Anlisis Microbiolgico del Agua: Filtracin por

Membrana
(Practica no. 5)
Aragn Mier Fabiola, Corredor Montaez Nilyx Alexandra
Fundacin Universitaria de San Gil - Unisangil, Facultad de Ciencias Bsicas e Ingeniera,
Programa de Ingeniera Ambiental
Yopal, Colombia

fabiolita-888@hotmail.com
nilyx03@hotmail.com

I. OBJETIVOS de organismos fermentadores de la lactosa sin

produccin de gas capaces de crecer en el medio.
Comprender el fundamento de la tcnica de Respecto a los resultados obtenidos se pudo observar
filtracin a travs de membrana para la claramente una pequea cantidad de colonias de la
deteccin de coliformes totales y E.coli en E.Coli en el filtro de membrana a diferencia de las
muestras de agua. otras coliformes totales que se presentaron en mayor
cantidad, las colonias de coliformes totales son ms
Determinar la cantidad de coliformes totales y grandes, en mayor nmero, y de color rosado; las
E.coli de una muestra de agua mediante el colonias de E.coli son ms pequeas, se presentan en
mtodo de filtracin a travs de membrana. menor nmero y adems son de color azul, en este
procedimiento fue importante la limpieza o
esterilizacin de los materiales que hacan contacto
directo con la membrana o con las pinzas
II. RESULTADOS especialmente, ya que si hubiese algn otro
microorganismo en estos objetos por motivo de
Tabla 1: CONTEO DE COLONIAS contaminacin, dependiendo sus caractersticas
habra de crecer tambin en la fibra de membrana
E-coli Coliformes Totales gracias a la agar nutritivo.
6 UFC/100 ml 18 UFC/100 ml

Tabla 2: RESULTADOS Y ASPECTO DE LAS III. CONCLUSIONES

COLONIAS (Ver anexos)

Discusin de Resultados La validacin del mtodo de filtracin por

En el procedimiento de filtracin por membrana se
destacaron varias ventajas importantes como lo es la
rapidez en la obtencin de los resultados, Ahorro de
mano de obra, medios, materiales de vidrio,
aunque tambin existen desventajas a la hora de
analizar una muestra bastante turbia ya que la
membrana tendera a obstaculizarse con las muchas
partculas de material lodoso en ella y adems las
cantidades grandes de organismos no coliformes
capaces de crecer en el medio pueden interferir en el
crecimiento de los coliformes y no hay indicacin de
formacin de gas ya que algunas tienen gran cantidad
1
Formacin acadmica; Experiencia laboral primer autor
2
Formacin acadmica; Experiencia laboral segundo autor
3
Formacin acadmica; Experiencia laboral tercer autor
membrana para el anlisis de coliformes totales
y E.coli en muestras de agua para el consumo
humano, permiti obtener resultados
reproducibles y confiables.
Se manejaron condiciones adecuadas de
limpieza y desinfeccin ya que se evidencio baja
presencia de microorganismos presentes en el
ambiente.
El agua analizada en el laboratorio por medio de
filtracin por membrana no es apta para
consumo humano ya que no solo presenta cepas
de E. Coli sino que tambin otras coliformes
 totales que pueden ser patgenos para la salud
en bajo o alto nmero de colonias.
IV. BIBLIOGRAFIA
[1] Recuento de Coliformes Totales. Laboratorio de
Tecnologa Educativa. Departamento de Microbiologa
y Gentica. Universidad de Salamanca. [Online]
Disponible en:
http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/Filtra
MembColiT_auto.html
[2] ACW UM (2010). Universidad de Murcia. Anlisis
Microbiolgico de Aguas por Filtracin. [Online].
Disponible en: http://ocw.um.es/cc.-de-la-
salud/higiene-inspeccion-y-control-
alimentario/practicas-1/practica-1-analisis-
microbiologico-de-aguas-por
[3] SlideShare (2013) Anlisis Microbiolgico del agua.
[Online]. Disponible en:
http://es.slideshare.net/Hiinataaaa/protocolo-de-
analisis-microbiologico-de-agua
[4] Consulta de la Norma (2015) Normas Tcnicas de
Calidad del Agua Potable [Online]. Disponible en:
http://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma
1.jsp?i=1327
V. PREGUNTAS
COMPLEMENTARIAS
1. De qu forma funciona el agar Chromocult?, es
decir, por qu unas bacterias se observan de
color rosadas y otras moradas?
RTA: La formacin simultanea de coliformes totales
y E.coli se hace posible por la formacin de dos
sustratos cromgenos: el sustrato Salmon Gal es
separado por la enzima -D-galactosidasa
caracterstico de coliformes y provoca una coloracin
roja de las colonias de coliformes. La formacin de
la -D-Glucoronidasa caracterstica para E.coli tiene
lugar mediante el sustrato X-Glucornido, que al ser
cortado por la encima produce una coloracin azul
para las colonias positivas. Ya que E. Coli separa
tanto Salmon-Gal como X-Glucornido, las colonias
se tien de violeta azul oscuro y debido a ellos se
pueden diferenciar de los coliformes restantes que se
presentan de color rojo.
2. En qu consiste la tcnica del nmero ms
probable (NMP) para el anlisis microbiolgico
de aguas?
RTA: Es una forma de obtener datos cuantitativos en
concentraciones de elementos discretos a partir de
datos de incidencia positiva/negativa. Es una
estrategia eficiente para estimar densidades de
poblacin que se emplea cuando una evaluacin
cuantitativa de elementos individuales no es factible.
Este mtodo tambin es conocido con el nombre de
ceros de Poisson.
3. Qu ventajas y desventajas tiene el mtodo de
filtracin por membrana respecto al NMP?
RTA: Ventajas
La capacidad de estimar tamaos
poblacionales basados en atributos
relacionados a un proceso de selectividad.
Provee una recuperacin uniforme de las
poblaciones microbianas de suelos
diversificados.
Determina solo organismos vivos y activos
metablicamente.
Suele ser ms rpido e igual de confiable
que los mtodos tradicionales de
esparcimiento en platos de cultivo, entre
otros.
Determina cargas microbianas bajas, pero
tambin puede emplearse para determinar
cargas mayores utilizando las diluciones
apropiadas.
Presenta ventajas frente a otros mtodos
para el caso de muestras de polvos
insolubles.
El mtodo de filtracin por membrana es
rpido ya que los resultados se dan en un
periodo de 24 horas.
Se puede utilizar en pruebas de campo.
Desventajas
El anlisis se dificulta en muestras de aguas
muy turbias y es difcil determinar la
cantidad de microorganismos que se quieren
encontrar.
No detectan las poblaciones con menos de
una clula por mililitro, solo permite
microorganismos viables.
4. Cul es la diferencia entre coliformes totales y
coliformes fecales, que tipo de medios de cultivo
se emplean para su identificacin y crecimiento,
en qu consisten estos medios?

