el promedio del índice de fertilidad
con un mínimo de 82 y máximo de 408, en un para R. colombiensis fue de 0,8 y de 0,9 para R.
período de vida promedio de las hembras de 187,3 prolixus (cuadro 3).
días (rango 101 a 357 días). Para R. prolixus el De los 92 insectos de R. colombiensis observados,
promedio de huevos fue de 574,1, con mínimo de 29 murieron sin completar el ciclo de vida (31,5%),
259 y máximo de 1.083, en un período de vida presentándose el mayor porcentaje de mortalidad
promedio de las hembras de 222,7 días (rango en el estadio N3 a N4 (18,2%), seguido por el
136 a 287 días). El promedio de huevos fértiles estadio N5 a adulto, con 7,3%. En el estadio N1 a
para R. colombiensis fue de 183,6 (rango 41 a N2, ningún individuo murió. De los 92 insectos
332) y para R. prolixus fue de 514,1 (rango 250 a observados en R. prolixus, 6 (6,5%) murieron sin
903). Además, el promedio de huevos no fértiles completar el ciclo de vida. En este caso, el mayor
123
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
Cuadro 3. Promedio de huevos puestos; promedio de huevos fértiles y no fértiles; promedio del índice de ovipostura;
fertilidad y promedio de longevidad de las hembras de R. colombiensis y R. prolixus. El nivel de significación es de 0,05.
124
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Hoyos
Biomédica
R., 2007;27(supl. 1):130-6 L.A. et al
Pacheco L., Agudelo Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
COMUNICACIÓN BREVE
130
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6 Seroprevalencia y factores de riesgo a T. cruzi
cruzi. However, the presence of parasite could not be confirmed by the PCR test.The main risk
factors were houses thatched with palm roofs, clay floors, wood walls, and presence of domestic
animal reservoirs.
Conclusions. The study population presented risk factors for the establishment of active
transmission. The presence of triatomines must be verified in this area and establishment of
control measures are necessary for preventiving the resurgence of the Chagas disease in
Morroa.
Key words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, serology, risk factors, Elisa test, epidemiology.
131
Hoyos R., Pacheco L., Agudelo L.A. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
las personas que no cumplían con estos criterios (Sigma # catalogo 104) se adicionó a una
no fueron tenidas en cuenta para la realización concentración de 1 mg\ml para ser leída a una
del estudio. Previa firma de consentimiento longitud de onda de 410 nm después de agregar
informado, las personas respondieron una 50 ul de NaOH 3N. Se consideraron muestras
encuesta epidemiológica y se extrajo una muestra reactivas positivas aquellas cuya D.O fuera mayor
de sangre que fue dividida en dos viales: uno para al punto de corte (punto de corte = 0,300).
extracción de suero y uno con anticoagulante
Hemoaglutinación indirecta
(EDTA – 0,2 M, pH = 8,0) para extracción de ADN.
Las muestras de sangre y suero se recolectaron Esta prueba se realizó con el kit Chagatest®
en el Laboratorio Clínico del Centro Médico de (Wiener Lab) y se consideraron reactivas las
Salud San Blas del 2 de septiembre al 3 diciembre muestras con títulos iguales o mayores a 1:32.
del 2004, y correspondieron a 122 personas Inmunofluorescencia indirecta
asentadas en 117 viviendas del área rural y urbana.
En esta prueba se utilizaron como antígeno
Encuesta epidemiológica proteínas formalizadas totales de epimastigotes
Las variables tomadas en cuenta fueron el tipo de de la cepa HA de T. cruzi de Colombia, y como
vivienda; el conocimiento sobre el vector, para lo anticuerpo, un anti IgG humano marcado con
cual a cada persona participante en el estudio se isotiocianato de fluoresceína (FITC), según el
le mostraron ejemplares adultos y ninfales de Tri- protocolo establecido en el laboratorio de Chagas
atoma maculata; los lugares de avistamiento del de la Universidad de Antioquia (11). El punto de
insecto, los tipos de animales domésticos y el corte se estableció a partir de la segunda dilución
hacinamiento. Se realizó una búsqueda pasiva de (1:40).
vectores, para lo cual se distribuyeron viales Extracción de ADN y PCR
plásticos rotulados estériles en el corregimiento
de Las Flores. Estos datos se procesaron en el El protocolo de extracción empleado es el descrito
programa estadístico Epi Info 2003. por Sambrook et al. (1989) (12): 500 µL de sangre
se mezclaron con buffer de lisis 2X (Tris - HCl 10
Ensayos serológicos mM PH = 7,4; EDTA 5M a pH = 8,0; SDS al 1%)
La Organización Mundial de la Salud (OMS) y 10 µL de proteinasa K (20 mg/ml); se incubaron
recomienda que las muestras de suero sean a 55°C por 1 hora y después toda la noche a 37°C;
clasificadas como positivas para la enfermedad luego se inactivó la proteinasa K (5 minutos a
de Chagas si son reactivas a dos de tres técnicas 95°C) para centrifugar a 12.000 r.p.m por 40
serológicas con metodologías diferentes (2). En minutos; el sobrenadante resultante se tomó para
este trabajo se utilizaron como pruebas la extracción del ADN con sales de alta molaridad.
diagnósticas Elisa, HAI e IFI. El sobrenadante de ADN se resuspendió en 50
µL de buffer TE 1X, almacenándose luego a -20°C
La prueba de Elisa se desarrolló de acuerdo al
hasta su uso.
protocolo descrito por Gea et al. (1987) y Takasu
et al. (1989) (9,10); el ensayo se realizó en En la prueba de PCR se usaron los iniciadores
microplacas Nunc – Immuno Plate (Maxisorp sur- S35 (5‘AAA TAA TGT ACG GGT GAG ATG CAT
face) y un lector de Elisa Biorad (model 550). El G 3‘) y S36 (5‘GGG TTC GAT TGG GGT TGG
antígeno consistió en un extracto crudo de TG 3‘), que amplifican un fragmento de 330 bp de
epimastigotes de T. cruzi (cepa Y), el cual se las regiones variables de minicírculos del kDNA
adicionó a una concentración de 1,22 ug\ml e de T. cruzi. La reacción de amplificación se realizó
incubado 24 horas en buffer carbonato (pH = 9,6). según Moser et al. (1989) (13) así: 2 µL de buffer
Los sueros se utilizaron en diluciones de 1:800 y PCR (10X), 0,4 µL de dNTPs mezclados (200
como conjugado enzimático se utilizó anti- mM), 1,2 µL de MgCl2 (1,5 mM), 1,2 µL de cada
inmunoglobulina G ligada a fosfatasa alcalina en iniciador (0,6 mM), 0,2 µL de Taq polimerasa y
dilución de 1:1000. El sustrato p – nitrofenilfosfato 6 µL de ADN problema, para un volumen final de
132
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6 Seroprevalencia y factores de riesgo a T. cruzi
25 µL. La PCR se llevó a cabo en un termociclador vectores en el corregimiento de Las Flores fue
PCR – Express (Hybaid) en las siguientes negativa.
condiciones: 1 ciclo a 94°C (5 minutos), 35 ciclos
El análisis por Elisa reveló cuatro personas
a 94°C (1 minuto) 65°C (1 minuto) 72 °C (1 minuto),
seropositivas, un hombre y tres mujeres que se
y una extensión final a 72°C (10 minutos). Los
encontraban en el grupo de edad entre los 14 y 45
productos amplificados se sometieron a una
años. A los sueros seropositivos se les realizó
electroforesis en gel de agarosa al 1,8% y se
una prueba de HAI con el estuche Chagatest®
visualizaron bajo luz U.V después de la tinción (Wiener Lab) con resultados negativos. Dada la
con bromuro de etidio. discrepancia que existía en cuanto al estado
Consideraciones éticas serológico de estos cuatro individuos (Elisa +, HAI
-), se definió la seropositividad con el ensayo de
El Comité de Investigaciones de la Facultad de
IFI, el cual dio resultado positivo en una de las
Educación y Ciencias de la Universidad de Sucre
cuatro muestras, con un título de 1:40.
aprobó este estudio.
