Manual Bqiii Medicina 2017

REGLAMENTO GENERAL
MANUAL DE
PRCTICAS
BIOQUMICA III
TERCER AO
QUINTO SEMESTRE
FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS
UNIVERSIDAD MARIANO GLVEZ DE
GUATEMALA
BASADO EN GUAS DE LABORATORIO I2QB3
FECHAS DE MODIFICACIN: AO 2008, AO

2011
1
INDICE
NO. NOMBRE DE PRACTICA
DE
}
PRACTICA NO. DE HOJA
0
1
2
CAPACIDAD BUFFER 2,017
NORMATIVA DE LABORATORIO
SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE PROTENAS

3
13
21
EN SUERO Y PLASMA
3 COAGULACIN SANGUNEA 28
4
Manual de cticas
pr de
FUNCIN RENAL: DETERMINACIN DE
CREATININA
34
5
6
BIOQUIMI CA III
FUNCIN RENAL: DETERMINACIN DE UREA
DETERMINACIN ENZIMTICA DE CIDO RICO
39
44
7 EL ELISA COMO UN ANLISIS CUALITATIVO Y 50
CUANTITATIVO
8 DETERMINACIN CUALITATIVA DE TIROXINA Y 54

TRIIODOTIRONINA TOTAL
9 DETERMINACIN DE CORTISOL 60
10 DETERMINACIN FSH Y LH 66
11 DETERMINACIN DEL LMITE DE DETECCIN DE 71
UNA PRUEBA CUALITATIVA
PRUEBA HCG DE EMBARAZO
Elaboracin
Licda. Eyda Menda de Campollo (QB)
Licda. Ana Ester Barrientos (QB)
Revisin
Licda. Ana Margarita Paz Morales de Ramrez (QB, MA)
Licda. Isabel Cristina Gaitn Fernndez (QB, MA)
2
INTRODUCCIN AL TRABAJO
DENTRO DEL LABORATORIO DE
BIOQUMICA
NORMATIVA DE COMPORTAMIENTO Y DE TRABAJO
Introduccin
Trabajar dentro de un laboratorio de cualquier ndole supone un grado

de responsabilidad del cual muchos estudiantes no estn conscientes. Es
necesario que cualquier persona que se encuentre dentro de las
instalaciones del laboratorio sepa comportarse de forma adecuada. Un
mal comportamiento no solamente tendr implicaciones disciplinarias,
sino podra tambin tener serias implicaciones de salud y seguridad. Es
absolutamente necesario que tanto el instructor como el estudiante que
trabaja dentro del laboratorio sepan que una accin fuera del
comportamiento adecuado puede desencadenar un serio accidente que
puede afectar tanto la salud y seguridad propia como la de los dems.
Para evitar este tipo de situaciones, se ha diseado una prctica de
introduccin para dar a conocer al estudiante lo que se espera de l o ella
durante el transcurso de los laboratorios. Objetivos
Que el estudiante:
1. Conozca la responsabilidad que adquiere al trabajar dentro del

laboratorio de Bioqumica.
2. Conozca el trabajo que se espera de l o ella antes, durante y
despus de realizarse un laboratorio de Bioqumica
3. Se comprometa con los Laboratorios del Instituto a guardar
compostura tanto en su rendimiento acadmico como en su
comportamiento personal, de manera que pueda obtener el mayor
provecho de su experiencia en el laboratorio.
Alcance
Que el estudiante:
3
1. Conozca la forma de evaluacin dentro del laboratorio
2. Est consciente de las
consecuencias de su calidad de
trabajo en el laboratorio
3. Conozca a cabalidad los aspectos
que se tomarn en cuenta en la evaluacin del laboratorio como
parte del curso de Bioqumica.
Reglamento para el estudiante
Para que un estudiante tenga derecho a participar en las sesiones del

Laboratorio de Bioqumica, debe cumplir con las siguientes reglas:
1. Estar inscrito en el curso terico de Bioqumica III.
2. Guardar un comportamiento adecuado en las actividades del

laboratorio, adhirindose completamente al REGLAMENTO DEL
LABORATORIO establecido. Puede encontrar una copia del REGLAMENTO

DEL LABORATORIO en el apndice al final de este manual. El faltar al
reglamento tiene consecuencias que pueden llegar hasta el retiro
definitivo del laboratorio.
3. Asistir al laboratorio de manera PUNTUAL. El alumno que no se

presente puntualmente a la puerta del laboratorio, perder el derecho
de presentar examen corto. El alumno que se presente despus de
haberse presentado las instrucciones para el laboratorio, perder el
derecho de ingresar a la prctica.
4. De no asistir a una prctica, el alumno pierde automticamente el

derecho a presentar todos los componentes de la nota de esa
prctica, teniendo un cero inmediato. Sin embargo, si el alumno
justifica su ausencia (razones mdicas o por luto), la nota de ese
laboratorio ser eliminada del promedio para obtener la nota final.
Independientemente que su ausencia sea justificada o no, es
responsabilidad del alumno ponerse al da con el contenido de
la prctica perdida. Existe la opcin de reponer prcticas si el
alumno lo tramita con su instructor anticipadamente y si existe
espacio disponible para hacerlo.
5. Haber cumplido con las tareas preparativas de cada prctica, las
cuales incluyen, pero no se limitan a, la informacin solicitada en el
4
cuaderno, una lectura a conciencia de la prctica y cualquier
investigacin previa que se haya
solicitado (ya sea escrita o no). Se
practicar un examen corto al inicio
de la prctica para asegurar que el
alumno conoce el tema a tratar y el procedimiento a seguir. Queda a
discrecin del instructor permitir la entrada de un alumno que
evidentemente no maneja el conocimiento previo requerido.
6. Utilizar su equipo de proteccin personal todo el tiempo que se

encuentre dentro de las instalaciones del laboratorio. Como equipo de
proteccin personal se incluye: bata larga (siempre cerrada), de
manga larga, sin bolsas en los costados y deber contar con su
respectivo nombre y logo de la Universidad, anteojos de
seguridad y zapatos cerrados. El no cumplir con esta regla es causa
justificada para retirar a un alumno del laboratorio del da, perdiendo
el derecho a presentar examen, cuaderno, prctica y reporte. De
reincidir, el alumno incluso puede ser retirado definitivamente de
laboratorio.
7. No llevar consigo bolsas, mochilas ni artculos de uso personal
(celulares, localizadores, joyas, etc.). De descubrirse que un alumno
porta consigo una de estas pertenencias, sta se confiscar y se
devolver al final de la prctica. No utilice su telfono mvil como
calculadora; lleve la propia. El laboratorio no se hace responsable de
guardar ninguna pertenencia personal de los alumnos durante la
prctica. Es responsabilidad del estudiante asegurar sus pertenencias
personales ANTES de llegar al laboratorio.
Trabajo antes de llegar al laboratorio:

El Pre-Lab
El laboratorio es un lugar donde nunca debe llegarse a improvisar. Es
necesario asegurar que el estudiante est familiarizado con el tema a
tratarse en el laboratorio, as como con el procedimiento que se seguir.
Como ayuda al estudiante, se ha diseado un cuestionario que
llamaremos Pre-lab. Responder el Pre-lab a conciencia tiene la ventaja de
ayudar a un mejor rendimiento para el examen corto que se realizar en
cada prctica al inicio de la misma.
5
El Pre-lab es un cuestionario que queda bajo la responsabilidad del
estudiante el resolver a conciencia
para asegurarse que se comprender
el trabajo que se va a realizar durante
el laboratorio. La resolucin escrita del
Pre-Lab deber entregarse al Instructor antes de empezar la prctica del
da.
Para la presentacin del Pre-Lab se deber incluir:

- Revisin Bibliogrfica acerca de la prctica (No ms de una pgina)
- La importancia Clnica-medica que tiene la prctica
- Cuestionario
- Referencias Bibliogrficas
Trabajo dentro del Laboratorio
Como se indic anteriormente, se espera que el estudiante haga su

mejor esfuerzo para aprovechar al mximo el recurso que se tiene en el
laboratorio. El trabajo que se realice dentro del laboratorio deber ser
registrado por cada estudiante a manera de poder comprobar qu se
hizo, cmo se hizo y cundo se hizo. Para este propsito, es necesario la
realizacin de un examen corto y que cada uno lleve un cuaderno de
laboratorio.
o Examen Corto
Al inicio de cada laboratorio se realizar un examen corto que
evidenciar el conocimiento con el que se prepar el estudiante para la
prctica. El alumno pierde el derecho a esta prueba si llega despus de
iniciado el laboratorio.
o Cuaderno de Laboratorio
El cuaderno de laboratorio est diseado para cumplir como
evidencia del trabajo que se ha realizado durante cada prctica de
laboratorio. Lo ms valioso de su cuaderno de laboratorio es el
contenido. Aunque su presentacin es importante, no es lo principal
en un cuaderno de laboratorio, por lo que el estudiante no debe temer
a hacer cualquier anotacin dentro de su cuaderno en cualquier
momento.
6
Cada estudiante debe poseer un cuaderno de laboratorio que cumpla
con ciertas especificaciones
establecidas. Si alguna persona
desea usar el cuaderno de
laboratorio de otro curso que haya
llevado previamente, puede hacerlo siempre y cuando se identifique
claramente el cuaderno (vuelto a forrar si hay cambio en el color a
usarse) y la seccin que se utiliza. No puede usarse el mismo
cuaderno de laboratorio para dos cursos simultneos en un mismo
ciclo.
Un trabajo que no puede leerse simplemente no tiene validez alguna,
por lo que se espera que el estudiante tenga un cuaderno tan ordenado
como sea posible, y sobre todo, legible. No se permitir el uso de lpiz
o de corrector en el mismo.
El cuaderno de laboratorio deber contener las siguientes secciones:
Seccin Contenido Valor1
Fecha de realizacin Indicar claramente la fecha en que se llevar a cabo la --
prctica de laboratorio.
Encabezado Indicar claramente el ttulo de la prctica que se llevar a cabo --

en el laboratorio y nmero de la misma.
Objetivos Enumerar de dos a tres objetivos a conseguir durante la 20

prctica. Incluir los presentados en la gua y dos
personales ms, distintos.
Materiales y Enumerar los materiales y reactivos que se requerirn durante 10

Reactivos la prctica.
Toxicidades Para los reactivos, es necesario incluir la toxicidad del 10

reactivo que se manejar. Es de vital importancia incluir los
efectos de exposicin, forma de aplicar primeros auxilios y la
forma adecuada de desecho.
Clculos previos Cualquier clculo que sea necesario en la preparacin de 10

soluciones a usarse o de la muestra en s.
Reacciones Reacciones qumicas o bioqumicas involucradas en la 10

prctica de laboratorio.
7
Procedimiento Enumerar los pasos a seguir durante la prctica. Debe 20
indicarse claramente cada paso,
incluyendo los pesos preparativos
involucrados. Debe incluirse al final un
diagrama de flujo para hacer ms fcil el
seguimiento del procedimiento.
Tablas Se debe preparar por adelantado las
de resultados tablas que se usarn para registrar los resultados de la 20
prctica.
Observaciones Es necesario que despus de anotar los resultados obtenidos --
en la prctica, se anote tambin cualquier observacin que
posteriormente pueda explicar una alteracin en los
resultados. No debe confiarse en la memoria ni debe
recurrirse a papelitos sueltos para anotar esta clase de
informacin (Durante el laboratorio)
Nota total del cuaderno de laboratorio 100

1
Valor: Algunos rubros no tienen valor asignado, ya que su presencia no agrega puntos de
nota al laboratorio. Sin embargo, su ausencia s resta puntos de la nota del cuaderno
Trabajo posterior al laboratorio

La principal forma de evaluacin del trabajo hecho durante el
laboratorio, as como la comprensin obtenida despus de realizado el
laboratorio, es el reporte del mismo. En l de evidencia el nivel de
comprensin y la calidad del trabajo realizado por el estudiante.
o Reporte del Laboratorio

