Bazan Sandoval, Yovher Edwin

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
UI
M
IC
A
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA
CARACTERSTICAS FARMACOGNSTICAS DE LAS HOJAS Y
BI
CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES TOTALES DEL EXTRACTO
FLUIDO DE Tagetes minuta L. (HUACATAY) PROVENIENTES DEL
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CASERO PEDREGAL, PROVINCIA TRUJILLO, REGIN LA LIBERTAD
IO
AUTORES:
TE
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DE
TESIS I
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BL
BAZN SANDOVAL, YOVHER EDWIN

BENITES MELQUIADES, JAVIER ISAI
ASESOR:
Dr. VENEGAS CASANOVA, EDMUNDO ARTURO
TRUJILLO PER
2014
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Per.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
DEDICATORIA
A creador de todas las cosas, quien con la fortaleza y sabidura brindada, han
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permitido el desarrollo del presente trabajo y a la vez permitir llegar a este momento
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tan importante de mi formacin profesional; por ello, con toda la humildad que de mi
emana, dedico en primer lugar mi trabajo a Dios.
De igual forma, dedico este trabajo a mis padres Alejandro y Rosa que han sabido
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formarme con buenos sentimientos, hbitos y valores, lo cual me ha ayudado a salir
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adelante en los momentos ms difciles.
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A mis hermanas Mary y Vernica que siempre me han brindado su apoyo, y con el
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ejemplo del xito de sus vidas acadmicas y profesionales, un deseo de superacin.

Y a m fraternal compaero, Javier que gracias a su apoyo, y conocimientos hicimos
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posible esta experiencia, una de nuestras principales metas.
Bazn Sandoval Yovher Edwin
DEDICATORIA
A Dios, quien con su inmensa bondad y amor, me ha permitido el desarrollo del

presente trabajo y as mismo llegar a este momento tan importante de mi formacin
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profesional; por ello, con toda la humildad que aprend de l, le dedico este trabajo.
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De igual forma, dedico este trabajo a toda mi familia en especial a mis padres que han
sabido formarme con buenos sentimientos, hbitos y valores, lo cual me ha ayudado a
salir adelante en los momentos ms difciles.
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A mis hermanos que siempre me han brindado su apoyo, y con el ejemplo del xito de
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sus vidas acadmicas y profesionales, que son un ejemplo de superacin.
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Y a m fraternal compaero, Yovher que gracias a su apoyo, y conocimientos hicimos
Benites Melquiades Javier Isai
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posible la realizacin de una de nuestras principales metas, el termino de este trabajo.
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Dios por protegerme durante todo mi camino y darme fuerzas para
superar obstculos y dificultades a lo largo de toda mi vida.
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Agradezco tambin la confianza y el apoyo brindado por parte de mis padres, que sin
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duda alguna en el trayecto de mi vida me han demostrado su amor, corrigiendo mis
faltas y celebrando mis triunfos.
Al Dr. Edmundo Arturo Venegas Casanova, asesor de tesis, por su valiosa gua y
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asesoramiento a la realizacin de la misma.
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Gracias a todas las personas que directa e indirectamente colaboraron en la
Bazn Sandoval Yovher Edwin

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realizacin de este proyecto.
AGRADECIMIENTO ESPECIAL
Al finalizar un trabajo tan arduo y lleno de dificultades como el desarrollo de una

tesis es inevitable que te asalte un muy humano egocentrismo que te lleva a concentrar
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la mayor parte del mrito en el aporte que has hecho. Sin embargo, el anlisis objetivo
te muestra inmediatamente que la magnitud de ese aporte hubiese sido imposible sin la
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participacin de personas e instituciones que han facilitado las cosas para que este
trabajo finalice exitosamente. Por ello, es para nosotros un verdadero placer utilizar
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este espacio para ser justo y consecuente con ellas, expresndoles nuestros
agradecimientos.
IA
Debemos agradecer de manera muy especial y sincera al Dr. Edmundo Arturo
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Venegas Casanova por aceptar realizar esta tesis bajo su direccin. Su apoyo y
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confianza en nuestro trabajo y su capacidad para guiar nuestras ideas han sido un
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aporte invaluable, no solamente en el desarrollo de esta tesis, sino tambin en nuestra

en su
DE
formacin como investigadores. Las ideas propias, siempre enmarcadas
juntos, el cual
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orientacin y rigurosidad, han sido la clave del buen trabajo que hemos realizado
no se puede concebir sin su siempre oportuna participacin. Le
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agradecemos tambin el haberme facilitado siempre los medios suficientes para llevar
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a cabo todas las actividades propuestas durante el desarrollo de esta tesis. Muchas
gracias Profesor y amigo.
Bazn Sandoval Yovher Edwin y

MIEMBROS DEL JURADO
Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes
ASESOR
Dr. Edmundo Arturo Venegas Casanova
MIEMBRO
Mg. Maril Roxana Soto Vsquez
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A
PRESIDENTE
PRESENTACIN
SEORES MIEMBROS DEL JURADO:

En cumplimiento con las disposiciones vigentes del Reglamento de Grado y Ttulo de la
Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos
a vuestra consideracin y elevado criterio el presente informe de Tesis I:
CARACTERSTICAS
FARMACOGNSTICAS
DE
LAS
HOJAS
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CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES TOTALES DEL EXTRACTO FLUIDO DE
PROVINCIA DE TRUJILLO REGIN LA LIBERTAD
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Tagetes minuta L. (HUACATAY) PROVENIENTES DEL CASERO PEDREGAL
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Aprovechamos la oportunidad para manifestar el ms sincero agradecimiento a la plana
docente y administrativa de nuestra Alma Mater, cuya enseanza y apoyo ha
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contribuido categricamente a nuestra formacin profesional.
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Dejamos a vuestra consideracin seores miembros del jurado, la calificacin del
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Trujillo, noviembre del 2014
DE
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presente trabajo.
BAZAN SANDOVAL YOVHER
BENITES MELQUIADES JAVIER
NDICE
1. RESUMEN ....................................................................................................... i
2. ABSTRACT...................................................................................................... ii
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3. INTRODUCCIN.............................................................................................1
4. MATERIAL Y MTODO................................................................................8
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5. RESULTADOS..................................................................................................28
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6. DISCUSIN.......................................................................................................32
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7. CONCLUSIONES.........41
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DE
8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS............................................................42
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9. ANEXOS.............................................................................................................50
RESUMEN
El Huacatay o Tagetes minuta L, conocida cientficamente, es una hierba anual de la
familia de las Asterceas ampliamente utilizada tanto por sus usos en gastronoma,
como por sus importantes usos en fitoterapia. Adems, con propiedades pesticidas,
insecticida, nematicida y fungicida; se constituye en un elemento primordial en
fitoterapia. Debido a ello, a su importancia comercial y a la poca informacin cientfica
que se tiene; se realiz el presente trabajo que tiene por objetivo determinar las
caractersticas farmacognsticas de sus hojas, as como tambin la cuantificacin de los
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flavonoides totales presentes en el extracto fluido de dichas hojas.
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Para ello se recolectaron muestras de la planta del casero Pedregal, de la provincia

las
caractersticas
Trujillo, regin La Libertad, determinndose inicialmente
macromorfologas y sus parmetros fsico-qumicos: porcentaje de humedad residual,
BI
cenizas totales, cenizas insolubles en cido, cenizas solubles en agua y materia extraa.
IA
Adems, se realiz la huella dactilar del extracto hidroalcohlico y el tamizaje
AC
fitoqumico segn la prueba de la Gota. Finalmente se ce cuantific flavonoides
RM
mediante espectrofotometra UV/Visible a 256 nm.
FA
Los resultados obtenidos fueron: materias extraas 0.128 %, humedad 8.70%, cenizas
DE
totales 16.78%, cenizas insolubles en acido 2.09%, cenizas solubles en agua 14.7%,
CA
sustancias solubles en agua 35.16%, en alcohol a 30 GL 31.62%, en alcohol a 50 GL

31.50%, alcohol a 70 GL 21.27%, slidos totales en macerado 1.15 g/100mL, slidos
TE
totales en extracto fluido 4.0 g/100 mL. En el tamizaje fitoqumico arrojo positivo:
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esteroles, triterpenos, alcaloides, taninos y flavonoides. Finalmente la cantidad

encontrada de flavonoides fue de 0.0155%, expresados como quercetina.
El trabajo realizado permiti evaluar la calidad fsico-qumica de las hojas, evidenciar la
presencia de metabolitos como esteroles, triterpenos, alcaloides, taninos y flavonoides,
as mismo cuantificar dichos flavonoides. Estos resultados contribuirn al conocimiento
fitoqumico de Tagetes minuta L., a la validacin cientfica de todas las propiedades
que se les atribuyen y comprobar de forma sistemtica los usos conocidos de antao.
Palabras Clave: Tagetes minuta L, caractersticas farmacognsticas, extracto fluido,
flavonoides totales.
2
ABSTRACT
The "Huacatay" or scientifically known Tagetes minuta L is an annual herb of the
family Asteraceae widely used both for its uses in cuisine, as its important uses in
herbal medicine. Furthermore, with pesticidal properties, insecticide, nematicide and
fungicide; it constitutes an essential element in phytotherapy. As a result, its
commercial significance and little scientific information available; The present work
aims to determine the characteristics farmacognsticas leaves, as well as the
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quantification of total flavonoids in the extract of these leaves fluid was performed.
This plant samples hamlet Pedregal, in the province Trujillo, La Libertad region were
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collected initially determined the macromorfologas characteristics and physicochemical
parameters: percentage of residual moisture, total ash, acid insoluble ash, water soluble
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ash and foreign matter. Furthermore, the fingerprint of the hydroalcoholic extract and
phytochemical screening was performed according to the test drop. Finally ce
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flavonoids quantified by UV / visible spectrophotometry at 256 nm.