La amplificación del kDNA de T. cruzi por PCR
Resultados
en las muestras de sangre pertenecientes a
La encuesta epidemiológica reveló que en la individuos seropositivos por Elisa y positivos para
muestra poblacional estudiada (n = 122), las IFI fue negativa.
condiciones socioeconómicas de la vivienda Discusión
fueron uno de los factores de riesgo encontrados
con mayor frecuencia. Los tipos de vivienda En el ciclo silvestre los triatominos están ubicados
correspondieron principalmente a tres categorías: en ecotopos con unas características particulares
la combinada (62 viviendas, 50,9%), que presenta dependiendo del género Triatominae al que
por lo menos un elemento estructural de riesgo pertenezcan; así, las especies pertenecientes a
para la infestación por triatominos; en segundo Rhodnius se han encontrado asociadas
lugar tenemos el “rancho“(37 viviendas, 30,3%), principalmente a palmas (14,15); Panstrongylus
que presenta todos los elementos estructurales sp. se encuentra en cavidades y huecos de palmas,
de riesgo para la infestación por vectores de la en árboles y también en madrigueras de
enfermedad de Chagas y, por último, la casa de vertebrados silvestres (16); Triatoma sp.
material (18,8%). frecuentemente se localiza en hábitats rocosos y
madrigueras de roedores (16). Los diferentes
Los animales domésticos encontrados en la nichos ecológicos colonizados por las especies
mayoría de las viviendas de la población Triatominae se distribuyen de acuerdo a la
encuestada fueron perros ( Canis familiaris, asociación que presentan en el ambiente silvestre
57,2%), gallinas (Gallus gallus, 44,4%) y cerdos y las preferencias de sustrato se reflejan en los
(Sus scropha, 36,7%), presentándose convivencia sitios infestados por los triatominos dentro de las
de diferentes especies dentro de la misma casa. casas (14); por esta razón, se considera que uno
El hacinamiento fue un factor presente en el 83,6% de los factores de riesgo mas relevantes es el
de los domicilios encuestados, ya que tipo de construcción de los domicilios. En la
población estudiada, la mayor parte de las
presentaban cinco o más personas por habitación
viviendas presentaban por lo menos un elemento
en el domicilio.
estructural de riesgo para la infestación por
Las personas que manifestaron conocer el vector triatominos (50,9%), y otro porcentaje (30,3%)
después de ver ejemplares adultos y ninfales de presentaba todos los elementos estructurales de
T. maculata fueron 54 (44,2%), siendo las paredes riesgo para la infestación por vectores de la
de las habitaciones el lugar más frecuente de enfermedad de Chagas, ya que las viviendas con
observación y los dormitorios el sitio predilecto paredes de bahareque y techos de palma
para la alimentación de los triatominos (34 y 44%, presentan los micrositios (fisuras) y microclimas
respectivamente). La búsqueda pasiva de que permiten una domiciliación acelerada de
133
Hoyos R., Pacheco L., Agudelo L.A. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
triatominos por tener una temperatura y humedad aumenta la densidad de animales en los domicilios
similares a las de los silvestres (17). estudiados y facilita a los insectos vectores la
obtención de alimento.
Aunque se considera que las casas con elementos
materiales sólidos (bloque, cemento y tejas de Se realizó una búsqueda pasiva en los domicilios
asbesto-cemento, presentes en un 18,8%) no del corregimiento de Las Flores (Morroa, Sucre),
presentan ningún tipo de riesgo, se ha observado después de realizar actividades de educación
que algunas especies como T. maculata y T. sobre los peligros de la enfermedad de Chagas y
dimidiata, presentes en Colombia y la Costa el vector Triatominae ; esta búsqueda arrojó
Atlántica (14,15,18), tienen una presencia ligada resultados negativos, pues no se encontraron
al hacinamiento y no a estructuras de riesgo, ejemplares de triatominos, aunque sí hay
considerándose la presencia de estas especies antecedentes de infestación años atrás, según
vectoras un factor de riesgo para cualquier tipo de informaciones anecdóticas de los moradores de
vivienda (15,19). El hacinamiento fue del 83,6%, este corregimiento. No se descarta la presencia
lo que indica que había casas con dos de vectores en el área de este municipio, debido
habitaciones y cinco o más habitantes; además, a que el principal tipo de vegetación son las palmas
las características de higiene asociadas con el en el peri y extradomicilio, y en el departamento
hacinamiento se consideran como de riesgo para de Sucre, Poyet (1995) (24) y Agudelo (2005)
la transmisión vectorial (19,20), la infestación, y (Agudelo L. Experiencias epidemiológicas del
también para la picadura de los triatominos a Grupo de Chagas, Universidad de Antioquia. En:
individuos, ya que facilitan una mayor Jaramillo N, Parra G, Triana O, Moreno J, editores.
concentración de fuentes de alimentos en un Memorias del VIII Curso Internacional sobre la
mínimo de espacio. Ecoepidemiología de la Enfermedad de Chagas y
sus Métodos de Estudio. Medellín: Editorial
Los principales animales domésticos encontrados
Gráficas; 2005) reportan infestación con
coinciden con los reservorios caracterizados para
triatominos (R. pallescens , T. dimidiata y P.
