Hematologa forense.

Tema 3
COMPOSICIN DE LA SANGRE:
La sangre consta de una parte lquida, el plasma sanguneo, en el que
se encuentran elementos formes (las clulas sanguneas) en
suspensin.
La sangre es de color rojo debido a la presencia de hemoglobina en
los hemates. Su viscosidad y su densidad estn relacionadas con la
cantidad de hemates y su presin osmtica, sobre todo, con su
contenido en protenas. Su pH se encuentra entre 7.35-7.45.
El volumen de sangre circulante o volemia es la cantidad total de
sangre que tiene un individuo y representa aproximadamente el 8%
del peso corporal (5.5 L en un hombre de 70 Kg y 250 ml en un
recin nacido que pese 3.2 Kg). Del volmen sanguneo total,
alrededor de 1 litro se encuentra en los pulmones, 3 litros en la
circulacin venosa sistmica y el litro restante se reparte entre el
corazn, las arterias sistmicas, las arteriolas y los capilares.
El plasma sanguneo es un lquido amarillento claro constituido por
un 95% de agua y el 5% restante por diversas sustancias en solucin
y suspensin. Estas sustancias incluyen: Iones minerales (sodio,
potasio, calcio, cloro, etc), pequeas molculas orgnicas
(aminocidos, cidos grasos y glucosa) y protenas plasmticas
(albminas, fibringeno....). En condiciones normales, las protenas
del plasma constituyen el 7-9% del plasma (6-8 g/100 ml),
destacando tres grandes grupos de protenas: albminas, globulinas y
factores de la coagulacin como el fibringeno y la protrombina.
Las albminas son las ms pequeas y abundantes y representan el
60% de las protenas del plasma. Las sintetiza el hgado y actan
como transportadoras de lpidos y hormonas esteroides en la sangre,
siendo responsables de la mayor parte de la presin osmtica
(presin onctica) que regula el paso de agua y solutos a travs de
los capilares.
Las globulinas representan el 40% de las protenas del plasma. Se
dividen en -globulinas, -globulinas y -globulinas. Las y globulinas se sintetizan en el hgado y transportan lpidos y vitaminas
liposolubles en la sangre. Las -globulinas (gammaglobulinas) son

anticuerpos producidos por las clulas plasmticas y resultan

fundamentales en la defensa del organismo frente a las infecciones.
El fibringeno es un importante factor de la coagulacin. Es
sintetizado por el hgado y representa el 2-4% de las protenas del
plasma.
Normalmente, la composicin del plasma se mantiene siempre
dentro de unos lmites seguros desde un punto de vista biolgico,
gracias a diversos mecanismos homeostticos (homeostasia =
equilibrio).
Distinguimos entre plasma y suero:
El plasma es la parte lquida de la sangre sin coagular.
El suero es el lquido sobrenadante que queda cuando la sangre
total se coagula, por lo que tiene una composicin similar a la del
plasma, aunque sin fibringeno ni otros factores de la coagulacin.
Existen 3 tipos de clulas en la sangre:
Glbulos rojos o eritrocitos o hemates
Glbulos blancos o leucocitos: Granulocitos o leucocitos granulares
(neutrfilos, eosinfilos y basfilos). Agranulocitos o leucocitos
agranulares (linfocitos y monocitos)
Plaquetas o trombocitos.

LA SANGRE EN EL LUGAR DE LOS HECHOS:

La bsqueda debe hacerse revisando cuidadosamente sobre el cuerpo
de la vctima, en el presunto victimario (si se lo ha capturado), el piso
del lugar (incluyendo uniones entre mosaicos); paredes y muebles; en
el arma (si es que hay una involucrada).
En todos estos casos se debe tener la precaucin de examinar desde
diferentes posiciones, variando el ngulo de visin y de iluminacin
(se recomienda el uso de linternas y fuentes alternativas de luz),
debido a que no siempre son plenamente visibles al simple examen
ocular, ya pueden quedar enmascaradas por el contraste con la
superficie que la contiene, ya por el intento de remocin para
encubrir un hecho delictivo.

