13

UNIDAD 2. ALMACENAJE Y EXPRESIN DE LA INFORMACIN GENTICA

2.4 Replicacin

Watson y Creck sugirieron que durante la replicacin, los enlaces de hidrgeno que
mantienen a las dos cadenas de hlices de ADN deben romperse de manera secuencial, lo
que ocasiona una separacin gradual de las cadenas (como la separacin de las dos
mitades de una cremallera). Cada una de las cadenas separadas, con sus bases de
nitrgeno expuestas, sirven como un templete o molde que dirigir el orden en el cual los
nucletidos complementarios se ensamblaran para formar la cadena complementaria.

Cuando el proceso se completa deben generarse dos molculas de ADN de doble cadena
que son:

a) Idntica la una a la otra.

b) Idntica a la molcula de ADN original.

Cada doble hlice de ADN debe contener una cadena de la molcula de ADN original y una
cadena sintetizada de nueva cuenta (Karp, 2007).

En clulas diploides, cada cromosoma y sus genes estn presentes dos veces; los dos
cromosomas con el mismo arreglo de genes llamados homlogos, cuando una clula se
divide, todos los cromosomas son replicados, de esta manera cada clula hija contiene el
complemento, entonces la unidad de replicacin es el cromosoma, cuando un cromosoma
es replicado, todos los genes de este cromosoma son autnticamente replicados a lo largo
de l (Guilln-Andrade, 2004).

2.4.1 Sntesis de ADN en microorganismos

El modelo de la estructura del ADN con dos hebras de polidesoxirribonucletidos

enlazadas por puentes de hidrgeno entre las bases complementarias, indica como puede
copiarse las cadenas de ADN. Es posible inferir dos mecanismos: un mecanismo
conservador en el que la nueva molcula hija de ADN est formada por dos nuevas
 14

hebras; y el semiconservador, en el que cada hebra de ADN progenitor se combina con

una hebra hija recin sintetizada en donde Meselson y Stahl demostr que este
mecanismo era el correcto (Smith y Wood, 1998).

2.4.2 Modelo de sntesis de DNA

Meselson y Stahl sealan que se suministra Escherichia coli una fuente de N, como el
amoniaco, puede elaborar todos los nucletidos de purina y pirimidina necesarios para la
sntesis de ADN. Si el N que se suministra es el istopo pesado (15N), el ADN resultante
ser ms denso que el sintetizado con el istopo ms abundante (14N); los dos tipos de
ADN se pueden separar por centrifugacin a travs de un gradiente de CsCl.

El experimento de Meselson y Stahl consiste en crecer bacterias en 15N durante varias

generaciones para asegurarse de que todo el ADN se encontraba en forma pesada; las
clulas se transfirieron a un medio que contena una fuente de 14N como nico suministro
de N y se permiti que se dividieran una sola vez; mientras crecan en 14N, la cantidad
total de ADN, deba de haberse duplicado. En este punto se extrajo el ADN de las clulas y
se someti a centrifugacin en un gradiente de CsCl; si el mecanismo de replicacin
hubiera sido conservador, se habra observado dos bandas de ADN despus de
centrifugar, el ADN original con 15N y el ADN hijo que contendra 14N (Figura 3).

Figura 3. Representacin del experimento de Meselson y Stahl.

 15

En lugar de ello se observ una sola banda de densidad intermedia, equivalente a 145N.
Esto slo poda haberse logrado a travs de un mecanismo semiconservador; si este ADN
se calentaba y se enfriaba rpidamente para separar las hebras, y despus volva a
centrifugarse en el gradiente de CsCl, se observaban dos bandas que correspondan una a
la densidad de ADN con 15N y la otra a la del ADN con 14N (Smith y Wood, 1998).

2.4.3 Sntesis de DNA en eucariotas

El mecanismo de sntesis de ADN en eucariontes probablemente sea similar a la de los

procariontes; las principales complicaciones adicionales son que el ADN en eucariontes se
organizan en varios cromosomas lineales y que el ADN es mucho ms largo que el que se
encuentra en los procariontes. EL movimiento de la ADN polimerasa es mucho ms lenta
que en los procariontes, para compensar esto, una clula eucarionte tiene ms de 20000
molculas de las enzimas; esto permite que se forme un nmero mucho mayor de
horquillas de replicacin, por ejemplo 2000 o ms en los cromosomas eucariontes; de esta
forma, en general la replicacin del ADN es ms rpida que la de E. coli (Smith y Wood,
1998).

2.4.4 Control gentico de la replicacin

Las mitocondrias y posiblemente los cloroplastos, contienen un ADN polimerasa, la

sntesis de ADN mitocondrial se lleva a cabo por el ADN polimerasa y la replicacin
empieza con el copiado de una sola hebra de ADN progenitor. Mientras la replicacin no
est hacia la mitad de esta hebra no empieza la sntesis de la segunda hebra. Esto da
origen a las llamadas estructuras D (Figura 4) la concatenacin se da como consecuencia
de la replicacin de ADN mitocondrial y se requiere la topoisomerasa para destorcer y
separar las hlices de ADN.