T. cruzi y con otras experiencias epidemiológicas,
geniculatus) en palmas del género Attalea (Attalea
en las que se han encontrado fuertes asociaciones
butyracea, “palma de vino”), Scheelea y Cocos
entre cerdos y la especie Panstrongylus
(Cocos nucifera, “palma de coco”).
geniculatus (21), y entre gallinas y T. dimidiata,
T. maculata y Rhodnius prolixus (3,15, 22). Hay Las pruebas serológicas constituyen importantes
que resaltar que existen reportes que asocian la herramientas que permiten estimar los niveles de
presencia de especies de triatominos infectados infección por T. cruzi y evaluar medidas de con-
con tripanosomas en los municipios del trol epidemiológico y vectorial (20). Sin embargo,
departamento de Sucre (7,23,24). la persistencia de resultados falsos debidos a la
gran cantidad de reacciones cruzadas con
Los perros son los reservorios principales para T.
anticuerpos de individuos que padecen otras
cruzi y los tres principales géneros de Triatominae
enfermedades parasitarias relacionadas (4) ha
tienen como fuente fundamental de alimento a esta
llevado a la OMS a recomendar el uso de por lo
especie. La presencia de posibles fuentes de
menos dos técnicas serológicas con fundamentos
alimentos susceptibles de ser reservorios está
metodológicos diferentes (2,4,5). En nuestro
ligada a altas densidades de animales domésticos
estudio, la prueba Elisa para detectar niveles de
que duermen en el intradomicilio y peridomicilio,
IgG anti–T. cruzi fue lo suficientemente sensible
además de la presencia de diferentes especies
en los sueros de la población estudiada,
de animales en la vivienda, como se observó en
discriminando cuatro muestras reactivas cuya
la muestra poblacional estudiada, en la que
densidad óptica fue mayor al punto de corte y no
además de los tres reservorios antes mencio-
se ubicaron dentro de la zona gris (0,270 a 0,330).
nados, se encontraron patos (Anas sp), pavos
(Meleagris gallipavo), gatos (Felis catus), burros Al realizar la prueba de HAI con el estuche
( Equus asinus ), vacas ( Bos taurus ), lo que Chagatest®, las cuatro muestras resultaron
134
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6 Seroprevalencia y factores de riesgo a T. cruzi
negativas, resultado similar al obtenido por Morroa es considerada un área de bajo riesgo no
Cárdenas et al.(2002), quien obtuvo seis muestras endémica para la enfermedad de Chagas.
reactivas por Elisa y todas negativas por
En conclusión, la zona de estudio presentó los
Chagatest®, lo que demuestra la discordancia
elementos de riesgo estructurales con los
entre esta prueba y Elisa (25). Hay que destacar
ecotopos artificiales propicios para la infestación
que el kit Chagatest® utiliza antígeno
de triatominos; la convivencia con diferentes tipos
citoplasmático liofilizado de cepas argentinas, por
de animales domésticos facilita una fuente de
lo que podría explicarse que las muestras no
alimento estable y reservorios para el desarrollo
reaccionen debido a la posible diferencia en
de colonias domiciliadas de triatominos y, en
determinantes antigénicos entre las cepas del
consecuencia, la transmisión activa de T. cruzi.
cono sur y las cepas de T. cruzi colombianas.
Por la prevalencia de 1,22% encontrada en la
Esta hipótesis es expuesta por Enciso et al.
muestra estudiada se recomienda realizar
(2004), quienes, para explicar las discordancias
estudios para ubicar la presencia de vectores
que existen al tamizar muestras por Elisa y
triatominos y su índice de infección natural en los
estuches de HAI foráneos, además proponen
corregimientos y veredas pertenecientes al
aspectos relacionados con el estadio del parásito
municipio de Morroa, así como establecer el
utilizado como antígeno, su preparación, el ciclo
estado seroepidemiológico de poblaciones
de transmisión al que pertenece la cepa aislada,
pertenecientes al corregimiento de Tumbatoro
así como el huésped o reservorio de origen (26).
(Morroa, Sucre), sitio de origen del individuo
Estos sueros también se analizaron con la técnica
positivo por Elisa e IFI en este estudio.
de IFI, y se confirmó una de las cuatro muestras
como positiva para T. cruzi, encontrándose el Conflicto de intereses
primer caso autóctono de la enfermedad de Los autores manifiestan no tener conflictos de
Chagas en un municipio considerado de bajo intereses con respecto a los resultados de esta
riesgo, en el cual no se ha reportado la presencia investigación.
de individuos infectados por T. cruzi.
Financiación
La PCR se realizó con el objetivo de detectar la
presencia del parásito en sangre; tres muestras Este trabajo de investigación pertenece a la línea
fueron negativas por ausencia de infección de investigaciones biomédicas de la Universidad
(positivos para Elisa, negativos para Chagatest® de Sucre y fue financiado parcialmente por el
e IFI), y una muestra fue negativa por ausencia proyecto 1102-04 -12901 registrado en Colciencias,
de parasitemia en sangre periférica (positivo para así como con recursos del Laboratorio de
Elisa e IFI, negativo para Chagatest®); este Investigaciones Biomédicas de la Universidad de
resultado es consistente con el de personas en Sucre y el Grupo de Chagas de la Universidad de
estado latente o crónico de la enfermedad de Antioquia.
Chagas, que presentan serología positiva pero Referencias
escasa presencia de parásitos en sangre (6,27);
otras posibles causas que pueden incidir en los 1. Atias A. Parasitología médica. Santiago de Chile:
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resultados son el tipo de extracción de ADN 251-64.
utilizado y el volumen de sangre usado en la
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en estado crónico de la enfermedad (28); sin em-
3. Moncayo A. Chagas disease: current epidemiological
bargo, la alta sensibilidad encontrada con esta trends after the interruption of vectorial and
técnica es consecuencia de la alta parasitemia transfusional transmission in the southern cone
de las cepas procedentes de las áreas endémicas countries. Mem Inst Oswaldo Cruz 2003;98:577-91.
brasileñas, característica diferente a la de los 4. Cannova D, Aguilar M, Pacheco M, Simona M,
aislamientos colombianos. En este sentido, Medina M. Validación del inmunoensayo enzimático
135
Hoyos R., Pacheco L., Agudelo L.A. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
(Elisa) y hemoaglutinación indirecta (HAI) para el (Heteroptera: Triatominae) BARBER 1932 en la costa
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136
Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42 Nitroforinas de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
COMUNICACIÓN BREVE
1
Laboratorio de Investigaciones en Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima,
Ibagué, Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical, Universidad de los Andes, Bogotá
D.C., Colombia.
137
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F., Vallejo G.A. Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42
La saliva de los insectos hematófagos presenta estadio ninfal (N1) hasta el adulto. En el primer
sustancias anticoagulantes, antihistamínicas, estadio se han purificado, además, dos
vasodilatorias y antiplaquetarias que facilitan el hemoproteínas salivares, la NP5 y la NP6, cuya
proceso de alimentación sobre el huésped cantidad va disminuyendo en las glándulas
vertebrado (1-4). En los triatominos se han salivares con las mudas sucesivas hasta
encontrado varias sustancias relacionadas con ausentarse en la fase adulta. En el segundo
estas funciones. En el caso del género Rhodnius, estadio (N2) aparece la NP4. En el tercer estadio
hasta el momento se han reportado ocho proteínas ninfal (N3) se presenta la NP1. Por ultimo, en el
salivares: tres factores que contrarrestan la quinto estadio ninfal (N5) aparece la NP3, y a
agregación plaquetaria, llamados inhibidores de partir de este momento ya están presentes las
agregación de R. prolixus (RPAI 1-3) (proteínas cuatro nitroforinas, NP1 a NP4, que perduran en
lipocalinas) (4,5); una apirasa que se encarga de el adulto (17).
hidrolizar el ADP bloqueando la agregación En el género Rhodnius existen varias especies
plaquetaria (4,6), y, por último, las nitroforinas epidemiológicamente importantes para la
(NPs), un grupo de cuatro hemoproteínas transmisión de los parásitos T. cruzi y T. rangeli.