The results were: foreign material 0.128%, 8.70% moisture, 16.78% total ash, acid
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insoluble ash 2.09%, water soluble ash 14.7%, water soluble substances 35.16% in
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alcohol 30 GL 31.62% in alcohol 50 GL 31.50%, alcohol at 70 GL 21.27% total
DE
solids in macerated 1.15 g / 100 mL, total solids in fluid extract 4.0 g / 100 mL. The
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phytochemical screening positive courage: sterols, triterpenes, alkaloids, tannins and
IO
quercetin.
TE
flavonoids. Finally the amount of flavonoids was found 0.0155%, expressed as
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The work allowed us to evaluate the physico-chemical quality of the leaves show the
presence of metabolites such as sterols, triterpenes, alkaloids, tannins and flavonoids,
also quantify these flavonoids. These results contribute to the phytochemical knowledge
of Tagetes minuta L, scientific validation of all the properties attributed to them and
check systematically the known uses of old.
Keywords: Tagetes minuta L, farmacognsticas characteristics, fluid extract, total
flavonoids.
I.
INTRODUCCIN
El hombre desde su aparicin sobre la tierra, estableci una fuerte relacin con la
naturaleza, en especial con las plantas. Estas han sido un recurso al alcance del ser
humano para su alimentacin y curacin de sus enfermedades. Muestra de sus usos y
preparados, se encuentran en los estudios de cualquiera de las culturas que han
existido1, 2.
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El reino vegetal posee muchas especies de plantas que contiene sustancias de valor
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medicinal, molculas producto del metabolismo que poseen actividad farmacolgica y
que
son
una
alternativa
diversos
problemas
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as
que son susceptibles de utilizacin teraputica, los denominados principios activos; es

de
salud,
abaratando
IA
considerablemente los costos de tratamiento y disminuyendo tambin los efectos
RM
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adversos de los medicamentos 2, 3.
FA
Las plantas medicinales juegan un papel muy importante en nuestra sociedad. En 1977
DE
la Organizacin Mundial de Salud (OMS), adopt una resolucin acerca de la
CA
promocin mundial de la medicina tradicional. Dicha resolucin insta a los gobiernos
TE
miembros a dar importancia a sus sistemas mdicos tradicionales. Desde entonces
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muchos fueron los esfuerzos de la OMS de promoverlos4.

La investigacin en plantas, as como la utilizacin de los recursos del medio ambiente,
se han convertido actualmente en una premisa fundamental que debe ser considerada
como lineamiento para orientar el desarrollo para la incorporacin sistemtica de los
conocimientos cientficos y tecnolgicos a las actividades econmicas, sociales y
culturales, pues a pesar de la gran utilizacin de las plantas medicinales por la
poblacin, cada vez en aumento, pocas de ellas han sido estudiadas siguiendo mtodos
cientficos vlidos y atendiendo a las normas ticas establecidas internacionalmente, ya
que si bien el uso popular es un indicador importante, no es garanta de la actividad

teraputica existiendo adems factores muy importantes como son las variaciones
ecolgicas; por las cuales una misma especie puede presentar concentraciones diferentes
de los mismos principios activos, debido a que el metabolismo secundario de los
vegetales superiores es responsable de la sntesis de sustancias qumicas, con poca
accin, del propio vegetal, aunque orientadas por las caractersticas genticas de las
IC
A
plantas5, 6.
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Asimismo, es necesario comprobar el potencial de toxicidad de una planta para su
posible aceptacin como medicamento, adems de garantizar su efecto especfico,
BI
evaluando la relacin riesgo/beneficio, siguiendo las normas ticas. La experimentacin
IA
animal debe preceder a la evaluacin de la planta medicinal en la especie humana,
AC
aunque ste sea el objetivo final de la validacin. Asociando estas variables a las
RM
enfermedades, de intensidades diferentes, o de causas diferentes. Es fcil imaginar que
FA
el tratamiento humano con una planta, sin control de calidad y sin la determinacin de
DE
su actividad farmacolgica, puede llevar a cualquier resultado ineficaz o hasta txico; es
TE
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por eso que ahora la ciencia moderna est consiguiendo explicar poco a poco algunas de
BI
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existentes2, 6, 7.
IO
las creencias populares sobre virtudes de las plantas medicinales y corregir los errores
Para ello se han desarrollado una serie de mtodos para la deteccin preliminar de los
diferentes constituyentes qumicos en las plantas, basadas en la extraccin de estos con
solventes apropiados y en la aplicacin de pruebas de coloracin y precipitacin8, 9.
2
Una planta medicinal es una especie vegetal definida por su genoma, capaz de sintetizar
compuestos qumicos potencialmente activos en animales, denominados metabolitos
secundarios. Esta capacidad est determinada por las influencias del ecosistema en que
crece o se cultiva la especie; estas influencias hacen variar el contenido y la calidad de
los metabolitos secundarios de la planta y de hecho los efectos biolgicos sern tambin
diferentes, por todo esto, la actividad biolgica de una planta, en diferentes pocas y
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A
lugares puede tener una variacin muy grande; desde actividad benfica cuando
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predominan los principios teraputicos, hasta accin toxica cuando predominan otros
productos o sntesis de aquellos principios es excesiva5, 10, 11 .
BI
Las plantas son fuentes de un gran nmero de productos metablicos de importancia
IA
comercial y son usados en las industrias farmacutica, alimentaria, de cosmticos y
AC
como fuentes de numerosas sustancias de inters agroqumico. Se estima que ms de
RM
100000 metabolitos secundarios son producidos por las plantas. Aproximadamente
FA
1600 estructuras qumicas nuevas obtenidas a partir de plantas superiores se describen
DE
cada ao, de las cuales un gran nmero tiene actividad biolgica. Esto hace que el
TE
CA
estudio de los metabolitos presentes en las plantas sea un enorme reto, de ah la
IO
necesidad de utilizar tecnologas diversas para su produccin, caracterizacin e
BI
BL
identificacin5, 10, 12.
Los metabolitos secundarios son compuestos derivados del metabolismo primario pero
delimitada distribucin en el reino de las plantas, restringidos a un grupo taxonmico
particular. Estos no tienen una funcin aparente en el metabolismo primario pero s
tienen una implicacin ecolgica como defensa contra herbvoros, virus, hongos,
bacterias, como sustancias alelopticas, fitoalexinas o disuasorios nutritivos. Otros
tienen una funcin fisiolgica, por ejemplo los alcaloides, las pectinas que pueden servir
para el transporte de nitrgeno txico y compuestos de almacenamiento, mientras los
3
compuestos fenlicos como los flavonoides realizan una funcin como protectores de
rayos ultravioletas. Adems, son una fuente importante de principios activos de
medicamentos y de valiosos productos qumicos10, 12.
Aunque gran parte de los medicamentos se obtienen por sntesis qumica, la mayora de
las estructuras principales estn basadas en productos naturales. Mundialmente existe un
44% de nuevos medicamentos basados en productos naturales y en pases desarrollados
IC
A
el 25% de los medicamentos son derivados de plantas. Se conoce que en la produccin
UI
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de medicamentos, segn Hostettmann et al. (2000), el 11% representa productos
naturales (extractos de plantas), 24% son productos de origen natural, es decir que para
BI
la sntesis de compuestos utilizan precursores de origen natural y el 9% son copias
IA
sintticas de productos naturales. Tal es su importancia, que aproximadamente el 60%
AC
de compuestos anticancergenos y el 75% de medicamentos contra enfermedades
FA
RM
infecciosas son productos naturales o derivados de estos12.
DE
En nuestro pas cientos de plantas son utilizadas en medicina folklrica o popular cuya
CA
prctica se ha incrementado en los ltimos aos. A pesar de la gran utilizacin de las
TE
plantas medicinales por la poblacin de bajo nivel econmico, pocas de ellas han sido
BI
BL
definidas13.
IO
estudiadas siguiendo parmetros cientficos modernos y atendiendo a las normas ticas
La O.M.S. tambin indica que la mayora de los estudios existentes sobre las plantas
medicinales son insuficientes para aceptar su uso de forma masiva, por lo cual ha
orientado protocolos cientficos para el desarrollo de fitofrmacos, de manera que los
ensayos farmacodinmicos y toxicolgicos siempre antecedan a la experimentacin
clnica, as como el control de la calidad de estos medicamentos. La estandarizacin de
las drogas se realiza para definir su calidad constante la cual es necesaria para los
ensayos clnicos confiables y el uso teraputico beneficioso13.
4
Nuestro pas cuenta con especies vegetales muy variadas. Entre la amplia cantidad de
especies tenemos plantas con propiedades medicinales, las cuales no han difundido
debido al escaso conocimiento cientfico que se tiene de ellos, debido a ello es nuestro
inters realizar el presente trabajo de investigacin para dar a conocer las propiedades
farmacognsticas del Huacatay cuyo nombre cientfico es Tagetes minuta L.
perteneciente al gnero Tagetes, de la familia Asteraceae; ampliamente utilizada desde
IC
A
hace muchos siglos por sus mltiples prodiedades14.
UI
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Tagetes minuta L. es ampliamente utilizada en gastronoma, como condimento en la
preparacin de ajes, guisos y asados. Tambin se le atribuyen propiedades medicinales
BI
en el tratamiento sintomtico de trastornos digestivos disppticos: hinchazn
IA
epigstrica, nauseas, aerofagia, flatulencias como digestivo y carminativo. La infusin
AC
de sus hojas se usa para aliviar los dolores gstricos y la decoccin de sus flores y hojas
RM
frescas, para aliviar los catarros y algunos sntomas de la bronquitis. Adems, de sus
DE
FA
hojas se extrae un aceite esencial utilizado en perfumera y aromaterapia15.
CA
Un informe anual de Tagetes minuta L, la ha identificado como potencial de plantas
TE
medicinales ya que contiene aleloqumicos y aceites esenciales que tienen usos y
BI
BL
IO
aplicaciones multidimensionales tales como herbicidas, germicidas, nematomicidas,

insecticidas, fungicidas, etc16.
Tagetes minuta L. es un miembro muy importante del gnero Tagetes perteneciente a la
familia Asteraceae. Tiene pequeas involucres, flores txicas y un olor particular.
Siendo una mala hierba, que es capaz de adaptarse a casi todos los climas de zona
templada (Neher, 1968) 16.
5
Es una planta anual con 50 a 150 cm de altura. Tiene tallo lizo, erecto y ramificado con
ramas opuestas, sus hojas son opuestas y pinnadas, pero las hojas superiores son
alternas. El largo y ancho de las hojas de Tagetes minuta L. es de 4 a 8 cm y de 3 a 4.5
cm, respectivamente. Los mrgenes de las hojas son agudos y aserrados. Tiene
inflorescencia corimbiforme densa en el extremo de las ramas, filarias formando un
tubo cilndrico, est desnudo en la base y de 7 a 10 mm de largo15, 16, 17.
IC
A
En la superficie inferior de las hojas de Tagetes minuta L. un nmero pequeo de
UI
M
glndulas multicelulares y puntiformes estn presentes, las cuales producen un aroma
caracterstico. Por otro lado el Aceite de Tagetes minuta L. puede ser extrado con
BI
hexano y es una materia prima para la produccin de perfume y un producto establecido
IA
de sabor. La extraccin con petrleo es una fuente rica de limoneno, cimenol,
RM
AC
dihidrotagetona, tagetone y tagetenone (Shahzadi et al., 2010)15, 16.
FA
Un anlisis fitoqumico de las partes areas de esta planta mostr la presencia de
DE
terpenoides, saponinas, taninos, flavonoides y alcaloides (Sehrish Sadia et al.). Los
CA
principales constituyentes del aceite de Tagetes minuta L. incluyen limoneno y (Z) -
TE
ocimeno (monoterpenos); dihidrotagetona (E)-y (Z) - tagetone (E) - y (Z) - tagetenone
BI
BL
IO
(tambin conocido como (E) - y (Z) - ocimenone) (Shahzadi et al, 2010)16.