El ADN se copia por medio de ADN polimerasa con gran exactitud (slo se inserta una base
incorrecta cada 108 a 1012 bases). Esta precisin es necesaria, ya que la insercin de una
base incorrecta es una mutacin que puede producir un defecto en el organismo. Todas
las ADN polimerasas procariontes tienen actividad exonucleasas y actan de preferencia
 16

sobre bases con pares incorrectos; si se introduce una base incorrecta en la hebra hija de
ADN, la sntesis posterior de la hebra se bloquea hasta que se elimina la base, esto se
conoce como correccin de prueba (proofreading) (Smith y Wood, 1998).

Figura 4. Generacin de una estructura en D durante la replicacin de ADN.

2.5 Recombinacin de ADN

Muchas especies pueden transformarse y se pueden obtener cientos de individuos

transformados independientemente; en el caso de la soya, papa, rbano y tabaco, son
fciles de transformar y para esto se utiliza la bacteria Agrobacterium tumefasciens.

La Agrobacterium tumefasciens tiene un plsmido de gran tamao (plsmido Ti o inductor

de tumores), que producen un crecimiento tumoroso, o callo, de clulas vegetales no
diferenciadas. Estas clulas producen compuestos especializados, llamadas opinas, de las
cuales se alimentan las bacterias; para alcanzar esta transformacin, parte del plsmido Ti,
el T-ADN, se transfiere de las bacterias a las clulas vegetales, donde se integra
aleatoriamente a un cromosoma de la planta (Figura 5). El T-ADN dirige el metabolismo de
la clula para desdiferenciar y producir opinas. El callo puede mantenerse en un cultivo de
tejidos libres de bacterias y despus diferenciarlos otra vez en una planta normal. Todas
las clulas de estas plantas son portadoras del T-ADN; los genes extraos pueden clonarse
en el T-ADN y a continuacin transformar con el A. Tumefasciens; las bacterias, de modo
 17

conveniente, transformarn las clulas vegetales, tomando tanto el gene extrao como el
T-ADN.

Figura 5. Recombinacin de ADN con Agrobacterium tumefasciens.

El objetivo de la transformacin, es obtener plantas sanas, resistentes a plagas,

enfermedades, herbicidas selectivos entre otros. Una protena que en particular tiene un
potencial enorme es la -endotoxina (toxina B.t) producida por la bacteria Bacillus
thuringensis. Esta toxina es letal para ciertos tipos de insectos. El gene de la toxina B.t, se
ha introducido en algunas plantas utilizando A. Tumefasciens; cuando el gene se fusiona a
un promotor vegetal fuerte, las clulas de las plantas producen la toxina. Las planta
transformadas son completamente resistentes al ataque de insectos (Smith y Wood,
1998).

2.6 Hibridacin

Las cadenas parcial o totalmente complementarias de ADN o ARN pueden hibridar entre s
formando los puentes hidrgeno correctamente para generar dplex de ADN-ADN o ARN-
ADN, es la base para las tcnicas que incluyen a la hibridacin en colonia, en punto o en
filtros donde los cidos nucleicos se hayan transferido. Un fragmento de ADN o de ARN
aislado puede utilizarse como rastreador o sonda para buscar o identificar una secuencia
de ADN similar, por lo que la sonda se marca con radioistopos (Figura 6).
 18

La sonda se pone en contacto con la muestra problema (clonas, geles) y las molculas
homlogas hibridan entre si; como la sonda lleva la marca, es fcil identificar la posicin
de hibridacin de los cidos nucleicos. El soporte se lava de modo que se elimine el resto
de la sonda radioactiva no hibridada, y el resultado se obtiene al exponer el soporte a una
pelcula de rayos X (Balbs, 2002).

Figura 5. Hibridacin de cidos nucleicos.

2.7 Cdigo gentico

El mensaje de la informacin contenida en el ADN, para la sntesis de las protenas, est

cifrado en el cdigo gentico, es un alfabeto de cuatro letras A G C T, (de los cidos
nucleicos es traducido al lenguaje de 20 letras de las protenas) cuya unidad de
informacin o codn est integrada por tres bases consecutivas que corresponden a un
determinado aminocido, la secuencia de los codones corresponde a la secuencia de
aminocidos en determinada protena (Cuadro 1).