denominadas NP1 a NP4 según su relativa Según las características biológicas, ecológicas
abundancia en las glándulas salivares (7). Las y etológicas de estos vectores, que suelen variar
nitroforinas se pueden agrupar en dos conjuntos de una zona geográfica a otra, pueden
con base en las relaciones de sus secuencias de considerarse como vectores primarios o
aminoácidos; es así como NP1 y NP4 son secundarios, o estar en proceso de alcanzar este
idénticas en un 90%, y NP2 y NP3 son idénticas último nivel. Algunas especies del género
en un 80% (4,7,8). Para Cimex lectularius de la Rhodnius suelen ser fenotípicamente similares y,
familia Cimicidae se ha reportado otra nitroforina además, ser simpátricas en algunas zonas
que, aun cuando no es significativamente similar geográficas. En los estudios de la epidemiología
a las de R. prolixus (familia Reduviidae), revelaría y la biología de los vectores y de los ciclos de
una evolución convergente entre estas transmisión de los parásitos T. cruzi y T. rangeli,
hemoproteínas (9,10). En Rhodnius , las NP así como en las encuestas entomológicas y en
transportan óxido nítrico e histamina a través de las campañas de control y prevención vectorial,
su grupo hemo (Fe III), el cual es el sitio de enlace se han utilizado diferentes tipos de técnicas que
para ambas moléculas (4,11-14). El óxido nítrico han permitido distinguir la mayoría de las especies
permite la vasodilatación e inhibe la agregación pertenecientes a este género, entre ellos la
plaquetaria (4,11,15). Por su parte, la unión de la morfología (18-20), las isoenzimas (21-23), la
histamina a las NP impide la respuesta de morfometría cuantitativa (23), el análisis
inflamación en el huésped vertebrado (4,12,13). cuantitativo de patrones de sensilias antenales
La NP2 o prolixin-S se encarga de bloquear la (24), el análisis de secuencias de ADN
cascada de coagulación, ya que evita que el factor mitocondrial (25,26) y el análisis de genitalia
X se convierta en el factor Xa (4,13,16). Por otro masculina (20,27); sin embargo, algunas veces
lado, se ha comprobado que las NP en R. prolixus no suelen ser muy efectivas, ya que no generan
son estadio específicas, es decir, que puede diferencias y, además, algunas son dispendiosas
presentarse una o faltar otra de un estadio a otro. y muy costosas.
Es así como la NP2 está presente desde el primer
Mediante la electroforesis de hemoproteínas
salivares es posible diferenciar especies
Correspondencia: fenotípicamente similares o poblaciones de una
Gustavo Adolfo Vallejo, Laboratorio de Investigaciones en
Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad misma especie separadas por áreas geográficas
del Tolima, Ibagué, Colombia. (28,29). Además, los perfiles electroforéticos de
Fax (+57-8) 2669176. las hemoproteínas pueden reflejar distancias
gvallejo@ut.edu.co biogeográficas entre poblaciones y revelar
Recibido: 23/03/06; aceptado: 08/09/06 relaciones filogenéticas entre las especies (28).
138
Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42 Nitroforinas de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
139
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F., Vallejo G.A. Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42
140
Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42 Nitroforinas de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
141
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F., Vallejo G.A. Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42
12. Ribeiro JM, Walker FA. High affinity histamine-binding 23. Dujardin JP, Chavez T, Moreno JM, Machane M,
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142
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
REVISIÓN DE TEMA
143
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
144
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
2. La costa del Pacífico, con clima ambiental De las 24 especies de triatominos presentes en
húmedo y superhúmedo, no representa una Colombia, 15 se han encontrado con infecciones
región que permita albergar especies de naturales por T. cruzi (cuadro 1): Panstrongylus
triatominos de importancia epidemiológica. geniculatus, Panstrongylus lignarius,
Panstrongylus rufotuberculatus, T. dimidiata,
3. La región Andina, que presenta sub-regiones Triatoma dispar, T. maculata, T. venosa, R.
con diferentes cinturones horizontales y brethesi, R. colombiensis, R. pallescens, R.
verticales de clima, vegetación y suelos, pictipes, R. prolixus, Eratyrus cuspidatus,
incluye los valles interandinos y constituye la Eratyrus mucronatus, Cavernicola pilosa.
región de mayor densidad de asentamientos
humanos del país. Aquí se encuentran La presencia de Trypanosoma rangeli en áreas
ampliamente distribuidas las principales endémicas para T. cruzi constituye un factor
especies de triatominos domiciliados, Rhodnius epidemiológico de importancia, dado que
prolixus, Triatoma dimidiata y T. venosa; en comparten algunos insectos vectores y
los valles interandinos a lo largo del río huéspedes mamíferos, incluido el hombre. A
Magdalena se encuentran ampliamente pesar de que T. rangeli se ha considerado como
distribuidas especies silvestres como no patógeno para el huésped mamífero, su ciclo
Rhodnius colombiensis. de vida aún no se conoce y su presencia tanto en
las heces de los triatominos como en la sangre
4. Los llanos de la Orinoquía se caracterizan por de los mamíferos puede constituir una fuente de
extremos de sequía y humedad durante el año. error en el diagnóstico. Desde el punto de vista
Las especies domiciliadas predominantes son epidemiológico es importante conocer su
R. prolixus, T. dimidiata y T. maculata. Varios distribución dado que sí es patógeno para los
reportes demuestran la existencia de R. insectos vectores que infecta.
prolixus silvestre asociado a palmas tanto
silvestres (Attalea butyracea, Maximiliana De las 24 especies de triatominos presentes en
elegans y Mauritia flexulosa) como de cultivos Colombia, siete se han encontrado con infecciones
agroindustriales (Elaeis guineensis). de T. rangeli (37): R. colombiensis, Rhodnius
dalessandroi , R. pallescens , R, prolixus , R.
5. La selva de la Amazonía colombiana presenta
robustus, T. dimidiata y E. mucronatus.
un clima frecuentemente húmedo y caluroso
durante todo el año y registra muy pocos Las principales especies que transmiten T. cruzi
triatominos domiciliados. Rhodnius brethesi, en Colombia son R. prolixus y T. dimidiata, las
145
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
cuales presentan un ciclo epidemiológico muy F. Memorias Primer Taller Internacional Sobre
complejo que no sólo involucra una distribución Control de la Enfermedad de Chagas. Curso de
en el domicilio sino también en el peridomicilio y Diagnóstico, Manejo y Tratamiento de la
en hábitats silvestres. Las poblaciones de Enfermedad de Chagas. VI Reunión de la Iniciativa
insectos no domiciliadas causan dificultad en el Andina para el Control de la Enfermedad de
control, pues pueden ser fuente de infestación o Chagas, Bogotá; Corcas Editores: 2005. p.25-41).
de reinfestación de las viviendas ya intervenidas Estos hallazgos merecen consideraciones
con insecticidas y, por lo tanto, hay posibilidad similares a las ya expuestas para R. prolixus.
de que se reinicíe el ciclo de transmisión a los
Las especies que no representan riesgo de
humanos.