El reporte de laboratorio tiene doble funcin: permite al estudiante
entrenarse en el arte de la escritura cientfica y le brinda la oportunidad
de demostrar qu tanto aprendi durante la realizacin de la prctica.
Para presentar un buen reporte de laboratorio, el estudiante debe
esforzarse en varios aspectos. Primero, debe asegurarse que el
contenido del reporte sea acorde al tema que se trat en el laboratorio.
Segundo, es necesario que muestre tanto una buena redaccin como una
buena ortografa. Como futuros mdicos, es importante que los
estudiantes ejerciten su habilidad de escribir bien, ya que forma parte de
la buena formacin de todo profesional.
El reporte debe contener las siguientes secciones:
Seccin Contenido Valor1
Encabezado Ver hoja 13. -
8
Resumen Se debe incluir de forma sintetizada lo realizado durante la 10
prctica, principalmente respondiendo las
preguntas Cmo lo hice?, Por qu lo
hice? y A qu llegu?. Mximo 10 lneas.
Se debe de escribir el o los objetivos
principales de la prctica. Recuerde que a
Objetivos partir de ellos, deber realizar sus conclusiones. 10
Resultados Debe presentar de la manera ms ordenada posible, los 20
resultados obtenidos en la prctica. Debe incluir: el nmero
de la tabla, el ttulo de la tabla entre comillas ( ). Debajo
de la tabla, incluir la fuente de los datos con tamao 8. Se
de presentar en tablas de fcil entendimiento a manera que
alguien que no haya estado en el desarrollo de la prctica
pueda entenderlo con
facilidad. NO se aceptan resultados escritos a mano
Discusin de Es la seccin en donde el estudiante debe discutir los 30
resultados resultados obtenidos en la prctica. Por qu obtuve esos
resultados, posibles fuentes de error. Debe refutar su
justificacin de fuentes confiables.
Conclusiones Como regla, no se puede concluir teora ni un asunto que 15

no haya sido incluido en la discusin. Es necesario haber
discutido un punto para poder concluir al respecto. Mnimo
deben ser 3 conclusiones.
Anexo Debe incluir cualquier informacin adicional que 5

complemente sus resultados (datos o clculos) o discusin
de resultados, as como imgenes si usted lo desea.
Bibliografa Debe escribir toda fuente CONFIABLE que haya consultado 10

para justificar su discusin, todo de acuerdo a las normas
de laboratorio.
Nota total del reporte de laboratorio 100

1
Valor: Algunos rubros no tienen valor asignado, ya que su presencia no agrega puntos
de nota al laboratorio. Sin embargo, su ausencia s resta puntos de la nota del cuaderno
Formato para entregar el REPORTE DE LABORATORIO:

Hojas tamao carta, blancas.
Fuente: Arial 11.
Interlineado sencillo (1.0).
Ttulo de las tablas Entre comillas.
9
Fuente de los datos obtenidos, Arial 8.
Los objetivos y las conclusiones,
se deben escribir con vietas.
Si incluye imgenes en la seccin de
ANEXOS debe colocar el nmero de la
figura, nombre y fuente y agregar descripcin, no se otorgara calificacin
si la imagen no tiene descripcin.
El reporte de laboratorio debe ser entregado durante el perodo de

laboratorio siguiente de realizada la prctica. Todo reporte debe
presentarse escrito con mquina de escribir o impreso. No se recibirn
reportes parcial o totalmente escritos a MANO (salvo excepciones
precisas indicadas por su instructor), ni en formato electrnico. Estos
debern entregarse debidamente engrapados. Se entregar una hoja de
control de entrega de reporte, donde se anotar semanalmente la fecha
en que se entreg el informe.
Toda aquella persona que se haya ausentado por cualquier motivo de
una prctica, NO TIENE DERECHO a entregar un reporte, sin importar si
la falta ha sido justificada o no. De ser justificada, la nota de dicho
laboratorio se eliminar, a manera de no ser tomada en cuenta en el
clculo de la nota final. Sin embargo, esto no quiere decir que el
estudiante se libere de la evaluacin del tema de la prctica durante las
pruebas finales del laboratorio del curso. ES RESPONSABILIDAD DEL
ALUMNO investigar el tema tratado durante la prctica que faltara,
independientemente si la falta ha sido justificada o no. IMPORTANTE:
NO se tolerar ningn tipo de copia en los reportes de laboratorio.
Cualquier indicio de plagio (reproduccin no autorizada de una
publicacin, palabra por palabra, incluyendo Internet) ser castigado con
una nota de cero en el reporte. Cualquier indicio de copia (entrega de
reportes idnticos por parte de dos o ms alumnos) ser evaluado como
un cero para todos aquellos estudiantes que tengan el reporte igual, sin
importar quin lo gener ni quin lo copi. Todo caso quedar
documentado, y una reincidencia puede significar el retiro definitivo del
o los alumnos involucrados del laboratorio del curso. Los reportes se
corregirn durante la semana y se devolvern en la siguiente semana. Si
algn alumno tiene cualquier reclamo sobre la forma en que se ha
calificado su reporte, debe hablar con el catedrtico DENTRO DE LA
10
PRIMERA SEMANA despus de haberlo recibido corregido. No se
aceptarn reclamos posteriormente.
Las actividades que se entreguen
impresas debern de ir debidamente
identificadas de la siguiente manera:
UNIVERSIDAD MARIANO GLVEZ
FACULTAD DE MEDICINA
BIOQUIMICA III
NOMBRE DE ALUMNO
CARN
SECCIN
NUMERO DE LA PRACTICA
NOMBRE DE LA PRACTICA INFORMACIN
SOLICITADA
Evaluacin de todo el trabajo del laboratorio
Al final del curso, la nota final de laboratorio se compondr de la

siguiente forma
Rubro a evaluar Puntaje
Exmenes cortos de laboratorio 4
Trabajo terico practico 3
Cuaderno de laboratorio 4
Reportes de laboratorio 4
Texto paralelo 1
Exmenes parciales de laboratorio 2
Examen final de laboratorio (Incluye los 2

temas vistos en todas las prcticas del
laboratorio)
Total Nota de Laboratorio 20
11
CURSO DE BIOQUIMICA III
Programa de Actividades de Laboratorio
2,017
N Nombre Fech
o. a
0 Normativa de comportamiento y 25/0
trabajo 1
1 Capacidad Buffer 01/0
2
2 Separacin e Identificacin de 08/0
Protenas en suero y plasma 2
3 Coagulacin Sangunea 15/0
2
4 Funcin Renal: Determinacin de 22/0
Creatinina 2
PRIMEROS PARCIALES TEORIA 27/0
2-
03/0
12
3
Funcin Renal: Determinacin de Urea
5 08/0
3
6 Determinacin enzimtica de cido 15/0
rico 3
PARCIAL DE LABORATORIO 22/0
3
7 El ELISA como un anlisis cualitativo y 29/0
cuantitativo 3
8 Determinacin cualitativa de Tiroxina 05/0
y Triiodotironina Total 4
SEMANA SANTA 10-
14/0
4
9 Determinacin de Cortisol 19/0
4
10 Determinacin de FSH y LH 26/0
4
SEGUNDOS PARCIALES TEORIA 02-
06/0
5
11 Determinacin del lmite de deteccin 10/0
de una prueba cualitativa Prueba de 5
HCG de embarazo
Presentacin de Casos Clnicos 17/0
5
Presentacin de Casos Clnicos 24/0
5
EXAMEN FINAL DE LABORATORIO 31/0
5
REALIZADO POR: LICDA. SARA BEATRIZ MOLINA DE SAMAYOA/ DRA. DORA INS
MAZARIEGOS CORDERO
PRCTICA NO. 1
CAPACIDAD BUFFER
13
Introduccin
El papel de las soluciones buffer son
de gran importancia no solamente
para el organismo sino para el trabajo
dentro del laboratorio. El pH de los
diferentes fluidos orgnicos vara grandemente. Por ejemplo, el jugo
gstrico se encuentra en el rango de pH 1 y no se regula en gran manera,
mientras que el pH de la sangre ronda los 7.40 y es uno de los
parmetros ms regulados del organismo. Para cumplir esta regulacin,
el organismo se vale de las propiedades de algunos compuestos qumicos
que tienen capacidad de resistir cambios de pH drsticos por la adicin
o remocin de iones H+. Estos compuestos forman las conocidas
soluciones buffer, de gran importancia dentro del organismo.
Esta prctica ayuda al estudiante a darle un significado ms all que el
puramente terico a la existencia y comportamiento de las soluciones
buffer, as como a sus propiedades. El significado del pK de disociacin
pasa de ser un valor numrico a un valor prctico que el cuerpo usa en la
regulacin del pH. El principal propsito de esta prctica es ilustrar al
estudiante a visualizar algunos procesos, en su versin simplificada, que
se llevan a cabo dentro del organismo. Objetivos
Que el estudiante
1. Conozca las propiedades de las soluciones buffer y la importancia de
su rol dentro del organismo y dentro de las actividades del
laboratorio de Bioqumica.
2. Determine el valor de pK de disociacin de un cido dbil (KH2PO4).
3. Identifique una solucin con mejor comportamiento de buffer.
Alcance
Que el estudiante
1. Adquiera destreza en el manejo y preparacin de soluciones.
2. Conozca la forma correcta de utilizar un potencimetro.
3. Aprenda la aplicacin de curvas de calibracin de un aparato simple.
4. Aplique su conocimiento matemtico en la obtencin e
interpretacin de grficos en el laboratorio.
14
Antecedentes
El agua tiene diversas propiedades
que le ha convertido en el solvente
universal adecuado para la vida tal y
como la conocemos. Es una molcula
tetradrica con extremos ligeramente cargados, dndole carcter de
molcula polar. Esta caracterstica le permite interaccionar con la gran
cantidad de molculas de diferente naturaleza que nos conforman.
Es capaz de formar puentes de hidrgeno, lo cual estabiliza su relacin
con otras molculas de agua as como otras molculas polares
(hidroflicas). Esta propiedad ayuda a que la estructura tridimensional de
las grandes molculas orgnicas, como protenas y cidos nucleicos,
pueda ser estable.
Una de sus propiedades ms importantes fisiolgicamente es la
tendencia que muestran las molculas de agua a que una pequea
porcin de ellas se disocien. El agua tiene capacidad para funcionar
como cido o como base, por lo cual su disociacin puede escribirse
como una transferencia de protones entre cido y base, de la siguiente
forma:
Se ha observado que la tendencia del agua a disociarse se comporta

de manera tal que mantiene una constante de disociacin, K, la cual
se define de la siguiente manera:
Sin embargo, la disociacin del agua se da en un grado tan pequeo

que no afecta la concentracin total del agua, as que puede incorporarse
a la constante (ya que siempre permanece constante) para dar la
siguiente ecuacin:
Esta nueva constante, KW, se conoce como producto inico del

agua, y tiene un valor de 1 x 10 -14, y es vlida para todas las ecuaciones
acuosas. Esto quiere decir que en un vaso de agua pura, por ejemplo,
donde no hay influencias de cidos o bases, se encontrar una
concentracin de protones (H+) equivalente a 1 x 10 -7. Este nmero vara
y ya no se hace tan sencillo cuando ya se consideran soluciones con la
15
influencia de cidos y bases. Para facilitar el manejo de estas
concentraciones, se recurre a una
escala logartmica mucho ms fcil de
utilizar: el pH.
El pH se define clara y llanamente
como el logaritmo negativo de la concentracin de protones de una
solucin, o escrito matemticamente:
Esta ecuacin permite que lo que sera una escala complicada se

convierta en una simple escala lineal que va desde valor 1 a 14, donde el
7 indica neutralidad (es decir, igual nmero de protones y grupos OH -), un
valor menor a siete indica acidez y uno mayor, basicidad. El valor del pH
del organismo no permite fluctuaciones muy amplias dentro de la escala.
En el caso especfico de la sangre, el pH
se encuentra alrededor del 7.40, pero no
puede ir ms all de 7.0 ni de 7.7, ya que
ambos casos son generalmente fatales.
Por tanto, la regulacin debe hacerse de
forma muy
cercana. Para lograr esto, el organismo
recurre a las llamadas soluciones
buffer. El sistema buffer de ms importancia en el organismo es el de
CO2 / bicarbonato.
Las soluciones buffer son soluciones que se resisten a cambiar de pH

por adicin de protones (H+) o grupos hidroxilo (OH-). Estas soluciones
generalmente estn formadas por cidos o bases dbiles (parcialmente
ionizados) con la presencia de una sal del mismo anin que el cido o
base fuerte. La capacidad de resistir a estos cambios, o capacidad
buffer, depende de la concentracin del cido conjugado y de la base
conjugada. Una caracterstica nica para cada sistema buffer es su valor
de pK, que no es ms que el logaritmo negativo de su constante de
disociacin. Cuando el pH del medio es igual al pK del buffer estudiado,
se dice que el buffer se encuentra en su capacidad mxima.
EL SISTEMA AMORTIGUADOR QUE SE APLICA EN CLNICA ES LA ECUACIN
DE HENDERSON HASSELBACH LA CUAL DICE QUE: pH de la sangre
16
S ustituyendo
En donde 6.1 es el valor del pK del cido carbnico

El cido carbnico (H2CO3) se calcula multiplicando la concentracin
del pCO2 (presin parcial de bixido de carbono) * la constante 0.03
que convierte los mmHg del CO 2 en mEq/l pH = 6.1 + log del
bicarbonato/pCO2 pH = 6.1 + log de 24 mEq/L / 40 mmHg (40 por
0.03 = 1.2 mEq/L) pH = 6.1 + log de 24/1.2 (24/1.2 = 20 y
logaritmo de 20 = 1.3) pH = 6.1 + 1.3 = 7.4
PreLaboratorio
En su trabajo de Pre-Laboratorio, conteste claramente las siguientes
preguntas:
1. Soluciones buffer o amortiguadoras:
a. Cmo se definen?
b. Cules son sus principales caractersticas?
c. Cul es su papel dentro del organismo?
d. Cules son los principales sistemas buffer que se encuentran en
el organismo?
e. Qu significa la pK de una solucin buffer?
2. Investigue sobre el potencimetro:
a. Qu es y para qu se usa?
17
b. Cmo se encuentra diseado?
c. Cmo se calibra?
d. Cmo se maneja y qu
cuidados debe tenerse al
manejarlo?
Materiales
a. Reactivos
Hidrxido de sodio, NaOH, solucin 1M
Fosfato dicido de potasio, KH2PO4, solucin 0.05M
Fosfato cido de potasio, K2HPO4, solucin 0.05M
b. Cristalera
Baln aforado de 50 mL
Pipeta volumtrica de 1 mL
Beacker de 100 mL
c. Instrumentacin
Medidor de pH, o
potencimetro Procedimiento
I. Preparacin de las muestras.