Partiendo nicamente de consideraciones matemticas desde hace tiempo haba parecido

muy probable que cada resto aminocido estuviera codificado por un pequeo nmero de
nucletidos consecutivos de la cadena de ADN, por lo que se requiere de ms de un
nucletido, dado que en el ADN slo hay cuatro bases, mientras que las protenas
contienen 20 aminocidos. Adems, como quiera que las cuatro letras de cdigo del ADN
 19

(A, G, C y T), dispuestas en grupos de dos, pueden producir slo 42 = 16 pares diferentes,
los vocablos de cdigo para los aminocidos deben contener ms de dos letras; las cuatro
bases tomadas en grupos de tres, pueden especificar tericamente a 43 = 64 aminocidos
distintos. Por tanto, un cdigo de tripletes es practicable para codificar a los aminocidos
(Lehninger, 1993).

Mecanismos de la gentica molecular
Cuadro 1. Cdigo gentico determinado por combinaciones entre tripletes y aminocidos.

2a. base
1a. base U C A G
UUU Fenilalanina UCU Serina UAU Tirosina UGU Cistena
U UUC Fenilalanina UCC Serina UAC Tirosina UGC Cistena
UUA Leucina UCA Serina UAA Ocre Parada UGA2 palo Parada
UUG Leucina UCG Serina UAG3 mbar Parada UGG Triptfano
CUU Leucina CCU Prolina CAU Histidina CGU Arginina
C CUC Leucina CCC Prolina CAC Histidina CGC Arginina
CUA Leucina CCA Prolina CAA Glutamina CGA Arginina
CUG4 Leucina CCG Prolina CAG Glutamina CGG Arginina
AUU Isoleucina ACU Treonina AAU Asparagina AGU Serina
A AUC Isoleucina ACC Treonina AAC Asparagina AGC Serina
AUA Isoleucina ACA Treonina AAA Lisina AGA Arginina
AUG5 Metionina ACG Treonina AAG Lisina AGG Arginina
GUU Valina GCU Alanina GAU cido asprtico GGU Glicina
G GUC Valina GCC Alanina GAC cido asprtico GGC Glicina
GUA Valina GCA Alanina GAA cido glutmico GGA Glicina
GUG Valina GCG Alanina GAG cido glutmico GGG Glicina

2
Fuente: Rodrguez, 2012. UGA codifica como selenocistena.
En algunos microorganismos,
3
2
En En algunas bacterias el codn UAG codifica como pirrolisina.
algunos microorganismos UGA codifica como selenocisteina.
4
CUG inicio para uno de los 2 productos alternativos del gen c-myc humano
3
En
5 algunas bacterias el codn UAG codifica como pirrilosina.
AUG codifica para metionina, y adems sirve como sitio de iniciacin
4
CUG inicio para uno de los dos productos alternativos del gene c-myc humano.
5
AUG codifica para metionina y adems sirve como sitio de iniciacin.
 20

2.8 Transcripcin

La transcripcin es el proceso por el cual se transfiere la informacin de un gene

codificado en el ADN de doble cadena, a una molcula de ARN de cadena sencilla.

La cadena de ADN que contiene la informacin se denomina cadena codificadora; en el

ADN se encuentran codificadas las seales necesarias para que la enzima que sintetiza
mARN reconozca cules secuencias se transcriben y dnde son el inicio y la terminacin de
la sntesis. A partir de la posicin donde se inicia el transcripto, hacia el extremo 3 de la
cadena codificadora, se denominan las posiciones de los nucletidos con nmeros
positivos y se dicen que se encuentran hacia abajo. Hacia el extremo 5 de la cadena
codificadora los nmeros son negativos y se dice que los nucletidos se encuentran hacia
arriba. Cada gene posee sus propias regiones reguladoras, las cuales pueden estar
situadas en posiciones variadas, incluso traslapndose una sobre otra, y algunas de estas
pueden estar ausentes en ciertos genes.

El inicio de la transcripcin es el paso ms importante en la regulacin de la biosntesis de

las protenas; la concentracin de cada mARN que es transcrito de cada gene individual
depende, hasta cierto grado, de la secuencia nucleotdica de una regin muy precisa
llamada promotor, que es la regin donde se une la enzima que transcribe un gene.
Adems del promotor, hay otras secuencias que desempean funciones cruciales en la
regulacin de la transcripcin, secuencias que son diferentes en los procariotas y los
eucariotas, genticamente se conocen como secuencias regulatorias de la expresin
gentica.

La transcripcin de un gene en una molcula de mARN siempre procede en direccin 5 a

3 y es catalizada por enzimas dependientes de ADN que se conocen como ARN
polimerasa dependiente de ADN. Esta enzima tienen una gran afinidad por los promotores
que en la mayora de los casos se localiza en la regin hacia arriba del punto de inicio de la
transcripcin; a diferencia de las ADN polimerasas, las ARN polimerasas no pueden editar
o corregir equivocaciones en la molcula que van sintetizando, de modo que cualquier
 21

error en la lectura del templado pasa a la protena. Esto rara vez afecta a la clula ya que
tanto el ARN como las protenas sintetizadas tienen una vida media determinada y son
degradados, por lo que los errores no se heredan a la siguiente generacin.