transmisión al hombre, y que conservan hábitos
R. prolixus se ha adaptado extremadamente bien silvestres específicos, pueden resumirse de la
a los domicilios humanos; sin embargo, estudios siguiente forma: Psamolestes arthuri en nidos de
recientes adelantados en el departamento de aves, palmas o debajo de la corteza de árboles
Casanare han mostrado poblaciones abundantes muertos; Panstrongylus lignarius en nidos de aves;
de R. prolixus silvestres asociadas a palmas Cavernicola pilosa en cuevas o árboles y palmas
nativas, A. butyracea, y a palmas introducidas donde habitan murciélagos; Belminus rugulosus
en cultivos agroindustriales, E. guineensis. Los en palmas; R. colombiensis en palmas; T. dispar
índices de infección natural por T.cruzi en zonas boscosas, y Microtriatoma trinidadensis
encontrados en los insectos capturados en estas bajo de la corteza de árboles muertos.
especies de palmeras fueron de 67 y 41%,
En el cuadro 1 se presenta el resumen de la recopila-
respectivamente, y los índices de colonización,
ción de toda la información actualizada sobre los
de 92,8 y 100%, respectivamente.
registros de las especies de triatominos presentes
Estos hallazgos indican la necesidad de instaurar en Colombia y su infección natural con tripano-
programas de vigilancia entomológica muy activos somátidos a nivel departamental y municipal según
encaminados a evaluar el riesgo epidemiológico actualización y modificación de Molina J et al. (4).
que representan estas poblaciones de insectos
Distribución geográfica de los triatominos en
silvestres (Guhl F, Pinto N, Marín D, Herrera C,
Colombia
Aquilera G, Naranjo JM, Vallejo G. Primer reporte
de Rhodnius prolixus Stal, en Elaeis guineensis, En los últimos años se ha hecho evidente el
variedad Papúa, en plantaciones agroindustriales interés de los grupos de investigación en la
de Villanueva, Casanare. Memorias XII Congreso epidemiología de la enfermedad de Chagas en
Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical, Colombia.
Biomédica 2005;25:158-59 y Pinto N, Marín D,
De igual manera, el personal de los servicios de
Herrera C, Vallejo G, Naranjo JM, Guhl F.
salud ha adquirido un mayor conocimiento sobre
Comprobación del ciclo silvestre de Rhodnius
la fauna de triatominos y la importancia de los
prolixus Stal en reductos de Attalea butyracea en
programas de vigilancia y control. Estos hechos
el departamento de Casanare. Memorias XII
han permitido aumentar el registro de nuevas
Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina
especies de triatominos en el país y aumentar de
Tropical. Biomédica 2005;25:159).
manera considerable el número de registros en
De igual manera es importante anotar que también nuevas localidades a nivel nacional.
se han reportado poblaciones silvestres de T.
Teniendo en cuenta esta información se presentan
dimidiata en algunos municipios del departamento
mapas que indican la distribución de los
de Boyacá, al igual que en la Sierra Nevada de
triatominos por departamento y municipio (figuras
Santa Marta (Guhl F, Aguilera G, Pinto N, Vergara
2-11).
D. Distribución geográfica de las especies de
triatominos en los departamentos endémicos para Las figuras 4, 6, 7, 9 y 11 corresponden a los
la enfermedad de Chagas en Colombia. En: Guhl departamentos que conforman la región andina;
146
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
Cuadro 1. Registro por departamentos y municipios de las especies de triatominos presentes en Colombia y su
infección natural con tripanosomátidos.
Amazonas P. geniculatus* El Calderón (Leticia) (5), Leticia (a), (b), Tarapacá (A)
R. pictipes* El Calderón (Leticia) (5), Leticia (a) ,(b), Puerto Nariño (A, 5), (b)
R. prolixus° Tarapacá (A)
R. robustus° Leticia (A), Puerto Nariño (b)
Antioquia B. rugulosus¨ San Carlos (c)
E. cuspidatus¨ Apartadó (B), Chigorodó (B), San Carlos (B, c)
E. mucronatus¨ San Carlos (c)
P. geniculatus*+ Amalfi (B) (6) Anori (B), Arboletes (B), Campamento (B) Caracolí (B),
Cisneros (B), Cocorna (B), Dabeiba (B), Hispania (B), La pintada (B),
Maceo (B), Medellín (7, 8), Murindó (B), Nariño (B), Peque (B), Puerto
Berrío (B, b), Puerto Triunfo (B), San Carlos (B,b), San Francisco (B), San
Juan de Urabá (B), San Luis (B), San Pedro de Urabá (B), San Rafael (B),
San Roque (B), Sonsón (B), Támesis (B), Taraza (B), Urabá (d), Uramita
(B), Valdivia (B), Vegachí (B, 9, 10), Yalí (B), Yolombó (B)
P. humeralis° Puerto Berrío (B, e), San Carlos (c, e), Vegachí (e)
P.rufotuberculatus° Anori (B), Puerto Berrío (B, e), San Carlos (c, e), Vegachí (B, e)
R. pallescens* Amalfi (B), Anori (B), Arboletes (B), Chigorodo (B), Maceo (B), Necoclí (B),
Puerto Berrío (B, 4), Puerto Nare (B), Remedios (B), San Carlos (c, e),
San Juan de Urabá (B), San Pedro de Urabá (B), Tarazá (B), Turbo (B, f),
Vegachí (B, c), Yalí (B), Yondo (B), Zaragoza(B)
R. prolixus° Necoclí (B, 9, 10)
T. dimidiata+ Apartadó (B), Chigorodó (B), Necoclí (B), Turbo (B)
T. dispar* Amalfi (B), Cocorná (B), Dabeiba (B, d, 11), Murindó (B), San Francisco (B)
T. venosa* Concepción (B), Nariño (B), San Francisco (B), San Luis (B), Puerto Nare
(B, g)
Arauca E. mucronatus° Saravena (C)
R. prolixus¨ (C, 9, 10), Arauca (I)
R. robustus° (C)
T. dimidiata° Arauca (C)
T. maculata°¨ Arauca (C), Tame (C), Arauca (I)
P. arthuri¨ Arauca (I)
C. pilosa° Arauca (I)
Atlántico T. maculata° (9, 10, 12)
Bolívar E. cuspidatus¨ Talaigua Nuevo (B),
P. geniculatus¨ Cantagallo(B), Santa Catalina (B), Santa Rosa del Sur (B)
R. pallescens¨ María la Baja (B), Mompós (B), Morales (B), San Juan Nepomuceno (B),
Santa Rosa del Sur (B), Turbacó (B, 9, 10)
R. prolixus° Las Boquillas (Mompós) (A)
R. robustus° (13)
T. maculata¨ Cantagallo (B), Córdoba (B), Mompós (B), Santa Catalina (B), San Juan
Nepomuceno (B), Santa Rosa del Sur (B), Talaigua Nuevo (B)
Boyacá E. cuspidatus° Páez (D), San Pablo de Borbur (D, d, 10, h)
E. mucronatus° Páez (D, h)
P. geniculatus° Berbeo (D), Boavita (D), La Victoria (D), Maripí (D), Puerto Boyacá (D),
San Pablo de Borbur (D), San Eduardo (D), Santa María (D), Soatá (D),
Susacón (D), Zetaquirá (D)
P. rufotuberculatus° Miraflores (D), San Pablo de Borbur (D), Zetaquirá (D)
R. pictipes° Garagoa (D, h)
