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Estado de Michoacn de
Ocampo
Licenciatura en Genmica Alimentaria
Prctica 6:
PCR
INTRODUCCION
Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural
de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN,
para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas
temperaturas alternadas para separar las hebras de
ADN recin formadas entre s tras cada fase de
replicacin y, a continuacin, dejar que las hebras de
ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas
nuevamente. La reaccin en cadena de la polimerasa
fue perfeccionada por Kary Mullis perteneciente a la
Cetus Corporation en California, en la dcada de
1980. Inicialmente la tcnica era lenta, ya que las
polimerasas se desnaturalizaban al realizar los
cambios de temperatura y era necesario agregar
nuevas polimerasas en cada ciclo. Puesto que las
temperaturas del ciclo (95 C en las fases de
desnaturalizacin del ADN) suponen la inmediata
desnaturalizacin de toda protena, se emplean ADN
polimerasas
termoestables,
extradas
de
OBJETIVOS
Aprender a calcular y preparar una solucion
stock para realizar reacciones de PCR.
Conocer el fundamento teorico de la PCR.
MATERIALES
Tubo Eppendorf de 200 uL, nicro pipetas de 10 y
100 uL con puntas esteriles, micro centrifuga
termociclador.
Primers o iniciadores, mezcla de dNTPs, buffer
de PCR, DNA, agua bidestilada esteril, ADN
polimerasa, MgCl2.
METODOLOGA
Se tom un tubo de 0.2mL y se rotul, despues se le
agragaron los siguientes reacrtivos en el siguiente
orden: 2uL de Buffer 10X, 0.8uL de dNII mix, 1uL de
oligoF, 1uL de oligo R, 13.7uL de agua y o.5uL de
polimerasa, poesteriormente se coloc el tubo en frio
y se almacen, antes de ponerlo en el termociclador
se agreg 1uL de ADN y se coloc en el
termociclador.
RESULTADOS
DISCUSIN DE RESULTADOS
El motivo por el cual no en todas las cargas se
muestra contenido de ADN es porque se tardo un dia
en cargar y correl el gel y probablemente no se
manejaron adecuadamente las muestras de AND y
estas se degradaron.
CONCLUSIONES
La tecnica de PCR es de gran utilidad en la
biologa molecular y es muy importante tener en
cuenta que cuando se valla a utilizar PCR la
secuencia de oligonucleotidos que se usara
como cebador es uno de los parametros mas
importantes debido a su alta sensibilidad y a que
puede ser muy susceptible a contaminarse, por
eso es muy importante tener una ADN de control
negativo para controlar esta variable.
REFERENCIAS
Griffiths, J.F. A. et al. (2002). Gentica. McGraw-Hill
Interamericana. ISBN 84-486-0368-0.
Coleman, WB y Tsongalis, GJ (2006). Molecular Diagnostics:
For the Clinical Laboratorian. Humana Press. ISBN 1-58829356-4.pgs. 47-56 y 65-74
Butler, JM (2005). Forensic DNA Typing: Biology, Technology,
and Genetics of STR. Academic Press pgs 63-84. ISBN 0-12147952-8.