Una vez sean localizadas, debe efectuarse una toma fotogrfica

flmica de las mismas, as como tambin una descripcin por escrito
consignando: color, forma, posicin relativa, direccin, cantidad
aproximada.
Determinacin de trayectoria: Esto es posible mediante el estudia
morfolgico de las manchas de proyeccin estas se pueden dividir en:
Estticas (cuando el cuerpo est quieto), las que seran gotas
propiamente dichas y dinmicas (cuando el cuerpo est en
movimiento), que reciben el nombre de salpicaduras.
En la escena deben buscarse manchas de sangre sobre la vctima,
sobre el acusado, en la ropa de ambos, instrumentos prendas, suelo.
En las armas blancas debe investigarse sangre en la unin de la hoja
con el mango en las uniones de los ladrillos
La determinacin del punto de origen es til de saber en la escena del
hecho, en los supuestos de grandes cantidades de manchas de
sangre por proyeccin, para determinar si tales indicios tienen un
nico origen no.

RECOLECCIN Y EMBALAJE DE LAS MUESTRAS

DE SANGRE:
El Dr. L. Rafael Moreno Gonzlez nos dice: La imprescindible proteccin y conservacin
del lugar de los hechos, debe entenderse como la piedra fundamental de la investigacin
criminalstica.
a). En el caso de encontrar sangre lquida en el lugar de los hechos, deber tomarse con
ayuda de una pipeta Pasteur o de un gotero y depositarla en un tubo de ensayo limpio y
seco, al que deber aadirse 1 ml de solucin salina estril por cada 5 ml de sangre.
b). Si no se encuentra sangre fresca, pero si cogulos, se tomarn stos con el extremo de
un aplicador de madera y se colocarn en el interior de un tubo de ensayo, procediendo
despus como en el caso anterior.
c). Si nicamente se localizaran manchas de sangre seca en objetos slidos se recolectara
en pequeos fragmentos de 2x2 cm de tela blanca y limpia libre de apresto, humedecidos
con solucin salina (0.85%). Tela que se colocar tambin en un tubo de ensayo, para su
envo al laboratorio. Con otro fragmento de tela, preparado de la misma forma, se tomar
una muestra de control de una zona del soporte no manchada con sangre.
d). Cuando las manchas se encuentran sobre cualquier tipo de tela, se recortarn
porciones respectivas de la muestra, as como un trozo de la misma tela problema que no
se encuentre maculado con sangre.

e). Si se trata de manchas sobre vegetales, stos se recortarn y se colocarn en el

interior de un sobre. Una porcin no manchada del vegetal ser tambin recogida en otro
sobre.
f). La sangre que se encuentre sobre tierra o arena deber recolectarse tomando un trozo
completo del soporte, el que se depositar cuidadosamente en una bolsa de plstico que
ser colocada en una caja de cartn. Tambin se tomar una muestra de tierra sin sangre
y se empacar por separado.
g). Si la muestra problema se encontrara impregnada en cabellos, stos se tomarn con
pinzas y se trasladarn al laboratorio dentro de pequeas bolsas de plstico.
h). Finalmente, manchas de sangre presentes sobre el cuerpo de la vctima, y de las que
se sospeche no pudieran ser originadas por su propia sangre, sern tomadas como se
describe en el punto tres. Adems se tomar sangre del cadver, con el fin de compararla
con la de las manchas.
Todas las muestras tomadas debern llevar etiquetas firmemente adheridas, en las que se
anotarn los datos concretos del caso:
Nmero de averiguacin o expediente.
Fecha y hora en que se levant la evidencia.
Sitio de donde se recolect.
Naturaleza presunta del indicio.
Nombre del investigador que realiz el levantamiento y embalaje.
Manchas in situ
Mancha: Toda modificacin de color, suciedad, visible o no, en una superficie, determinada
por el depsito de un producto lquido y a veces slido. (Gisbert)
Lugares donde es posible encontrar manchas de sangre:
Los vestidos de la vctima (anverso, reverso, puos, bolsillos, interior de las mangas,
costuras, repliegue subunqueal, etc)
Suelo
Paredes
Picaportes de puertas y ventanas
Barandilla de las escaleras
Tiradores
Armas
Bordes de las mesas
Agua de lavado
Cuarto de aseo
Zcalos
Cortinas
Linternas
Juntas de baldosines
Hay manchas que en determinadas circunstancias pueden asemejarse a la sangre, entre