R. prolixus*·+ Almeida (D), Berbeo (D), Boavita (D), Campo Hermoso (D), Chiquinquirá (13,
14), Chitaraque (D), Chivor (D), Covarachía (D), Cubará (D), Garagoa (D, 7,
13), Guateque (D, 7, 13, 14), Guayatá (D, 13, 14), Labranza Grande (D), La
Capilla (D), La Uvita (D), Macanal (D), Miraflores (7, 13), Moniquirá (D, 7,
13, 14), Otanche (D, 13), Pachavita (D), Páez (D), Pajarito (13), Pauna (13),
147
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
Paya (D), Pisba (D), Puerto Boyacá (D), Ramiriquí (13), Rondón (D), San
Eduardo (D), San Luis de Galeno (D), San Mateo (D), Santa María (D),
Sátiva Norte (D), Soatá (D, c, 13, 14, 15), Somondoco (D), Susacón (D),
Sutatenza (D), Tenza (D), Tinjacá (13), Tipacoque (D), Togui (D), Zetaquirá
(D, 9, 10, h)
T. dimidiata*·+ Boavitá (D), Campo Hermoso (D), Chiscas (D), Chitarque (D), Guayatá (13),
La Uvita (D), Miraflores (13), Moniquirá (D), Páez (D), Pisba (D), Puerto
Boyacá (D), San Eduardo (D), San Mateo (D), Sátiva Norte (D), Soatá (D, 7,
13, 14), Susacón (D), Sutatenza (D), Tipacoque (D), Zetaquirá (D, 9, 13, h)
T. maculata° Cubará (D), Páez (D), Paya (D, h)
T. venosa* Boavita (D), Campo Hermoso (D), Chinavitá (D), Chivor (D), Garagoa (D),
Guateque (D, 13), Guayatá (D, 13), La Capilla (D), La Victoria (D), Macanal
(D), Moniquirá (D), Munantá (4), Pachavitá (D), Páez (D), Pisba (D),
Ramiriquí (4), San Pablo de Borbu r (D), Santa María (D), Sátiva Norte (D),
Soatá (D), Somondoco (D), Susacón (D), Sutatenza (D), Tenza (D), Tinjacá
(13), Tipacoque (D), Zetaquirá (9, 10, h)
Caldas R. pallescens° Samaná (A)
Caquetá P. geniculatus* Belén de los Andaquíes (A), Solano (16, 17)
R. pictipes¨ Tres Esquinas (13, g)
R. prolixus* Doncella (A), Florencia (c, 13, 14), Maguareño (A), Puerto Rico (A), Santa
Helena (A, 9, 10)
Casanare C. pilosa° Yopal (G)
E. cuspidatus° Nunchía (D), Sabanalarga (D), Tauramena (D), Villanueva (D)
E. mucronatus° Nunchía (D), Poré (D), Villanueva (D), (G)
P. geniculatus° Hato Corozal (D), Sabanalarga (D), Tauramena (D), Villanueva (D, G)
P. lignarius° Yopal (G)
Ps. arthuri° Monterrey (D, G), Paz de Ariporo (D), Villanueva (D)
R. prolixus*· Aguazul( D), Hato Corozal (D), Maní (13, 14), Monterrey (D), Nunchía (D),
Orocué (D), Paz de Ariporo (D), Poré (D), Recetor (D), Sabanalarga (D),
San Luis de Palenque (D), Támara (D), Tauramena (D), Trinidad (D),
Villanueva (D), Yopal (D, G, 9, 10, 14)
T. dimidiata*· La Salina (D, G, 9, 10), Sácama (D)
T. maculata*+ Aguazul (D), Hato Corozal (D, g), Monterrey (D), Nunchía (D), Paz de
Ariporo (D), Poré (D), San Luis de Palenque (D), Tauramena (D), Villa Nueva
(D), Yopal (D, G)
Cauca P. geniculatus° Gorgona (9, 10 , 15, 16)
T. nigromaculata El Tambo ver. La Playa (18)
P. rufotuberculatus* Santander de Quilichao (13, e, 17)
Cesar B. herreri° San Alberto (C), San Martín (C)
E. cuspidatus° San Alberto (C), San Diego (C)
P. geniculatus° Aguachica (C), Chiriguaná (C), Agustín Codazzi (C), Chimichagua (C),
Curumaní (C), El Paso (C) Gamarra (C), La Paz (C), Pailitas (C), Pelaya (C),
Río de Oro (C), San Alberto (C), San Diego (C) Valledupar (C)
R. neivai° La Paz (C), San Alberto (C), Valledupar (C, 9, 10)
R. pallescens¨ Caserío Los Pajaritos (g), Chimichagua (C), Chiriguana (C), Agustín Codazzi
(C), Curumaní (C), Gamarra (C), La Paz (C), Pailitas (C), Pelaya (C), San
Martín (C), Tamalameque (C)
R. prolixus*· Chiriguaná (13), El Paso (13), La Jagua (C), Río de Oro (9, 10), San Alberto
(C), Valledupar (C)
T. dimidiata¨ Aguachica (C), Chiriguana (C), Agustín Codazzi (C), Curumaní (C), La Jagua
(C), La Paz (C), Pailitas (C), Pueblo Bello (C), Río de Oro (C), San Diego
(C), Valledupar (C, g)
T. maculata° Astrea (C), Becerri l(C), Agustín Codazzi (C), El Copey (C), El Paso (C), La
Jagua (C), La Paz (C), San Diego (C), San Juan del Cesar (9, 10, 12, 19),
Valledupar (C)
148
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
149
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
Pueblo Viejo (B), Santa Marta (B, E, F), Sierra Nevada de Santa Marta (E, F)
P. rufotuberculatus° Santa Marta (B, D, E, F)
R. pallescens*+ El Banco (A, B, F), Fundación (B), Guamal (A, F) Pijiño del Carmen (B), San
Sebastián (F) Santa Marta (B, D, E, F), Sierra Nevada de Santa Marta (E)
R. neivai Sierra Nevada de Santa Marta (E, F)
R. prolixus*· Aracataca (B), Fundación (B), Pivijay (14, 21), Santa Marta (A, g), Sierra
Nevada de Santa Marta (E, F)
T. dimidiata* Aracataca (B), Cienaga (B), Fundación (B), Santa Marta (9, 10, g), Sierra
Nevada de Santa Marta (E, F)
T. maculata¨ Guamal (B, F), Pijiño del Carmen (B), San Sebastián de Buenavista (B),
Santa Ana (B), Santa Marta (A, E, F, g)
Meta C. pilosa*+ El Porvenir (Puerto Gaitán) (24), Granada (9, 10)
E. cuspidatus° Puerto Gaitan (D)
E. mucronatus° (9, 10)
M. trinidadensis° San Martín (9, 10 )
P. geniculatus* Acacias (D), El Porvenir (24),Granada (D), La Macarena (D, k), Restrepo
(D), Villavicencio (D)
P. lignarius* El Porvenir (d, 13, g, 24)
P. rufotuberculatus° El Calvario (D, 9)
Ps. arthuri¨ El Porvenir (d, 13, g, 24)
R. dalessandroi· San Martín (9, 10, 25)
R. pictipes* Acacias (D), Cumaral (A), Fuente de Oro (D), Granada (D), Guamal (D), La
Macarena (D, k), La Uribe (D), Lejanías (A, D), Mesetas (D), San Carlos de
Guarda (D), San Martín (9, 10, 26), Villavicencio (D)
R. prolixus*·+ Acacias (13, 14), Barranca de Upía (D), Cumaral (13), El Porvenir (12, 24),
Fuente de Oro (D), Granada (D), Guamal (13, 14), Guape (Granada) (10),
La Macarena (D), Lejanías (D), Mesetas (D), Puerto Gaitán (D), Puerto
Lleras (D), Puerto López (13, 14), Restrepo (7, 13, 14), San Antonio (13),
San Carlos de Guarda (D), San Juan de Arama (D), San Martín (7, 13),
Villavicencio (7, 9, 10, 12, 14), Vista Hermosa (14)
T. dimidiata° Cumaral (27), Restrepo (27)
T. maculata¨ El Porvenir (24)
Nariño T. dispar* Inda (28), Tumaco (A)
Norte de SantanderE. cuspidatus° (9, 10)
E. mucronatus*· Acarí (C), Convención (C), Cúcuta (C), El Carmen (C), Los Patios (C), San
Cayetano (C), Santiago (C), Sardinata (C), Teorema (C, 9, 10)
P. geniculatus* Arboledas (C), Cúcuta (C), Durania (C), El Carmen (C), El Zulia (C),
Santiago (C), Sardinata (C), Teorema (C), Tibú (14), Villa del Rosario (16).