Por otro lado la composicin del aceite esencial es diferente en diferentes partes de la
planta, pero es el mismo con respecto al origen material vegetal. Los aceites esenciales
de las hojas florecidas y las flores contienen -ocimeno y tagetenone mientras que las
hojas de plantas no florecidas y flores principalmente tienen dihidrotagetona (Chamorro
et al., 2008)16, 18.
6
Las hojas de Tagetes minuta L. se utiliza normalmente para la curacin de heridas, tiene
efectos antiinflamatorios, broncodilatadores (Abbasi et al., 2010), hipotensor,
espasmoltico, antifngicos (Shahzadi et al., 2010), germicida (Abbasi et al., 2010),
carminativo, vermfugo (Neher, 1968) y microbicida caractersticas (Abbasi et al.,
2010). Toda la planta se utiliza como un diafortico, diurtico, purgante, fortalecedor
del estmago, remedio histeria, estimulante menstrual (Neher, 1968). Las flores se
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A
utilizan para ataques epilpticos y las fiebres (Qureshi et al., 2007). Tambin se utilizan
UI
M
sus flores como leve laxantes, repelente de insectos, para gastritis, indigestin (Neher,
1968)16, 19, 20.
BI
Las hojas se usan para problemas de rin, hemorroides, dolores musculares. Tambin
IA
se utilizan localmente para repeler hormigas y mosquitos. Las races tienen efecto
AC
fungicida y nematicida caractersticas (Batish et al, 2007. Su aceite se utiliza en el
FA
RM
tratamiento de viruela, dolor de odo y resfriados y para reducir la fiebre (Shahzadi et
DE
al., 2010). El Aceite voltil adems es muy supresor de plantas, microorganismos,
CA
animales y seres patgenos. Tambin se utiliza como agente saborizante en la industria
TE
alimentaria y en los perfumes (Mohamed et al., 1999) 16, 19, 20, 21.
BI
BL
IO
Teniendo en cuenta los estudios mencionados y que no se han realizado trabajos sobre
cuantificacin de flavonoides totales en Tagetes minuta L. en nuestro medio, y dada sus
mltiples aplicaciones es necesario una investigacin exhaustiva para explorar ms
cualidades y los usos de esta planta beneficiosa en el futuro. Todo ello nos motiva a la
investigacin aqu descrita, en donde se tiene como objetivo determinar las
caractersticas farmacognsticas de las hojas de Tagetes minuta L. provenientes del
casero Pedregal, de
la provincia Trujillo, regin La Libertad; as como tambin
cuantificar los flavonoides totales presentes en el extracto fluido de dichas hojas.
7
II.
MATERIAL Y MTODO
2.1. Materiales
2.1.1. Material Biolgico:
Se emplearon las hojas de Tagetes minuta L. provenientes del casero
Pedregal provincia de Trujillo regin La Libertad.
IC
A
2.1.2. Material de laboratorio:
UI
M
Reactivos:
cido actico glacial 99.8% de pureza, calidad Sigma
cido clorhdrico 37% de pureza, calidad Sigma
BI
cido ntrico 65% de pureza, calidad Sigma
cido sulfrico 98% de pureza, calidad Sigma
AC
IA
Anhdrido actico 98% de pureza, calidad Sigma
RM
Cloruro frrico hexahidratado 97% de pureza, calidad Sigma

Cloruro de mercurio (II) 99.5% de pureza, calidad Sigma
FA
Cloruro de Sodio 99.5% de pureza, calidad Sigma
DE
Hidrxido de sodio 98% de pureza, calidad Sigma
CA
Magnesio metlico
TE
Nitrato de bismuto 98% de pureza, calidad Sigma
IO
Gelatina from porcin skin, calidad Sigma
BI
BL
Tolueno 99.5% de pureza, calidad Sigma

Yodo 99.8% de pureza, calidad Sigma
Yoduro de potasio 99% de pureza, calidad Sigma.
8
Solventes:
Agua destilada.
Diclorometano Merck para anlisis.
Cloroformo Merck p.a.
Alcohol etlico de 96 GL.
Alcohol metlico, calidad Merck
Hidrato de cloral
ter de petrleo
UI
M
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A
ter dietlico
Equipos:
BI
Balanza Triple Brazo 700/800 series OHAUS US PAT. N 2,
729,439.
IA
Balanza Analtica OHAUS GA 200 (precisin 0.0001 g)
AC
Estufa THELCO H.W. Kessel Model 17.
RM
Estereoscopio Karl Zeiss Stemi DV4
FA
Espectrofotmetro Heweltt Packard de arreglo de diodos modelo
DE
8452A. es el GENESIS
Horno Mufla Furnace 1300
CA
Microscopio Karl Zeiss Primo Star 176 065
TE
Rotavapor Heidolph Laborata 4003 control
BI
BL
IO
Tamiz Retsh
2.2. Mtodos
2.2.1. Recoleccin
La especie objeto de estudio fue recolectada en los meses de perodo de
floracin, en el casero Pedregal, provincia Trujillo, regin la Libertad. De
una misma poblacin se recolecto hojas maduras de la parte area de la
planta con el fin de preservar la especie.
9
2.2.2. Seleccin
Una vez recolectada la muestra, se procedi a realizar la seleccin de la
materia vegetal, con el objeto de hacer una separacin de las partes
deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.
2.2.3. Identificacin taxonmica

Las plantas medicinales seleccionadas, fueron llevadas al Herbarium
IC
A
Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificacin
UI
M
Taxonmica.
BI
2.2.4. Desecacin
Para evitar cualquier tipo de alteracin que pudiera afectar a la composicin
AC
IA
de la planta, la droga fue desecada. Las hojas seleccionadas se colocaron
RM
sobre papel Kraft en un lugar fresco y seco durante 24 horas. Luego se
FA
pasaron a bolsas hechas de papel Kraft y se llevaron a estufa a una
TE
2.2.5. Trituracin
CA
DE
temperatura de 40C, durante aproximadamente 48 horas.
IO
Una vez desecado el material vegetal, se procedi a su trituracin en
BI
BL
mortero hasta tamao de partcula adecuado. El material pulverizado, se

almacen adecuadamente en frascos mbar en un lugar desprovisto de
humedad y luz directa, hasta su posterior utilizacin.
2.2.6. Caracterizacin macromorfolgica 13, 22, 23

Se llev a cabo analizando los siguientes caracteres: Forma, textura,
superficie, peculiaridades, color, olor, condicin y dimensiones; los cuales
fueron contrastados con las bibliografas correspondientes.
10
2.2.7. Determinacin de materias extraas13, 22

Se pes 1g de muestra en una placa petri y con la ayuda del estereoscopio
se procedi a separar la materia extraa manualmente. Esta ltima fue
pesada para determinar su porcentaje en base al peso de la muestra ensayo.
Los lmites para las materias extraas, se establecen en las monografas o
especificaciones de calidad de cada droga en particular.
100(%)
UI
M
IC
A
El porciento de materia extraa ( ) fue calculada con la frmula siguiente:
Dnde:
BI
= Masa inicial de la muestra de ensayo (g).
IA
= Masa de materia extraa (g).
RM
AC
100 = Factor matemtico para los clculos.
FA
2.2.8. Determinacin de humedad13, 22, 23
CA
DE
Mtodo Gravimtrico:
TE
Este anlisis se realiz por triplicado. Para ello se coloc una cpsula
IO
durante al menos 1 hora en estufa a la temperatura de secado del producto.
BI
BL
Empleando pinzas, la cpsula se traslad al desecador y se dej enfriar

durante 30 minutos. Luego pesamos la cpsula en una balanza analtica con
una aproximacin de 0,1 mg.
Posteriormente se pes 0.5 g de muestra previamente homogeneizada en la
cpsula, para luego colocarlos en la estufa a la temperatura y tiempo

recomendado, 105C x 3 horas.
11
Finalmente con una pinza se retir la cpsula con la muestra de la estufa y

se llev a enfriar en desecador durante 30 minutos. Se repiti el
procedimiento de secado por una hora adicional, volvindose a pesar, hasta
obtener una masa constante.
Para determinar la humedad se aplic la frmula siguiente:
2 1
100(%)
2
IC
A
=
Dnde:
UI
M
Hg = Prdida de masa por desecacin (%)
2 = Masa de la cpsula con la muestra de ensayo (g).
IA
= Masa de la capsula vaca (g).
BI
1 = Masa de la cpsula con la muestra de ensayo desecada (g).
RM
AC
DE
FA
2.2.9. Determinacin de cenizas totales13, 22, 24, 25
CA
Se pes 0.3 g de la droga pulverizada y tamizada con una desviacin
TE
permisible de 0,5 mg en un crisol de porcelana previamente tarado, para
IO
luego ser calentada suavemente la porcin de ensayo aumentando la
BI
BL
temperatura hasta carbonizar y posteriormente se inciner en un horno

mufla a temperatura de 700C a 750C durante 2 horas.
Transcurrido el tiempo se enfri el crisol en una desecadora a temperatura
ambiente y se procedi a pesar, repitindose el proceso hasta que dos
pesadas sucesivas no difieran en ms de 0,5 mg por gramo (masa constante).
Para obtener la masa constante los intervalos entre calentamiento y pesada
son de 30 minutos.
12
Si el residuo presenta trazas de carbn, se le aade unas gotas de solucin de

perxido de hidrgeno concentrado, cido ntrico o solucin de nitrato de
amonio al 10% p/v y se calienta hasta evaporar los solventes. Al enfriar el
crisol el residuo debe ser de color blanco o casi blanco.
Cuando los valores obtenidos para las cenizas totales son elevadas (>5%), es
necesario conocer si las mismas estn compuestas por metales pesados, lo
IC
A
cual se determina mediante los ensayos de cenizas insolubles, y, si este
UI
M
residuo es elevado, hay que someter a la droga a otros anlisis antes de
aprobar su uso.
BI
La cantidad de cenizas totales ( ) en base anhidra se calcula por la frmula
siguiente:
IA
= 2 100(%)
RM
AC
100
= 100
FA
Dnde:
DE
= Cenizas totales en base hidratada.
CA
= Masa del crisol vaco (g).
TE
1 = Masa del crisol con la muestra de ensayo (g).
IO
2 = Masa del crisol con la ceniza (g).
BI
BL