RTA: Las bacterias coliformes son un grupo de
bacterias que se utilizan como indicadoras de
contaminacin. El grupo est compuesto por oxidasa.
Escherichia coli, Enterobacter, Citrobacter y
Klebsiella. Esas son las bacterias coliformes "totales"
que se definen como "bacterias que fermentan la
lactosa con produccin de cido y gas". Dentro de potable
ese grupo la nica bacteria que es de origen fecal
(intestino de hombre y animales) es la Escherichia
coli, que compone las "coliformes fecales" que son
capaces de crecer a 44C a diferencia de las otras
coliformes que no resisten esa temperatura.
Las coliformes totales crecen en medios lactosados
con inhibidores de Gram positivos como Caldo Mac
Conkey, este consiste en indicar visualmente el pH
distinguiendo as las bacterias Gram negativas que
pueden fermentar la lactosa y las que no lo pueden
hacer; las coliformes totales y fecales tambin crecen
en Caldo Lauril triptosa a 37C, este es un medio
selectivo ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el
desarrollo de la flora acompaante. Por la
fermentacin de la lactosa se produce cido y gas, sustrato definido.
este ltimo se evidencia al utilizar las campanas
Durham; es rico en nutrientes que permiten un rpido
desarrollo de los microorganismos fermentadores de
la lactosa.
5. Consultar la normatividad ambiental vigente que
establece las caractersticas microbiolgicas los mtodos aceptados para anlisis microbiolgico,
permisibles para aguas de consumo humano en
Colombia
RTA: Decreto 475 de 1998 Nivel Nacional
Captulo I Definiciones
Artculo 1: Para los efectos del presente decreto,
adptense las siguientes definiciones:
Agua cruda: Es aquella que no ha sido sometida a
proceso de tratamiento.
Agua para consumo humano: Es aquella que se
utiliza en bebida directa y preparacin de alimentos
para consumo.
Agua potable: Es aquella que, por reunir los
requisitos organolpticos, fsicos, qumicos y
microbiolgicos, en las condiciones sealadas en el
presente decreto, puede ser consumida por la
poblacin humana sin producir efectos adversos a su
salud.
Calidad del agua: Es el conjunto de caractersticas
organolpticas, fsicas, qumicas y microbiolgicas
propias del agua.
Escherichia Coli, (E-coli): Bacilo aerobio Gram-
negativo que no produce esporas, pertenece a la
familia de los enterobactericeas y se caracteriza por
poseer las enzimas b - Galactosidasa y b -
gluoroanidasa. Se desarrolla a 44 0.5 C en medios
complejos, fermenta la lactosa liberando cido y gas,
produce indol a partir del triptfano y no produce
Capitulo III Normas organolpticas, fsicas,
qumicas y microbiolgicas de la calidad del agua
Artculo 6: Las normas organolpticas, fsicas,
qumicas y microbiolgicas de la calidad del agua
potable establecidas en el presente decreto rigen para
todo el territorio nacional y deben cumplirse en
cualquier punto de la red de distribucin de un
sistema de suministro de agua potable.
Artculo 24. Los mtodos aceptados para anlisis
microbiolgico del agua son los siguientes:
Para Escherichia Coli: Filtracin por membrana y
sustrato definido.
Para Coliformes Totales: Filtracin por membrana y
Pargrafo. Mtodo de tubos mltiples de
fermentacin y recuento en placa (siembra en
profundidad) se seguir empleando hasta el ao
2000; por lo tanto, a partir de la entrada en vigencia
del presente decreto los laboratorios que no empleen
debern implementarlos y estandarizarlos;
igualmente se adoptarn otras metodologas
debidamente validadas por el Instituto Nacional de
Salud y aprobadas por el Ministerio de Salud,
mediante el correspondiente acto administrativo.
Artculo 25. El agua para consumo humano debe
cumplir con los siguientes valores admisibles desde
el punto de vista microbiolgico:
Tabla 3: VALORES ADMISIBLES PUNTO DE
VISTA MICROBIOLOGICO
Tcnica
Utilizada Filtracin
Microorganism por Sustrato Tubos mltiples
os Indicadores Membran Definido de fermentacin
a
0 <2microorganism
Coliformes 0 UFC/100
microorganis os/100 cm3
Totales cm3
mos/100 cm3
0 negativo
0 UFC/100
E.Coli
cm3
microorganis
mos/100 cm3
Pargrafo primero. Los resultados de los anlisis
microbiolgicos se deben reportar en las unidades de
NMP/100 cm3 (nmero ms probable), si se utiliza la
tcnica del nmero ms probable o la tcnica
enzimtica de sustrato definido y en UFC/100 que se proces no es apta para el consumo humano,
cm3 (unidades formadoras de colonia), si se utiliza la porque presenta coliformes totales y fecales aun
tcnica de filtracin por membrana. cuando esta proviene del grifo; en la norma se indica
que un agua potable es aquella que rene los
Pargrafo segundo. Se recomienda un valor mximo requisitos organolpticos, fsicos, qumicos y
admisible de 100 Unidades Formadoras de Colonias microbiolgicos, en las condiciones sealadas en el
(U.F.C.) por 100 centmetros cbicos (cm 3), para presente decreto, puede ser consumida por la
microorganismos mesfilos, como prueba poblacin humana sin producir efectos adversos a su
complementaria de la calidad del agua desde el punto salud, es decir, que no estn presentes estos
de vista microbiolgico. microorganismos ni en baja ni en alta cantidad, sino
que en el agua no haya presencia alguna de ellos. La
Artculo 26. Ninguna muestra de agua potable debe muestra analizada a pesar de que no mostro niveles
contener E-coli en 100 cm3 de agua, incontables de E.coli y coliformes totales, muestras
independientemente del mtodo de anlisis utilizado. ambas colonias y aun si hubiese mostrado tan solo
una o una de cada una, esto la considerara no apta
6. De acuerdo a sus resultados y a la pregunta para el consumo humano.
anterior discuta la calidad microbiolgica del
agua procesada.