ellas:
Las de herrumbre (color rojo-amarillento y a menudo rugosas)
Las producidas por algunos vegetales (jugo de ciertas plantas, suero de lamo blanco,
planta diente de len)
Las causadas por el sudor (dan la impresin de manchas de sangre lavadas)
Para la bsqueda de las manchas de sangre utilizaremos la iluminacin oblicua, la luz
artificial, incluso la fotografa con pantalla azul o con rayos infrarrojos para descubrir las
manchas lavadas.
Aspectos de las manchas
Es muy diverso, segn sean recientes o antiguas y segn tambin el soporte sobre el que
asientan. Si la gota de sangre ha cado sobre tela absorbente, los contornos parecen como
si estuviera sobre un papel secante porque el lquido penetra ms o menos rpidamente
en el tejido.
Si la mancha es fresca su color es rojo vivo, pero se oscurece progresivamente para pasar
al marrn y hacerse marrn negruzca cuando ya es algo vieja.
Si la mancha ha cado sobre tejidos oscuros, es ms difcil de distinguir, como es lgico,
que si cae sobre ropas claras, en cualquier caso y siempre que sea posible, para visualizar
perfectamente las manchas utilizaremos el Luminol, con el cual las manchas se harn
luminiscentes. Este reactivo tiene la ventaja de no interferir posteriormente reacciones
analticas.
Si la sangre ha cado sobre un objeto no absorbente, entonces se secara conservando las
formas caractersticas de la altura y la direccin de la proyeccin.
Las manchas pueden ser grandes o pequeas, incluso muy pequeas, reducidas a la
dimensin de puntos; como es evidente cuanto ms pequeas sean ms problemas nos
van a causar tanto para su localizacin como para su anlisis.

METODOLOGA GENERAL PARA LA INVESTIGACIN

CRIMINALSTICA DE LAS MANCHAS DE SANGRE:
Las manchas que se encuentran en objetos y/o personas, se analizan desde varios puntos
de vista: la bsqueda, la caracterizacin, e identificacin de la misma, es decir observar
paso a paso si la mancha es sangre o no, en primer lugar, luego de investigar si la mancha
es humana o no, posteriormente investigar su grupo sanguneo y finalmente realizar una
prueba de ADN, con lo cual ser completado el trabajo de la investigacin.
Como parte de la investigacin se habr de hacer la comparacin del ADN de las personas

sospechosas de un crimen o simplemente la comparacin para otros propsitos extra

judiciales.

TCNICAS
DE
ORIENTACIN
IDENTIFICACIN DE LA SANGRE:

PARA

LA

Tcnica de Bencidina o Adler

Fundamento qumico
Las peroxidasas sanguneas son catalasas que, como su nombre lo
indica, poseen actividad cataltica en las reacciones de oxidacin, ya
que tienen la propiedad de descomponer el perxido de hidrgeno u
otros perxidos orgnicos, produciendo la liberacin de radicales
oxhidrilo segn la siguiente reaccin:
El grupo hem de la hemoglobina posee esa actividad enzimtica, que
puede catalizar la ruptura del perxido de hidrgeno. Mientras no
estn presentes otras sustancias orgnicas oxidantes, esa actividad
de la hemoglobina, descompone el perxido de hidrgeno en agua y
oxgeno, que al reaccionar con la bencidina la oxidar formando un
compuesto intensamente azul.
Tcnica de la fenolftalena o de Kastle-Mayer
Fundamento qumico
Esencialmente la rige el mismo principio que se mencion en la
reaccin de Adler. La diferencia estriba:
a) La fenolftalena debe ser reducida previamente a fonolftalena
incolora y este reactivo, por su labilidad, debe ser guardado en
refrigeracin en frasco mbar.
b) Se trabaja en medio alcalino en vez de un medio cido.
c) Se efectuar un calentamiento previo a 100 C durante un minuto.
Se apuntar a continuacin el comportamiento de las peroxidasas
vegetales, que explicar el porqu de las modificaciones apuntadas:
a) Termolabilidad: Se ha confirmado que las peroxidasas vegetales se
inactivan por calentamiento a 100 C . A la misma temperatura las
peroxidasas de origen animal son estables. Un perodo de un minuto a
100 C servir para diferenciar una de otra.

b) Tiempo: Las peroxidasas de origen animal son muy estables, las

manchas de sangre humana dan resultados positivos an despus de
varios meses de haberse producido.
Cuando manchas de la misma edad pero de origen vegetal son
tratadas de esta manera, dan resultado negativo.
c) pH: las peroxidasas de las plantas reaccionan en medio cido, pero
no en medio alcalino. Por esta razn, sta tcnica. A pesar de esto
debe efectuarse pruebas testigo sin aadir agua oxigenada a
muestras previamente calentadas.

Tcnica de leuco malaquita verde

Fundamento qumico
Se basa, al igual que las anteriores en una reaccin de oxidacin y
reduccin. La estructura qumica de esta sustancia recuerda a la de la
fenolftalena. El prefijo leuco se refiere a la forma reducida incolora; la
forma leuco puede ser preparada por reduccin de la malaquita
verde.
Como en el caso de la fenolftalena, la forma leuco puede ser oxidada
por la accin de las peroxidasas para dar la forma oxidada verde. Esta
tcnica fue reportada por Hunt, quien seala la encontr ms
confiable para sangre, aunque menos sensible que la bencidina.
Tcnicas espectroscpicas
Estas tcnicas permiten poner de manifiesto, mediante espectros de
absorcin, la presencia de hemoglobina y/o de alguno de sus
derivados, en manchas de sangre.
La hemoglobina, diluida en agua (oxihemoglobina) tiene dos bandas
de absorcin en la zona del espectro visible cuyos mximos se
encuentran a 575 y 540 nm respectivamente; as como la banda de
Soret, tpica de los derivados porfirnicos, prxima a la regin del
ultravioleta, que para la hemoglobina se encuentra a 412 nm siendo
esta banda mucho ms ancha que las dos primeras.

Tcnica de luminol
El luminol es el 3 amino-ftalhidracina y el reactivo se prepara de la
siguiente manera, en el momento de utilizarse:

Solucin A. Luminol 0.1 gr.

Carbonato de sodio 1 gr.
Agua destilada c.b.p. 100 ml.
Solucin B. Hidracina hidratada al 95% 01 gr.
Agua destilada 100 partes

a) Al ml de la solucin A, se aade una gota de agua oxigenada e

inmediatamente despus, 2 gotas de la solucin B;
b) Se espera un minuto y la mezcla se asperje sobre la zona
sospechosa.
c) En caso positivo, las manchas de sangre producen luminiscencia.
Como reactivo, no altera la mancha, se puede continuar con la
metodologa normal.

TCNICAS DE CONFIRMACIN
Cristales de hemina o de Teichman
Fundamento qumico
La hemoglobina, cuando es tratada con cido actico, se separa
inmediatamente de las protenas y del grupo prosttico. Durante la
hidrlisis la globulina se desnaturaliza.
La oxidacin del fierro del grupo hem se efecta ms rpidamente en
medio cido que en medio alcalino. Si est presente un halgeno
inorgnico como el cloro, se formarn cristales insolubles de cloruro
de ferriprotoporfirina o hemina.