= % humedad.
2.2.10. Determinacin de cenizas solubles en agua13, 22, 24, 25

Es la diferencia de peso entre las Cenizas Totales y el Residuo Remanente
despus del tratamiento de las cenizas totales con agua. Los valores no
deben de ser mayores de 8 10%.
13
Procedimiento:
A las cenizas totales obtenidas, se aadi de 5 10 mL de agua destilada, se
tap el crisol y dej hervir suavemente a la llama del mechero por 5
minutos.
Filtramos a travs de un papel filtro libre de cenizas, para luego lavar el
residuo con agua caliente hasta obtener aproximadamente un volumen de
IC
A
filtrado de 60 mL. Posteriormente se coloc el papel de filtro y su contenido
UI
M
en un crisol previamente tarado e incineraren un horno mufla de 700C a
750C durante 2 horas.
BI
Finalmente, se dej en desecador hasta alcanzar temperatura ambiente para
luego ser pesado.
FA
2 4
100(%)
1
100
100
DE
RM
las frmulas siguientes:
AC
IA
La cantidad de cenizas solubles en agua ( ) en base anhidra se calcul por
CA
Dnde:
TE
= % de cenizas solubles en agua en base hidratada.
IO
BI
BL

4 = Masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g)
100= Factor matemtico para los clculos.
= % humedad
14
2.2.11. Determinacin de cenizas insolubles en cido13, 22, 24, 25

Para tal determinacin, a las cenizas totales obtenidas se agreg 5mL de
solucin de HCl al 10%, en un crisol al cual se le tap con un vidrio reloj y
calent sobre bao de agua hirviendo durante 10 minutos. Se lav el vidrio
de reloj con 5 ml de agua caliente, vertindose posteriormente al contenido
del crisol.
IC
A
Filtramos la solucin a travs de papel filtro libre de cenizas, luego lavamos
UI
M
el residuo con agua caliente hasta que el filtrado acidulado con cido ntrico,
al cual se le ha de aadir I o II gotas de solucin de nitrato de plata 0.1 M,
BI
esta no debe mostrar la presencia de cloruros. Posteriormente se desec el
IA
papel filtro con el residuo de 100C a 105C durante 2 horas. Se coloc en
AC
un desecador hasta alcanzar temperatura ambiente para luego pesar.
RM
Repetimos el procedimiento hasta obtener peso constante.
DE
FA
La cantidad de cenizas insolubles en cido clorhdrico ( ) en base anhidra
CA
se calcularon por las frmulas siguientes:
100
= 100
IO
TE
= 2 100(%)
BI
BL
Dnde:
= % de cenizas insolubles en cido clorhdrico en base hidratada.

= % humedad.
15
2.2.12. Determinacin de sustancias solubles 13, 24, 25
Se basa en la extraccin de las sustancias en agua, alcohol o una mezcla

hidroalcohlica, mediante maceracin y evaporacin hasta sequedad de una
alcuota del extracto.
Procedimiento:
IC
A
Pesamos 4 muestras de 2.5 g de la droga previamente pulverizada y
UI
M
tamizada, luego transferimos a un frasco cnico con tapa de 250 mL,

aadimos 50 mL de alcohol de 30 GL, 50 GL, 70 GL y agua a
temperatura ambiente, respectivamente, luego agitamos durante 6 horas y

se agit 30
BI
dejamos en reposo hasta el da siguiente; posteriormente
AC
IA
minutos, para dejarlo reposando alrededor de 30 minutos; despus filtramos
RM
por papel. Finalmente, se tom una alcuota de 10 mL, evaporamos sobre
FA
Bao Mara, desecamos a 105 C en una estufa durante 3 horas, dejamos
DE
enfriar y posteriormente se pes. El porcentaje de sustancias solubles en
500 100
(%)
(100 )
BI
BL
IO
TE
CA
base anhidra (SS) se calcul mediante la frmula siguiente:
Dnde:
H = Humedad de la muestra (%).

R = Residuo de la muestra (g).
M = Masa de la muestra (g).
500 y 100 = Factores matemticos para los clculos.
El ensayo se realiz por duplicado, informando el promedio de las dos

determinaciones del porciento de sustancias solubles.
16
2.2.13. Determinacin de slidos totales del macerado y del extracto fluido22

Para preparar el macerado, pesamos 10 g de la muestra
ensayo y
agregamos 50 mL de alcohol de 70GL en un frasco mbar, y dejamos

reposar por una semana.
Trasladamos 5 mL de las soluciones (macerado y extracto fluido) a una
cpsula de porcelana limpia, seca y previamente tarada; la cpsula se coloc
IC
A
en un bao de agua y se evapora hasta que el residuo est aparentemente
UI
M
seco; posteriormente pasamos a estufa a una temperatura de 105 2C
durante 3 horas.
BI
Retirar la cpsula de la estufa, colocamos en una desecadora hasta que
IA
alcance la temperatura ambiente y pesamos. Repetimos el proceso anterior,
AC
empleando slo 60 minutos de secado, las veces necesarias, hasta obtener
RM
masa constante.
DE
FA
Los slidos totales se calcularon mediante la frmula siguiente:
TE
Dnde:

100
CA
BI
BL
IO
= Masa de la cpsula ms el residuo (g)

= Masa de la cpsula vaca (g)
= Volumen de la porcin de ensayo (mL)
100 = Factor matemtico
El ensayo se realiz por duplicado y se inform la cantidad de slidos

totales en g/100mL.
17
2.2.14. Preparacin del extracto fluido de las hojas de Tagetes minuta L. 22

Se pes y separ 125 g de muestra en porciones de 62.5 g, 37.5 g y 25 g,
luego se humect 125 g de muestra con cantidad suficiente de menstruo y
dej 15 minutos reposando. Posteriormente se traslad al percolador y se
macer de 24 a 48 horas. Se prosigui a percolar y recoger 200 mL, los
cuales se separan y se guardan.
IC
A
Se sigui percolando 5 porciones sucesivas de percolado de 300 mL cada
UI
M
una enumerndola segn el orden que se recibe. Luego humectamos la
segunda porcin de 300 g de muestra con cantidad suficiente de la primera
BI
porcin de 300 mL del lote anterior de la droga, y se ejecut la percolacin
IA
con el resto del contenido del lote anterior recibiendo 300 mL del percolado
AC
que se separan. Seguimos percolando 5 porciones de 200 mL cada uno
RM
enumerando.
FA
Posteriormente se humect la tercera porcin de 200 g de muestra con
DE
cantidad suficiente de la primera porcin de 200 mL del segundo lote y
TE
CA
percol con el contenido de 200 mL cada uno.
IO
Finalmente se recogi 500 mL del percolado y uni a las anteriores para
BI
BL
formar 1000 mL del extracto fluido.
2.2.15. Huella dactilar del extracto fluido de las hojas de Tagetes minuta L.22
Se agreg 20 mL de la muestra en una probeta de 1000 mL, de
aproximadamente 5 cm de dimetro y 70 cm de altura, para luego colocarla
en la cmara protectora.
18
Colocamos luego una banda de papel de filtro (Whatman #1) de 4 cm de

ancho por 15 cm de longitud verticalmente de manera que su borde superior
est fijado a una varilla metlica que permita la suspensin de la tira de
papel y su extremo inferior est sumergido dentro de la muestra de ensayo
pero sin tocar el fondo ni las paredes del recipiente. Posteriormente se cerr
la cmara y dej transcurrir 2 horas; finalizada sta, retiramos el papel filtro
IC
A
y se dej secar. Finalmente una vez seco, se procedi a su inspeccin visual
UI
M
y caracterizacin.
Examen e Interpretacin de la imagen: Se tienen en cuenta los aspectos
BI
siguientes:
Color: El color de la imagen se define en su conjunto inicialmente como:
AC
IA
Vivamente coloreada
RM
Poco coloreada
FA
Muy poco coloreada
DE
En dependencia de la tonalidad que predomine en toda la imagen y
CA
posteriormente se detallen los colores caractersticos de cada una de las 4
IO
TE
zonas si son fcilmente detectables.
BI
BL
Altura: La altura de una imagen capilar se determina midiendo con una
regla graduada en cm, del borde inferior del papel a la franja, siendo esta
inversamente proporcional al grado alcohlico de la muestra.
La altura promedio de una imagen capilar es de 8,0 cm aproximadamente,
de ah que se pueden clasificar las imgenes en:
Altas: De 8,0cm en adelante
Medianas: Entre 5,0-8,0cm
Pequeas: Menos de 5,0cm
19
En el anlisis de la imagen es posible distinguir 4 zonas:

Franja: lmite superior de ascensin del lquido.
Sub-franja: regin generalmente poco coloreada, comprendida entre
la franja y la zona superior de la banda.
Banda: zona generalmente pigmentada debido a la presencia de
sustancias coloreadas.
IC
A
Sub-banda: situada debajo de la banda hasta el lmite de inmersin.
UI
M
Descripcin de las diferentes partes: Una de las zonas de mayor inters es
la franja, que esta puede ser o no traslucida, lo que denotar la presencia de
BI
resinas o aceites esenciales y grasos.
IA
En la franja, tambin puede describirse la forma que esta adopta, dentro de
RM
AC
la ella.
FA
Lineal
DE
Festonada
CA
Dentada (regular o irregular)
TE
Profundamente dentada
IO
Cambios de coloracin con vapores de amonaco: Se expone la imagen
BI
BL
capilar a los vapores de amoniaco y se observan e informan los cambios de

coloracin. El efecto de la coloracin debe desaparecer al retirar la tira de
papel de los vapores amoniacales.
Examen bajo la Luz Ultravioleta: Despus de la corrida, la tira de papel
bien seca se expone a la Luz ultravioleta de 366 nm. Se observa e informa la
fluorescencia de las diferentes zonas de la imagen.
20
2.2.16. Tamizaje fitoqumico del extracto fluido de las hojas de
Tagetes
minuta L. : Prueba de la Gota 9

Pesar 1g del material de estudio, y se le agregar 10 mL del solvente (para
extracto Diclorometnico, Metanlico, Acuoso cido y Acuoso). Mantener a
reflujo controlado por 10 minutos en Bao Mara. Luego se dejar enfriar y
posteriormente filtrar. Finalmente realizar los ensayos correspondientes para
IC
A
cada extracto.
UI
M
En el caso de la tintura evaporar el solvente, y el residuo redisolver en los
solventes necesarios (diclorometano, metanol, acuoso cido y acuoso) para
BI
la realizacin de los ensayos.
1. Extracto diclorometnico: Se identificar compuestos de muy baja
RM
AC
IA
polaridad como: Esteroles, Quinonas.
FA
A. Ensayo de Liebermann-Burchard: Medir X gotas del extracto y
DE
agregar X gotas de Anhdrido actico, XX gotas de cido Actico y I
CA
gota de cido sulfrico concentrado y mezclar suavemente. La
IO
TE
reaccin ser positiva si aparece coloracin azul, verde o naranja.
del extracto y llevar a
BI
BL
B. Ensayo de Bortranger: Medir X gotas
sequedad, luego agregar XX gotas de tolueno y XX gotas de NaOH