- Usando las soluciones que se le facilitan en el laboratorio, prepare las
muestras siguiendo las indicaciones del cuadro siguiente. Para
mayor facilidad, utilice balones de 50 mL, transfiera el volumen
menor usando pipeta volumtrica y afore con el volumen mayor.
Rotule claramente cada muestra para evitar confusiones.
Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8
K2HPO4 0.05M (mL) 0 1 5 20 30 45 49 50
KH2PO4 0.05M (mL) 50 49 45 30 20 5 1 0
II. Lectura.
- Obtenga el valor del pH para cada una de las muestras. Siga
claramente las instrucciones del docente de laboratorio y asegrese
de ser supervisado al momento de tomar las lecturas de su muestra.
18
Procese la informacin que obtuvo como se indica en la seccin de
Observaciones importantes.
- Calibracin del potencimetro:
o Retirar la tapa del
potencimetro. o Retirar el
tapn de plstico que est en el sensor. o Introducir el sensor
del potencimetro en el buffer pH 7. o Presionar la tecla ON/OFF.
o Seguidamente presionar la tecla
CAL y se escuchara un Beep, esperar a que en la pantalla indique
7.0 y sonara Beep o Retirarlo del Buffer pH 7. o Lavar el sensor
con agua destilada y eliminar el exceso de agua sin tocar al
sensor.
o Introducir el sensor del potencimetro en el buffer pH 4. o
Presionar la tecla CAL y se escuchar un Beep, esperar a que en
la pantalla se indique 4.00 y sonara Beep.
o Retirarlo del buffer pH 4. o Lavar el sensor con agua destilada y
eliminar el exceso de agua sin tocar el sensor.
o El potencimetro est listo para leer su muestra. No lo apague.
o Obtenga el valor de pH para cada una de las muestras. o
Introducir el potencimetro en el beacker con la muestra y
presionar la tecla READ y espere el sonido Beep y en la pantalla
se le indicara el pH de la muestra.
III.Comparacin.
- Coloque en un beacker 50 mL de muestra (un beacker por muestra)
y 50 mL de agua en otro beaker.
- Mida el pH de cada solucin.
- Luego de haber medido el pH de cada solucin, aadir 5 gotas de
NaOH al 2.5%
- Vuelva a medir el valor de Ph de cada solucin.
Observaciones importantes
Asegrese de anotar claramente dentro del cuadro que prepar para
datos, en su cuaderno los valores de pH para todas sus muestras. Para
cada muestra, calcule los siguientes parmetros:
1. [HPO4-2] usando la informacin del volumen de K 2HPO4 que agreg
en la muestra, utilizando la siguiente formula
19
Concentracin original * Vol. adicionado = [HPO4-2] * Vol. Total
2. [H2PO4-] usando la informacin del
volumen de KH2PO4 que agreg
en la muestra
Concentracin original * Vol.
adicionado = [H2PO4-] * Vol. Total
3. El logaritmo de la relacin de las dos concentraciones usando la
siguiente ecuacin
2
Haga una grfica en donde se muestre en el eje x el valor de la

relacin de concentraciones obtenidas en el inciso anterior, en el eje y
el valor obtenido para cada muestra. Obtenga una regresin lineal
entre estos datos y el valor que obtenga para el intercepto ser su
valor del pK. (Se recomienda revisar su manual de BQI)
Busque en la literatura el valor terico para el pK de disociacin de la
siguiente ecuacin y calcule el porcentaje de error de su experimento.
Anexo
Investigue lo siguiente
1. Capacidad buffer o de amortiguacin:
a. Qu significa?
b. Qu sucede cuando se excede?
c. Qu significa rango buffer o de amortiguacin y cul es su
relacin con el pK?
d. Por qu una solucin buffer no puede actuar de la misma
manera en todas las situaciones (a varios valores de pH?
2. D un ejemplo de un buffer o amortiguador mdico y describa su
funcin.
Bibliografa de referencia
1. Department of Biochemistry, University of Minnesota. Labotatory
Manual for Biochemistry 5025. 1998. Consultado el 23 de junio,
20
2005. Modificado el 23 de diciembre, 2003.
http://www.natureandscience.net/labmanual.htm
2. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical
Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4. Edicin. Mosby, Inc.
pg. 38-39
3. Devlin, T. (ed) 2002. Textbook of Biochemistry with Clinical
Correlations. 5 Edicin. Estados Unidos. Wiley-Liss. Pginas 12-
13.
REALIZADO POR: DR. OCHAETA Y LICDA. NANCY DEL CID
21
PRCTICA NO. 2
SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE PROTENAS

EN SUERO Y PLASMA
Introduccin
Las protenas estn compuestas por carbono, oxigeno, hidrogeno y
nitrgeno. La mayora de ellas contienen adems azufre y algn fsforo.
Las protenas proporcionan estructuras, catalizan reacciones
celulares y llevan a cabo multitud de tareas. Su papel central en la clula
queda reflejado en el hecho que la informacin gentica se expresa en
forma de protenas. Existe para cada protena un segmento de ADN que
codifica la informacin que especifica su secuencia de aminocidos.
Para el estudio de las protenas es necesario que estas se
encuentren en estado puro, existen varias tcnicas para poder separarlas
como la precipitacin por adicin de sales y precipitacin por adicin de
aniones y cationes. Luego de la separacin por medio de la precipitacin
es necesaria una purificacin ms profunda a travs de la cromatografa.
Durante esta prctica el estudiante podr poner en prctica la
precipitacin de protenas plasmticas y de huevo; as mismo podr
identificar la presencia de protenas en soluciones de varios alimentos a
travs del reactivo de Biuret.
Objetivos
Que el estudiante:
1. Describa que es la sangre y sus constituyentes.
2. Describa cada una de las fracciones que constituyen a las protenas
del plasma con base a su origen, concentracin y funcin
3. Conozca e interprete la diferencia entre suero y plasma.
4. Explique cmo se encuentran constituidas las inmunoglobulinas, y
las diferentes caractersticas de cada una de ellas.
Alcance
Que el estudiante
1. Adquiera destreza en el manejo y preparacin de soluciones.
2. Conozca la forma correcta de utilizar un potencimetro.
3. Aprenda la aplicacin de curvas de calibracin de un aparato simple.
22
4. Aplique su conocimiento matemtico en la obtencin e
interpretacin de grficos en el
laboratorio.
Antecedentes
Las protenas plasmticas son un
grupo de ms de 100 molculas distintas con caractersticas y funciones
muy diversas
La sangre es considerada como un tejido que circula por un espacio
virtualmente cerrado, que son los vasos sanguneos. Est constituida por
una fraccin celular (eritrocitos, leucocitos y plaquetas) y un lquido
llamado plasma, en el que se encuentran suspendidos los constituyentes
de la fraccin celular adems de nutrientes, metabolitos, hormonas,
clulas, electrolitos, protenas, factores de la coagulacin, sistema del
complemento, entre otros. El volumen de la sangre es de
aproximadamente el 8% del peso corporal total, del cual el 55% est
constituido por el plasma y el 45% por clulas sanguneas.
- Protenas del plasma
La sangre normal circulante contiene en su plasma alrededor de 7 a
7.5 g/100mL de protenas totales siendo su fraccionamiento el
siguiente:
Albmina 4.3 g/100 mL (3.5 5.5)

Globulina 2.4 g/100 mL (2.0 3.6)
Fibringeno 0.3 g/100 mL (0.2 0.6)
(5.7 9.7)
7.0 g/100 mL
o Albmina
Esta fraccin de las protenas del plasma es la ms abundante,
es sintetizada en el hgado. Tiene un peso molecular
aproximado de 69,000. La estructura primaria de la albmina
est constituida por 610 aminocidos dispuestos en una sola
cadena peptdica. La estructura secundaria parece ser solo una,
la cual esta plegada sobre si misma, formando capas que se
pueden desplegar bajando el pH y volverse a plegar cuando se
sube el pH. La albumina en el organismo cumple con varias
funciones como por ejemplo: transporte de compuestos
orgnicos y recambio de nutrientes y metabolitos. o Globulina
23
Es una mezcla de varias protenas las cuales se han podido
separar por mtodos
especiales de laboratorio,
uno de ellos es la
electroforesis son la cual se
obtienen fracciones de globulinas conocidas como 1, 2 y .
Las globulinas 1, 2, al asociarse a carbohidratos forman gluco
y mucoprotenas. Todas las globulinas al asociarse a fracciones
de lpidos (TAG, colesterol libre y esterificado, fosfolpidos),
forman las llamadas lipoprotenas.
Algunas globulinas se unen a metales para transportarlos por el
plasma, como la Siderofilina o Transferrina para el hierro, la
Ceruloplastina para el cobre. Los pesos moleculares de las
globulinas cubren una gama muy amplia, desde cerca de
40,000 hasta algo ms de 1 milln. El sitio principal de su
sntesis es el hgado, con excepcin de las gamma globulinas
que se sintetizan en el sistema retculo endotelial.
Gamma Globulinas: tambin llamadas Inmunoglobulinas (Ig),
tienen actividad de defensa actuando como anticuerpos. Cada
molcula de Ig est formada por 4 cadenas polipeptdicas (2
pesadas llamadas H y 2 livianas llamadas L) las que estn
unidas por puentes disulfuro. Se conocen 5 clases de
inmunoglobulinas: IgA, IgG, IgD, IgM e IgE. o Fibringeno
Es una protena que est presente en el plasma humano a una
concentracin de 0.3g por 100 mL. La molcula de
fibringeno es un dmero que consta de 2 mnomeros
constituidos de 3 cadenas polipeptdicas cada uno enlazados
por puentes disulfuro. La presencia de hidratos de carbono en
la molcula tiene algn significado en el mecanismo de la
coagulacin.
- Plasma y suero
El plasma se obtiene cuando, inmediatamente despus de extraer la
sangre, se le agregan anticoagulantes como oxalato, citrato, EDTA, o
heparina y se centrifuga. Si se recoge sangre sin anticoagulante y se deja
que est coagule, el lquido que se separa se llama suero. El suero
carece de clulas y de factores de la coagulacin incluyendo la protena
24
fibringeno, pues sta ha sido transformada en fibrina insoluble en el
proceso de la coagulacin.
Una de las tcnicas de precipitacin
se basa en la baja solubilidad que
tienen las protenas en disoluciones
salinas concentradas, la sal que ms se ha utilizado es el Sulfato de
Amonio, (NH4)2SO4. El hecho de que una protena se disuelva en un
medio acuoso se debe a su capacidad de formar puentes de hidrgeno.
Con el agua a mayor cantidad de puentes de hidrgeno mayor
solubilidad. La accin de la sal es liberar el agua unida a la protena por
puentes de hidrgeno, lo cual provoca su precipitacin.
El reactivo de Biuret se utiliza para la determinacin de protenas,
peptidos cortos y otros compuestos con dos o ms en laces peptdicos.
La prueba se basa en la reaccin del sulfato de cobre con compuestos
que tengan dos o ms enlaces peptdicos, en un medio alcalino. La
reaccin final produce un complejo color violeta, cuya intensidad de color
es proporcional a la cantidad de enlaces peptdicos presentes.
Materiales
a. Reactivos
Solucin 0.1M de Oxalato de sodio
Solucin de hidrxido de sodio al 10%
Solucin saturada y semisaturada de sulfato de
amonio
Cristales de sulfato de amonio
Reactivo de Biuret
Suero y Plasma oxalatado
Agua destilada
b. Cristalera
Tubos de ensayo
Tubos de centrifuga
c. Equipo
Gradillas para tubos de ensayo
Pipetas pasteur
Pipetas de 1 mL y de 5 mL
25
Esptula
Centrfuga
Procedimiento
I. Presencia de Fibringeno
- Colocar 1 mL de plasma oxalatado
en un tubo de centrifuga, agregarle 1 mL de una solucin
semisaturada de sulfato de amonio y mezclarlos.
- Observe el fibringeno que se precipit.
- Centrifugue el tubo con su contenido durante 5 minutos, descartar