Prueba de Takayama (hemocromgeno)

Fundamento qumico
Tanto la ferroprotoporfirina como la ferriprotoporfirina tienen la
propiedad de combinarse con otros compuestos nitrogenados por
medio de la globulina.
Tales compuestos incluyen otras protenas, hidrxido de amonio,
cianuro, nicotina y piridina y los productos resultados se llaman

hemocromgenos. Los cristales pueden formarse tanto en medio

cido como alcalino; sin embargo, el reactivo de Takayama es de
naturaleza alcalina.

Mecanismo de reaccin:
El hidrxido de sodio efecta una hidrlisis alcalina, liberando el grupo
prosttico de la globina; el fierro del hem en este momento se
encuentra como in frrico (+3) debido a la formacin de la
metahemoglobina en el proceso de desecacin de la mancha de
sangre. La carga (+3) del fierro se neutraliza por el in OH.
Calentando la glucosa (a azcar reducida), se reduce el in frrico a
ferroso (+2) y la piridina se combina con ste para formar un
producto
cristalino
insoluble:
el
hemocromgeno
o
piridinferroprotoporfirina.
La prueba es ms sensible y sencilla que la de los cristales de hemina
y no se dan casos de falsas reacciones positivas.

TCNICAS DE DETERMINACIN DEL ORIGEN DE

LA SANGRE:
La tcnica de eleccin para determinar si una mancha de sangre es
de origen humano, es la reaccin de las precipitinas descubierta en
1900 por Uhlenhuth.
Fundamento de la tcnica
Las molculas del anticuerpo (inminoglobulina) reacciona con el
antgeno (protena soluble) para formar un precipitado fcilmente
visible bajo condiciones de luz apropiadas y a las concentraciones
equivalentes de antgeno y de anticuerpo. La tcnica de precipitinas
en tubo o en capilar, tiene la ventaja de ser rpida y sencilla pero es
necesario tener una muestra clara. En ella debe efectuarse una
cuidadosa estratificacin en donde la capa de la solucin del antgeno
se encuentra sobre la preparacin del anticuerpo. La precipitacin
sobre gel tiene una ventaja de poder realizarse con el extracto de una
mancha de sangre aunque ste sea turbio, y requiere de muy
pequea cantidad de muestra, pero tiene como desventaja el emplear
varias horas para que se efecte la difusin.
La tcnica

electrofortica, tiene la ventaja de acelerar la difusin sobre el gel y

por lo tanto disminuye el tiempo de reaccin adems de ser ms
sensible que las otras tcnicas, pero requiere de un equipo ms
costoso.

Factores que afectan la reaccin de las precipitinas.

Son varios: la edad de la muestra; su exposicin al aire, a la luz solar,
a la humedad y a las altas temperaturas; el grado de putrefaccin y la
contaminacin con compuestos qumicos, tales como detergentes.

TCNICA
CRUZADA
HUMANA:

DE
PARA

INMUNOELECTROFORESIS
IDENTIFICAR
SANGRE

Fundamento
Esta tcnica inmunoqumica se basa en las reacciones que se
efectan entre un antgeno que emigra andicamente y un anticuerpo
que emigra hacia el ctodo 20durante una electroforesis. Sobre una
placa de agarosa, se hacen horadaciones en pares; el antgeno
(seroalbminas y alfa y beta globulinas) se coloca en una de ellas y el
anticuerpo (gamma globulinas) en la otra; una vez terminada la
electroforesis aparecen bandas visibles de precipitacin entre las
perforaciones pares de los materiales protenicos especficos.
Material y equipo
a) Cmara de electroforesis
b) Fuente de poder con control de voltaje hasta 500 v, 20 ma y
control de tiempo.
c) Puentes de papel filtro u otro material absorbente.
d) Perforador y extractor de gel aproximadamente 2 mm de dimetro.
e) Micropipetas graduadas
f) Portaobjetos desgrasados y pulidos.
Reactivos:
a) Suero antihumano completo