10%. Se agita mezclando las fases y se deja en reposo hasta su
ulterior separacin. Si la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de
rosado o rojo, el ensayo se considera positivo.
2. Extracto metanlico: Se identificar compuestos de polaridad muy

variada, como: Esteroides, Alcaloides, Flavonoides y Taninos.
21
A. Ensayo de Liebermann-Burchard: medir X gotas del extracto y llevar

a sequedad en bao de agua. Luego agregar X gotas de Anhdrido
actico, XX gotas de cido Actico y I gota de cido sulfrico
concentrado y se mezclar nuevamente. La reaccin ser positiva si
aparece coloracin azul, verde o naranja.
B. Ensayo de Shinoda: Medir X gotas del extracto, agregar limadura de
IC
A
magnesio seguido por gotas de HClcc., las coloraciones roja (flavonas),
UI
M
roja a crimson (flavonoles), crimson a magenta (flavanonas) y algunas
BI
veces azul o verde, son consideradas positivas.
C. Ensayo de Tricloruro frrico: Medir X gotas del extracto y luego
AC
IA
aadir II gotas de Cloruro Frrico, la aparicin de un color azul-negro,
RM
nos indica la presencia de Tanino derivados del cido Glico y la
FA
aparicin de un color verde indica la presencia de Taninos derivados del
CA
DE
Catecol.
TE
D. Ensayo de Gelatina: Medir XX gotas del extracto y llevar a sequedad en
IO
bao de agua y el residuo redisolver en XX gotas de agua; luego aadir I
BI
BL
gota de solucin reactiva de gelatina 1%. Se debe de observar un

precipitado blanco, que nos indica la presencia de Taninos.
E. Ensayo de Dragendorff: medir XX gotas del extracto y llevar a

sequedad en bao de agua y el residuo redisolver con XX gotas de
solucin de cido clorhdrico al 1%. Luego agregar II III gotas de
reactivo. Este reactivo (yoduro de bismuto y potasio) da, con los
22
alcaloides en solucin dbilmente acidulada, precipitados de color rojo o

anaranjado.
F. Ensayo de Mayer: Medir XX gotas del extracto y llevar a sequedad en

bao de agua y el residuo redisolver en XX gotas de solucin de cido
clorhdrico al 1%. Luego agregar III IV gotas de reactivo. Este reactivo
UI
M
blanco, blanco amarillento o amarillo limn claro.
IC
A
da con casi todas las soluciones de alcaloides, precipitados de color
3. Extracto acuoso - cido: Se identificar compuestos bsicos, como:
BI
Alcaloides.
A. Ensayo de Dragendorff: Medir XX gotas del extracto y agregar II a III
AC
IA
gotas de reactivo. Este reactivo (yoduro de bismuto y potasio) da, con los
RM
alcaloides en solucin dbilmente acidulada, precipitados de color rojo o
DE
FA
anaranjado.
CA
B. Ensayo de Mayer: Medir XX gotas del extracto y agregar III IV gotas
TE
de reactivo. Este reactivo da con casi todas las soluciones de alcaloides,
BI
BL
IO
precipitados de color blanco, blanco amarillento o amarillo limn claro.

C. Ensayo de Wagner: Medir XX gotas del extracto y agregar II III gotas
de reactivo. Este reactivo es muy sensible y da con los alcaloides,
precipitados floculentos que varan del color caf claro al rojo o pardo
oscuro.
23
4. Extracto acuoso: Se identificar compuestos de alta polaridad, como:

Flavonoides, Leucoantocianidinas, Saponinas, Taninos.
A. Ensayo de Shinoda: medir XX gotas del extracto y llevar a sequedad en
bao de agua y el residuo redisolver en XX gotas de solucin de etanol,
luego agregar unos trocitos de cinta de magnesio seguido por gotas de
HClcc; las coloraciones roja (flavonas), roja a crimson (flavonoles),
IC
A
crimson a magenta (flavanonas) y algunas veces azul o verde, son
UI
M
consideradas positiva.
BI
B. Ensayo de Rosenhein: Medir XX gotas del extracto y llevar a sequedad;
luego agregar X gotas de solucin de cido clorhdrico La reaccin es
AC
IA
2N/1-propanol. Hervir de 15 - 30 minutos. La aparicin de una
FA
leucoantocinaidinas.
RM
coloracin roja en la fase acuosa, nos indica la presencia de
DE
C. Ensayo de Espuma: Medir XX gotas del extracto. Agitar vigorosamente
TE
CA
por 30 segundos, esperar 15 minutos en reposo. La persistencia de la
BI
BL
IO
espuma nos indica la presencia de saponinas.
D. Ensayo de Gelatina: Medir XX gotas del extracto y aadir I gota de

solucin reactiva de gelatina 1%. Se debe de observar un precipitado
blanco, que nos indica la presencia de Taninos.
24
2.2.17. Cuantificacin de flavonoides totales del extracto fluido de las hojas de

Tagetes minuta L. mediante espectrofotometra UV- visible. 26, 27
Preparacin de la Solucin Patrn:

Pesar 80 mg de quercetina patrn y disolver con c.s.p.100 mL de etanol de
96 GL; para obtener una concentracin de 800 p.p.m.
1000
800
= 100 mL
IC
A
80 mg quercetina x
UI
M
Preparacin de soluciones diluidas de la muestra patrn para la curva
BI
de calibracin
Medir volmenes de 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 y 1.4 mL de la solucin
y aforar a 100 con alcohol de 96 GL, para obtener
AC
IA
patrn
RM
concentraciones de 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8.0, 9.6 y 11.2 ppm
FA
respectivamente.
DE
Primero se debe realizar un espectro con la disolucin de 8.0 ppm en el
CA
espectrofotmetro para conocer el pico ms alto correspondiente a la
IO
TE
mx a la que absorbe la quercetina, a la cual deben leerse todas las
BI
BL
muestras.
A continuacin hacer 3 lecturas de absorbancias de las concentraciones
conocidas de 0.032, 0.016, 0.008, 0.0064, 0.002, 0.001 ppm, en el
espectrofotmetro UV-Visible Hewlett Packard (8452ADiode Array
Spectrofotometer) para obtener la ecuacin de la recta.
25
Preparacin de la Solucin Blanco:

Preparar etanol a 96GL como solucin blanco, tomar una alcuota de 3mL
aproximadamente para la calibracin del espectrofotmetro UV-Visible
Hewlett Packard (8452ADiode Array Spectrofotometer).
Hidrlisis de Flavonoides:
IC
A
Medir 50 mL del extracto fluido y reflujar con 50 mL de cido sulfrico al
UI
M
10% durante dos horas.
BI
Purificacin de Flavonoides Totales:
Llevar el extracto a rotavapor a una temperatura de 40C hasta
AC
IA
disminuir aproximadamente a 50% del volumen, enfriar y llevar a
RM
refrigeracin durante 1 hora.
FA
Filtrar al vaco el extracto refrigerado sobre embudo bchner
DE
previamente acondicionado a una temperatura menor a 15C, lavar el
TE
helada.
CA
residuo con 3 volmenes sucesivos de 400 mL de agua bidestilada
BI
BL
IO
Llevar el papel filtro que contiene los flavonoides totales, en forma de

cristales, a la estufa a 40C durante 2 horas.
Solubilizar los cristales obtenidos con 100 mL de etanol de 96 GL y

100 mL de agua bidestilada llevar a rotavapor a una temperatura de
40C hasta disminuir a 50% del volumen y repetir los pasos anteriores
por 3 veces hasta obtener los cristales.
Los cristales purificados disolver en etanol de 96GL y aforar con este a
un volumen de 100 mL.
26
Preparacin de la solucin problema

De la primera muestra que forma parte de la solucin problema tomar
un volumen de 1 mL y aforar a 100 mL con etanol al 96GL; de ste
aforo tomar tres alcuotas de 3 mL aproximadamente, de cada alcuota
obtener 3 lecturas de absorbancias a 256 nm en el espectrofotmetro
UV-Visible Hewlett Packard (8452A Diode Array Spectrofotometer).
IC
A
De las otras dos muestras restantes que forman parte de la solucin
UI
M
problema tomar tres alcuotas de 3 mL aproximadamente, de cada
alcuota obtener 3 lecturas de absorbancias a 256 nm en el
BI
espectrofotmetro UV-Visible Hewlett Packard (8452A Diode Array
AC
IA
Spectrofotometer).
FA
RM
2.3. Anlisis de Datos:
DE
Los resultados obtenidos se analizaron mediante las siguientes pruebas: media
BI
BL
IO
TE
CA
aritmtica, desviacin estndar, anlisis de varianza.
27
III.
RESULTADOS
CUADRO N 01: Caractersticas Macromorfolgicas de las hojas de Tagetes

minuta L.
OBSERVADO
FORMA
-Margen aserrado
UI
M
-Compuesta-Lanceolada
IC
A
CARACTERSTICAS
BI
TEXTURA
-Haz: suave
IA
-Envs: rugosa
AC
PECULIARIDADES
RM
-Glndulas oleosas anaranjadas
CA
DE
FA
COLOR
-Haz (verde )
-Envs (verde claro)
BI
BL
IO
TE
DIMENSIONES
-7x1.94 cm(largo-ancho)
OLOR
-Sui generis (fuerte y penetrante)
SABOR
-Amargo
28
CUADRO N 02: Parmetros fisicoqumico de las hojas de Tagetes minuta L. y su