(9, 10)
R. pallescens° La Esperanza (C)
R. pictipes° (C)
R. prolixus*· Convención (C), Cúcuta (C, 7, 13, 14), Cucutilla (l), Chinácota (7, 13, 14),
Gramalote (13, 14), San Cayetano (13, 14), Santiago (13, 14), Tibú (7, 13,
14), Toledo (13, 14), Villa del Rosario (13, 14), Zulia (9, 10, 14)
R. robustus· Cúcuta (C), El Zulia (C). (9, 10)
T. dimidiata° El Carmen C, Toledo (9, 10)
Putumayo P. geniculatus° Puerto Asís (m), Valle del Guamuez (m, 9, 10)
R. pictipes* Puerto Asís (m), Puerto Guzmán (m), Puerto Leguízamo (m, 9, 10)
R. prolixus*+ Puerto Asís (g, m), Puerto Guzmán (m), Orito (9, 10, g), Villa Garzón (m)
Risaralda P. geniculatus° Pueblo Rico (16)
San Andrés y
Providencia T. dimidiata Sector Aguamansa (D) (n)
Santander B. herreri° El Carmen (C), San Vicente de Chucurí (C)
C. pilosa° Curití (C), Galán (C), San Gil (C), Socorro (C)
150
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
E. cuspidatus° Bolívar (C), El Carmen (C), Pinchote (C), San Gil (C), San Vicente de
Chucurí (C), Socorro (C)
P. geniculatus° Barichara (29), Capitanejo (C), Contratación (29), Curití (29), El Carmen
(29), El Playón (C), Enciso (C), Málaga (C, 6), Pinchote (29), San Gil (o), San
José de Miranda (C), San Vicente del Chucurí (29), Simácota (29), Socorro
(9, 10, o)
P. humeralis° El Carmen (29), San Vicente del Chucurí (29)
P. rufotuberculatus° El Carmen (29), San Vicente de Chucurí (29)
R. pallescens° Bolívar (C), Contratación (29), El Carmen (29), El Peñón (C), El Playón (C),
San Gil (29), San Vicente de Chucurí (29), Socorro (29), Sucre (C)
R. prolixus*· Barbosa (13, 14, 21), Betulia (C), Bolívar (C), Bucaramanga (8, 13),
Capitanejo (C), El Carmen (29), Charalá (13, 29), Chimá (29), Cimitarra (9),
Coromoro (29), Curití (13, 29), El Peñón (C), Enciso (C), Gambita (29),
Guadalupe (29), Guapotá (29), Guavatá (13), Güenza (13, 14), Güepsa
(13), Macravita (C), Málaga (7, 13, 14), Miranda (7, 13, 14), Mogotes (13,
29), Molagavita (C), Ocamonte (29), Oiba (7, 13, 14, 29), Onzaga (13, 14,
29), Páramo (29), Piedecuesta (7, 13, 14), Pinchote (13), Puente Nacional (7,
13, 14), Rionegro (7, 13, 14), San Gil (7, 13, 14, 29), San Joaquín (13, 14,
29), San Miguel (C), San Vicente de Chucurí (7, 13, 29), Simácota (29),
Socorro (7, 13, 14, 29), Suaita (29), Sucre (C), Valle de San José (13, 29),
Vélez (7, 9, 10, 14)
R. robustus° (10, 13)
T. dimidiata*· Capitanejo (C), Charalá (29), Curití (29), El Carmen (29), El Hato (29),
Enciso (C), Guacamayo (C), Guadalupe (C), Macaravita (C), Málaga (13),
Mogotes (13, 29), Molgavita (C), Onzaga (13, 14, 29), San Gil (29), San
Joaquín (13, 29, 30), San José de Miranda (C), San Miguel (C), San Vicente
de Chucurí (29), Socorro (o), Suaita (9, 10, 29)
T. maculata° Capitanejo (C)
T. venosa* Bolívar (C), Contratación (29), El Carmen (29), Florian (C), Gambita (C),
Matanza (C), Onzaga (13), San Gil (29), San Joaquín (13), San Vicente de
Chucurí (9, 10, 29), Socorro (29), Suaita (29)
Sucre E. cuspidatus* Galeras (C, c, d, 9, 10)
P. geniculatus+ Coloso (B), Corozal (B), Ovejas (B), San Marcos (B),San Onofre (B), Since
(B), Sincelejo (B), Toluviejo (B, d, 10)
R. pallescens+* Caimito (B), Galeras (C, 9, 31), Guaranda (C) , La Unión (C) , San Benito
Abad (c), San Marcos (C), San Onofre (C, d, 10, 32)
T. dimidiata* Galeras (9, d, 20)
Tolima C. pilosa* Guamo (13), Honda (d, 10, 33, p)
P. geniculatus° Casablanca (D), Dolores (D), Falan (D), Fresno (D), Iconazo (D), Prado (D),
Purificación (D, d, 9, 10, p)
R. colombiensis*·+ Alvarado (D, q), Carmen de Apicalá (D, q), Chaparral (4), Coello (D, q),
Coyaima (D, 20, q 34, r, 35), Guamo (D, q), Ibagué (D, q), Icononzo (q)
Lerida (D, q) Libano (D, q), Melgar (D), Ortega (D c, 13, q) Prado (D, q)
Purificación (D, q) San Luís (D, q) Santa Isabel (D, q)
R. prolixus*· Alvarado (7, 13), Carmen de Apicalá (13), Coello (13, 21), Coyaima (D, c, r,
31), Espinal (13, 14, 21), Flandes (13), Guamo (13), Honda (7, 13), Ibagué
(7, 13), Lérida (13), Líbano (13), Mariquita (7, 13), Melgar (7, 13), Natagaima
(D, 13), Ortega (7, 13), Prado (7, 13, 14, 22), Saldaña (13, 14), San Antonio
Suárez (d, 10)
R. robustus*· Coyaima (13, p)
T. venosa° Villahermosa (D)
Valle del Cauca C. pilosa* Palmira (13), Restrepo (9, 10)
P. geniculatus° Buenaventura (9, 10, 16)
P. rufotuberculatus° Buenaventura (9, 13, 16, 35)
R. proluxus° Cali (13)
T. dispar* Buenaventura (16, 36), Calima (15, 16, 28) Caserío Bajo Calima (s)
151
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
* Presencia de T. cruzi; . presencia de T. rangeli; + presencia de Trypanosoma sp; ° sin datos disponibles; ¨ negativos
para T. cruzi, T. rangeli y Trypanosoma sp.