todo el sobrenadante.
- Al sedimento agrguele 1 mL de agua destilada, mzclelo
completamente.
- Agrguele 1 mL de solucin al 10% de hidrxido de sodio y 1 mL de
reactivo de Biuret.
- Observe el color que se desarrolla.
II. Separacin de Globulinas
- Tomar 1 mL de suero y colocarlo en un tubo de centrifuga, agregarle
1 mL de una solucin saturada de sulfato de amonio y mezclarlos.
- Observe el precipitado.
- Centrifugar durante 10 minutos.
- Pasar el sobrenadante a otro tubo de centrifuga limpio (este se utilizara
en el apartado III).
- Al sedimento agregue 1 mL de agua destilada y mzclelo.
- Agrguele 1 mL de solucin al 10% de hidrxido de sodio y 1 mL de
reactivo de Biuret.
III. Separacin de Albmina
- Al sobrenadante del inciso anterior, agrguele unos cristales de
sulfato de amonio y agtelo suavemente hasta que se disuelva (si es
necesario agregue un poco ms).
- Observar el precipitado que se forma.
26
- Agrguele 2.5 mL de solucin al 10% de hidrxido de sodio y 1 mL
de reactivo de Biuret.
Anexo
Investigue lo siguiente:
1. Describir la funcin de por lo menos tres protenas plasmticas que
se incluyen dentro de las globulinas.
Bibliografa
1. Quesada Mora, Silvia. Manual de experimentos para Bioqumica. San
Jos Costa Rica. EUNED. 2007. 148 p.
2. Departamento de Bioqumica, Universidad Autnoma de Mxico.
Programa acadmico, objetivos del curso, contenido temtico y
manual de practicas de Laboratorio, Biologa y Biologa Molecular.
2004. Consultado en enero 2010. Reimpreso 2006.
REALIZADO POR: LICDA. NANCY DEL CID
PRCTICA NO. 3
COAGULACIN SANGUNEA
Introduccin
El organismo dispone de un sistema de seguridad que le permite detener
una hemorragia o prdida de sangre debido a la rotura de la pared
vascular, a este mecanismo se le conoce como hemostasia o coagulacin
sangunea.
Existen diferentes pruebas para poder evaluar este proceso como el
tiempo de sangra, tiempo de coagulacin, tempo de protrombina, tiempo
de tromboplastina parcial, entre otras.
Objetivos Que el estudiante:

1. Conozca las pruebas de coagulacin y la importancia de cada una
de ellas.
2. Conozca que se evala en cada prueba.
27
3. Conozca la forma adecuada de realizar cada una de las pruebas.
Antecedentes
Antecedentes: Fases de la
hemostasis:
1. VASOCONSTRICCIN: es la disminucin de la luz del
vaso sanguneo, como un mecanismo de defensa, llevado a cabo
por el estmulo directo del sistema nervioso simptico sobre el
msculo liso de la pared del vaso sanguneo.
2. AGREGACUN PLAQUETARIA: es el proceso que se desencadena
cuando una plaqueta se adhiere al factor de Von,Willebrand unido
a la colgena del vaso sanguneo, est plaqueta libera
tromboxano A2, lo cual atrae a otras plaquetas. Las plaquetas que
se van agregando emiten pseudpodos y sustancias que activan
a otras plaquetas para que sigan unindose hasta formar el
cogulo plaquetario.
3. COAGULACIN SANGUNEA: tradicionalmente se le divide en 3
fases: intrnseca, extrnseca y comn. La va intrnseca
comprende los factores XII, XI, IX y VIII, adems de la calicreina
(que existe inicialmente como precalicreina) y el ciningeno de
alto peso molecular. La va intrnseca se inicia con el contacto con
una superficie
patolgica como la exposicin de las cargas negativas en el

endotelio lesionado. La va extrnseca se inicia con la activacin
del factor VII y el factor tisular (factor III), tanto la va intrnseca
como la extrnseca convergen en la activacin del factor X que
inicia la va comn la cual comprende la conversin de la
protrombina en trombina y la conversin de fibringeno en el
cogulo de fibrina como se observa en el siguiente esquema:
28
Dos pruebas de coagulacin nos sirven para evaluar la va
intrnseca y extrnseca. Por medio del tiempo parcial de tromboplastina
(TPTP), evaluamos la va intrnseca, su valor normal es de 30 a 40
segundos. Con esta prueba monitorizamos a las personas que estn
siendo tratadas con heparina y tambin refuerza el diagnstico de
29
enfermedades como las hemofilias tipo A (deficiencia del factor VIII),
hemofilia tipo B (deficiencia del factor
IX) y hemofilia tipo C (deficiencia del
factor XI), y de la enfermedad de von
Willebrand. Con el tiempo de
protrombina (TP: valor normal de 10 a 15 segundos), monitorizamos a las
personas que estn siendo tratadas con warfarina un inhibidor
competitivo de la vitamina K (la vitamina K es necesaria para que se d
la gamma-carboxilacin de los factores II, VII, IX y X), est prueba
tambin est alargada. anormalmente en la deficiencia de vitamina K y
en las hepatopatas graves. Actualmente cada vez que mandamos hacer
un tiempo de protrombina el laboratorio nos informa del INR que
significa razn normalizada internacional, esta razn fue propuesta por
la OMS en 1982. Al inicio la INR se calculaba asi: INR = TP del pac. / TP
controlISI. El exponente ISI significaba ndice de sensibilidad internacional,
como se hace muy difcil elevar al exponente, se trat de que este
exponente se aproximara a la unidad y como cualquier nmero elevado a
un exponente 1 no
se modifica entonces actualmente solo se utiliza
INR = TP del pac / TP control y su valor normal va de 0.8 a 1.2
- Tiempo de sangra:
El tiempo de sangrado mide la fase primaria de la hemostasia: la
interaccin de las plaquetas con la pared del vaso sanguneo y la
formacin del tapn hemosttico. El tiempo de sangrado constituye la
mejor prueba para detectar alteraciones de la funcin plaquetaria y es
uno de los principales estudios en los trastornos de la coagulacin. Se
hace una pequea herida en el lbulo auricular o en el antebrazo y se
anota el tiempo de sangrado y la velocidad con que se forma el cogulo
plaquetario. La duracin del sangrado de un capilar depende de la
calidad y cantidad de plaquetas y de la vasoconstriccin. Valor de
referencia: 2 9 minutos. Esta prueba se altera principalmente en la
enfermedad de Von Willebrand (el valor de esta prueba puede pasar los
25 minutos).
30
Tiempo de coagulacin:
Es el intervalo requerido para que la sangre venosa se coagule en
condicin controlada; es una medicin del tiempo requerido para la
formacin de las primeras trazas de trombina que bastan para formar un
coagulo visible. Valor de referencia: 5 a 8 minutos. Esta prueba casi no se
hace actualmente, porque la informacin que proporciona tiene poco
utilidad clnica.
Pre-laboratorio
De la coagulacin investigue lo siguiente:
1. A qu conocemos como fibrina?
2. Qu son las plaquetas?
3. A que se refiere cuando se habla de la va intrnseca y extrnseca
de la coagulacin
4. Qu tipo de anticoagulante debe de usarse en pruebas de
coagulacin? Materiales
31
a. Reactivos
Reactivo para Tiempo de
Protrombina (TP)
Agua Destilada
Control Normal para TP
Control Patolgico para TP
b. Cristalera
Tubos de ensayo
Laminas porta-objeto
c. Equipo
Gradillas para tubos de ensayo
Micro pipeteador automtico 200L
Micro pipeteador automtico 50 L
Bao de Mara a 37C
d. Otros
Papel mayordomo
Cronometro
Lancetas
Procedimiento
I. Tiempo de Protrombina (TP)

- Luego de recolectada y separada la sangre
- Calentar el reactivo de TP a 37C
32
- Colocar 50 L del control normal de TP en un tubo e incubarlo a 37C
en el bao de Maria durante 2
minutos.
- Aadir con fuerza 100 L del
Reactivo de TP al tubo del inciso
3) y cronometrar hasta la formacin de hilos de fibrina.
- Repetir el inciso 3) y 4) para el control patolgico y la muestra.
MUESTRA TIEMPO EN INR

SEGUNDOS
Control Normal --
Control Patolgico --
Muestra No. 1
Muestra No. 2
II. Tiempo de Sangra

- Se utiliza la zona que esta 15 a 20 mm por encima de la porcin
grasa redonda del lbulo de la oreja.
- Calentar la oreja.
- Desinfectar el rea a puncionar.
- Colocar una lmina portaobjetos detrs del pabelln de la oreja (esto
con la finalidad de darle firmeza a la puncin que se ejecutar).
- Usando una lanceta, se perfora el lbulo de la oreja mediante un
golpe firme. La herida deber ser lo suficientemente posible
profunda para que fluya libremente la sangre sin apretar con el
dedo.
- Activar el cronmetro inmediatamente

- A intervalos de medio minuto, recoger la cota de sangre que se
forma en la oreja con un pedazo de papel mayordomo
- Cuando el papel ya no absorba nada, detener el cronometro. -
Reportar el tiempo transcurrido en minutos y segundos.
Anexo
Investigue lo siguiente
1. Clnicamente cual es el comportamiento del TP, cuando hay
administracin de anticoagulantes en un paciente, explique el por
qu.
33
2. Cuantos factores de la coagulacin existen, mencione cada uno de
ellos Bibliografa
1. Prez Folgar, JR, Fernndez Ch.,
JG. Manual de Prcticas de
Laboratorio de Hematologa
Bsica. Guatemala. USAC. 2002. 102 p.
2. Ficha tcnica NEOPLASTINE CI PLUS. Diagnostica Stago, Francia.
MAZARIEGOS CORDERO MODIFICADO POR: LICDA. NANCY DEL CID (2011)
34
PRCTICA NO. 4
FUNCIN RENAL: DETERMINACIN DE

