Centro Universitrio de Braslia

Faculdade de Cincias da Educao e Sade

Graduao em Biomedicina

Roberta Monteiro e Silva de Barcellos

ESTGIO DE HEMATOLOGIA
Professor orientador: Milton Junior

Braslia, Setembro 2016.

Sumrio

Hemoglobina
Hematcrito
Hemcia
VHS
Leuccitos
Reticulcitos
Plaqueta
Falcizao
Contagem de reticulocitos
Tipagem sanguinea

Dosagem de Hemoglobina
Introduo do exame
O mtodo utilizado para a dosagem de hemoglobina o cianometaglobina, do qual
utiliza o liquido de Drabkin. A amostra de sangue e adicionada ao liquido de Drabkin do
qual e hemolizada e a hemoglobina livre e transformada em metaglobolina que em
reao ao cianeto de potssio, transforma-se em cianometamoglobina, composto estvel
que absorve luz.
Metodologia
O sangue misturado com uma soluo de cianeto e ferrocianeto, que oxida o ferro da
hemoglobina, transformando em metamoglobina e junto com a ao do cianeto forma
cianometemoglonia, cuja cor medida em fotocolorimetricamente. Calcula-se um fator
determinado a absorvncia de 0,02mL do padro em 5mL da soluo de cianeto, por meio da
formula:
Fator= concentrao do padro/absorvncia do padro
Para o estudo, o sangue diludo do mesmo feito com o padro (0,02mL para 5mL de reagente)
fornecendo outro valor de absorvancia, que multiplicando pelo fator d g% de hemoglobina
nesta amostra.
Materiais
- Reativo de cor
- Pipeta semi automtica
-Espectofotometro
- Agua destilada
- Amostra sangunea.
Valor de referencia
Tcnica
- Identificar os tubos de ensaio e adicionar 5 ml do reagente
- Pipetar 20 L de sangue no tubo de ensaio com o reagente
- Homogeneizar por 3 min
- Ler a absorbncia no espectrofotmetro em 540 nm, zerando o aparelho com o branco (gua
destilada)
- Fazer o calculo com os resultados obtidos
Valores de Referncia:
Homens- 90 a 100% ou 1,5 a 17,3 g% de hemoglobina
Mulheres- 80 a 90%ou 13,8 a15,5 g% de hemoglobina
Mdia normal- 90% ou 13,5g% de hemoglobina

 Resultados
Paciente: Leni Sala
Data de nascimento: 02/06/1940
Fc = 14,7/0,451 = 32,59 x 0,463 = 15,08
(normal)
Paciente: Bianca Lima de Oliveira
Data de nascimento: 11/11/1981
Fc = 14,7/0,451 = 32,59 x 0,438 = 14,27
(normal)

Resultados
Hemoglobina:
P Jos : 0,888

R: 0,461

P Reyner: 0,465

R: 0,482

Hematcrito:
P: 50%
P: 40%

Leuccito:
P: 7x20x10/4 = 350x50=17.500
VHS
P = O
P = 2

Hemcias:
P: 48+42+47+42+41=220
P: 21+27+18+20+15=101

Plaquetas:
P: 56+62+52+38+23+51= 282
P: 29+98+35+27+27= 216
Resultados
Paciente: Carol
ABO: AB
RH : +

Paciente: Renata
ABO: B
RH: +

Paciente: Lucas G.
ABO: O
RH: -

Dosagem de Hematcrito
Introduo do exame
Hematcrito o volume de hemcias expressa como porcentagem do volume de uma
amostra de sangue total, ou seja, milmetros de hemcias por decilitro de sangue.
Aparelho de alta rotao com forca centrifuga de aproximadamente 15 000g fornecem
aps 3 a 4 minutos, sedimentao constante para o volume hematcrito.. Tem maiores
aplicaes em pediatria e medicina de urgncia.
Materiais
-tubo capilar para microhematcrito/ tubos de 1x75mm heparinizados ou no.
- sangue total com EDTA
- Escala para leitura
- lamparina ou bico de Bunsen ou massa de modelar
- Centrfuga de microhematcrito
- Papel filtro ou algodo
Metodologia
Preencher um tubo capilar com sangue total, at cerca de 2/3 do seu comprimento.
Limpar a parede externa do tubo capilar com um papel absorvente.
Vedar a extremidade vazia (limpa) com uma massinha ou fech-la no calor.
Colocar o tubo capilar na centrfuga de microhematcrito com a parte vedada voltada para fora,
equilibrando-o com outro tubo.
Tampar a centrfuga.
Centrifugar durante 5 minutos numa velocidade de 3.500 RPM ou superior.
Fazer a leitura do resultado, utilizando a tabela prpria para microhematcrito.
O menisco inferior (hemcias) deve coincidir com a linha zero e o menisco superior (plasma)
deve coincidir com a linha cem. A leitura feita onde ocorre separao entre as duas fases
(interface).
Valor de referencias.
Homem: 47 a 54%
Mulher: 37 a 47%
Rn: 44 a 64%

Contagem de Hemcias
Introduo do exame
Consiste na determinao do nmero de hemcias por 1 mm de sangue. O sangue diluidora
proporo de 1.200 com o liquido diluidor isotnico contendo um fixador para a conservao da
forma celular. A densidade apropriada impede a sedimentao rpida das hemcias.