b) Agar
c) cido dietilbarbitrico
d) Barbital sdico
e) Lactato de calcio

DETERMINACIN DEL GRUPO SANGUNEO EN

SANGRE FRESCA Y MANCHAS DE SANGRE:
Recoleccin y preparacin de las muestras sujetas a estudio.
En personas vivas.
a) Tomar 5 ml de sangre venosa con una jeringa estril y seca
b) Separar el suero por centrifugacin
c) Hacer una suspensin del paquete globular al 2% en el propio
suero de la muestra tomada, para trabajar en tubo de ensayo y al 5%
para determinaciones en placa.
En cadveres.
a) Tomar 5 ml de sangre de una arteria o vaso grueso, o bien de la
cavidad cardiaca teniendo cuidado de que no se contamine con tejido
adiposo
b) Separar el paquete globular por centrifugacin
c) Lavar el paquete globular3. tres veces con solucin salina fra,
fresca y estril
d) Hacer una suspensin de esos glbulos al 2% en solucin salina
para determinaciones en tubo y al 5% cuando se utilice placa

En cogulos
a) Exprimir cuidadosamente el cogulo contra las paredes de un tubo
de ensayo de 13
X 100, apoyndonos con un aplicador de madera
b) Lavar lo extrado tres veces con solucin salina

c) Por ltimo, hacer suspensiones al igual que los casos anteriores

Mancha por Chorro: es el patrn que resulta del flujo de la sangre que
sale del cuerpo a una presin baja, formando un charco de sangre.
Patrn de goteo sobre sangre: Es el patrn que resulta del gotereo de
sangre en sangre.
Lanzamiento: El patrn de la mancha creada cuando la sangre es
sacudida o tirada a una superficie u objeto, en movimiento.
Patrn Arterial o de Chorro: El patrn de la mancha que resulta
cuando la sangre sale del cuerpo, bajo una presin ejercida, causada
por el rompimiento de una arteria.
Manchas circulares: Las manchas o gotas que se encuentran en
superficies horizontales son de forma circular, dependiendo de la
altura desde donde caen.
A mayor altura, el impacto puede ocasionar que se proyecten en
forma de estrellas. (Brian Innes, 2000, Bodies of Evidence)

CARACTERSTICAS MORFOLGICAS
MANCHAS DE SANGRE:

DE

LAS

Las formas y figuras pueden variar en tamao y caractersticas

morfolgicas, debido a la cantidad, calidad, origen, dimensin,
profundidad y longitud de la lesin. (Montiel)

Huellas que gotean sobre un plano inclinado, sin que la persona tenga
movimiento, se presentan ovaladas y alargadas con escurrimientos
largos en la parte inferior. Son manchas estticas. (Montiel)

Las huellas que caen en un plano horizontal cuando el movimiento es

rpido se presentan en forma de lgrimas, con una sola estra o
alargamiento, que indica la direccin del movimiento. Se conocen
como manchas dinmicas.

Las manchas producidas por un goteo ininterrumpido sobre un plano

horizontal presentan un rastro de sangre en forma de franjas
desplazndose estras en los lados, que segn su direccin indican
movimiento. (bloodspatter.com)

MANCHAS DE SEMEN:
COMPONENTES DEL SEMEN:
El sustrato para la coagulacin del semen est constituido por
material proteinoide secretado por las vesculas seminales; en tanto
que las enzimas licuantes (fibrolisina y fibrogenasa) solo hacen
contacto con el sustrato durante la eyaculacin.

