UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

ZARAGOZA

LABORATORIO DE BIOQUMICA CELULAR Y DE

LOS TEJIDOS I

Informe:
SEPARACIN Y CUANTIFICACIN DE PROTENAS
PLASMTICAS

27 de Abril, 2016
OBJETIVOS:

Separar albmina y globulina a partir de una muestra de sangre.

Determinar cuantitativamente por medio de una curva estndar la
concentracin de protenas totales, albmina y globulinas presentes en el
plasma por el mtodo de Biuret.

INTRODUCCIN:

Las protenas plasmticas son un conjunto de molculas formadas por la unin de

diversos aminocidos que se encuentran en el plasma sanguneo. Constituyen un
grupo de aproximadamente cincuenta protenas contenidas en el flujo sanguneo y
la concentracin presente de cada una de las protenas es muy variable oscilando
desde los 0.01g/100mL hasta los 5g/100mL, siendo el contenido total de protenas
en el plasma de 6-8g/100mL
Las principales protenas plasmticas, que son:

a) Albmina (constituye el 55% del total de las protenas plasmticas con una
cantidad aproximada de 4g/100mL)1.
b) 1-globulinas: 1-glicoprotena cida, 1-antitripsina, 1-fetoglobulina, 1-
antiquimiotripsina, transcortina, inhibidor inter- 1- de la tripsina, protena
transportadora de retinol, 1-lipoprotenas, 1-B y 1-T glicoprotenas (5%
del total, de 0.3-0.6g/100mL)1.
c) 2-globulinas: haptoglobina, 2-macroglobulina, ceruloplasmina,
1
hemopexina y transferrina (9% del total, de 0.4-0.9g/100mL) .
d) -globulinas: -globulina ligadora de esteroides, 2-microglobulina,
fibringeno, 1-glicoprotena especfica del embarazo, -lipoprotenas y
protena C reactiva (13% del total, de 0.6-1.1g/100mL) 1.
e) -globulinas: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE (11% del total, de 0.7-1.5g/100mL) 1.

Por ello es de vital importancia conocer los componentes de la sangre (protenas

plasmticas), as como la determinacin cuantitativa de dichos componentes para
ello se tom una muestra por medio de una venopuncin; a la muestra obtenida se
separ en globulinas, protenas totales y en albminas por medio de una
centrifugacin de 2000 rpm por 10 minutos para finalmente cuantificarlos en el
espectrofotmetro a 540 nm.
RESULTADOS Y ANLISIS

En la grfica 1 se muestra la absorbancia en funcin de la concentracin de la

solucin estndar de protenas obtenida de la tabla 1. Esta grfica se ajusta a un
modelo lineal de la forma y=mx +b quedando as la siguiente ecuacin
y=0.0831 x+ 0.001 con una R2 de 0.9998

Tabla 1. Valores de absorbancia y concentracin en mg de la solucin estndar.

Absorbancia Concentracin (mg)
0 0
0.058 0.7
0.120 1.4
0.177 2.1
0.233 2.8
0.291 3.5

Grafica 1. Curva estndar de Protenas

Curva Estandar
0.35

0.3
f(x) = 0.08x + 0
0.25
R = 1
0.2 Absorbancia
Linear (Absorbancia)
Absorbancia 0.15
Linear (Absorbancia)
0.1

0.05

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4

Concentracin (mg)

Tabla 2. Se muestran los valores de concentracin en funcin de la absorbancia en dos muestras

de la solucin problema de protenas totales y albminas en la muestra de sangre.
Solucin Problema de Solucin Problema de
Protenas Totales Albminas
Absorbancia 0.502 0.309
Concentracin (mg) 6.025 3.704

Como los valores de concentracin en mg fueron muy altos, se diluyeron las

muestras de protenas totales y albmina 50:50 con agua destilada. Los valores de
concentracin a estas nuevas absorbancias se muestran a continuacin.

Tabla 3. Se muestran los valores de concentracin en funcin de la absorbancia en dos muestras

de la solucin problema de protenas totales y albminas en la muestra de sangre diluidas 50:50
Solucin Problema de Solucin Problema de
Protenas Totales Albminas
Absorbancia 0.214 0.124
Concentracin (mg) 2.561 1.4793

CLCULOS

Para realizar la curva estndar se realizaron los siguientes clculos de

disoluciones:

1
=2
Factor de dilucin: 0.5 (puesto que al realizar la lectura de las protenas

totales y de la albumina las absorbancias correspondientes no entraban dentro del

5
=20
rango de la curva estndar). Factor de dilucin 2: 0.25 ( se tomaron 0.25 mL

de plasma y se disolvieron en 4.75 mL de una disolucin al 23% P/V de sulfato de

sodio)

Clculo para obtener la concentracin de protenas totales:

De acuerdo a la tabla 3, el valor de concentracin para la absorbancia es de

2.561 mg

2.561 x 20 x 2=102.44 mg

1 mL102.44 mg
100 mL10247.2mg

10247.2mg=10.2472 g

Protenas totales=10.247 g /100 mL

 Clculo para obtener la concentracin de albmina:

De acuerdo a la tabla 3, la concentracin para la absorbancia es de 1.479

mg

1.479 x 20 x 2=59.16 mg

1 mL59.26 mg
100 mL5916 mg

10247.2mg=5.916 g

Albmina=5.916 g/100 mL

Clculos para la concentracin de globulinas

Protenas Totales Albmina=Globulinas

10.2475.916=4.331

globulinas=4.331 g /100 mL

Segn los resultados obtenidos comparados con los niveles de protenas tanto
totales cmo albuminas reportados en la literatura 1 estn por encima de estos. En
el siguiente cuadro se aprecia la comparacin de los resultados arrojados en la
prctica.

Tabla 4. Se observan los niveles normales de protenas en la sangre en porcentaje para un adulto
promedio y los niveles de protenas plasmticas obtenidos en la prctica mediante su
cuantificacin con una curva estndar por el mtodo de Biuret.
Protena Niveles Normales de Niveles de protenas obtenidos en la
protenas plasmticas prctica (g/100mL)
(g/100mL)
Totales 6-8 10.247
Albumina 4 5.916
Globulina 2 - 4.2 4.331
Esto se pudo deber en primer lugar a que la venopunsin fue hecha en un sujeto
que no guard ayuno entonces, se pudo haber incrementado los niveles en sangre
de una protena , la insulina, cmo se muestra en la imagen 1.

Imagen 1. Metabolismo en el tejido adiposo donde se ve implicada la insulina 2

CONCLUSIONES

La determinacin de protenas plasmticas se ve afectada por no guardar ayuno

en el sujeto en el que se realiza la venopunsion.
Se deben diluir las muestras problema de albumina y protenas totales con el fin
de que las absorbancias de estas entren dentro del rango de las absorbancias de
la curva estndar pues no se sabe si el sujeto, al que se le realiza la venopunsion,
tiene patologas que afecten los parmetros normales de protenas plasmticas
como lo son el VIH, la Hepatitis B C y el embarazo 3.

BIBLIOGRAFA

1. Devlin, Thomas M. Bioqumica. 4a ed. Espaa, Ed. Revert. 2004. pp 105-

108.

2. Vasudevan, D.M, Sreekumari, S. "Texto de Bioqumica para Estudiantes de

Medicina". Editorial JP Medical. 2012. pp 140.

3. https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003483.htm