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9-

Material:
Sangue colhido por puno venosa em EDTA
Pipeta graduada de 5 ml
Pipeta de hemoglobina com bocal
Frasco tipo penicilina com tampa de borracha
Papel de filtro ou algodo
Cmara de Neubauer para contagem de glbulos.
Conta gota ou tubo capilar
Microscpio
Procedimento:
1 Pipetar 4,0 ml do liquido diluidor no frasco tipo penicilina
2- Com a pipeta de hemoglobina medir 0,02 ml de sangue. Limpar sua parede externa com
papel de filtro e acertar exatamente o volume.
3- Transferir os 0,02 ml de sangue para o frasco com liquido diluidor, lavando com ele o
interior da pipeta por aspirao e expulso do liquido. A diluio de 1:200.
4- Agitar suavemente por inverso dois minutos, no mnimo.
5- Com o conta-gotas encher os retculos da cmara de contagem, evitando o excesso de
liquido e bolhas de ar sob a lamnula aderida firmemente a cmara, por compresso daquela
sobre esta, cobrindo ambos os retculos.
6- Deixar repousar por cinco minutos para sedimentao dos glbulos
7- Focalizar a preparao com pequeno aumento no microscpio para localizar o reticulo e
observar a distribuio uniforme das hemcias. Observar, ento, com o aumento de 100x ou
400x, conforme necessidade.
Fazer a contagem de todas as hemcias encontradas nos quadros marcados H na figura
relativa ao reticulo de Neubauer, ou seja, 1/5 de mm.

Clculos:
Hemcias por mm de sangue = H.c x5 x10 x 200
Ou seja: nmero de hemcias contadas em 1/5 de mm x 10.000
H.c = nmero de hemcias contada em 1/5 de mm
5 = fator de converso para 1 mm
10 = fator de converso para 1 mm
200 = fato de converso da diluio.
O erro permitido varia entre 200.000 a 300.000 hemcias por milmetro cbico de sangue, ou
em torno de 12% quando a contagem feita vrias vezes na mesma preparao.
Valores normais:
Homens - 4.500.000 a 6.000.000 por mm de sangue
Mulheres 4.000.00 a 5.500.000 por mm de sangue
Recm Nascidos 5.500.000 a 7.000.000 por mm de sangue
7

A determinao da hemoglobina e hematcrito so mais utilizveis que a contagem de hemcias

mais demorada e sujeita a erro maior. Esta til, no entanto, na determinao dos ndices
hematmtricos.
1-Fisiologicas
Corresponde a uma oscilao de at +- 5% em torno dos valores normais.
2- Anemias
Bastante comuns na prtica mdica e caracterizadas por uma reduo do nmero de hemcias.
Associam-se com frequncia alteraes da morfologia das hemcias e baixa concentrao de
hemoglobina. Em casos extremos estes valores alcanam cifras de 800.000 hemcias/mm, 3g%
de hemoglobina e 8% de hematcrito.
As anemias so sempre secundrias. Existe uma doena que as produz e no se justifica tratar
anemia mas a sua causa ou etiologia. Conhecendo-se as alteraes das hemcias ou a
classificaes morfolgicas pode, muitas vezes, conhecer a etiologia.
3- Policitemias ou poliglobulias
Correspondem a um aumento do numero de hemcias, onde o denominador comum
frequentemente a hipxia, com mecanismo compensador, aumentando o nmero, como nas
doenas cardacas e pulmonares crnicas.

Contagem de VHS (Hemossedimentao)

