PRCTICAS DE FISIOLOGA DE LA SANGRE Y SISTEMA

INMUNE
Para realizar los diferentes experimentos de la prctica, sacaremos sangre venosa con
anticoagulante EDTA a un alumno de cada grupo:

Experimento 1.- Determinacin del hematocrito

El hematocrito (Hto) es la relacin existente entre el volumen de eritrocitos y el volumen total

de sangre, expresado como porcentaje. Est directamente relacionado con la concentracin de
hemoglobina. Un descenso del mismo es indicativo de anemia, mientras que el aumento lo es de
poliglobulia.
Mtodo:
A.- a la sangre con anticoagulante obtenida, introduciremos un tubo capilar. Al hacerlo, la
sangre subir por l por capilaridad.
B.- Sellamos uno de los extremos del tubo con plastilina para que haga de tope y no salga la
sangre durante la centrifugacin.
C.-- Colocaremos en la microcentrifuga por 5 minutos a 10,000 rpm
D.- Al finalizar la centrifugacin, la muestra se habr separado en dos fracciones: un
sobrenadante (parte lquida que corresponde al plasma) y un precipitado en el fondo (que
corresponde a las clulas de la sangre).
E.- Se medir (con una tabla) la fraccin del precipitado celular y se calcular as el porcentaje
del hematocrito.

Experimento 2.- DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA

GENERALIDADES
La hemoglobina es una protena pigmentada de color rojo transportadora de oxgeno que se
Encuentra solo en los eritrocitos de los vertebrados. Es un tetrmero con dos pares de
Cadenas polipeptdicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina Llamado
grupo hemo, que a su vez contiene hierro.
Las dos principales funciones de la hemoglobina son el transporte de oxgeno amortiguador del
pH. Las concentraciones de hemoglobina estn influidas por variaciones fisiolgicas como la
edad, sexo, deshidratacin, postura y altitud, y por procesos patolgicos. Se encuentran
valores patolgicos en anemias y en policitemias.
La determinacin de la concentracin de hemoglobina se ha convertido en una de las pruebas
ms importantes en el diagnstico y tratamiento de la anemia. Las tres causas principales de
anemia son: alteracin en la sntesis de los eritrocitos en la mdula sea, prdidas de sangre
excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre perifrica.
MUESTRAS
Sangre capilar o venosa recogida mediante procedimientos estndar y con heparina o EDTA
como anticoagulante. La hemoglobina en sangre es estable 6 das a 2-8 C.
PROCEDIMIENTO
1.- Pipetear en 3 tubos de ensayo:
BLANCO
ESTNDAR
MUESTRA
ESTNDAR
50 uL
MUESTRA DE SANGRE
50 uL
REACTIVO DE TRABAJO
5 ml
5 ml
5ml
2. Mezclar por inversin sin que forme espuma y dejar por 3 minutos a temperatura ambiente.
3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 540 nm restando el Blanco
CLCULOS
La concentracin de hemoglobina en la muestra se calcula a partir de la frmula:
A Muestra
-------------- X Concentracin estndar = hemoglobina en gr%
A Patrn
OJO.- Los valores varan de acuerdo a la edad, sexo, lugar de procedencia

Experimento 3.-Velocidad de Sedimentacin globular

VSG es la precipitacin de los eritrocitos (glbulos rojos) en un tiempo determinado (1-hora),

que se relaciona directamente con la tendencia de los glbulos rojos hacia la formacin de
acmulos (pilas de monedas) as como a la concentracin plasmtica de protenas (globulinas y
fibringeno)
Materiales. Sangre con anticoagulante
Mtodo:
A.- En un tubo de velocidad de sedimentacin, agregar con una pipeta Pasteur sangre hasta la
marca 0.
B.- Fijar con plastilina en forma vertical en las maylicas de la pared
C.- Dejar por espacio de una hora
D.- Leer la sedimentacin en mm/hora

Experimento 4.- Recuento de glbulos blancos

Estas pruebas tienen por objeto determinar la concentracin de los distintos tipos celulares
presentes en la sangre. Leucopenias y leucocitosis en el de los glbulos blancos.
Materiales.
Sangre con anticoagulante
Reactivo de Turk para contar glbulos bancos (cido actico al 2% en agua destilada + 1 gota
de violeta)
Cmaras de neubawer con sus respectivas laminilla
4 Microscopios binoculares
Mtodo:
A.- En un tubo de ensayo pequeo 13x75 agregar 380 ul de reactivo de Turk agregar 20 ul de
sangre anti coagulada mezclar sin formar espuma, dejar por un minuto
B.- Cargar aproximadamente 5ul de la suspensin en la cmara neubawer
C.- Dejar en reposos por 2 minutos, llevar al microscopio y leer los cuadrantes grandes (L)
D.- El resultado dividir entre 2, agregar 2 ceros, se expresa en cel/mm3
Cmara de Neubawer

Los valores se dan en clulas x mm3

Experimento 5.-Prctica Determinacin del grupo sanguneo:

Materiales:
Sangre con anticoagulante
Placa de porcelana
Pipetas de plstico
Reactivos de grupos sanguneos: anti A, anti B y anti D
Mtodo:
1. Se realiza una extraccin venosa
2. Ponemos una gota de anticuerpo A en la porta rotulada con la A, Otra gota de anticuerpo B
en el porta B, una gota de anticuerpo Rh+ en el porta D.