extracto fluido de
PRUEBA
RESULTADO
HOJAS
MATERIAS EXTRAAS
0.128 %
HUMEDAD
8.70 %
CENIZAS TOTALES
16.78 %
CENIZAS INSOLUBLES EN ACIDO
2.0919 %
CENIZAS SOLUBLES EN AGUA
14.7 %
IC
A
DETERMINACION DE SUSTANCIAS SOLUBLES EN
31.62 %
UI
M
Alcohol a 30 GL
Alcohol a 50 GL
31.50 %
21.27 %
Alcohol a 70 GL
35.16 %
Agua
SOLIDOS TOTALES EN EXTRACTO FLUDO
4 g/100 mL
AC
1.15 g/100 mL
DE
FA
RM
SOLIDOS TOTALES EN MACERADO
IA
MACERADO
BI
EXTRACTO FLUIDO
CA
CUADRO N 03: Anlisis capilar del extracto fluido de las hojas de Tagetes
TE
minuta L.
RESULTADOS
COLOR
ALTURA
BI
BL
IO
PRUEBA
Poco coloreada
17.2 cm
DESCRIPCIN
Regularmente dentada
Naranja (366 nm)
Subfranja: Verde (254 nm)
Banda: Amarillo intenso
COLORACION VAPORES AMONIACO
Cambios de coloracin
COLORACIN LUZ UV
Fluorescencia (+)
29
CUADRO N 04: Tamizaje Fitoqumico del extracto fluido de las hojas de Tagetes
minuta L.
PRUEBAS
RESULTADO
OBSERVACIN
EXTRACTO DICLOROMETANO
Liebermann-Burchard
Esteroles y triterpenos
Bortranger
Quinonas
Gelatina
Dragendorff
Mayer
UI
M
Tricloruro frrico
Flavonoides
Taninos
Taninos
BI
Shinoda
Esteroles y triterpenos
Alcaloides
Alcaloides
AC
IA
Liebermann-Burchard
IC
A
EXTRACTO METANLICO
RM
EXTRACTO ACUOSO CIDO
FA
Dragendorff:
Mayer
CA
DE
Wagner
Alcaloides
Alcaloides
Alcaloides
EXTRACTO ACUOSO
+
Flavonoides
Leucoantocianidinas
Gelatina
Taninos
Espuma
Saponinas
TE
Shinoda
BI
BL
IO
Rosenhein
LEYENDA
+
Positivo
Negativo
30
CUADRO N 05: Cuantificacin de Flavonoides Totales expresados como

Quercetina presentes en el extracto fluido de las hojas de,
Tagetes minuta L. mediante espectrofotometra UV- visible.
CONTENIDO DE
minuta L.
FLAVONOIDES TOTALES
IC
A
GRAMO DE HOJAS DE Tagetes
UI
M
100 g
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
BI
0.0155 %
31
IV.
DISCUSIN
El estudio de plantas medicinales permite el conocimiento de las particularidades de

estas, debindose tener en cuenta el control de calidad de las drogas vegetales, para
garantizar su identidad, pureza y contenido de principios activos as mismo determinar
si esta se presenta alterada y la naturaleza del adulterante. Existen numerosos factores
que alteran a la droga, dentro de las principales encontramos a la poca de recoleccin,
UI
M
IC
A
mtodos de desecacin y conservacin13, 28, 29.
Debido a la gran variedad de especies dentro de una misma familia, sin ser exclusivo el
BI
caso de Tagetes minuta L, es necesario en primer lugar hacer el reconocimiento de
dicha planta, para de esta manera asegurar que ste estudio farmacognstico sea
AC
IA
aplicado a la planta medicinal, por lo cual el material biolgico recolectado del casero
RM
el Pedregal, de la provincia Trujillo, regin La Libertad, fue debidamente identificado
FA
en el Herbarium Truxillense (HUT) con cdigo de ingreso N 57954.
DE
Luego de la identificacin de la especie en estudio y el tratamiento de las hojas para su
TE
CA
anlisis; la cual incluy la recoleccin, seleccin, desecacin y trituracin, se procedi a
IO
la determinacin de las caractersticas macromorfolgicas, lo que nos proporcion un
BI
BL
medio simple y rpido de establecer la identidad, la pureza, asimismo la calidad de la

planta en estudio.
En el cuadro N 01, se observa las caractersticas macromorfolgicas de las hojas de

Tagetes minuta L., presentando un tipo de hoja compuesta-lanceolada con margen
aserrado, con textura del Haz suave y color verde, mientras que el Envs rugosa con un
color blanquecino, nervios marcados, sabor amargo, de olor fuerte y penetrante. La
superficie inferior de las hojas pequeas presenta glndulas oleferas caractersticas, de
32
color anaranjado las cuales tambin son comunes a otras especies tales como
Tagetes erecta 30.
Las dimensiones de largo y ancho realizadas, arrojaron un valor promedio de 7.0 x 1.94
cm respectivamente. Estudios realizados sobre esta especie informan dimensiones
promedio de 20 x 5 cm de largo y ancho respectivamente, a la vez se informa que el
tamao de las hojas as como tambin de la planta est influenciada por factores como
IC
A
el tipo de suelo y humedad, tanto as que mientas ms hmedo sea el clima se alcanzan
UI
M
dimensiones mayores 31, 32.
BI
En el cuadro N 02, se observan los parmetros fisicoqumicos de las hojas de Tagetes
minuta L.; teniendo como resultado para el valor de materia extraa 0.128 %,
AC
IA
considerndose aceptable para muestras compuestas a base de hojas, segn
RM
recomendaciones de la OMS y normas instadas por la Farmacopea de plantas
FA
medicinales del Caribe, las cuales indican que los valores de este parmetro no deben
DE
ser superiores 2 %, a menos que se especifiquen segn la especie en estudio33, 34
CA
El material biolgico, debe estar enteramente libre de la contaminacin inorgnica como
IO
TE
polvo, la excreta de los animales; y de la contaminacin orgnica como insectos, etc.
BI
BL
Adems es difcil preparar una muestra libre de materia extraa puesto que la mayor
parte de esta se adhiere a las partes intrnsecas de la planta medicinal. El problema es
especialmente difcil cuando las muestras de los materiales de la planta medicinal
seleccionados
son
pequeas;
deben
ser
suficientemente
grandes,
para
ser
representativos, de ah la importancia de realizar un control de materia extraa orgnica

e inorgnica13, 33, 35.
33
Por otro lado el porcentaje de humedad encontrado fue 8.70 %, valor que se encuentra
dentro de los niveles aceptados que deben oscilar entre 8 y 14% segn la Norma Ramal.
El mtodo usado fue el de la Estufa con Aire (Mtodo Gravimtrico), el cual, a pesar de
ser este un mtodo considerado como patrn para la determinacin de la humedad, no
existe
una
combinacin
de
tiempo
temperatura
de
secado,
aceptada
universalmente13, 33, 35.
IC
A
Para la conservacin de la droga, es necesario eliminar el exceso de humedad y as
UI
M
evitar reacciones de hidrlisis de sus componentes y el crecimiento bacteriano. Al usar
la estufa se obtuvo un proceso ms controlado y el producto final obtenido es de mejor
BI
calidad33, 36.
AC
IA
Un exceso del agua en una planta medicinal inducir el crecimiento microbiano, la
RM
presencia de hongos o de insectos, y se producir la hidrlisis, por lo cual es necesario
FA
que despus de la desecacin de la droga la humedad sea inferior o igual al 10%,
DE
adems a este porcentaje de humedad la droga se conserva por tiempo prolongado, sin
CA
deteriorar la calidad del material35, 37, 38.
IO
TE
El valor encontrado de cenizas totales fue de 16.78 %, este porcentaje es elevado segn
BI
BL
la Norma Ramal. La determinacin de cenizas representa el contenido en sales

minerales o en materia inorgnica de la droga. Adems nos permite descubrir las
falsificaciones por otras drogas. La ceniza resultante de la incineracin del material
vegetal puede ser fisiolgica, si proviene de los componentes minerales de la propia
planta o derivada de materia extraa, principalmente tierra, adherida a la superficie de la
droga13, 33, 35, 37.
34
Las cenizas totales se componen de carbonatos, fosfatos, sulfatos, silicatos y slice. Esta
prueba es importante porque nos indica, cierta medida, el cuidado que se ha tenido en la
preparacin de la droga. En la determinacin de las cenizas totales, la muestra debe
quemarse a temperatura moderada para luego llevarla a calcinacin, pues de lo contrario
se pierden los cloruros alcalinos, voltiles a altas temperaturas que se encuentra dentro
del rango permitido para esta especie13, 33, 35.
IC
A
Cuando los valores obtenidos para las cenizas totales son elevados (mayores de 5%), es
UI
M
necesario conocer si las mismas estn compuestas por metales pesados, lo cual se
determina mediante los ensayos de cenizas insolubles, y, si este residuo es elevado, hay
BI
que someter a la droga a otros anlisis antes de aprobar su uso37, 39.
AC
IA
Por ello mismo, se realiz los ensayos para determinar los porcentajes de cenizas
RM
solubles en agua e insolubles en cido, cuyos resultados fueron de 14.7 % y 2.09%
FA
respectivamente, siendo elevado en el caso de cenizas soluble en agua y aceptable en el
DE
caso de cenizas insolubles en cido, segn los niveles establecido por las normas
CA
Ramales. Al encontrarse una cantidad mayor de cenizas solubles en agua, podemos
TE
afirmar que la mayor cantidad de cenizas corresponderan a concentraciones elevadas de
BI
BL
IO
algunos iones como calcio, magnesio, hierro, sodio, potasio, etc., porque estos son
solubles en agua, y la pequea concentracin de cenizas insolubles en cido se debe a la
presencia de residuos principalmente de arena, estas suelen componerse sobre todo de
slice; una cantidad elevada de cenizas estas, indica contaminacin con productos
trreos,33, 35, 40, 41.
35
En la determinacin de sustancias solubles encontramos mayor porcentaje en las

soluciones acuosa y etanlica de 30 GL siendo 35.16 % y 31.62 % respectivamente.
En la determinacin de las materias hidrosolubles o alcohol solubles es utilizado como
medio de valoracin de drogas cuyos componentes no puedes determinarse fcilmente
por otros procedimientos; permitindonos determinar la cantidad de principios activos
en una cantidad dada de una droga que es extrada por un solvente. Estos resultados
IC
A
indican la presencia de mayor cantidad de componentes de intermedia polaridad11, 13, 42.
UI
M
Los extractos fluidos son extractos lquidos de materias vegetales, de tal manera
preparadas, que la cantidad de extracto final en volumen es equivalente a la de la droga
BI
desecada en peso, o sea, la relacin peso de droga/volumen final de extracto 1 es a 1, lo
RM
AC
dactilar) y cuantificacin de flavonoides10, 11.
IA
cual nos sirvi para poder realizar la prueba de solidos totales, anlisis capilar (huella
FA
La determinacin de solidos totales encontrada es mayor en el extracto fluido con
DE
4g/100mL en comparacin con el macerado que fue de 1.5g/100mL; esto se debe en que
CA
en el extracto fluido se realiza una extraccin casi completa de la droga, mientras que en
IO
TE
el macerado tiende a extraer sustancias que son ms solubles al solvente utilizado10, 11.
BI
BL
En el cuadro N 03, se describe la prueba de anlisis capilar (huella dactilar) del

