COLORACIN GRAM

I. OBJETIVO
Comprender la base qumica de la tincin de Gram.
Diferenciar entre dos grupos principales de bacterias: Gram+ positiva
y Gram- negativas.
II. MARCO TEORICO
La tincin de Gram, llamada as en honor al Dr. Hans Christian Gram.
Este mtodo divide las bacterias en dos grandes grupos, la Gramnegativas y la Gram+ positiva. Esto es esencial para la clasificacin y
diferenciacin de microorganismos. La reaccin a la tincin de Gram
est basada en la diferencia en la composicin qumica de la pared
celular bacteriana. Las bacterias Gram+ positivas tienen una gruesa
capa de peptidoglicano o murena, mientras que esta capa es ms fina
en las Gram-negativas y est rodeada por una bicapa lipdica externa. El
Peptidoglicano es un

polisacrido formado por dos subunidades

qumicas, N-acetilglucosamina y acido Nacetilmurmico.

III.

MATERIALES - REACTIVOS

Materiales de bioseguridad:
Mandiln
Mascarilla
Gorro
Guantes
Materiales
Mechero de alcohol
Lamina portaobjetos
Microscopio
Muestra de esputo
Reactivos
Cristal de Violeta
Lugol Gram
Alcohol acetona
Safranina
Azul de metileno
Aceite de inmersin
Agua destilada

IV.

PROCEDIMIENTO
1. En una lamina porta objetos colocar una gota de agua destilada;
extender la muestra y fijarla en el mechero

2. La muestra se tiene que fijar por lo cual se acerca el portaobjetos a

la llama del mechero.

3. Cubrir el frotis con cristal violeta (3gotas), dejar reposar por un

minuto; luego lavar .

4. Inunde suavemente con el mordiente y dejar actuar por

luego escurrirlo con agua

5. luego escurrirlo con agua

(2min)

6.

gota
casi claro, solo ligeramente azul.

7. Lave suavemente con agua.

Decolore
con
alcohol
acetona Nota: no sobre
decolore, agregue el alcohol
a gota hasta que este salga

8. Agregue la safranina para la tincin de contraste.

9. Lave suavemente con agua.

10.
Seque la preparacin.

11.
Examine al microscopio con el objetivo 100X con aceite de
inmersin.

12.
De la muestra de esputo. Las bacterias Gram + positivas se
ven de color purpura-violeta y las Gram negativas de color rojizorosado

V. CONCLUSIONES
Tincin Primaria: Se utiliza Cristal Violeta, que tie todas las clulas
moradas.
El yodo o Lugol, aparte de matar bacterias, incrementa la afinidad del
colorante primario con la clula, formando complejos insolubles con
este. El complejo cristal violeta-yodo sirve para intensificar el color

del tenido.
El alcohol acetona disuelve los lpidos de la parte externa de la pared
celular Gram-negativa, haciendo la pared ms porosa. De esta
manera, el complejo Cristal violeta-yodo es removido de la capa de
murena ms fina de las bacterias Gram negativas, mientras que la

pared ms gruesa de las Gram-positivas retiene el tinte en su interior.

La Safranina, este tinte se utiliza para teir de rojo las clulas
previamente decoloradas, o sea, las Gram-negativas.

VI.

BIBLIOGRAFIA

INSTITUTO SUPERIOR TECNOLGICO ARZOBISPO LOAYZA

INFORME DE LABORATORIO

PRACTICA N 1: COLORACIN GRAM

INTEGRANTES:
-MEDRANO SNCHEZ, GREYS ARIANA
-MOYA CRUZ, JACKELINE
-QUISPE GAVILN, FLOR
CURSO:
BACTERIOLOGA
PROFESOR:
DOMINGO RIVERA TORRES

LIMA PER
2016