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Universidad de La Cinega del

Estado de Michoacn de
Ocampo
Licenciatura en Genmica Alimentaria
Prctica 6:

PCR

Alumnos.- *Anaya Flores Yareni


*Magalln Alczar Jess
Tcnico.- M.C. Luis Enrique Flores Pantoja
Profesor.- Dr. Pedro Damin Loeza Lara
Sahuayo, Michoacn, DICIEMBRE 2016

INTRODUCCION
Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural
de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN,
para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas
temperaturas alternadas para separar las hebras de
ADN recin formadas entre s tras cada fase de
replicacin y, a continuacin, dejar que las hebras de
ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas
nuevamente. La reaccin en cadena de la polimerasa
fue perfeccionada por Kary Mullis perteneciente a la
Cetus Corporation en California, en la dcada de
1980. Inicialmente la tcnica era lenta, ya que las
polimerasas se desnaturalizaban al realizar los
cambios de temperatura y era necesario agregar
nuevas polimerasas en cada ciclo. Puesto que las
temperaturas del ciclo (95 C en las fases de
desnaturalizacin del ADN) suponen la inmediata
desnaturalizacin de toda protena, se emplean ADN
polimerasas
termoestables,
extradas
de

microorganismos adaptados a vivir


a esas
temperaturas, restrictivas para la mayora de los
seres vivos. Dichos microorganismos, generalmente
arqueas, son: Thermus aquaticus (polimerasa Taq),
Pyrococcus furiosus (Pfu), Thermococcus litoralis
(Vent) y Thermus thermophilus (Tth). Generalmente
se emplean mezclas de polimerasas muy procesivas
(Taq) con otras capaces de hacer correccin de
errores. (Griffiths, 2002)
Hoy, todo el proceso de la PCR est automatizado
mediante un aparato llamado termociclador, que
permite calentar y enfriar los tubos de reaccin para
controlar la temperatura necesaria para cada etapa
de la reaccin. Muchos termocicladores modernos
hacen uso del efecto Peltier, que permite tanto
calentar como enfriar los tubos simplemente
invirtiendo la corriente elctrica. Los tubos usados
para PCR tienen una pared muy fina, lo que favorece
una buena conductividad trmica, permitiendo que
se alcance rpidamente el equilibrio trmico. Casi
todos los termocicladores tienen un sistema que
calienta la tapa de cierre con el fin de evitar la
condensacin sobre los tubos de reaccin. Los
termocicladores ms antiguos carecan de este
sistema y solucionaban el problema de la
condensacin con una capa de aceite en la parte
superior de la mezcla de reaccin o con un poco de
cera dentro de los tubos.
Por lo general, la PCR es una tcnica comn y
normalmente indispensable en laboratorios de
investigacin mdica y biolgica para una gran
variedad de aplicaciones. Entre ellas se incluyen la
clonacin de ADN para la secuenciacin, la filogenia
basada en ADN, el anlisis funcional de genes, el
diagnstico
de
trastornos
hereditarios,
la
identificacin de huellas genticas (usada en
tcnicas forenses y test de paternidad) y la deteccin
y
diagnstico
de
enfermedades
infecciosas.
(Coleman, 2006)

OBJETIVOS
Aprender a calcular y preparar una solucion
stock para realizar reacciones de PCR.
Conocer el fundamento teorico de la PCR.

Individualmente simular una mezcla de reactivos


para una reaccion de PCR usando agua.
aprender a programar los ciclos de reaccion en
el termociclador.

MATERIALES
Tubo Eppendorf de 200 uL, nicro pipetas de 10 y
100 uL con puntas esteriles, micro centrifuga
termociclador.
Primers o iniciadores, mezcla de dNTPs, buffer
de PCR, DNA, agua bidestilada esteril, ADN
polimerasa, MgCl2.

METODOLOGA
Se tom un tubo de 0.2mL y se rotul, despues se le
agragaron los siguientes reacrtivos en el siguiente
orden: 2uL de Buffer 10X, 0.8uL de dNII mix, 1uL de
oligoF, 1uL de oligo R, 13.7uL de agua y o.5uL de
polimerasa, poesteriormente se coloc el tubo en frio
y se almacen, antes de ponerlo en el termociclador
se agreg 1uL de ADN y se coloc en el
termociclador.

RESULTADOS

DISCUSIN DE RESULTADOS
El motivo por el cual no en todas las cargas se
muestra contenido de ADN es porque se tardo un dia
en cargar y correl el gel y probablemente no se
manejaron adecuadamente las muestras de AND y
estas se degradaron.

CONCLUSIONES
La tecnica de PCR es de gran utilidad en la
biologa molecular y es muy importante tener en
cuenta que cuando se valla a utilizar PCR la
secuencia de oligonucleotidos que se usara
como cebador es uno de los parametros mas
importantes debido a su alta sensibilidad y a que
puede ser muy susceptible a contaminarse, por
eso es muy importante tener una ADN de control
negativo para controlar esta variable.

REFERENCIAS
Griffiths, J.F. A. et al. (2002). Gentica. McGraw-Hill
Interamericana. ISBN 84-486-0368-0.
Coleman, WB y Tsongalis, GJ (2006). Molecular Diagnostics:
For the Clinical Laboratorian. Humana Press. ISBN 1-58829356-4.pgs. 47-56 y 65-74
Butler, JM (2005). Forensic DNA Typing: Biology, Technology,
and Genetics of STR. Academic Press pgs 63-84. ISBN 0-12147952-8.

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