extracto fluido. La imagen capilar obtenida se observ poco coloreada con una altura de
17.2 cm, estando la franja festoneada con coloracin amarillenta. Se observ bajo luz
UV a 366 nm manchas amarillo verduzcas, las cuales se intensificaban con vapores de
amoniaco, evidenciando la presencia de compuestos fenlicos9, 13, 43.
36
En el cuadro N 04, el tamizaje fitoqumico del extracto fluido de las hojas de Tagetes
minuta L., llevadas a cabo sugirieron orden de polaridad ascendente para la muestra
tamizada con diclorometano, metanol, agua cida y agua. Estos solventes modifican el
pH del medio con el fin de obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su
solubilidad9, 11, 12.
La extraccin de los fitoconstituyentes sigue un orden de polaridad ascendente; debida a
IC
A
que las clulas de donde se los ha de extraer, constituyen sistemas hidroflicos internos,
UI
M
donde se encuentran los primeros, inmersos dentro de una vescula, que consta de una
membrana lipoflica. Cuando se pulveriza la droga, se rompen las paredes y membranas
BI
celulares, dejando libres las vesculas que almacenan a los fitoconstituyentes
RM
AC
diversidad de metabolitos secundarios8, 11, 35.
IA
mencionados. Los resultados del tamizaje fitoqumico mostraron la presencia de una
FA
En el extracto diclorometano se puso de manifiesto la presencia de esteroles y
DE
triterpenos en la intensidad de la coloracin verde-azulada evidente al realizar el ensayo
CA
de Liebermann-Burchard. En dicho ensayo la reaccin es tpica de los esteroles que
TE
contienen dos dobles enlaces conjugados en un mismo anillo, en dos anillos adyacentes
BI
BL
IO
o un doble enlace de un anillo adyacente con un grupo hidroxilo. La reaccin debe

realizarse en un medio absolutamente anhidro, ya que al existir molculas de agua estas
reaccionaran con el anhdrido actico, anulando de esta manera la reaccin con el
ncleo esteroidal o triterpenoide. Por otro lado no se evidenci la presencia de quinonas
a travs del ensayo de Bortranger13, 30, 35.
37
En el extracto metanlico se observ la presencia de esteroles en la intensidad verdeazulada, por la prueba de Liebermann-Burchard. Se presenci flavonoides con
intensidad de color rojizo, mediante el ensayo de Shinoda, en dicho ensayo el magnesio
metlico es oxidado por el HCl concentrado, dando como productos al H2, que es
eliminado en forma de gas y el MgCl2, que es el que forma complejos con los
flavonoides dando coloraciones caractersticas. El magnesio divalente intensifica la
IC
A
coloracin por estar doblemente coordinado13, 30, 35.
UI
M
En la identificacin de taninos con la prueba de la gelatina se observ un precipitado
blanquecino, comprobando la presencia de taninos en las hojas. En los ensayos de
BI
tricloruro frrico, para la identificacin de taninos, los ensayos de Dragendorff y Mayer
AC
IA
para la identificacin de alcaloides salieron negativos30.
RM
En el extracto acuoso cido, para la identificacin de alcaloides, resultaron positivas las
FA
pruebas de Dragendorff y Wagner mas no la prueba de Mayer. Las reacciones de
DE
precipitacin y coloracin se basan en un intercambio; que normalmente el anin
TE
IO
alcaloides13, 35.
CA
voluminoso del reactivo en accin reemplaza a los aniones pequeos de las sales de
BI
BL
En el extracto acuoso, se identific la presencia de flavonoides por la intensidad de

color rojiza ante la prueba de Shinoda, en la prueba de la Gelatina se identific la
presencia de taninos. Por otro lado no se evidenci la presencia de leucoantocianidinas y
saponinas con las pruebas de Rosenheim y Espuma respectivamente tal y como se
confirma en el cuadro N 04, para todas las pruebas realizas en los diferentes extractos.
Es as entonces que se pudo determinar la presencia de esteroles, terpenos, flavonoides,
taninos y alcaloides. Esto corresponde con informes de estudio de tamizaje fitoqumico
de Tagetes minuta L. de otra procedencia como se informa en el estudio de
38
determinacin de la actividad antimicrobiana del extracto etanlico y su extracto etreo

y clorofrmico de Tagetes minuta L., en la que antes del realizar el ensayo problema se
realiz un ensayo preliminar para determinar la composicin principal de esta especie y
relacionarlos con su efecto, en tal estudio se determin la presencia de flavonas,
flavonoides, compuestos fenlicos, taninos, terpenos, sesquiterpenolactonas, triterpenos
y esteroides. Por otro lado en otro estudio del tamizaje fitoqumico del aceite esencial de
IC
A
Tagetes minuta L. se evidenci la presencia no solo de los componentes encontrados en
UI
M
el presente estudio con el extracto acuoso sino tambin la presencia de saponinas,
quininas y catequinas. Las cuales convierten esta especie en una fuente importante de
BI
metabolito con muchsimas aplicaciones en fitoterapia.32, 44, 45
IA
Finalmente en la Cuadro N 06 para la cuantificacin de flavonoides totales expresado
AC
con quercetina presentes en el extracto fluido de Tagetes minuta L. se encontr que 100
FA
RM
g de hojas secas de contienen 0.0155 g de flavonoides totales. La cuantificacin se llev
DE
a cabo mediante espectrofotometra U.V/Visible a 256 nm (longitud de onda de mxima
CA
absorcin) la cual fue determinada con la solucin patrn de 8 ppm.
TE
Contrastando con estudios realizados sobre los flavonoides presentes en Tagetes
BI
BL
IO
minuta L., como el de Juana Zavaleta et al; se determin que el contenido de

flavonoides en esta especie es baja, sin embargo presenta dentro de su estructura grupos
hidroxilos que determinan una gran propiedad antioxidante, dichas tipos de flavonoides
que se encuentran en cantidades apreciables y que son responsables de tal actividad,
corresponden principalmente al cido cafeico (3,98mg/g) , ferlico (16,60 mg/g) y cido
clorognico (13,7mg/g).19, 43
39
Los flavonoides con sustituyentes dihidroxlicos en posiciones 3" y 4" del anillo B se
muestran ms activos como antioxidantes y este efecto es potenciado por la presencia de
un doble enlace entre los carbonos 2 y 3, un grupo OH libre en la posicin 3 y un grupo
carbonilo en la posicin 4 como sucede con la quercetina. 19, 43
De esta manera se evidencia que Tagetes minuta L., es un fuente importante de
metabolitos con actividad de teraputica, que si bien en el caso de flavonoides la
IC
A
cantidad presente es baja, posee una gran capacidad oxidante tal y como lo demuestras
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
BI
UI
M
algunos estudios.
40
V.
CONCLUSIONES
1. Se realiz el estudio de las caractersticas farmacognsticas de las hojas de

Tagetes minuta L. provenientes del casero Pedregal, de la provincia Trujillo
regin La Libertad.
2. Con el tamizaje fitoqumico preliminar se comprob la presencia de metabolitos
hojas de Tagetes minuta L. se encontraron
3. En el extracto fluido de las
UI
M
IC
A
secundarios tales como esteroles, triterpenos, alcaloides, flavonoides y taninos.
BI
flavonoides totales expresados como quercetina en un porcentaje de 0.0155%.
IA
4. Los resultados obtenidos, identifican a la especie Tagetes minuta L. como una
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
fuente importante de metabolitos secundarios para aplicaciones fitoteraputicas.
41
VI.
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en:
www.biol.unlp.edu.ar/analisisdealimentos/tp-
RM
Disponible
AC
IA
Nacional de la Plata Argentina; 2007 [Citado el 29 de octubre 2014];
FA
determinacionesgenerales-08.doc
DE
42. Medina M. Anlisis de las Cenizas: Alcalinidad y Solubilidad de las Cenizas en
CA
cido y Agua. Determinacin de Calcio, Hierro y Fsforo [Online] Venezuela:
IO
TE
Universidad Central de Venezuela. Facultad de Ciencias. Escuela de Biologa.
BI
BL
Departamento de Tecnologa de Alimentos. Asignatura Anlisis de Alimentos.

Prctica 07. 2006. PP: 46 50. [Citado el 28 de octubre 2014] Disponible en:
www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/mmedina/archivos/Practica7cenizas.pdf
43. Zavaleta J. Capacidad antioxidante y principales cidos fenlicos y flavonoides
de algunos alimentos. Bioqumica y Nutricin de la Facultad de Medicina
Humana, USMP. [Citado el 25 de octubre 2014] 2004. Disponible en:
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48
44. Braga P. Extractos aquosos de Tagetes minuta (asteraceae) como alternativa ao

manejo agro-ecolgico de afdeos em hortalias. Faculda de Agronoma Eliseu
Maciel, Universidade Federal de Pelotas (UFPEL), Brasil. 2005
45. .Mohamed. Crop Protection Compendium. Tagetes minuta L. Department of
Horticulture. Faculty of Agriculture. Minia University. EGYPT. [Citado el o1 de
noviembre
2014]
2008.
Disponible
en
IC
A
http://faculty.ksu.edu.sa/mahmohamed/Documents/Tagetes%20in%20Crop%20
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
BI
UI
M
Protection%20Compendium.pdf
49
VII.
ANEXOS
UI
M
IC
A
7.1. Identificacin Taxonmica en el Herbarium Truxillense (HUT)
BI
Figura N 1: Identificacin Taxonmica: N 57954
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
7.2. Estudio macromorfolgico externo de las hojas de Tagetes minuta L.
Figura N 2: Hoja de Tagetes minuta L.
Figura N 3: Medicin de las dimensiones de las hojas de Tagetes minuta L.