CREATININA
Introduccin
La prueba que se usar en el laboratorio es un mtodo colorimtrico de
punto final para la deteccin de creatinina en suero u orina. El principio
del mtodo se basa en que la creatinina reacciona con el picrato alcalino
formando un complejo de color rojo. La intensidad de color es
proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra, lo cual
permite su cuantificacin con el uso de estndares de creatinina de
concentracin conocida.
Objetivos
Que el estudiante
1. Realice un mtodo espectrofotomtrico para determinacin de
analitos en muestras biolgicas.
2. Practique la preparacin de curvas de calibracin con estndares de
concentracin conocida.
Alcance
Que el estudiante
1. Se familiarice con el uso de las micropipetas y diluciones.
2. Aprenda a realizar clculos de concentracin por interpolacin
usando curvas de calibracin
3. Interprete resultados clnicos.
Antecedentes
Los niveles de creatinina srica y la excrecin urinaria son una funcin

de la masa muscular en personas normales, y muestran muy poca
respuesta a cambios en la dieta. La creatinina deriva de la
deshidratacin no enzimtica de la creatina en msculo esqueltico. La
cantidad de creatina por unidad de masa muscular es constante, y por lo
tanto la tasa de
35
deshidratacin de creatina es
constante tambin-. Por lo tanto la
concentracin de creatinina srica es
muy estable, con variaciones diarias de menos del 10%.
La creatinina es un compuesto sumamente difusible y se elimina del
organismo casi exclusivamente por filtracin renal: Es filtrada libremente
en el glomrulo y no es reabsorbida en los tbulos. Por estas
propiedades, la tasa de depuracin de creatinina puede ser usada como
estimacin de la funcin glomerular. Su determinacin en suero y la tasa
de depuracin de creatinina endgena constituyen parmetros
importantes para el diagnstico de diversas afecciones renales.
La creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el
picrato alcalino para formar un complejo de color rojo. La intensidad del
color se cuantifica con un espectrofotmetro, a una longitud de onda de
510 nm, y por interpolacin (comparacin) con la absorbancia de un
estndar o curva estndar se obtiene la concentracin de la muestra que
se analiza. Como otros compuestos de la muestra tambin reaccionan
con la muestra, para eliminar la interferencia se agrega cido, el cual
destruye el complejo picrato-creatinina pero no los otros complejos. La
concentracin de creatinina se calcula por diferencia entre la absorbancia
(intensidad de color) antes y despus de agregar el cido.
Pre-laboratorio
1. Qu es la creatinina?
2. Investigue las patologas que presentan alteraciones de los valores
de creatinina srica y urinaria.
3. Haga los clculos necesarios para obtener 1 mL de una muestra de

orina diluida para cada una de las siguientes diluciones: 1:2, 1:50,
1:100 y 1:200 de la muestra de orina. Materiales
Reactivos
Muestras de suero y orina de 24 horas diluida 1:50
Solucin salina, NaCl al 0.9%
Estndar de creatinina, 2.0 mg/dL
Solucin de cido pcrico 41 mmol/L
36
Solucin de buffer alcalino, pH 12.4
Reactivo de trabajo: Prepare en frasco de plstico mezcla a partes

iguales de cido pcrico y buffer alcalino.
Solucin stop, cido actico al 20%
a. Instrumentacin
Espectrofotmetro, lectura a 510 nm
Celdas para espectrofotmetro
Bao de agua a 37C
Reloj o timer
Micropipetas de 2 a 20 L, 10-100 L, 200-1000 L
Puntas para micropipeta
b. Cristalera
Tubos Eppendorf de 1.5 mL
Tubos de vidrio
Precauciones
Los reactivos utilizados son txicos y corrosivos. Maneje todas las
soluciones con cuidado. Evite derrames y el contacto directo con la piel y
mucosas.
Toda muestra biolgica debe tratarse como potencialmente infecciosa,
por lo cual debe cumplirse con las normas de bioseguridad adecuadas.
Debe usarse guantes en todo momento, as como ser cauteloso durante
la manipulacin.
37
Procedimiento
Seguir el siguiente esquema de pipeteo en cada tubo de ensayo
debidamente identificados:
Blanco Estndar Muestra de Muestra de

Suero orina
Estndar -- 10 L -- --
Muestra Suero -- -- 10 L --
Muestra Orina -- -- -- 10 L
Reactivo de 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Creatinina
Mezcle e incube por 10 min en bao a 37C
Dentro de los 15 minutos despus de retirarlo del bao, leer el

estndar y las muestras en el espectrofotmetro a una longitud
de onda de 510 nm. Llevando el equipo a cero con el Blanco
Stopper
50 L -- 50 L 50 L
Mezclar y dejar los tubos 5 minutos a temperatura ambiente y
volver a leer las muestras, llevando a cero con el blanco.
Calculo de resultados
Creatinina en suero (mg/dL)= (Abs1- Abs2)* F
F= 2.0 mg/dl
Abs. Estndar
38
Creatinina en orina (g/24
horas)= Abs1-Abs2 * 0.020
g/L * 50 *
Vol en L
Abs. Estndar
Depuracin de Creatinina Endgena (D.C.E)=
La creatinina tiene la ventaja de que es un compuesto endgeno,

por lo tanto lo forma nuestro propio cuerpo. La creatinina se
sintetiza por la deshidratacin de la creatina-P (un reservorio de
energa), la cual es sintetizada a partir de 3 aminocidos: glicina,
arginina y metionina.
Si existe por ejemplo 1 mg de creatinina por mililitro de plasma y

se filtran 125 o 130 ml de plasma cada minuto, en la orina
aparecen 180 mg de creatinina en cada minuto, esto significa que
aparecieron 50 mg de creatinina ms de lo que podra esperarse si
la creatinina solo se hubiera filtrado, sin embargo la creatinina
tambin es secretada en los tbulos de la nefrona y por eso cada
minuto realmente se depura la creatinina de 180 ml de plasma y
no 130 ml como en el caso de la inulina que solo se filtra.
La UREA, es otro compuesto que en alguna oportunidad tambin se
uso para medir tasa de filtracin glomerular. Si en el plasma
existen 20 mg de urea por cada 100 ml y se filtran 130 ml de
plasma cada minuto, entonces se filtran 26 mg de urea cada
minuto, pero en la orina de cada minuto solo aparecen 12.22 mg,
quiere decir que el resto (26-12.22=13.78 mg) se reabsorbi, por
lo tanto, del 100 % de urea que se filtr se reabsorbi el 53 %, en
los tbulos y se excret el 47 %
La velocidad del filtrado glomerular o tasa de filtracin glomerular

en una persona adulta sana es de 125 ml por minuto, en las
mujeres se debe de considerar un 10 % menos. Para la eliminacin
de creatinina corregida con la superficie corporal, la TFG es para
los hombres adultos de 97 a 137 ml/min y para las mujeres de 88
a 128 ml/min.
39
TFG = U (mg/dl) x V (ml/24 h) / P (mg/dl x 1440 min x 1.73/A
TFG = tasa de filtracin glomerular

U = concentracin de creatinina urinaria
V = volumen de orina eliminada en 24 horas (1440 minutos)
P = concentracin de creatinina en el plasma
A = Area de superficie corporal de la persona a quien se
investiga
Los valores normales de creatinina en orina y plasma son:
Los hombres tienen un valor de creatinina urinaria de 0.8 a 2.4

g/da
Las mujeres tienen un valor de creatinina urinaria de 0.6 a 1.8
g/da
La diferencia consiste en que la creatinina en la orina esta en
relacin a la masa muscular y los hombres tienen ms masa
muscular que las mujeres.
La creatinina en plasma para hombres y mujeres es menor o igual

a
1.2 mg/dl
D.C.E. (ml/min)= Creatinina en orina de 24 horas (g/24 horas) * 694
mL/min Creatinina en suero (mg/L)
Valores de referencia
Suero: Hombres 0.64 - 1.04 mg/dL
Mujeres 0.57 - 0.92 mg/dL
Orina: Hombres 1.0 2.0 g /24 horas
Mujeres 0.8 1.8 g /24 horas
Depuracin de creatinina: 80-140 mL/min
40
1. Ficha tcnica Creatinina Directa.
864101004. Wiener Lab, Rosario,
Argentina
2. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C.
Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation.
4. Edicin. Mosby, Inc.
REALIZADO POR: LICDA. GABRIELA CIFUENTES MODIFICADO POR: LICDA. NANCY

DEL CID (2011)
PRCTICA NO. 5 FUNCIN RENAL: DETERMINACIN DE
NITRGENO DE UREA
Introduccin
La concentracin de urea ser cuantificada espectrofotomtricamente,

en donde la ureasa cataliza la hidrlisis de la urea, presente en la
muestra, en amonaco (NH3) y anhdrido carbnico (CO2). El amonaco
formado se incorpora al -cetoglutarato por accin de la glutamato
deshidrogenasa (GLDH) con oxidacin paralela de NADH a NAD+.
ureasa
Urea + H2O 2 NH3 + CO2
GIDH
NH3 + NADH + H+ + 2-oxoglutarato I-glutamato + NAD+ + H2O
Objetivos
Que el estudiante
1. Realice la prueba de determinacin de nitrgeno de urea.
2. Use los valores obtenidos para evaluar la condicin del paciente.
41
Alcance
Que el estudiante
1. Se familiarice con el uso de las
micropipetas y diluciones.
Antecedentes
La urea se forma en el hgado con la ayuda del CO2, y constituyen el
producto final del metabolismo de las protenas. La cantidad de urea
excretada est directamente relacionada con la ingesta de protenas en
la dieta, aumentada en estados febriles, diabetes, y actividad de la
glndula adrenal.
El test de Nitrgeno de Urea mide la porcin de nitrgeno de la urea, y
es usada como ndica de funcin glomerular. Sus niveles se aumentan en
necrosis tisular, catabolismo proteico. Sus niveles se correlacionan mejor
con la sintomatologa de uremia que los niveles de creatinina.
Su aumento es signo elemental de insuficiencia renal orgnica, pero
hay que tener en cuenta que no todo aumento significa nefropata, pues
tambin se eleva por causas extrarrenales.
Niveles altos se encuentran en uremia aguda, glomerulonefritis aguda,
anuria traumtica, choque hemoltico post-transfusional, nefrosis,
esclerosis renal, hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis y rin
poliqustico.
Cuando el aumento obedece a causa extrarrenal, es fenmeno agudo o
subagudo, pero reversible a veces en pocas horas, como sucede en la
deshidratacin aguda, donde por la maana se puede encontrar en 40
mg/dL y en la tarde estar dentro de la normalidad.
Igual ocurre en los vmitos intensos, diarreas, sudoracin profusa,
quemaduras extensas, infecciones que ocurren por protelisis tisular
aumentada, en el coma diabtico, en el post-operatorio inmediato,
insuficiencia suprarrenal y en la agona, donde intervienen factores de
hipotensin.
42
Pre-laboratorio
1. Mencione 3 patologas que se
asocien a la alteracin del
nitrgeno de urea y mencione los
sntomas de cada una de ellas.
Materiales
a. Reactivos
Muestra de suero
Reactivo de trabajo, el cual consta de una mezcla de

buffer y enzimas (2oxoglutarato, NADH, ureasa y
glutamato deshidrogenasa) Estndar con una
concentracin de 0.60 g/L
b. Instrumentacin
Cronometro
Micropipetas de 2 a 20 L, 10-100 L, 200-1000 L
Gradilla
c. Cristalera
Tubos de vidrio
Procedimiento
Seguir el siguiente esquema de pipeteo en cada tubo de ensayo,
debidamente identificados:
Estndar Muestra 1 (Mx1) Muestra 2 (Mx2)
(S)
43
Estndar -- 10 L --
Muestra -- -- 10
Suero 1 L
Muestra -- -- --
Suero 2
Reactivo de trabajo 1 mL 1 mL 1 mL
Mezclar (sin invertir) y disparar un cronometro
A los 60 segundos exactos medir la absorbancia de los tres tubos, la cual ser la
ABS1 para las muestras y S1 para el estndar.
Continuar con la incubacin
Medir nuevamente la absorbancia a los 120 segundos (60 segundos despus de

la primera lectura) la cual ser la ABS2 para las muestras y S2 para el estndar.
Urea (g/L) = f * (ABS1 ABS2)
En donde f = 0.60 g/L
(S1 S2)
Para la determinacin del Nitrgeno de Urea: divida el resultado de la