La unin del ARN polimerasa separa los puentes de hidrgeno entre las bases
complementarias de las dos cadenas de ADN en el promotor para iniciar la polimerizacin
de los ribonucletidos trifosfato y sintetizar la cadena de mARN. Solo se transcribe una
hlice del ADN que acta como templado o molde, los sustratos del ARN polimerasa son
por tanto ATP, GTP, CTP y UTP (colectivamente llamados NTPs), y un in metlico
divalente (Mg o Mn) como cofactor.

La formacin de molculas de ARN se inicia usualmente con un ribonucletido tipo purina

(G o A), complementario al nucletido de inicio de transcripcin presente en la cadena de
ADN que acta como templado y se establece una unin 3- 5 fosfodister entre el grupo
3- OH del primer NTP y el fosfato ms prximo a la ribosa, denominado , del segundo
nucletido. La reaccin utiliza la energa obtenida de la hidrlisis del pirofosfato liberado
durante la hidrlisis de ATP, la elongacin de la cadena de ARN contina en direccin 5 a
3, formando un hbrido corto de ADN-ARN de aproximadamente 12 pares de bases, y
despus de ARN se disocia de su hebra complementaria de ADN permitiendo que el ADN
adquiera de nuevo su estructura regular de doble hlice. La regin donde los puentes de
hidrgeno se desnaturalizan para que la transcripcin proceda, se denomina burbuja de
transcripcin, que se mueve al transcribirse el gene.

El ARN polimerasa contina elongando el ARN hasta que se encuentra un terminador, que
es una seal codificada en la secuencia misma del ADN, y transcrita en la molcula de
mARN, que indica el fin del proceso; finalmente, tanto la ARN polimerasa y el ARN recin
sintetizado se disocian del templado.

La secuencia del ADN transcrito en ARN se conoce con el nombre de unidad transcipcional
y el ARN que se sintetiza es el transcrito primario, este ltimo se modifica de varias
maneras para ser biolgicamente activo mediante las enzimas denominadas
 22

ribonucleasas.

En prcticamente todos los casos, slo una de las dos cadenas de ADN se transcribe en
ARN; en algunos genes virales o genes mitocondriales, se han encontrado mARN, cuyos
extremos sobrelapan algunos pares de bases pero son excepcionalmente raros (Balbs,
2002).

2.8.1 Sntesis de RNA

La sntesis de las molculas de rARN y tARN comienzan en una secuencia promotora y

acaba en una secuencia de terminacin, al igual que el mARN. Sin embargo, ni la molcula
de rARN ni las de tARN son los productos primarios de la transcripcin como se puede
deducir de las tres propiedades siguientes:

1. Las molculas terminan con un grupo 5-monofosfato en lugar de con un trifosfato,

como sera de esperar en los transcriptos primarios.
2. Tanto las molculas de rARN como las de tARN son ms pequeas que los
transcriptos primarios (unidades de transcripcin).
3. Todas las molculas de tARN contienen bases diferentes A,G,C y U y estas bases
raras (como se denominan) no estn presentes en los productos de transcripcin
originales.

Todos estos cambios se producen despus de la transcripcin mediante un proceso

llamado modificacin postranscripcional, o procesamiento.

Tanto las molculas de rARN como las de tARN proceden de productos de transcripcin
primarios; frecuentemente una sola molcula primaria contiene las secuencias de varias
molculas diferentes. Por ejemplo, tARN diferentes o molculas de rARN y de tARN. La
formacin de las rARN se produce por la escisin directa de una nica secuencia continua;
sin embargo, los tARN que contienen bases distintas de A, U, C y G se forman a partir de
un transcripto primario por cortes con enzimas que actan en un orden determinado y
por modificacin qumica de alguna de las bases.
 23

2.8.2 RNA mensajero

El mARN contiene solamente las cuatro bases principales; se sintetiza en el ncleo durante
el proceso de transcripcin, en la que la secuencia de bases de una hebra del ADN
cromosmico se transcribe, enzimticamente, en forma de una sola hebra de mARN;
cierta cantidad de mARN se sintetiza tambin en la mitocondria. La secuencia de bases de
la hebra de mARN as formado es complementaria de la hebra de ADN que est siendo
transcrita; despus de la transcripcin, el mARN pasa al citoplasma y luego a los
ribosomas, en donde acta como matriz para la ordenacin secuencial de los aminocidos
durante la biosntesis de las protenas. Aunque el mARN constituye solo una pequea
parte del ARN total de la clula; sin embargo, en muchas formas diferentes que pueden
variar en peso molecular y en su secuencia de bases. Cada uno de los millares de protenas
diferentes sintetizada por la clula es codificada por un mARN especfico o por un
segmento de una molcula de mARN.