RTA: Teniendo en cuenta el decreto 475 de 1998

Nivel Nacional y el decreto 1575 de 2007, el agua
 VI. ANEXOS

Registro Fotogrfico General

Figura 4. Esterilizacin de las pinzas con alcohol y flameado con

mechero de Bunsen
Figura 1. Montaje el Sistema de Filtracin por Membrana Fuente: Autores
Fuente: Gua de Laboratorio

Figura 5. Fijacin del embudo sobre el soporte

Figura 2. Mquina de sistema de filtracin y fuente de vaco Fuente: Autores
Fuente: Autores

Figura 3. Filtro de membrana

Fuente: Autores
Figura 6. Fijacin del embudo sobre el soporte
Fuente: Autores
Figura 7. Vertimiento de la muestra de agua a travs de filtro y
mediante accin de la mquina. Figura 10. Observacin de las colonias 24 horas despus de la
Fuente: Autores incubacin.
Fuente: Autores

Figura 8. Aislamiento de la membrana a la caja de Petri con agar

Chromoult
Fuente: Autores

Figura 11. Observacin de las colonias 24 horas despus de la

incubacin.
Fuente: Autores

Figura 9. Se adhiere la membrana al agar en la caja de Petri

procurando que no queden burbujas de aire entre la membrana y la
gelatina de agar.
Fuente: Autores
 Tabla 2 RESULTADOS Y ASPECTO DE LAS COLONIAS

Origen de la (UFC) (UFC)

Aspecto de Aspecto de las
muestra de Coliformes E. Coli Registro Fotogrfico
las colonias colonias
agua promedio promedio

18 Redondas y
Agua del grifo UFC/100 de color
mL rosado.

Figura 12
Observacin detallada de las colonias de coliformes
totales 24 horas despus de la incubacin.
Fuente: Autores

Redondas, ms
pequeas que las
Agua del grifo 6 UFC/100 mL coliformes totales
rosadas, estas son
azules.

Figura 13
Observacin detallada de las colonias de E. Coli 24
horas despus de la incubacin.
Fuente: Autores