Urea /
2.14
Nota: para el reporte de sus resultados, deber de calcular la
concentracin de Nitrgeno de Urea en mg/dL.
Urea = 15 39 mg/dL
Nitrgeno de Urea = 7
20 mg/dL
44
Anexo:
Investigue sobre la reaccin de
Berthelot modificada
Bibliografa
1. Ficha tcnica Urea Cintica.
861237005. Wiener Lab. Rosario, Argentina
2. ngel, Gilberto y ngel, Mauricio. Interpretacin Clnica del
Laboratorio. 7. Edicin. Editorial Mdica Panamericana. 2006.
Bogot.
MAZARIEGOS CORDERO
PRCTICA NO. 6
DETERMINACIN ENZIMTICA DE CIDO RICO
Introduccin
La concentracin de cido rico ser cuantificada
espectrofotomtricamente a travs de la reaccin de cido rico
catalizada por uricasa, acoplada a la formacin de un complejo de color.
La uricasa cataliza la reaccin del cido rico presente en la muestra,
para formar alantona y perxido de hidrgeno (H2O2). El H2O2
formado reacciona por la actividad cataltica de la peroxidasa con cido
3,5-dicloro-2hidroxibencensulfnico (DCHBS) y 4-aminofenazona
45
(PAP) para producir un complejo rojo-violeta de quinoneimina que se
cuantifica en el espectrofotmetro con
una longitud de onda de 520 nm.
uricasa
cido rico + O2 + 2H2O
Alantona + CO2 + H2O2
peroxidasa
2 H2O2 + DCHBS + PAP Quinoneimina + HCl + 4H2O
Objetivos
Que el estudiante
1. Se introduzca a los mtodos enzimticos para
determinaciones clnicas.
2. Estudie las patologas asociadas con cido rico elevado.
Alcance
Que el estudiante
1. Contine familiarizndose con la aplicacin de mtodos
espectrofotomtricos para determinacin de analitos en muestras
biolgicas.
Antecedentes
El cido rico es el mayor producto del catabolismo de los
nuclesidos de purina. Las purinas provenientes de la dieta se convierten
a cido rico directamente. Sin embargo la mayor parte de las purinas
que se excretan como cido rico en la orina proviene de la degradacin
de cidos nucleicos endgenos. Un 75% del acido rico excretado por
los seres humanos es excretado por la orina, el resto es secretado al
tracto gastrointestinal, donde se degrada a alantona y otros compuestos
por las enzimas bacterianas.
El manejo renal es complejo y ocurre en 4 pasos: (1) filtracin
glomerular; (2) reabsorcin de 98-100% en el tbulo proximal
convolucionado; (3) secrecin hacia el lumen en la porcin distal del
tbulo proximal; y (4) nueva reabsorcin en el tbulo distal. La filtracin
neta de cido rico es de 6 a 12% de la cantidad filtrada.
46
La hiperuricemia se define como concentraciones de cido rico en
sangre mayor a 6.0 (mujeres) o 7.0
mg/dL (hombres). La manifestacin
clnica extrema de hiperuricemia
ocurre en forma de gota, cuando el
urato monosdico precipita de los fluidos sobresaturados. Los depsitos
de urato son los responsables de los sntomas La artritis gotosa puede
asociarse con cristales en fluido articular, y depsitos de cristales en los
tejidos que rodean la articulacin. Cuando los depsitos ocurren en tejido
blando, producen una respuesta inflamatoria intensa mediada por
leucocitos polimorfonucleares y macrfagos.
La gota primaria se asocia con hiperuricemia esencial debido a la
sobreproduccin metablica de purinas o excrecin disminuida de cido
rico. La gota secundaria es resultado de hiperuricemia asociada a
causas identificables. La falla renal aguda o crnica puede producir
retencin renal de cido rico. Algunos medicamentos, en particular
diurticos pueden ser la causa de la falla. La acidemia orgnica por
aumento del cido acetoactico en diabticos, o la acidosis lctica
pueden interferir con la secrecin tubular del urato. En clulas
tumorales, el rpido recambio de cidos nucleicos puede tambin inducir
hiperuricemia.
El nivel de cido rico en la sangre se incrementa gradualmente

con la edad, aumentando un 10% entre los 20 y 60 aos de edad. Las
mujeres muestran un aumento considerable despus del inicio de la
menopausia, alcanzando niveles similares a los reportados en hombres.
Un acercamiento a la interpretacin de valores de cido rico
srico es considerar el grado de hiperuricemia en relacin con el riesgo
de desarrollo de gota. Hombres con valores de cido rico por encima de
9.0 mg/dL tienen alrededor de 150 veces ms riesgo de tener artritis
gotosa que el grupo de hombres con valores menores a 6.0 mg/dL. La
excrecin de cido rico
Los mtodos que involucran reacciones enzimticas tienen mayor
especificidad que otros mtodos colorimtricos debido a que el sustrato
reacciona especficamente con la enzima utilizada. La uricasa cataliza la
oxidacin del cido rico a alantona, con produccin de H 2O2. En este
procedimiento se utiliza un sistema de peroxidasa acoplado con
molculas aceptoras de electrones que producen un cromgeno, o
47
molcula coloreada. Se reducen la interferencias con metabolitos como
bilirrubina o cido ascrbico usando
molculas complejas, como el fenol
substituido de la aminofenazona.
Prelaboratorio
1. Investigue en que situaciones se pide anlisis de cido rico.
2. Haga un cuadro de causas de hiperuricemia.
3. Cules son los diferentes mtodos para la identificacin de cido
rico?
4. Investigue cuales son los valores normales de cido rico en sangre
y en orina de 24 horas
Materiales
a. Reactivos
- Estndar de cido rico, 8
mg/dL - Solucin de reactivo
enzimtico Buffer fosfato, pH
7.0, 50 mmol/L
4-aminofenazona, 0.3 mmol/L
DCHBS 4 mmol/L
Uricasa > 200 U/L
Peroxidasa>1000 U/L
b. Cristalera
Tubos de vidrio de 10 mL
c. Instrumentacin
Bao de agua a 37C
Micropipetas de de 2 a 20 L, 20-200 L, 200-1000 L
Puntas para micropipeta azules y amarillas
Procedimiento
1. Prepare una dilucin 1:11 de la muestra de orina.
48
Blanco Estndar (S) Muestra de Muestra de orina
Suero
(Mx1)
(Mx2)
Estndar -- 20 L -- --
Muestra Suero -- -- 20 L --
Muestra Orina -- -- -- 20 L
diluida
Reactivo de 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Acido Urico
Mezcle e incube a temperatura ambiente por 20 min o 5 min en el bao de mara.
Mida la absorbancia en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 520 nm
Para medir la absorbancia, transfiera 1 mL a la celda espectrofotomtrica
Mida en el siguiente orden: Estndar, muestra suero y muestra orina frente al Blanco antes de
15 min.
Acido rico en suero (mg/dL): Abs de Mx1 * Concentracin del Estndar
Abs de S
Acido rico en orina (mg/24 horas): Abs de Mx2 * Concentracin S * 11 * Vol
Abs de S
Suero:
Hombres: 3.4 a 7.0 mg/dL Orina: 250 a 750 mg/24
Mujeres: 2.4 a 5.7 mg/dL horas
3. Ficha tcnica URIC ACID Liquicolor. 106901E Human, Wiesbaden,

Alemania.
4. Burtis, C. y E. Ashwood. 2001. Fundamentals of Clinical Chemistry. 5.
Edicin. W.B. Saunders Company, Filadelfia, USA. p 422-426.
49
50
MAZARIEGOS CORDERO
MODIFICADO POR: LICDA. GABRIELA

CIFUENTES (2009), LICDA. NANCY DEL CID
(2011)
PRCTICA NO. 7
EL ELISA COMO UN ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO
Introduccin
El ELISA (por el trmino en ingls Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)
es uno de las tcnicas clnicas ms utilizadas para fines de diagnstico
humano. Como su nombre lo indica, est relacionado con el uso de
partculas inmunolgicas unidas a un soporte para la deteccin de la
especie que se busca. En la presente prctica se realizar una simulacin
de anlisis de ELISA para la mejor comprensin de la base qumica e
inmunolgica de la prueba.
Objetivos
Que el estudiante:
1. Simule una prueba de ELISA para una especie especfica, sea esta
patgena o no
2. Diferencie entre ELISA directo, ELISA tipo sndwich y ELISA indirecto
Alcance
El estudiante
1. Reconocer el esquema de cada uno de los tres tipos diferentes de
ELISA que existen
2. Podr describir la base inmunolgica de una prueba de ELISA
3. Explicar el por qu la especificidad del anlisis de ELISA
Antecedentes
El radio
51
inmmunoensayo (RIA, por sus siglas
en ingls) y el ensayo
inmunoadsorbente
ligado a una enzima
(ELISA, por sus siglas
en ingls) son ensayos que involucran
la unin directa de un anticuerpo
para la determinacin de un
antgeno o anticuerpo buscado, aunque la forma de deteccin final en
ambos procedimientos es diferente. El Figura 1: Placa de ELISA, con anlisis
terminado.
radioinmunoensayo generalmente se
utiliza para la medicin de hormonas en sangre y tejidos, mientras que el
ELISA se usa frecuentemente en diagnsticos virales (como HIV). Para
ambos mtodos, se requiere la preparacin de un antgeno o anticuerpo
conocido puro (o ambos) para lograr estandarizar la prueba. Estandarizar
la prueba significa asegurar que la prueba funcionar bien y de la misma
forma para la muestra de cualquier paciente, siempre y cuando sea el
mismo tipo de muestra.
En el ELISA directo se mide o detecta la presencia de un antgeno
especfico en la muestra, mientras que en el ELISA indirecto se mide o
detecta la presencia de un anticuerpo especfico. Una versin modificada
del ELISA directo, llamada ELISA tipo sndwich, mejora la sensibilidad del
anlisis, cuando se requiere, usando un anticuerpo de captura para el
antgeno que se busca. En cualquier caso, el ELISA se lleva a cabo en
placas de 96 pozos de material plstico especial, como la que se muestra
en la Figura 1.
Mientras que el radio inmunoensayo la deteccin se realiza midiendo la
cantidad de radiacin que permanece en el pozo de la placa, en el ELISA se
realiza por una reaccin que convierte un sustrato incoloro a una sustancia
coloreada dentro del pozo, usando para ello una enzima unida a un
anticuerpo. El cambio de color puede verse directamente en la placa,
haciendo que la recoleccin de datos sea ms fcil, a la vez que evita los
riesgos del manejo de material radioactivo. Es por ello que esta tcnica es
la preferida por encima del RIA.
PreLaboratorio
Antes de llegar al laboratorio, investigue:
52
1. Qu aplicaciones diagnsticas importantes tiene el ELISA?
2. Qu significa un anlisis de
tamizaje (o, en ingls, screening
test)
3. Explique de qu depende la
especificidad de un anlisis de
ELISA.
4. En qu consiste el ELISA directo, indirecto y tipo sanwich?
Materiales
a. Reactivos
- Calibrador 1 - Enzima conjugada
- Calibrador 2 - Sustrato
- Muestra1 - Solucin de lavado
- Muestra 2 - Solucin STOP
b. Otros
- Placa para ELISA
Procedimiento
1. Se le dar una tira con pozos inactivos para ELISA
2. Seguir el siguiente esquema de pipeteo para una prueba de ELISA
Pozo A1 B1 C1 D1
Calibrador 1 20L
Calibrador 2 20L
Muestra 1 20L
Muestra 2 20L
Conjugado 200L 200L 200L 200L
Mezclar e Incubar por 10 minutos a T ambiente
Lavar con 400L cada pozo (repetir 3 veces)
Substrato 100L 100L 100L 100L
Incubar por 5 minutos a T ambiente, en oscuridad
53
STOP 100L 100L 100L 100L
Mezclar cuidadosamente
Anexo
Investigue qu pruebas clnicas se realizan con ELISA. Adems,
investigue qu otros tipos de ELISA existen adems de los tres ya
mencionados.
1. The Biology Project. ELISA Activity. 1998. Pgina consultada el 25 de
febrero, 2007.
http://www.biology.arizona.edu/immunology/activities/elisa/elisa_intro.htm l
2. Janeway, C. A. et al. 2001. Inmunobiology. 5a Edicin. Garland
Science Publising, New York.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?
call=bv.View..ShowTOC&rid=imm.TOC&dep
th=10
MAZARIEGOS CORDERO
MODIFICADO POR: LICDA. NANCY DEL CID (2011)
PRCTICA NO. 8
DETERMINACIN CUALITATIVA DE TIROXINA Y TRIIODOTIRONINA
54
Introduccin
En la presente prctica se llevar a
cabo una prueba de ELISA para
determinar la presencia de tiroxina total
en muestras desconocidas. Esta prctica
pretende ilustrar al estudiante sobre cmo se lleva a cabo una
determinacin sencilla usando la tcnica de ELISA, enfatizando los cuidados
que debe tenerse para asegurar el resultado obtenido.
Objetivos
Que el estudiante:
1. Realice una prueba de ELISA competitivo para detectar la presencia de
T4 total en muestras desconocidas.
2. Reconozca los cuidados que debe tenerse durante todas las etapas de
la realizacin de una prueba de ELISA
Alcance
Que el estudiante:
1. Explique el esquema de la tcnica de ELISA utilizado.
2. Demuestre la forma correcta de utilizar una micropipeta.
3. Indique la importancia de realizar correctamente los lavados durante
una determinacin por tcnica de ELISA
4. Conozca la forma correcta de manejar una muestra clnica para
asegurar su integridad y la calidad de los resultados obtenidos
5. Practique las precauciones indicadas durante el manejo de muestras
clnicas.
Antecedentes
Tiroxina T4 total Tetraiodotironina
La Tiroxina es una hormona sintetizada y almacenada en el tiroides.
Ms del 99% de T4 en la sangre est unida reversiblemente a las
protenas plasmticas (principalmente a Globulina unida a Tiroxina,
55
TBG), quedando una parte muy pequea libre, que es la porcin que
controla los procesos metablicos.
Es parte integrante del perfil
tiroideo, el cual se emplea en el
diagnostico de toda afeccin
tiroidea y su dosificacin aislada, debe de interpretarse con reservas.
Sin embargo, en el recin nacido, su dosificacin permite diagnosticar
precozmente el hipotiroidismo congnito y evitar el retraso mental.
Niveles elevados de T4 han sido encontrados en hipertiroidismo
debido a enfermedad de Grave y de Plummer as como en tiroiditis
aguda y subaguda. Bajos niveles de T4 han sido asociados con
cretinismo, mixedema, enfermedad de Hashimoto y algunas
anormalidades genticas.
Triiodotironina T3 total
Es una hormona sintetizada y almacenada en el tiroides. Ms del 99%
de T4 en la sangre est unida reversiblemente a las protenas
plasmticas. La concentracin de T3 es mucho ms baja que la de T4,
pero su potencia metablica es mucho ms alta. Al igual que la T4, la
T3 representa una herramienta muy valiosa para el diagnstico de
enfermedad tiroidea.
PreLaboratorio
Antes de llegar al laboratorio, investigue:
1. Qu significa el trmino ELISA competitivo?
2. Para la realizacin de T3 y T4 se utilizar un ELISA de tipo
competitivo, hacer un esquema de este tipo de ELISA.
Materiales
a. Reactivos
Calibradores
Enzima Conjugado-antignico
Solucin de lavado
Reactivo Sustrato
Solucin STOP
Muestra desconocida para T3 y T4
b. Instrumentacin
56
Tiras de micropocillos
Micropipetas de 10 a 100 L, 100-
1000 L
Puntas para micropipeta azules y
amarillas
Procedimiento
1. Se le proporcionarn las muestras a utilizar para el anlisis. En este
caso, debe usarse muestras de suero o plasma (Cul es la
diferencia?), que se haya obtenido usando EDTA o heparina como
anticoagulantes. No debe usarse muestras hiperlipidmicas o
hemolizadas (Qu quiere decir esto y por qu?).
2. Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de
usarse. Para obtener resultados reproducibles, es importante agregar
los reactivos en el mismo orden y con el mismo tiempo en todos los
pocillos.
Determinacin de
T3
Pozo A1 B1 C1 D1 E1
Calibrador 1 50L
Calibrador 2 50L
Calibrador 3 50L
Muestra 1 50L
Muestra 2 50L
Conjugado 100L 100L 100L 100L 100L
Substrato 100L 100L 100L 100L 100L
STOP 50L 50L 50L 50L 50L
Mezclar cuidadosamente e interpretar
Determinacin de T4
Pozo A1 B1 C1 D1 E1
Calibrador 1 25L
Calibrador 2 25L
Calibrador 3 25L
57
Muestra 1 25L
Muestra 2 25L
STOP 50L 50L 50L 50L 50L
- Se le darn diferentes calibradores (por mesa se utilizarn 3), los