Los mARN mensajeros de las clulas eucariotas se caracterizan por contener una larga
secuencia de cerca de 200 restos sucesivos de adenilato en el extremo 3, la cual segn
parece desempea algn papel en el tratamiento o transporte del mARN desde el ncleo
a los ribosomas (Lehninger, 1993).

2.8.2.1 Estructura y funcin

El ARN que especifica la estructura primarias de las protenas se llama ARN mensajero
(mARN); tambin otros tipos de ARN intervienen en descifrar el cdigo gentico, pero a
diferencia del mARN, no especifican el orden de residuos de aminocidos en la protena;
estos son el ARN de transferencia (tARN) y el ARN ribosmico (rARN), tanto en eucariontes
como en procariontes las secuencia de tARN y rARN estn contenidas en molculas
grandes de precursores (los transcriptos primarios de los genes) que se conocen como
pre-tARN y pre-rANT, respectivamente.

Todos los ARN tiene grandes regiones de estructura secundaria (hlice doble) formadas
por el apareamiento de bases entre bases complementarias presentes en distintas
 24

regiones de la misma molcula; esta estructura secundaria, y tambin la estructura

terciaria, con frecuencia son cruciales para la actividad biolgica; adems todo el ARN
natural est asociado permanente o transitoriamente con protenas especficas in vivo en
forma de complejos de ribonucleoprotena (RNP); estas interacciones entre el ARN y la
protena son de nuevo de importancia crtica en la mayora de los aspectos del
metabolismo del ARN y en todos los aspectos del proceso de traduccin (Smith y Wood,
1998).

2.8.2.2 Maduracin del mRNA en eucariotas

La mayora de las molculas de mARN sufren una serie de modificaciones y fenmenos de

procesamiento antes de que se produzca la traduccin. Qu fenmeno ocurre durante
un periodo de 30 minutos cuando las molculas de ARN heterogneo nuclear (hnARN) se
presenta a mARN?

El primero de estos fenmenos de procesamiento provoca la modificacin qumica de los

extremos 5 de la transcritos primarios; una molcula de ARN sintetizada por transcripcin
tendr un extremo 5 formado por:

5-pppPupN3.

Donde: Pu es un residuo purina, N es el componente con base + azcar de un nucletido y

p representa un grupo fosfato, as en el extremo 5 hay un grupo trifosfato; sin embargo,
cuando se examina el mARN eucarionte maduro, se encuentra que el extremo 5 tienen
una estructura qumica ms compleja que en forma abreviada, se describe como:

5-7mGpppPupN3.

Donde 7-mG es el nucletido modificado 7-metilguanosina, que se une a la molcula de

mARN despus de la transcripcin y se llama cap. El enlace fosfato entre la 7-metil-
guanosina y el primer nucletido del transcrito es poco usual en el lugar de enlace 5- 3
que normalmente se encuentra en los polinucletidos, en la estructura del cap el enlace
est entre los carbonos 5 de los nucletidos adyacentes as como esta estructura del cap
 25

bsica, algunas mARN eucariotes pueden sufrir otras modificaciones en el extremo 5 por
adicin de grupos metilo extra a uno o a ambos de los siguientes dos nucletidos, es decir,
los nucletidos +1 y +2 de la molcula.

2.8.3 ARN ribosomal

El ARN ribosmico (rARN) constituye hasta un 65 % de la masa de los ribosomas; puede

obtenerse de los ribosomas de E. coli, en forma de molculas lineales de una sola hebra,
que aparecen en tres formas caractersticas, cuyo coeficiente de sedimentacin son 23S,
16S y 5S respectivamente. Estas tres formas difieren en las relaciones de bases y en sus
secuencias. En las clulas eucariotas, que poseen ribosomas mayores que las procariotas,
existen cuatro tipos de rARN: los 5S, 7S, 18S y 28S, aunque los rARN constituyen una gran
fraccin del total de ARN celular su funcin en los ribosomas no est clara todava; en los
rARN, algunas de las bases se hayan metiladas (Lehninger, 1993).

2.8.3.1 Estructura y funcin

Intervienen en la formacin de la estructura de partculas ribonucleoproteicas, comunes a

todos los seres vivos, llamados ribosomas. Son conjuntos complejos de protenas y
molculas de ARN, organizada en dos subunidades de tamao distinto, la ms grande
contiene dos o tres molculas de ARNr, mientras que la ms pequea slo posee una.

En los organismos eucariotes se observan cuatro tipos de ARNr codificadas en el genoma

nuclear, cuyos tamaos son de 4700, 1900, 160 y 120 nucletidos (28 S, 18 S, 8 S y 5 S) y
se encuentran tambin en organelos semiautnomos como las mitocondrias y
cloroplastos, quienes presentan ribosomas especficos y ARN propio.

