You are on page 1of 5

Laboratorio No.

5 Molculas de Importancia Biolgica, ADN

LABORATORIO NO.5
MOLCULAS DE IMPORTANCIA BIOLGICA
ADN
Prof. Jos L. Correa D. M.Sc.
Biologa General

Extraccin y purificacin del ADN


El ADN genmico puede ser obtenido de cualquier organismo vivo, desde
microorganismos, hasta organismos superiores vegetales y animales.
El material genmico extrado de cualquiera de estas fuentes puede ser utilizado
posteriormente para una infinidad de aplicaciones, tales como anlisis de
hibridacin, amplificaciones (PCR), clonacin molecular, construccin de
bibliotecas genmicas, secuenciamiento, entre otros.
Por otra parte, no solo el ADN genmico puede ser extrado para servir de base
para el anlisis gentico, tambin puede ser extrado ADN extracromosmico,
ARN mensajero, ribosomal, ADN plasmdico en bacterias, incluso, ADN o ARN
viral, los cuales pueden ser utilizadas en aplicaciones similares a las sealadas
con anterioridad.
Los protocolos de extraccin de material gentico dependen fundamentalmente
del tipo de material biolgico de donde se extraer, tipo de material gentico, sea
ADN o ARN y el tipo de ensayo que se les aplicar.
<*
La extraccin y purificacin aprovecha ciertas caractersticas de esta molcula,
tales como su solubilidad en concentraciones altas de sales, su pH cido, su
insolubilidad en alcoholes y la capacidad de formar sales con cationes.
Independientemente del origen o la fuente de ADN, los procesos de extraccin y
purificacin de ADN suelen constar de cuatro pasos fundamentales:
a. Lisis celular: este paso suele variar segn el tipo de material biolgico que
sirve de base para la extraccin. Este paso tiene la funcin de
desestabilizar paredes celulares y membranas, para permitir la liberacin de
todos los componentes y macromolculas. Para tal fin se utilizan mtodos
fsicos como la sonicacin y la congelacin, o mtodos enzimticos como la
utilizacin de lisozima. Las membranas se rompen con agentes detergentes
como SDS o Tritn.

21

Prof. Jos L. Correa D. M.Sc.

Biologa General I

Laboratorio No.5 Molculas de Importancia Biolgica, ADN


b. Inhibicin de nucleasas: las nucleasas deben ser eliminadas para evitar que
degraden el ADN. Esto se logra por medio trmicos, o por utilizacin de
agentes qumicos como enzimas, solventes (fenol cloroformo),
desnaturalizantes (ditiotreitol), detergentes (SDS).
c. Eliminacin de impurezas: tiene el objetivo de eliminar impurezas,
principalmente protenas, adems de restos de carbohidratos y lpidos. Para
tal fin se utilizan solventes y desnaturalizantes, adems de mtodos fsicos
de separacin con membranas, electroforesis, cromatografas.
d. Precipitacin de los cidos nucleicos.
Los cidos nucleicos son
concentrados mediante precipitacin en presencia de etanol o isopropanol,
y sales monovalentes como acetato de sodio o de amonio, a bajas
temperaturas.
Actualmente en el mercado existe una cantidad de mtodos, sistemas y paquetes
preparados para extraccin y purificacin, los cuales, sin importar la diversidad de
protocolos aplicados, siguen los mismos principios expuestos con anterioridad.

OBJETIVOS
Demostrar la presencia de ADN en tres tipos de clulas diferentes.
Aislar ADN genmico eucariota a partir de muestra te tejido vegetal
Aislar ADN genmico eucariota a partir de muestra de tejido animal
Describir y explicar el significado de los pasos desarrollados en los
mtodos de extraccin aplicados

MATERIALES Y MTODO
Material biolgico

Hojas jvenes de brcoli


Trozo de hgado de res o piezas de hgado de pollo

Material de laboratorio

Mortero y pistilo
Vaso qumico
Colador fino de cocina
Pao de tela
Tubos de ensayo

22

Prof. Jos L. Correa D. M.Sc.

Biologa General I

Laboratorio No.5 Molculas de Importancia Biolgica, ADN

Palito de madera
Probeta 100 ml
Probeta de 10 ml
Embudo
Pipeta

Reactivos

Jabn o detergente lquido


Solucin de NaCl 2M
Alcohol al 96
Suavizante de carnes
Arena

Procedimiento
Extraccin de ADN de tejido animal
1.

Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Aadir arena para que al


triturar se puedan romper las membranas y queden los ncleos sueltos.

2.

Aadir al triturado, 50 centmetros cbicos de agua. Remover hasta hacer


una especie de papilla o pur.

3.

Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que
hayan quedado por romper.

4.

Medir el volumen del filtrado con una probeta.

5.

Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro de sodio 2M. Con esto


conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las
fibras de cromatina.

6.

A continuacin se aade 1 mililitro de detergente lquido. Deje actuar entre


5 a 10 minutos. La accin de este detergente es formar un complejo con
las protenas y separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las
protenas que tiene asociadas.

7.

Lleve el contenido a un tubo de ensayo llenado 1/3 del mismo.

8.

Aada una pizca de suavizante de carnes y agite muy suavemente el tubo


de ensayo. Evite agitar bruscamente pues puede romper las hebras de
ADN con el suavizante.

23

Prof. Jos L. Correa D. M.Sc.

Biologa General I

Laboratorio No.5 Molculas de Importancia Biolgica, ADN


9.

Aadir mediante una pipeta el alcohol de 96. Hay que hacerlo de forma
que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En
la interfase, precipita el ADN vindose como finas hebras blancas.

10.

Introducir una varilla de madera e ir removiendo. Sobre la varilla se van


adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado
de la agrupacin de muchas fibras de ADN.

24

Prof. Jos L. Correa D. M.Sc.

Biologa General I

Laboratorio No.5 Molculas de Importancia Biolgica, ADN

CUESTIONARIO

1.

Cul es la funcin del ADN en la clula?

2.

Cules son las caractersticas del ADN?

3.

Qu estructuras de la clula protegen al ADN?

4.

Qu funcin tiene el detergente para la extraccin del ADN? Recuerda que


los detergentes actan sobre los lpidos.

5.

Qu funcin tiene el suavizante de carnes en el mtodo utilizado de


extraccin?

6.

A qu sustancia es ms afn al ADN, al agua o al alcohol?

7.

Identifique en los dos mtodos utilizados, los cuatro pasos fundamentales


en un proceso de extraccin de ADN.

8.

Investigue los mtodos para cuantificar el ADN una vez extrado.

25

Prof. Jos L. Correa D. M.Sc.

Biologa General I

You might also like