Contiene hormonas, fructosa, fosfatasa cida y alcalina, espermita,

colina, ergotionena, cido ctrico, lpidos, protenas, hilauronidasa,
prostglandina, ribosa, inositol, sorbitol, flavinas, aminas, albmina,
alfa, gamma y beta globulinas, lecitina, cidos grasos, fosforilcolina,
zinc, calcio y antgeno soluble de grupo sanguneo.
Las sustancias del grupo ABO solubles en agua, est presente de los
individuos excretores (aproximadamente el 85% de la poblacin en
Mxico) y pueden determinarse por el mtodo de absorcin inhibicin,
ya que se encuentran en grandes concentraciones en esos individuos.

LEVANTAMIENTO Y EMBALAJE
Las prendas deben colocarse en bolsas de papel, en forma separada.
Si se encuentran hmedas, deben secarse a la temperatura
ambiente; en ningn caso usar calor.
En otras oportunidades, se solicita el anlisis de exudados vaginales o
rectales de la vctima y de trulas con esos mismos materiales
extrados por mdicos legistas o forenses. Estas muestras deben ser
colocadas en tubos de ensayo convenientemente sellados y estriles
(para evitar putrefaccin y contaminacin bacteriana).
Si las machas se encuentran sobre soportes no transportables
(colchones, tapices, etc.), se proceder a recortar muy
cuidadosamente la mancha, ya que al secarse toma una consistencia
apergaminada fcilmente desprendible. Este problema se agudiza
sobre soportes no absorbentes donde forma una pelcula o escamas
brillosas, desprendibles al tacto.
Fluidos biolgicos en estado seco (manchas)
Determinar tipo de soporte
Transportable * se traslada al laboratorio en el soporte en el que se
encuentre
No transportable (se toma la muestra en alguna de las formas)
* Frotando la superficie de la mancha con un hisopo humedecido con agua
estril, y deber dejarse secar antes de guardar en bola de papel.
* Si recupera a travs de un raspado con esptula, el polvo obtenido deber
guardarse en un contenedor.

INVESTIGACION DE ESPERMATOZOIDES:

El liquido espermtico contiene usualmente de 70 a 150 millones por

mililitro.
El espermatozoide humano esta formado por: una cabeza de forma
uval que mide 4.6x2.6x1.5 micras; una pieza intermedia que contiene
las mitocondrias y una cola formada por nueve filamentos que rodean
a otros dos centrales. En los animales, la cabeza tiene diferentes
formas y dimensiones. Las cuantas espermticas por debajo de 50
millones por mililitros, se consideran infrtiles.
Debido a las bacterias atacan su tallo primeramente en las muestras
contaminadas se hace difcil su identificacin. Mondragn refiere que
el promedio de vida es de 4 a 6 das de vida en las trompas y tero de
la vagina; en la cavidad anal no sobrepasan las 12 horas de vida.

TCNICA DE TINCIN DE GRAM:

Por este procedimiento la cabeza se tie de color rosa y el cuerpo
medio y el tallo se observan de color azul 19.1 Preparacin de los
reactivos a) Colorante de Cristal violeta Solucin A 2 g de cristal
violeta + 20 ml de alcohol etlico absoluto Solucin B 0.8 g de
oxalato de amonio + 80 ml de agua destilada Mezclar las soluciones A
y B. Envasar en frasco gotero color mbar. b) Solucin iodo iodurada
(lugol) 1 g de iodo metlico + 2 g de ioduro de potasio + 300 ml de
agua destilada Diluir 1:15 en agua destilada antes de usarla c)
Decolorante Alcohol etlico absoluto 95% d) Colorante de safranina
10 ml de safranina (2.5% en alcohol etlico) + 100 ml de agua
destilada 19.2
Procedimiento
El frotis o una gota de suspensin problema se secan ligeramente al
calor del mechero o bien, con metanol
a) Aadir el reactivo de cristal violeta hasta cubrir la muestra y
dejarlo actuar durante un minuto
b) Lavar con agua destilada
c) Cubrir nuevamente el portaobjetos con la solucin
b) durante un minuto, tirar el exceso de lugol y decolorar con
agitacin usando el reactivo
c) durante 30 segundos