Los ARNr son molculas de tipo estructural que participan en la constitucin de los
abundantes ribosomas que existen en la clula, pertenecen a estructuras que contienen
protena, lo que los estabiliza considerablemente. Los ARNr representan
aproximadamente 80 a % de la masa de los ARN totales y se caracterizan por una gran
estabilidad metablica y vida prolongada a escala de la vida celular.
 26

Los ARNr prsentan dos caractersticas:

1. Contienen numerosas secuencias autocomplementarias, de modo que presentan

mltiples apareamientos internos (segmentos de doble hlice) estructuras
secundarias locales del tipo de horquillas para el cabello, o sistemas llamados de
tronco o zarcillo. Todos estos segmentos de doble cadena y de cadena simple
compactan a la molcula y la organizan en el espacio.
2. La organizacin general de esta estructura se conserva en forma notable no
solamente en los procariotes, sino tambin en el ARNr de origen nuclear o en los
eucariotes, y en los que se encuentran en los organelos semiautnomos (Callen,
2005).

2.8.4 RNA transcripcin

El proceso de sntesis de ARN o TRANSCRIPCIN, consiste en hacer una copia

complementaria de un trozo de ADN. El ARN se diferencia estructuralmente del ADN en el
azcar, que es la ribosa y en una base, el uracilo, que reemplaza a la timina. Adems el
ARN es una cadena sencilla.

En una primera etapa, una enzima, la ARN-polimerasa se asocia a una regin del ADN,
denominada promotor, la enzima pasa de una configuracin cerrada a abierta, y
desenrolla una vuelta de hlice, permitiendo la polimerizacin del ARN a partir de una de
las hebras de ADN que se utiliza como patrn.

La ARN-polimerasa, se desplaza por la hebra patrn, insertando nucletidos de ARN,

siguiendo la complementariedad de bases, as por ejemplo: secuencia de ADN: 3'...
TACGCT...5' Secuencia de ARNm: 5'...AUGCGA...3'

Cuando se ha copiado toda la hebra, al final del proceso , la cadena de ARN queda libre y
el ADN se cierra de nuevo, por apareamiento de sus cadenas complementarias. De esta
forma, las instrucciones genticas copiadas o transcritas al ARN estn listas para salir al
citoplasma.
 27

El ADN, por tanto, es la "copia maestra" de la informacin gentica, que permanece en
"reserva" dentro del ncleo. El ARN, en cambio, es la "copia de trabajo" de la informacin
gentica. Este ARN que lleva las instrucciones para la sntesis de protenas se denomina
ARN mensajero (Figura 7) (www.botanica.cnba.uba.ar/ Los CompuestosOrganicos. 2012).

Figura 7. Sntesis de protenas.

2.8.4.1 Estructura y funcin

Las unidades monmeras del ARN se llaman ribonucletidos; cada nucletido

contiene tres componentes caractersticos:
1. Una base nitrogenada heterocclica, que es un derivado de la purina o de la
pirimidina.
2. Una pentosa.
3. Una molcula de cido fosfrico.
Son cuatro ribonucletidos los componentes de ARN como son las bases purnicas
(adenina y guanina) y las bases pirimidicas (citosina y uracilo); adems de que
 28

contienen D-ribosa y se encuentran en la forma de furanasa en los nucletidos. La

pentosa est unida a la base por un enlace -N-glucosilo establecido entre el tomo de
carbono 1 de la pentosa y el tomo de nitrgeno 9 de las bases pirimdicas; el grupo
fosfato de los nucletidos se halla unido mediante enlace ster al tomo de carbono 5
de la pentosa. Cuando el grupo fosfato de un nucletido se separa por hidrlisis, la
estructura residual recibe el nombre de nuclesido.

Las bases pirimdicas y purnicas libres son relativamente insolubles en el agua; son
compuestos bsicos dbiles que pueden existir en dos o ms formas tautmeras segn
su pH.

2.9 Traduccin

La traduccin es til para el trazado de mapas genticos, en donde una pequea porcin
del cromosoma de una clula bacteriana por ejemplo, infectada por un virus se incorpora
a las molculas de ADN de la progenie del virus; cuando las partculas del virus progenie
infecta a otra clula, los genes procedentes de la clula husped; la partcula de virus que
se transfiere es portadora de una porcin de cromosomas de una clula bacteriana hasta
el cromosoma de otra.

La traduccin tiene importancia en el trazado de mapas genticos de estructura detallada,

puesto que el fago que se transfiere generalmente porta slo una porcin pequea del
cromosoma bacteriano, del orden del 1 %; de tal forma que la traduccin sirve para la
construccin de los mapas de segmentos cromosmicos muy pequeos ms que para
representar la estructura del cromosoma.