A hemossedimentao mede a estabilidade da suspenso de hemcias no plasma que, por ser

menos denso, favorece a sedimentao dos glbulos pela ao da gravidade, quando colocamos
numa pipeta graduada de 0 a 200 mm com 2,5 mm de dimetro interno e 1 ml de capacidade.
Inicialmente ocorre a queda individual das hemcias, seguida pela agregao dos glbulos com
formao de rouleaux e aumento da velocidade de hemossedimentao que se torna constante
para diminuir numa fase final quando os glbulos se concentram na poro inferior da pipeta.
Material:
1. Material para puno venosa.
2. Frascos tipo penicilina
3. Aparelho de Westergren: suporte e pipetas.
4. Relgio.
Procedimento:
1. Colher 5 ml de sangue do paciente em jejum, pela manh. No apertas demasiadamente o
garrote, evitando estase venosa. Na mulher, fora do perodo menstrual.
2. Colocar o sangue em um frasco tipo penicilina e diluir com 0,5 Ml NaCl 0,9% e 2 Ml de
sangue.
3. Com a pipeta de Westergren aspirar sangue at exatamente marca zero.
4. Colocar a pipeta no suporte de modo a permanecer na posio vertical.
5. Marcar o tempo.
6. Fazer a leitura em milmetros aps uma e duas horas ao nvel de separao do plasma e
hemcias. Nas reticulocitoses, pode haver uma impreciso do limite de sedimentao,
dificultando a leitura exata.
Os valores normais so:
Homens: 3 a 5 mm (aps 1 hora) e 7 a 15 mm (aps 2 horas).
Mulheres: 4 a 7 mm (aps 1 hora) e 12 a 17 mm (aps 2 horas).
Crianas: 4 a 7 mm (aps 1 hora) e 12 a 17 mm (aps 2 horas).

Contagem de Leuccitos

O sangue diludo com um fluido que cause a hemlise dos eritrcitos, mas que no
tenha efeito sobre os leuccitos e core os ncleos pelo azul de metileno ou violeta de genciana.
Lquido de Turk - Composio
cido actico Lisa as hemcias
Azul de Metileno ou Violeta de Genciana Cora os ncleos dos leuccitos
A diluio recomendada de 1/20. Vrios livros e tcnicas falam para diluir 20L de
sangue em 400L de lquido, que na verdade d uma diluio de 1/21 (volume final de 420L).
O fator da diluio ser utilizado nos clculos mais na frente. Para o fator da diluio ser 20, a
diluio deveria ser 20L de sangue em 380L de lquido (volume final de 400L).

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Com uma pipeta encher os retculos da cmara de Neubauer, evitando

excesso de lquido e bolhas de ar sob a lamnula, aderida firmemente cmara por
compresso daquela sobre esta, cobrindo ambos os retculos.
Focalizar a preparao em pequeno aumento no microscpio para localizar o retculo e
observar a distribuio uniforme dos leuccitos. Em seguida, observar com aumento de
100x e 400x conforme a necessidade.
Fazer a contagem de todos os leuccitos encontrados nos quatro quadrantes da cmara
de Neubauer, ou seja, 4 mm. Veja a figura abaixo.

Onde:

Lc = nmero de leuccitos contados nos 4 quadrantes;

10 = fator de converso para l;

21 = fator de converso da diluio;

4 = fator de converso para 1 l.

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Objetivos: determinar infeco ou inflamao, determinar a necessidade de testes adicionais,

como, por exemplo, o diferencial de leuccitos ou a bipsia de medula ssea, monitorar a
resposta quimioterapia, radioterapia ou outros tipos de terapia.
Valores de referncia: a contagem de leuccitos varia de 4.000 a 10.000/ml.
Interpretao:
Uma contagem elevada de leuccitos (leucocitose) com freqncia assinala uma
infeco, como, por exemplo, um abscesso, meningite, apendicite ou amigdalite. Uma contagem
alta de leuccitos pode tambm resultar de leucemia e necrose tecidual devido queimaduras,
infarto do miocrdio ou gangrena.
Uma contagem diminuda de leuccitos (leucopenia) indica depresso da medula ssea,
que pode resultar de infeces virais ou de reaes txicas, como, por exemplo, as que
acompanham o tratamento com antineoplsicos, ingesto de mercrio ou outros metais pesados,
ou exposio ao benzeno ou arsnicos. J a leucopenia caracteristicamente acompanha
influenza, febre tifide, sarampo, hepatite infecciosa, mononucleose e rubola.

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Contagem de Reticulcitos
Os reticulcitos so os precursores das hemcias. Contem no seu interior material reticular, que
no apresenta afinidade pelos corantes comuns. Sua demonstrao feita por colorao supra
virtual. Os reticulcitos presentes no sangue retirado do organismo sofrem morte somtica,
sendo, porm, corados antes que toda atividade vital seja extinta. O corante usado o azul de
cresil brilhante, associado a um anticoagulante e um preservativo.
Material:
1. Sangue colhido por puno venosa em EDTA.
2. Tubo de ensaio de 12X75 mm.
3. Laminas para microscopia.
4. Conta- gotas ou tubo capilar.
5. Banho Maria a 37C.
6. Microscpio.
7. leo para imerso.
O corante contm azul de cresil brilhante (1,0 g), citrato de sdio (0,4 g) e cloreto de sdio
0,85% em gua q.s.p. (100,0 mL).
Procedimento:
1. No tubo de hemlise, colocar 2 a 3 gotas da soluo corante.
Em seguida, acrescentar 2 a 3 gotas do sangue colhido por puno digital ou em
anticoagulante.
2. Misturar e colocar em banho-maria a 37C durante quinze a vinte minutos.
3. Retirar do banho-maria. Misturar novamente e fazer esfregao da maneira usual.
4. Secar e examinar ao microscpio sob imerso.
5. Contar mil hemcias, em vrios campos microscpicos, anotando em porcentagem ou nmero
absoluto.
6. Opcionalmente pode-se fazer colorao de fundo por Giemsa.
Os clculos so feitos das seguintes formas:

Reticulcitos por 1000 hemcias

10

= % de reticulcitos ou

Hm
sangue
mm3 de
= reticulcitos/ mm de sangue.
100

de reticulcitos X

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 Valores normais so:

Adulto - 0,5 a 1,5% ou 25.000 a 75.000/ mm.
Gravidez

- aumentado.

Recm-nascido - at 10%.

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PLAQUETAS
Introduo:
As plaquetas so contadas por mtodos diretos e indiretos. Nos mtodos diretos elas so
visualizadas em uma diluio do sangue e contadas na camarade Neubauer atravs de
microscopia comum ou de contraste de fase.
No mtodo indireto de Fonio, plaquetas e hemcias so contadas simultaneamente no mesmo
esfregao. Depois faz o relacionamento entre a contagem e o nmero de hemcias por mm de
sangue obtido, a parte, pelo hemocitometro. Este mtodo fornece contagens um pouco mais
altas que os diretos.
O mtodo mais divulgado o Rus-Ecker, comparado avaliao de numero de plaquetas pelo
esfregao corado, especialmente nos casos de contagens anormais, baixas ou elevadas e
relacionado ainda a historia clinica do paciente, tempo de sangria, retrao do coagulo e prova
de resistncia capilar.

1.
2.
3.
4.
5.

Materiais:
Sangue
Camara de Neubauer
Soluo diluidora
Papel filtro ou algodo
Placa de Petri

A soluo diluidora composta por citrato de sdio, formol a 40%, azul de Cresil brilhante e
gua destilada.
Procedimento:
1. Pipetar 4,0 ml da soluo diluidora no frasco tipo penicila
2. Com a pipeta de hemoglobina medir 0,02 ml de sangueem EDTA. Limpar sua parede
externa com papel de filtro e acertar exatamente o volume.
3. Transferir os 0,02 ml de sangue para o frasco com soluo diluidora, lavando com ele o
interior da pipeta por aspirao e expulso do liquido. A diluio de 1:200.
4. Agitar no mnimo por 2 minutos
5. Encher os retculos da cmara de contagem
6. Sedimentar as plaquetas, repousando a preparao de 15 minutos em uma placa de
Petri, contendo pedao de algodo umedecido em agua (cmera mida) e em local
isento de vibraes.
7. Fazer a contagem microscpica com aumento de 400x em1/5 de mm conforme
indicado para as hemcias.

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FALCIZAO
um teste apenas qualitativo que indica, quando positivo, a presena de Hb S nos eritrcitos,
sem caracterizar genotipicamente. Sua sensibilidade depende de vrios fatores como o tipo de
agente redutor, tempo de reao, temperatura, umidade, vedao, presena quantitativa de Hb S
e Hb Fetal.
Sob baixa tenso do oxignio,os eritrcitos contendo hemoglobina S, tomam a forma
caracterstica de foice. O mterabissulfito de sdio reduz a tenso de oxignio. Quando uma
soluo demetaissulfito adicionada ao sangue total, e esta mistura vedada entre a lamina e a
lamnula por meio de esmalte, os eritrocutos contendo Hb S se deformam, aps algumas horas
de repouso.
Material:
1. Microscopio
2. Laminas e lamnulas
3. Micropipetas de 10uL e 50uL
4. Placa de Petri
5. Esmalte
6. Material para puno venosa
7. Reagente composto por soluo de metaissulfito de sdio a 2%
Procedimento:
1. Colocar em um tuno de 50uL de sangue total + 100uL de soluo fisiolgica 0,9% ,
misturar por inverso e adicionar 100uL de metabissulfito de sdio a 2%. Mistura
por inverso.
2. Colocar na lamina de microscopia 10 a 20 uL da mistura e espalhar porum espao
de 4cm.
3. Cobrir a preparao com a lamnula e vedar os quatros lados com esmalte.
Conservar a preparao em cmera mida (Placas de Petri com algodo embebido
com agua).
4. Examinar em microscpio com objetiva 10 ou 40x, aps 1 ora, 2 oras, 6 horas, 12
horas e 24 horas.

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Tipagem Sangunea

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