cuales tienen una concentracin conocida de T3 o T4.
- Calibradores para T3 o A = 0 ng/mL o B = 0.50 ng/mL o C = 1.00
ng/mL o D = 2.50 ng/mL o E = 5.00 ng/mL o F = 7.50 ng/mL
- Calibradores para T4 o A = 0 g/mL o B = 2.0 g/mL o C = 5.0 g/mL

o D = 10.0 g/mL o E = 15.0 g/mL o F = 25.0 g/mL
- Deber de tener en cuenta que prueba est realizando su mesa, si T3 o
T4.
- Deber de conocer cuales calibradores est utilizando su grupo de
trabajo.
Interpretacin de resultados
Los resultados se interpretaran de la siguiente manera:
- Anotar la intensidad de color de sus calibradores y de sus muestras por
medio de cruces, siendo de menor (+) a mayor (+++) intensidad.
- Los calibradores le servirn para que pueda comparar estos contra su
muestra y as saber la concentracin de cortisol presente en sus
muestras.
58
Anexo
Investigue brevemente qu
condiciones mdicas pueden dar origen a niveles alterados (elevados o
disminuidos) de la hormona T4 y T3. Existen otras pruebas que deben
acompaar a stas?
1. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry.
Theory, Analysis, Correlation. 4. Edicin. Mosby, Inc. pg. 827-848
2. Inserto del producto. T4 Prueba ELISA para la determinacin
cuantitativa de Tiroxina Total (T4) en suero o plasma humanos.
59
REALIZADO POR: LICDA. GABRIELA
CIFUENTES
MODIFICADO POR: LICDA. NANCY DEL CID

(2011)
PRCTICA NO. 9
DETERMINACIN CUALITATIVA DE CORTISOL POR EL MTODO DE ELISA

Introduccin
El cortisol es el principal glucococorticoide secretado por la corteza
suprarrenal humana y el esteroide ms abundante en la sangre perifrica.
Estudios han demostrado que todo el cortisol secretado deriva del
colesterol circulante en condiciones basales y como resultado de la
estimulacin aguda con adrenocorticotropina (ACTH).
Objetivos
Que el estudiante:
1. Realice una prueba de ELISA competitivo para detectar la presencia de
cortisol en muestras desconocidas.
2. Reconozca los puntos crticos en la realizacin de una prueba de ELISA.
Alcance
Que el estudiante
1. Adquiera destreza en el manejo y preparacin de una placa de ELISA.
2. Explique el esquema de la tcnica de ELISA competitivo y pueda
reconocer las diferencias que existen entre cada tipo de ELISA.
Antecedentes
El cortisol, tambin llamado hidrocortisona o componente F, es un
esteroide de 21 carbonos y es el glucocorticoide ms importante en el
humano. Es formado y secretado por la corteza suprarrenal. El 90% del
cortisol est ligado a la protena plasmtica transcortina, mientras que
alrededor del 7% est unida a la albumina. El resto de forma libre
(alrededor de un 3%) es la forma biolgicamente activa del cortisol, el cual
puede determinarse en muestras de suero, plasma, saliva y orina.
60
Regulacin de la Secrecin de Cortisol
La secrecin del cortisol est determinada por el ndice de secrecin de
ACTH por parte de la adenohipfisis bajo la estimulacin del factor de
liberacin de corticotropina (CRF) procedente del hipotlamo. El ndice de
secrecin de ACTH presenta el balance entre las influencias estimuladoras
del sistema nervioso central y las inhibidoras del cortisol circulantes sobre
la hipfisis o los centros hipotalmicos. El descenso del cortisol plasmtico
no unido a protenas produce un aumento en la secrecin de ACTH y un
ascenso inhibe dicha secrecin. Sin embargo, pueden producirse
variaciones diarias de los niveles de ACTH en el plasma en ausencia de toda
variacin de los niveles plsmaticos de cortisol (Enfermedad de Addison),
por lo que la periodicidad circadiana parece ser secundaria a la periodicidad
en la secrecin de ACTH. Esta secrecin puede comenzar a concentracin
cero de cortisol en plasma o a una alta concentracin de cortisol o ACTH,
por lo que es dudoso que el concepto usual de un mecanismo cerrado de
retroaccin negativa cumpla alguna funcin en la regulacin minuto a
minuto de la secrecin de cortisol en el hombre.
En el hombre, el ndice de secrecin de ACTH d ha calculado en unos
10g/da y la concentracin plasmtica, entre las 6 y las 9 de la maana, en
20100pg/ml. Las concentraciones plasmticas de ACTH y cortisol,
muestran en individuos normales no sometidos a estrs, variaciones cclicas
constantes en un periodo de 24 horas. En sujetos que tienen un ciclo
sueo-vigilia normal, los niveles plasmticos son el resultado de una serie
de episodios secretorios distintos y son ms elevados entre la 6 y las 9 de
la maana, para descender lentamente hasta alcanzar valores prximos a
cero cerca de medianoche. La secrecin episdica de cortisol y ACTH
representa una serie de impulsos de amplitud y duracin variable; durante
estos episodios, el ndice de secrecin de cortisol puede variar hasta 10
veces. Los impulsos de secrecin guardan correlacin generalmente con la
concentracin plasmtica de ACTH. No obstante, algunos individuos
muestran escasa correlacin entre la ACTH detectable por inmunoensayo o
bioensayo y el cortisol plasmtico. El ritmo circadiano depende del
61
esquema sueo-vigilia, y es independiente de la ingestin de alimentos, del
ejercicio o de la luz. El acto inmediato de
dormirse o despertarse no es el
determinanate directo de la actividad
suprarrenal, y el aumento de ACTH que
se produce a diario antes del despertar
es probablemente una respuesta condicionada debida a la anticipacin
subconsciente de dich despertar.
Pre-Laboratorio
1. Qu significa la frase proceso de retroacoplamiento negativo?
2. Que tcnica analtica funciona mejor para la medicin de hormonas y
por qu?
3. Cul es la importancia de realizar una prueba de cortisol?
4. Haga un esquema para ejemplificar lo que sucede al realizar un ELISA
COMPETITIVO
Materiales
a. Reactivos
Muestra desconocida
Calibradores para cortisol
Solucin de conjugado
Solucin de lavado (diluida)
Solucin de sustrato
Solucin STOP
Cloro 5%
Alcohol 70%
62
b. Equipo
Micropipetas de 2 a 20L
Micropipetas de 100 a
1000L
Puntas para micropipetas Pocillos para ELISA
Procedimiento
Se le proporcionarn las muestras a utilizar para el anlisis, que pueden
ser suero o plasma obtenido con EDTA. No debe usarse muestras
hiperlipidmicas o hemolizadas, ni deben contener azida de sodio. Todos
los reactivos debern de estar a temperatura ambiente antes de ser
utilizados. Para obtener resultados reproducibles, es importante agregar
los reactivos en el mismo orden y con el mismo tiempo.
Pozo A1 B1 C1 D1 E1
Calibrador 1 20L
Calibrador 2 20L
Calibrador 3 20L
Muestra 1 20L
Muestra 2 20L
STOP 100L 100L 100L 100L 100L
Mezclar cuidadosamente
Se le darn diferentes calibradores, los cuales tienen una
concentracin conocida de cortisol, identificados de la siguiente
manera:
A = 0 ng/mL
B = 20 ng/mL
C = 50 ng/mL
D = 100 ng/mL
E = 200 ng/mL
F = 400 ng/mL
G = 800 ng/mL
- Deber de conocer cuales calibradores est utilizando su grupo de
trabajo.
muestra y as saber la concentracin de cortisol presente en sus
muestras. Anexo
1. Investigue brevemente qu condiciones mdicas pueden dar
origen a niveles alterados de cortisol
2. Qu pruebas complementarias deben acompaar al cortisol para
dar un diagnostico ms certero?
3. Menciones los efectos que tiene el cortisol sobre:
a. El metabolismo de los carbohidratos
b. El metabolismo de las protenas
c. El metabolismo de las grasas
4. Investigue la funcin del cortisol en el estrs y la inflamacin
Bibliografa
1. Kaplan, L.A. y Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory
Analysis Correlation. 4. Edicin. Mosby, Inc. Pag 827-848.
2. Lehninger Albert L. Bioquimica; las bases moleculares de la estructura
y funcin celular. 2. Edicin. Ediciones Omega, S.A. Pag. 832-834
3. Ficha tcnica CORTISOL. 55050 Human, Wiesbaden, Alemania
REALIZADO POR: LICDA. NANCY DEL CID
PRCTICA NO. 10
DETERMINACIN CUALITATIVA DE FSH Y LH

Introduccin
Entre las gonadotropinas hipofisiarias conocidas estn la hormona folculo
estimulante (FSH) y la hormona luteinizante (LH), las cuales son hormonas
glocoprotenicas encargadas de regular los ciclos sexuales.
Objetivos
Que el estudiante:
1. Realice una prueba de ELISA de tipo sandwich para detectar la
presencia de FSH y LH en muestras desconocidas.
2. Reconozca los puntos crticos en la realizacin de una prueba de ELISA.
Alcance
Que el estudiante
1. Adquiera destreza en el manejo y preparacin de una placa de ELISA.
2. Explique el esquema de la tcnica de ELISA de tipo sandwich y pueda
reconocer las diferencias que existen entre cada tipo de ELISA.
Antecedentes
Hormona Foliculo Estimulante (FSH)