152
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
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2003;23:101-2.
( ) Entre paréntesis aparecen el número y la letra en minúscula de la referencia bibliográfica correspondiente.
Figura 1. Distribución de los principales triatominos asociados al hábitat humano según las zonas biogeográficas.
153
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
154
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
Antioquia, (Gualdrón LE, Brochero HL, Arévalo C, estas especies, originalmente consideradas como
Pérez L, Suárez M, Olano VA. Hallazgo de algunos de hábitos silvestres.
vectores de la enfermedad de Chagas en el
Los índices de infección natural en 15 de las 24
departamento del Amazonas. Santafé de Bogotá;
especies de triatominos registradas en Colombia,
Resúmenes XXVI Congreso Sociedad Colombiana
la presencia de R. prolixus en 21 departamentos,
de Entomología: 1999. p.72). Igualmente, la
sumada a la continua acción antrópica sobre los
demostración del proceso de domiciliación de T.
ambientes silvestres que sirven de hábitat a los
maculata en Santa Marta (Guhl F, Aguilera G, Pinto
triatominos selváticos, así como el
N, Vergara D. Distribución geográfica de las
desplazamiento masivo de poblaciones humanas,
especies de triatominos en los departamentos
constituyen factores determinantes en la
endémicos para la enfermedad de Chagas en
aceleración de los procesos de domiciliación de
Colombia. En: Felipe Guhl. Memorias Primer Taller
los triatominos.
Internacional Sobre Control de la Enfermedad de
Chagas. Curso de Diagnóstico, Manejo y Se espera que la información aquí presentada sirva
Tratamiento de la Enfermedad de Chagas. VI como herramienta para reforzar las estrategias de
Reunión de la Iniciativa Andina para el Control de control de la enfermedad de Chagas, permitiendo
la Enfermedad de Chagas, Bogotá; Corcas también la evaluación del riesgo que representan
Editores: 2005. p.25-41), pone de manifiesto la las especies de triatominos silvestres en
importancia de mantener bajo estricta vigilancia Colombia.
Figura 2. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos que conforman la región de la
Amazonia y la Orinoquia.
155
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
Figura 3. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos que conforman la región de la llanura
del Caribe, incluida la Sierra Nevada de Santa Marta y la isla de Providencia (perteneciente al departamento de San Andrés
y Providencia).
Figura 4. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos de Cauca, Huila, Nariño, Tolima y
Valle.
156
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
Figura 5. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos de Chocó, Caldas y Risaralda.
Figura 6. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos de Norte de Santander y Santander.
157
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
158
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
159
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
Adendo Referencias
Al cierre de esta edición se ha reportado una nueva 1. Schofield CJ, Diotaiuti L, Dujardin JP. The process
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ejemplares fueron capturados en una vivienda de 2. Padilla J, Guhl F, Soto J, Alvarez G. Diagnóstico y
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registro se completan 25 especies de triatominos Barrios D, Guhl F. Distribución e importancia
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Los autores declaran no tener conflicto de 5. Gualdrón LE, Brochero HL, Arévalo C, Pérez LP,
intereses con el contenido del manuscrito. Suárez MC, Olano VA. Hallazgo de algunos vectores
de la enfermedad de Chagas en el departamento del
Financiación Amazonas y sus implicaciones en salud pública. Revista
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Este estudio se realizó con el apoyo financiero
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1984;21:750.
162
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científico que presenta la opinión sustentada del hallazgos microscópicos. Consta de dos partes,
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de un comentario actualizado sobre la entidad que
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clínicos de enfermedades que destacan alguna
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conocimiento sobre un tema; incluye dos pecial de las mismas, con una revisión breve de
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4- Palabras clave:
___ De 6 a 10 por artículo en cada idioma.
___ Se incluyen las palabras clave en español e inglés (keywords), indexadas en los Descriptores
en Ciencias de la Salud (DeCS), http://decs.bvs.br/E/homepagee.html.
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___ Resúmenes: en español e inglés.
___ Materiales y métodos.
___ Resultados.
___ Discusión.
___ Agradecimientos.
___ Declaración de conflicto de intereses.
___ Fuente de financiación.
___ Referencias.
___ Cuadros y figuras con sus respectivas leyendas.
6- Figuras:
___ Se incluye cada una en página aparte.
___ Se incluyen las leyendas correspondientes en hoja aparte.
7- Cuadros:
___ Se adjuntan en hoja aparte, elaborados en el modelo más sencillo de tablas del programa
Word y las copias en impresora láser.
___ Se ordenan secuencialmente.
___ Se incluye el título correspondiente.
8- Fotografías:
___ Se adjuntan tres copias.
___ Se señala la identificación de la misma y la orientación al respaldo.
___ Se acompañan del correspondiente pie de foto en hoja aparte.
9- Referencias:
___ Las citas se numeran según orden de aparición en el texto.
___ Se ordenan secuencialmente y en el formato adecuado, tal y como lo indican las normas de
Biomédica en las instrucciones a los autores (http://www.icmje.org/index.html).
___ Cuando se citan referencias en los cuadros, éstas deben seguir el orden con el que se
venía en el texto.
10- Abreviaturas y siglas:
___ Se anota entre paréntesis después de la primera vez cuando debe aparecer en formacompleta
y en el idioma original.
11- Nomenclatura:
___ Los nombres de género y especie están escritos en letra cursiva.
___ Los nombres de microorganismos se escriben completos la primera vez que se citan, incluso
en el título y en el resumen, y luego se usa la solamente inicial del género y permanece el
nombre completo de la especie.
12- Consideraciones generales:
___ Carta firmada por todos los autores.
___ Incluye autorización del Comité de Ética para la experimentación en humanos.
___ Incluye autorización del Comité de Ética para la experimentación en animales.
___ Los autores deben certificarle al Comité Editorial que la (s) persona (s) mencionada (s) en los
agradecimientos tiene (n) conocimiento y está (n) de acuerdo con aparecer en ellos.
___ Todos los manuscritos deben incluir declaración de conflicto de intereses y fuente de
financiación.
___ Los decimales en español deben separarse de los enteros por comas, no por puntos.
___ Se envían los nombres de 4 evaluadores con sus respectivos datos.
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