2.9.1 Estructura del ribosoma

Los ribosomas son estructuras ribonucleoproteicas mixtas y de gran tamao (15 a 20 nm

de dimetro, segn su origen), las cuales participan en descifrar el mensaje gentico
contenido en la secuencia de ARNm y lo transducen en una secuencia ordenada de
aminocidos. Las partculas ribonucleoproteicas (llamadas PRS) y los complejos de
 29

empalme intervienen en la sntesis de protenas y la maduracin de ARNm en los

eucariotes (Callen, 2005).

2.9.2 Elongacin

Una vez en su sitio el primer aminocido, el ribosoma descifra el mARN desde 5hasta 3,
como un trascodn, de manera idntica en procariotes y eucariotes; un segundo ARNt
cargado llega y se coloca junto al primero a nivel del sitio A, saturando as la subunidad
grande del ribosoma al igual que en la iniciacin, en este proceso intervienen factores
proteicos diversos; el ARNt cargado no se encuentra solo, sino siempre asociado con un
factor de elongacin que sirve de transcriptor (y con el cual se instala en el sitio A).

La siguiente etapa es la sntesis del enlace peptdico con el COOH de la metionina y el NH2
libre del nuevo aminocido; el COOH de la metionina, participa en su unin con el
ARNtmet. Como ya se mencion, la ruptura de este enlace aporta la energa necesaria para
formar el enlace peptdico; el resultado es el siguiente:

1. El ARNtmet se descarga y rompe el contacto con el ARNm, y despus se desprende

del sitio P.
2. Se forma un dipptido que tienen en un extremo un NH2 libre y en el extremo
COOH contina unido con el ARNt permanece unido al ARNm por su anticodn a
nivel del sitio A.
3. El sitio P del ribosoma queda libre mientras que el sitio A permanece ocupado por
el dipeptidil-ARNt.

La etapa siguiente para que la sntesis contine es el desplazamiento relativo del ARNm
con respecto al ribosoma llamado translocacin, este ltimo se desprende de su unin de
una muesca que corresponde a un codn a lo largo del ARNm, cerca del extremo 3 OH
(Figura 8).

Este acontecimiento trae consigo una doble consecuencia: a) el ARNt dipeptdico se

encuentra ahora a nivel del sitio P del ribosoma y b) el sitio A de este ltimo queda libre
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con el codn nmero 3 del ARNm expuesto a su nivel; en este momento de la traslocacin
se producen exactamente las mismas circunstancias que en el inicio del proceso recin
descrito y se repiten los mismos eventos:

a) Llega al sitio A un nuevo ARNt (nmero 3) cargado que reconoce, gracias a su

anticodn, el codn nmero 3 del ARNm.
b) Se forma el enlace peptdico y se sintetiza tripptido que queda enganchado con el
ARNt nmero 3.
c) Se expulsa el ARNt nmero 2 y se efecta la nueva traslocacin del ribosoma de
una muesca hacia el extremo 3OH del ARNm.

As contina el proceso, dando lugar a la elongacin de la cadena polipeptdica que

corresponde a la totalidad del mensaje en el curso del ciclo (Callen, 2005).

Figura 8. Etapas de elongacin de una cadena de polipptidos.

2.9.3 Terminacin

De los 64 codones posibles, tres carecen de sentido, en trminos de aminocidos; estos

son los codones de terminacin o codones stop UAA, UAG y UGA; cuando un ribosoma
llega a su nivel a lo largo del ARNm, ningn ARNt puede aparecer en el sitio A, ya que no
existe all el anticodn correspondiente; se ha demostrado que todos los seres vivos
tienen diversos factores proteicos con capacidad de alojarse especficamente a nivel del
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sitio A cuando aparecen alguno de los tres codones stop. El efecto de este enlace, es que
la cadena poliptida se desprende del ltimo ARNt con carga por hidrlisis, a nivel de su
extremo COOH, este ltimo queda en libertad , ya sea en el hialoplasma o en el retculo
endoplasmtico, o bien, directamente en el exterior de la clula (en el caso de una
bacteria).

La liberacin del ltimo ARNt sin carga va acompaada de la disociacin del ribosoma en
dos subunidades libres que pasan de nuevo a las reservas de las subunidades
hialoplsmicas. Estas se encuentran listas para recomenzar un nuevo ciclo de sntesis
proteica de manera simultnea, el ARNm queda en libertad (Callen, 2005).

2.10 Traduccin en eucariotas

Se define como el proceso mediante el cul la informacin contenida en el ADN se ejecuta

a travs de las protenas. Para ello requiere de la participacin conjunta y coordinada de
ms de 100 clases de macromolculas: ARNm, ARNt, ribosomas y otras protenas.