3.* Agregamos una gota de sangre (con cuidado de no tocar la punta de la pipeta con el
anticuerpo del porta) a cada anticuerpo y mezclamos.
4. Interpretamos los datos segn la aglutinacin de la sangre de los portas:
- Aglutina A, aglutina B aglutina D
- Aglutina A, aglutina B, no aglutina D
- Aglutina A, no aglutina B, aglutina D
- Aglutina A, no aglutina B, no aglutina D
- No aglutina A, aglutina B, aglutina D
- No aglutina A, aglutina B, no aglutina D
- No aglutina A, no aglutina B, Aglutina D
- No aglutina A, no aglutina B, no aglutina D

AB+
ABA+
AB+
B0+
0-

Experimento 6.-Prueba Inversa o determinacin de anticuerpos

en sangre
Material
Muestra de suero o plasma de los de GS A y GS B
Mtodo
A.-Conocidos los grupos sanguneos de los compaeros, haremos una suspensin al 10% de los
hemates en SSF, para tener clulas A y clulas B, las cuales rotularemos con el plumn
B.-Poner 2 gotas de suero o plasma de un compaero en una placa previamente sealizada, luego
agregar 1 gota de clulas A y otra de clulas B, mezclar y leer:
Aglutina (+)
No aglutina (-)
Determinar el GS y explicar el resultado

Experimento 7.-Tiempo de coagulacin o Test de Lee White.

OBJETIVOS: Evaluar la va intrnseca de la coagulacin.
MATERIALES:
A.- 3 tubos de ensayo 13 x 100
B.-2. Porta tubos (gradilla)
C.-3. Cronmetro
D.-4. Algodn con alcohol
E.-5. Torniquete
F.- Jeringas de 5 ml con aguja
Reactivos biolgicos: estudiantes
PROCEDIMIENTO:

1. Correcta asepsia de la flexura del brazo.

2. Se toma el tiempo en cuanto se visualice la sangre en la jeringuilla.
3. Extraemos 5cc de sangre (separamos 2cc para la retraccin del cogulo), y colocamos 1cc de
sangre en cada tubo de ensayo.
4. Cada 30 segundos hacemos movimientos de inclinacin y frotacin hasta que coagule el
primer tubo.
5. Hacemos lo mismo con el segundo tubo y despus con el tercero.
6. Sumamos los tres tiempos y luego los dividimos para 3.
El tiempo de coagulacin normal oscila entre 5 y 11 minutos

Experimento 8.- Retraccin del cogulo

OBJETIVOS: Evaluar el factor plaquetario tanto en nmero como en funcin.
MATERIALES:
1. Bao Mara
2. Tubos de ensayo
3. Porta tubos
Reactivos biolgicos: estudiantes
PROCEDIMIENTO:
* Se colocan los dos c.c. de sangre restantes de la experiencia anterior en un tubo de ensayo,
con lentitud para evitar el dao de los glbulos rojos y especialmente de las plaquetas.
* Este tubo de ensayo es colocado en el sistema de bao mara a una temperatura de 37.5
grados centgrados, (temperatura corporal normal).
* Se observan los resultados a los 30, 60 y 120 minutos, y a las 24 horas de realizada la
experiencia.

Realizar el Informe de prcticas y enviarlo va email (plazo mximo 1

semana) al correo wou03@hotmail.com
CUESTIONARIO (desarrollar al final del informe de prcticas)

1.-Etiologa ms frecuente de trombocitopenia adquirida por disminucin en la

produccin. En la Quimioterapia y Radioterapia
2.-Mecanismos de las alteraciones de la hemostasia en la insuficiencia renal
3.-Por que no sirve el Plasma fresco congelado para el Tratamiento de los
hemoflicos?
4.-Que s el mieloma mltiple y por que se llam as?
5.-Potencial Z y fenmeno de Roleaux.
6.-Cual es la va comn de la coagulacin?
7.-Paciente masculino de 37 aos de edad que muestra en los resultados de
laboratorio: GR=4700000Hb= 12g/dL Hto= 40%Calcule valores los valores hematimtricos, y
segn a los resultados obtenidos determine si el paciente presenta anemia y de qu tipo.
8.- Paciente de sexo femenino con 50 Kg de peso y hemoglobina de 9.8 g/dL. Calcule la cantidad
de O2 y Fe en sangre. Considrese: Que hay 70 mL por Kg de peso, 1g Hb por 1,34ml de O2 y
34,7mg de Fe por 100mL
9 . - P a c i e n t e q u e e n e x a m e n d e l a b o r a t o r i o p r e s e n t a b a = 12000 leucocitosl x
mm3 Neutrofilos=30% Linfocitos=65% Monocitos=3% Eosinofilos: 2%; Evalu los resultados
de laboratorio segn los valores absolutos (edad 3 aos)
10.-- Explique a que nivel actan los siguientes coagulantes en la fisiologa de hemostasia
EDTA, Citrato de sodio, Heparina, Warfarina
PREGUNTAS (al final de informe)
1.- Cul es tu grupo sanguneo y el de tus padres y hermanos, como se han heredado?
2.- Qu es la volemia? Cul es su valor normal, que tcnicas se usa para medirla?
3. Qu son las constantes corpusculares para que se utilizan en la prctica mdica?
4.- Qu es la hemlisis? Cuales on las causas
5.- Describa el fenotipo Bombay y su importancia
6.- Describa la fisiologa de la hemostasia?
7.-Como es la Fisiologa sangunea del hombre de la altura (>3500 msnm) ?
8.-Cuando el fibringeno esta alto hay cambios en el valor normal de la VSG, porque?