50
Tamizaje Fitoqumico Preliminar.
UI
M
IC
A
7.3.
BI
Preparacin del extracto fluido de hojas de Tagetes minuta L.
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
7.4.
Figura N 4: Tamizaje Fitoqumico del extracto fluido de hojas de Tagetes minuta L.
Figura N 6: Seleccin de la muestra
BI
BL
IO
Figura N5: Recoleccin de la muestra
Figura N7: Estabilizacin de la muestra
51
UI
M
IC
A
Figura N 9: Construccin
del equipo de Lixiviacin
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
BI
Figura N 8: Droga homogneamente

Humidificada
Figura N 10: Extraccin del principio
Figura N 11: Extracto fluido
52
Anlisis capilar del extracto Fluido de las hojas de Tagetes minuta L.
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
BI
UI
M
IC
A
7.5.
Figura 12: Capilarograma del extracto fluido de hojas de Tagetes minuta L.
53
Determinacin de cenizas totales
UI
M
IC
A
7.6.
Parmetros fisicoqumicos de las hojas de Tagetes minuta L, extracto fluido y
7.7.
BI
Figura 13: Cenizas Totales de las hojas de Tagetes minuta L.
FA
RM
AC
IA
macerado.
DE
TABLA N 01: DETERMINACIN DE MATERIAS EXTRAAS
Peso materia
% Materias
extraa
extraas
100 g
0.128
0.128
100 g
0.125
0.125
0.132
0.132
BI
BL
IO
TE
CA
Peso de la muestra
100 g
Promedio
0.128
0.00351
DS
54
TABLA N 02: DETERMINACION DE HUMEDAD

W crisol (M)
W c + m (M1)
W1
W2
W3
WP
(M2)
humedad
16.4907
17.4910
17.4064
17,4055
17,4051
17,4057
8,53
16.2694
17.2694
17,1861
17,1835
17,1833
17,1843
8,51
16.4492
17.4497
17,3595
17,3591
17,3587
17,3591
9,06
IC
A
Promedio
0.3119
AC
IA
BI
UI
M
DS
8.70
Wcrisol+mues(M1)
M2
Cl
FA
W crisol (M)
RM
TABLA N 03: DETERMINACION DE CENIZAS TOTALES

% CENIZAS
TOTALES
17.4733
16.6258
15.34
16.80
19.2757
20.2791
19.4338
15.76
17.26
16.4268
17.4272
16.5792
15.23
16.68
18.4127
17.5624
15.14
16.58
20.0568
19.2094
15.36
16.82
16.3029
15.4539
15.13
16.57
15.3025
CA
TE
IO
19.0556
BI
BL
17.4107
DE
16.4722
Promedio
16.78
DS
0.2555
55
TABLA N 04: DETERMINACION DE CENIZAS INSOLUBLES EN ACIDO

W crisol vaci (M)
W crisol +
W crisol +
Cl
Ci
muestra (M1)
cenizas (M2)
0,1936
1,1947
0,2005
0,68924183
0,75491986
0,2636
1,207
0,2756
1,27199491
1,39320363
0,264
1,2644
0,3017
3,7684926
4,12759321
(%)
IC
A
PROMEDIO
1.7916
BI
UI
M
DS
2.0919
Pr
Solidos Totales
promedio
(St)
AC
Pr2
RM
Pr1
21,8311
21,8308
21.8309
3,994
g/100mL
20,4035
20,6103
20,6097
20,61
4,124
g/100mL
20,4627
20,6598
20,65975
3,94
g/100mL
PROMEDIO
4,01933
g/100mL
DS
0,0946
DE
21.6311
FA
W crisol (P)
IA
TABLA N 05: DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES EN EXTRACTO FLUIDO
BI
BL
IO
TE
CA
20,6597
TABLA N 06: DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES EN MACERADO

Wcrisol (P)
Pr1
Pr2
Pr
Solidos Totales
promedio
(St)
20,4536
20,5113
20,5111
20,5112
1,15
g/100mL
21,6201
21,6783
21,6782
21,67825
1,162
g/100mL
20,4627
20,5208
20,5205
20,52065
1,156
g/100mL
PROMEDIO
1,156
g/100mL
DS
0,006
56
TABLA N 07: DETERMINACION DE SUSTANCIAS SOLUBLES

Grados
Masa de
de
la
crisol
Alcohol
muestra
vaco
Sustancias
W1
W2
W3
DS
Solubles
promedio
(M)
2,5012
16,4907
16,6347
16,6353
16,6354
16,6351333
31,6241048
0,00037859
50
2,5017
16,2694
16,4128
16,4137
16,4135
16,4133333
31,5083297
0,00047258
70
2,5005
16,4505
16,5468
16,5478
16,5481
16,5475667
21,258983
0,00068069
H2O
2,5012
16,4473
16,6076
16,6081
16,608
16,6079
35,1638442
0,00026458
Cuantificacin de flavonoides totales presentes en el extracto fluido de las
BI
7.8.
UI
M
IC
A
30
BI
BL
IO
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
hojas de Tagetes minuta L.
Figura 14: Curva de calibracin Quercetina estndar
57
TABLA 08: CURVA DE CALIBRACIN

Quercetina (ug/mL)
Abs (256 nm)
% Error
1.60000
0.11255
1.95
2 QuercetinaST1.2
1.60000
0.11304
1.51
3 QuercetinaST1.3
1.60000
0.11301
1.54
4 QuercetinaST2.1
3.20000
0.22586
1.61
5 QuercetinaST2.2
3.20000
0.22510
1.95
6 QuercetinaST2.3
3.20000
0.22516
1.92
7 QuercetinaST3.1
4.80000
0.33492
2.78
8 QuercetinaST3.2
4.80000
0.33481
2.82
9 QuercetinaST3.3
4.80000
0.33594
2.47
10 QuercetinaST4.1
6.40000
0.45464
0.96
11 QuercetinaST4.2
6.40000
0.45499
0.88
12 QuercetinaST4.3
6.40000
0.45428
1.03
8.00000
0.57443
-0.12
8.00000
0.57463
-0.16
8.00000
0.57416
-0.08
11.20000
0.81128
-0.99
11.20000
0.81335
-1.25
18 QuercetinaST6.3
11.20000
0.81474
-1.42
19 QuercetinaST7.1
12.80000
0.91521
0.28
20 QuercetinaST7.2
12.80000
0.91537
0.3
21 QuercetinaST7.3
12.80000
0.91570
0.25
BI
IA
AC
13 QuercetinaST5.1
RM
14 QuercetinaST5.2
FA
15 QuercetinaST5.3
BI
BL
IO
CA
DE
16 QuercetinaST6.1
17 QuercetinaST6.2
UI
M
1 QuercetinaST1.1
IC
A
Standard Name
TE
58
BI
UI
M
IC
A
DE
FA
RM
AC
IA
Figura 15: Espectro de la muestra para la cuantificacin de flavonoides en Tagetes

minuta L.
CA
QUERCITINA (ug/mL)
ABS(256nm)
TE
TABLA N 09: CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES
7,0967
0,50894
7,0001
0,50201
7,0392
0,50482
7,0967
0,50894
6,9522
0,50073
6,9807
0,50063
7,0276
0,50434
2
3
4
BI
BL
IO
DIL FACTOR
PROMEDIO
59
7.9.Clculos para determinar la cantidad de flavonoides totales en las hojas de

Tagetes minuta L.
2 ml
Peso de contenido
total obtenido en
papel filtro
1 ml
Peso promedio de
contenido en un
papel filtro
0, 0616 g
(contenid
o)
BI
0.2177g
UI
M
IC
A
LECTURA
25 ml
RM
AC
IA
100 ml
FA
7.0276 ug.1 ml de alcuota
DE
X.....25 ml de dilucin
CA
X = 175.69 ug de F.T
BI
BL
IO
TE
175.69 ug....2ml de alcuota

X....100 ml de dilucin
X= 8784.5021 ug de F.T
8784.5021 ug....0.0616 g
X.0.2177 g
X=31045,22895 ug de F.T
X = 0.031045 g de F.T
Hallando porcentaje:
0.031045 g F.T ....200 g muestra problema
X100 g
X = 0.0155 %
60

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

CARACTERSTICAS FARMACOGNSTICAS DE LAS HOJAS Y

CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES TOTALES DEL EXTRACTO

FLUIDO DE Tagetes minuta L. (HUACATAY) PROVENIENTES DEL

CASERO PEDREGAL, PROVINCIA TRUJILLO, REGIN LA LIBERTAD

BAZN SANDOVAL, YOVHER EDWIN

Dr. VENEGAS CASANOVA, EDMUNDO ARTURO

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

emana, dedico en primer lugar mi trabajo a Dios.

formarme con buenos sentimientos, hbitos y valores, lo cual me ha ayudado a salir

adelante en los momentos ms difciles.

ejemplo del xito de sus vidas acadmicas y profesionales, un deseo de superacin.

posible esta experiencia, una de nuestras principales metas.

Bazn Sandoval Yovher Edwin

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

A Dios, quien con su inmensa bondad y amor, me ha permitido el desarrollo del

salir adelante en los momentos ms difciles.

sus vidas acadmicas y profesionales, que son un ejemplo de superacin.

Y a m fraternal compaero, Yovher que gracias a su apoyo, y conocimientos hicimos

Benites Melquiades Javier Isai

posible la realizacin de una de nuestras principales metas, el termino de este trabajo.

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

duda alguna en el trayecto de mi vida me han demostrado su amor, corrigiendo mis

faltas y celebrando mis triunfos.

asesoramiento a la realizacin de la misma.

Gracias a todas las personas que directa e indirectamente colaboraron en la

Bazn Sandoval Yovher Edwin

realizacin de este proyecto.

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

Al finalizar un trabajo tan arduo y lleno de dificultades como el desarrollo de una

Debemos agradecer de manera muy especial y sincera al Dr. Edmundo Arturo

aporte invaluable, no solamente en el desarrollo de esta tesis, sino tambin en nuestra

formacin como investigadores. Las ideas propias, siempre enmarcadas

Bazn Sandoval Yovher Edwin y

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

MIEMBROS DEL JURADO

Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes

Dr. Edmundo Arturo Venegas Casanova

Mg. Maril Roxana Soto Vsquez

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

SEORES MIEMBROS DEL JURADO:

CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES TOTALES DEL EXTRACTO FLUIDO DE

PROVINCIA DE TRUJILLO REGIN LA LIBERTAD

Tagetes minuta L. (HUACATAY) PROVENIENTES DEL CASERO PEDREGAL

Aprovechamos la oportunidad para manifestar el ms sincero agradecimiento a la plana

docente y administrativa de nuestra Alma Mater, cuya enseanza y apoyo ha

contribuido categricamente a nuestra formacin profesional.

Dejamos a vuestra consideracin seores miembros del jurado, la calificacin del

Trujillo, noviembre del 2014

BAZAN SANDOVAL YOVHER

BENITES MELQUIADES JAVIER

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

flavonoides totales presentes en el extracto fluido de dichas hojas.

Para ello se recolectaron muestras de la planta del casero Pedregal, de la provincia

Trujillo, regin La Libertad, determinndose inicialmente

macromorfologas y sus parmetros fsico-qumicos: porcentaje de humedad residual,

Adems, se realiz la huella dactilar del extracto hidroalcohlico y el tamizaje

fitoqumico segn la prueba de la Gota. Finalmente se ce cuantific flavonoides

mediante espectrofotometra UV/Visible a 256 nm.

sustancias solubles en agua 35.16%, en alcohol a 30 GL 31.62%, en alcohol a 50 GL

esteroles, triterpenos, alcaloides, taninos y flavonoides. Finalmente la cantidad