Es una hormona glicoproteica de aproximadamente 35.5 kD,
secretada por la glndula pituitaria. Fisiolgicamente esta hormona
acta en los testculos y en los ovarios, donde induce la
espermatognesis (en el hombre) y la esteroidognesis (en la mujer)
respectivamente. Todos los ciclos menstruales tienen un patrn
caracterstico de secrecin de FSH. Mientras la concentracin
disminuye con el progreso de la fase folicular, el valor ms elevado
se observa cerca del momento de la ovulacin, es decir, alrededor de
la mitad del ciclo. La utilidad clnica y diagnostica de la medicin de
FSH para la evaluacin de la homeostasis que regula la fertilidad a
travs del eje hipotalmico-hipfisiario-gonadal ha sido bien
establecida.
Hormona Luteinizante (LH)

Es una hormona glicoproteica de aproximadamente 30 kD,
sintetizada en la hipfisis. Fisiolgicamente esta hormona acta en
las gonadas donde es esencial para su desarrollo y funcin. Durante
la primera fase del ciclo menstrual, la LH estimula el desarrollo del
folculo de Graaf. La ovulacin se induce por los valores ms altos de
LH. La utilidad clnica y diagnostica de la medicin de LH para la para
la evaluacin de la homeostasis que regula la fertilidad a travs del
eje hipotalmico-hipfisiario-gonadal ha sido bien establecida. La
determinacin de LH es indispensable para monitorear pacientes
sometidas a procedimientos de fertilizacin in vitro.
Pre-Laboratorio
1. Cul es el principio del ELISA tipo sandwich?
2. Qu relacin existe entre la hormona FSH y LH?
Materiales
a. Reactivos
Muestra desconocida
Calibradores para FSH y LH
Solucin de conjugado
Solucin de lavado (diluida)
Solucin de sustrato
Solucin STOP
Cloro 5%
Alcohol 70%
b. Equipo
Punta s para micropipetas
Pocillo s para ELISA
Procedimiento
Se le proporcionarn las muestras a utilizar para el anlisis, que pueden
ser suero o plasma obtenido con EDTA. No debe usarse muestras
hiperlipidmicas o hemolizadas, ni deben contener azida de sodio. Todos
los reactivos debern de estar a temperatura ambiente antes de ser
utilizados. Para obtener resultados reproducibles, es importante agregar
los reactivos en el mismo orden y con el
mismo tiempo.
Pozo A1 B1 C1 D1 E1
Calibrador 1 20L
Calibrador 2 20L
Calibrador 3 20L
Muestra 1 20L
Muestra 2 20L
STOP 100L 100L 100L 100L 100L
1. Se le darn diferentes calibradores (por mesa se utilizarn 3), los
cuales tienen una concentracin conocida de FSH o LH.
2. Calibradores para FSH
A = 0 UI/L
B = 5.0 UI/L
C = 10.0 UI/L
D = 25.0 UI/L
E = 50.0 UI/L
F = 100.0 UI/L
Calibradores para LH
A = 0 UI/L
B = 5.0 UI/L
C = 25.0 UI/L
D = 50.0 UI/L
E = 100.0 UI/
F = 200.0 UI/L
3. Deber de tener en cuenta que prueba est realizando su mesa, si FSH
o LH.
4. Deber de conocer cuales calibradores est utilizando su grupo de
trabajo.
muestra y as saber la concentracin de FSH o LH presente en sus
muestras. Anexo
1. Investigue brevemente qu condiciones mdicas pueden dar origen a
niveles alterados de FSH y LH
2. Qu pruebas complementarias deben acompaar a la FSH y LH para
dar un diagnstico ms certero?
Bibliografa
1. Kaplan, L.A. y Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry.
Theory Analysis Correlation. 4. Edicin. Mosby, Inc. Pag 827-848.
2. Lehninger Albert L. Bioquimica; las bases moleculares de la
estructura y funcin celular. 2. Edicin. Ediciones Omega, S.A. Pag.
832-834
3. Ficha tcnica FSH 53020 Human, Wiesbaden, Alemania
4. Ficha tcnica LH 53010 Human, Wiesbaden, Alemania
MAZARIEGOS CORDERO
PRCTICA NO. 11 DETERMINACIN DEL LMITE DE DETECCIN DE UNA PRUEBA

CUALITATIVA
PRUEBA DE EMBARAZO
Introduccin
La prueba que se usar en el laboratorio es una prueba rpida de

deteccin de hCG en orina o en sangre como indicador de embarazo. En
esta prctica se determinar el lmite de deteccin de la prueba, que se
utiliza como cualitativa. Objetivos
Que el estudiante
1. Realice una cromatografa inmunolgica para la deteccin de hCG
2. Determine el lmite de deteccin de una prueba cualitativa de
deteccin de hCG como prueba temprana de embarazo.
Alcance
Que el estudiante
1. Se inicie en el manejo de muestras de suero, aplicando todo
sus conocimientos de bioseguridad
2. Aprenda el uso de las micropipetas
3. Relacione cada muestra con la realidad personal de un
paciente
Antecedentes
La gonadotropina corinica humana (hCG) es una hormona glucoproteica
producida por la placenta en desarrollo poco despus de la fertilizacin. En
el embarazo en un ser humano, la hCG puede detectarse tanto en orina
como en suero a partir de los 7-10 das de la concepcin. Los niveles de
hCG continan aumentando muy rpidamente superando las 100 mUI/mL
tras la primera falta y alcanzando el mximo en torno a 100,00 a 200,000
mUI/mL a las 10 a 12 semanas de embarazo. La aparicin de hCG en la
orina y el suero poco despus de la concepcin y su rpido aumento
posterior durante el principio de la gestacin hacen de esta hormona un
marcador ideal para la indicacin temprana del embarazo
La prueba de embarazo en tarjeta es una prueba rpida que detecta
cualitativamente la presencia de hCG en una muestra de orina o suero con
una sensibilidad de 25 mUI/mL. La prueba utiliza una combinacin de
anticuerpos monoclonales y policlonales para detectar selectivamente los
niveles elevados de hCG en orina o suero. Con este nivel de sensibilidad, la
prueba no muestra interferencias cruzadas con otras hormonas
glucoproteicas estructuralmente relacionadas, tales como la FSH, la LH y la
TSH a niveles fisiolgicos altos.
Esta prueba se basa en un inmunoensayo de flujo cromatogrfico en un
solo paso que permite detectar selectivamente los niveles elevados de hCG.
El ensayo se realiza aadiendo la muestra al pozo de la placa y observando
la presencia o ausencia de bandas en la ventana de resultados. En el pozo
de la muestra se encuentra un conjugado de anticuerpo monoclonal de
ratn contra hCG y partculas coloidales de oro, que migra hacia las lneas
de prueba y control. Si la muestra contiene hCG, el complejo hCG-antihCG-
oro se une al anticuerpo de captura en la lnea de prueba y se desarrolla un
color rosado-vino tinto. La ausencia de esta lnea sugiere un resultado
negativo. Se incluye una lnea de control, que contiene anticuerpos
policlonales de cabra contra ratn, y debe formarse siempre, independiente
que la muestra contenga hCG o no. La formacin de color en la lnea
control asegura que la prueba ha sido efectuada correctamente.
Materiales
a. Reactivos
Muestra de suero con contenido de hCG conocido
Prueba rpida de embarazo, placa de reaccin y
gotero incluido
Solucin salina (NaCl 0.9%) para diluir
b. Cristalera
Tubo Eppendorf de 1.5 mL
Procedimiento
1. Escuche atentamente a su instructor, quien le indicar la forma
adecuada de utilizar una micropipeta y realizar diluciones.
2. Tome la muestra que le corresponda a su mesa (de su compaero de
la izquierda) y realice la dilucin que le haya tocado. Anote en su
registro la concentracin de la muestra que le lleg y la que usted
produjo. Pase su muestra a su compaero de la derecha.
3. Obtenga una prueba para hCG y rompa la bolsa. No toque las
membranas reactivas con los dedos.
4. Coloque la placa en una superficie nivelada y limpia.
5. Manteniendo el gotero en posicin vertical, agregue 4 gotas (unos
100 L) de muestra a pozo de la placa marcado con S (SAMPLE).
6. Espere cinco minutos a que aparezcan las lneas correspondientes al

control (siempre debe aparecer) y a la de prueba (aparece
nicamente si es positivo).
7. Compare resultados con sus compaeros de mesa. Entre qu
valores se encuentra el lmite de deteccin?
En esta prctica se estarn manejando muestras de suero humano que
se sabe son positivas para hCG. Toda muestra de esta naturaleza debe
tratarse como potencialmente infecciosa, por lo cual debe cumplirse con
las normas de bioseguridad adecuadas. Debe usarse guantes en todo
momento, as como ser cauteloso durante la manipulacin.
Anexo
1. Investigue qu otras pruebas existen con este tipo de principio.

2. Investigue en qu casos, fuera de embarazo normal se pueden
observar valores elevado de hCG.
1. Ficha tcnica Prueba de Embarazo Instant-View (Orina/Suero) Alfa
Scientific Designs Inc., CA, USA

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REGLAMENTO GENERAL

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

UNIVERSIDAD MARIANO GLVEZ DE

BASADO EN GUAS DE LABORATORIO I2QB3

FECHAS DE MODIFICACIN: AO 2008, AO

SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE PROTENAS

8 DETERMINACIN CUALITATIVA DE TIROXINA Y 54

PRUEBA HCG DE EMBARAZO

Trabajar dentro de un laboratorio de cualquier ndole supone un grado

1. Conozca la responsabilidad que adquiere al trabajar dentro del

Reglamento para el estudiante

Para que un estudiante tenga derecho a participar en las sesiones del

1. Estar inscrito en el curso terico de Bioqumica III.

2. Guardar un comportamiento adecuado en las actividades del

LABORATORIO establecido. Puede encontrar una copia del REGLAMENTO

3. Asistir al laboratorio de manera PUNTUAL. El alumno que no se

4. De no asistir a una prctica, el alumno pierde automticamente el

6. Utilizar su equipo de proteccin personal todo el tiempo que se

Trabajo antes de llegar al laboratorio:

Para la presentacin del Pre-Lab se deber incluir:

Trabajo dentro del Laboratorio

Como se indic anteriormente, se espera que el estudiante haga su

Encabezado Indicar claramente el ttulo de la prctica que se llevar a cabo --

Objetivos Enumerar de dos a tres objetivos a conseguir durante la 20

Materiales y Enumerar los materiales y reactivos que se requerirn durante 10

Toxicidades Para los reactivos, es necesario incluir la toxicidad del 10

Clculos previos Cualquier clculo que sea necesario en la preparacin de 10

Reacciones Reacciones qumicas o bioqumicas involucradas en la 10

Nota total del cuaderno de laboratorio 100

Trabajo posterior al laboratorio

o Reporte del Laboratorio

Conclusiones Como regla, no se puede concluir teora ni un asunto que 15

Anexo Debe incluir cualquier informacin adicional que 5

Bibliografa Debe escribir toda fuente CONFIABLE que haya consultado 10

Nota total del reporte de laboratorio 100

Formato para entregar el REPORTE DE LABORATORIO:

El reporte de laboratorio debe ser entregado durante el perodo de

Evaluacin de todo el trabajo del laboratorio

Al final del curso, la nota final de laboratorio se compondr de la

Exmenes cortos de laboratorio 4

Trabajo terico practico 3

Exmenes parciales de laboratorio 2

Examen final de laboratorio (Incluye los 2

Se ha observado que la tendencia del agua a disociarse se comporta

Sin embargo, la disociacin del agua se da en un grado tan pequeo

Esta nueva constante, KW, se conoce como producto inico del

Esta ecuacin permite que lo que sera una escala complicada se

Las soluciones buffer son soluciones que se resisten a cambiar de pH

En donde 6.1 es el valor del pK del cido carbnico

I. Preparacin de las muestras.

K2HPO4 0.05M (mL) 0 1 5 20 30 45 49 50

KH2PO4 0.05M (mL) 50 49 45 30 20 5 1 0

Haga una grfica en donde se muestre en el eje x el valor de la

REALIZADO POR: DR. OCHAETA Y LICDA. NANCY DEL CID

SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE PROTENAS

Albmina 4.3 g/100 mL (3.5 5.5)

- Centrifugue el tubo con su contenido durante 5 minutos, descartar

REALIZADO POR: LICDA. NANCY DEL CID

Objetivos Que el estudiante:

patolgica como la exposicin de las cargas negativas en el

I. Tiempo de Protrombina (TP)

MUESTRA TIEMPO EN INR

II. Tiempo de Sangra

- Activar el cronmetro inmediatamente