La traduccin es el segundo proceso de la sntesis proteica (parte del proceso general de

la expresin gnica). La traduccin ocurre tanto en el citoplasma, donde se encuentran los
ribosomas, como tambin en el retculo endoplasmtico rugoso (RER). Los ribosomas
estn formados por una subunidad pequea y una grande que rodean al ARNm. En la
traduccin, el ARN mensajero se decodifica para producir un polipptido especfico de
acuerdo con las reglas especificadas por el cdigo gentico; es el proceso que convierte
una secuencia de ARNm en una cadena de aminocidos para formar una protena; para
esto es necesario que la traduccin venga precedida de un proceso de transcripcin. El
proceso de traduccin tiene cuatro fases: activacin, iniciacin, elongacin y terminacin
(entre todos describen el crecimiento de la cadena de aminocidos, o polipptido, que es
el producto de la traduccin).

En la activacin, el aminocido (AA) correcto se une al ARN de transferencia (ARNt)

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correcto. Aunque tcnicamente esto no es un paso de la traduccin, es necesario para que

se produzca la traduccin. El AA se une por su grupo carboxilo con el OH 3' del ARNt
mediante un enlace de tipo ster. Cuando el ARNt est enlazado con un aminocido, se
dice que est "cargado". La iniciacin supone que la subunidad pequea del ribosoma se
enlaza con el extremo 5' del ARNm con la ayuda de factores de iniciacin (FI), otras
protenas que asisten el proceso. La elongacin ocurre cuando el siguiente aminoacil-ARNt
(el ARNt cargado) de la secuencia se enlaza con el ribosoma adems con un GTP y un
factor de elongacin. La terminacin del polipptido sucede cuando la zona A del
ribosoma se encuentra con un codn de parada (sin sentido), que son el UAA, UAG o UGA.
Cuando esto sucede, ningn ARNt puede reconocerlo, pero el factor de liberacin puede
reconocer los codones sin sentido y provoca la liberacin de la cadena polipeptdica. La
capacidad de desactivar o inhibir la traduccin de la biosntesis de protenas se utiliza en
antibiticos como la anisomicina, la cicloheximida, el cloranfenicol y la tetraciclina.

El ARNm porta informacin gentica codificada en forma de secuencia de ribonucletidos

desde los cromosomas hasta los ribosomas. Los ribonucletidos son "ledos" por la
maquinaria traductora en una secuencia de tripletes de nucletidos llamados codones.
Cada uno de estos tripletes codifica un aminocido especfico. El ribosoma y las molculas
de ARNt traducen este cdigo para producir protenas. El ribosoma es una estructura con
varias subunidades que contiene ARNr y protenas. Es la "fbrica" en la que se montan los
aminocidos para formar protenas. El ARNt son pequeas cadenas de ARN no codificador
(de 74 a 93 nucletidos) que transportan aminocidos al ribosoma. Los ARNt tienen un
lugar para anclarse al aminocido, y un lugar llamado anticodn. El anticodn es un
triplete de ARN complementario al triplete de ARNm que codifica a su aminocido. La
aminoacil-ARNt sintetasa (una enzima) cataliza el enlace entre los ARNt especficos y los
aminocidos que concuerdan con sus anticodones. El producto de esta reaccin es una
molcula de aminoacil-ARNt. Esta aminoacil-ARNt viaja al interior del ribosoma, donde los
codones de ARNm se enfrentan con los anticodones especficos del ARNt mediante el
emparejamiento de bases. Luego se utilizan los aminocidos que portan los ARNt para
montar una protena. La energa requerida para traducir protenas es significativa. Para
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una protena que contenga n aminocidos, el nmero de enlaces fosfato de alta energa
necesarios para traducirla es 4n-1. Es tambin el proceso mediante el que los ribosomas
utilizan la secuencia de codones del ARNm para producir un polipptido con una
secuencia particular de aminocidos.

2.11 Mutacin

La mutacin se refiere a cualquier cambio en la secuencia de bases de ADN que origina un

fenotipo mutante; el cambio ms comn es la sustitucin, adicin o deleccin de una o
ms bases, ejemplo:

a) Mutacin puntual, en la que hay un solo cambio de un par de bases. Puede

producirse por sustitucin de una base, insercin de una base o por deleccin de
una base.
b) Mutacin mltiple, en la que hay dos o ms pares de bases que difieren de la
seleccin original. Se basa en la consecuencia que puede tener el cambio sobre la
secuencia de aminocidos afectada. Por ejemplo, si se produce la sustitucin de un
aminocido la mutacin es una mutacin errnea.

Si la sustitucin produce una protena que es activa a una temperatura de 30 oC e inactiva

a temperaturas muy altas entre 40 a 42 oC, la mutacin se llama sensible a la temperatura
o mutacin Ts. Si la mutacin genera un codn de terminacin, la sntesis de protena se
parar y la mutacin correspondiente se conoce como mutacin de terminacin de
cadena o mutacin sin sentido. Las mutaciones sensibles a la temperatura y de
terminacin de cadena muestran el fenotipo mutante slo bajo ciertas condiciones y por
tanto se les llama mutaciones condicionales; son las mutaciones ms tiles de que
dispone el bilogo molecular (Freifelder, 1988).