d) Secar con papel filtro y cubrir la preparacin con el reactivo d),

dejarlo actuar de 10 a 30 segundos
e) Lavar con agua destilada y observar al microscopio con aceite de
inmersin y el objetivo correspondiente
Interpretacin Las clulas espermticas aparecern teidas: la cabeza
de color rosa y el resto del cuerpo y cola azules.
Tincin de christmas tree:
Preparacin de colorantes Colorante rojo rpido nuclear 50 mg de
colorante rojo rpido nuclear + 2.5 g de sulfato de aluminio + 100 ml
de agua destilada
Calentar a ebullicin los 100 ml de agua destilada y disolver en ellos
el sulfato de aluminio, adicionar el colorante rojo rpido nuclear,
mezclar con agitador mecnico hasta disolver completamente.
Enfriar y almacenar en papel watham #1. Almacenar en frasco gotero
mbar a una temperatura entre 2 y 8 C Colorante de ndigo carmn
1.3 g de cido pcrico + 0.23 g de ndigo carmn + 100 ml de agua
destilada
Disolver el cido pcrico en los 100 ml de agua, aadir el ndigo
carmn, mezclar perfectamente con agitador mecnico. Guardar en
frasco gotero mbar.

CARACTERSTICAS
MICROSCPICAS
ESPERMATOZOIDE (DIBUJO):

DEL

PRUEBAS
PRESUNTIVAS
IDENTIFICACION Y TCNICAS
MANCHA DE SEMEN:

PARA
QUMICAS

LA
DE

Pruebas de Orientacin
Las pruebas de orientacin tienen mayor utilidad
cuando se trata de localizar el vestigio entre las
ropas de la vctima, en superficies grandes tales
como sbanas, mantas o entre manchas dubitadas
recogidas del lugar de los hechos. El papel de una
prueba de orientacin recae ms en su habilidad
para descartar la presencia de semen en una
mancha cuestionada que en la de indicar la
presencia de semen. Es necesario un examen visual
exhaustivo y minucioso de las distintas prendas.
Una de las tcnicas que se utiliza es:

Luz ultravioleta: Bajo la accin de radiaciones

ultravioletas, las manchas de semen presentan una
fluorescencia directa que si bien no es especfica,
pues existen otros materiales que producen similar
efecto, constituyen un recurso til, para localizar
manchas sospechosas.
Fosfatasa cida: Es una enzima fosfomonoesterasa
no especfica, se encuentra en niveles altos en el
semen, proviene de las clulas epiteliales de la
glndula prosttica. El nivel de la actividad de la
fosfatasa cida es 500 a 1000 veces ms alta en el
semen humano que en otros fluidos o secreciones
corporales (Gutman AB & Gutman EB., 1941). La
deteccin de la fuerte actividad de
la fosfatasa cida es considerada como un rpido y
confiable indicador de la presencia de semen
(Sensabaugh GF., 1979; Riisfeldt O., 1996).

Pruebas Microscpicas
El mtodo ms utilizado actualmente, es la
observacin de espermatozoides al microscopio. Se
han detectado espermatozoides mviles en lquido
de lavado vaginal hasta 24 horas despus de la
violacin e inmviles 100 das despus de ocurrido
el hecho en manchas secas.
Otros mtodos
Electroforticos: E. Villanueva y J.A. Gisbert-Calbuig,
proponen mtodo bidimensional sobre papel,
combinacin de electroforesis y cromatografa, lo

que permite separar la espermina de los

aminocidos del semen y obtener una separacin
sumamente interesante de estos ltimos, que puede
considerarse
de
relevante
valor
para
la
identificacin de dicho humor.
Mtodos enzimticos: el esperma tiene una elevada
cantidad de fosfatasa acida, no hallada hasta ahora
en ningn otro material orgnico natural sea animal
o vegetal. La fosfatasa cida prosttica produce la
hidrlisis de la fosforil colina en cido fosfrico y
colina. Esta enzima acta entre un pH 4.5 5.