Universidad Nacional Autnoma de

Mxico
Facultad de Estudios Superiores
Zaragoza.

Laboratorio de Bioqumica Celular y de Tejidos I.

Autores:
Anaya Estrada Diego.
Crdenas Chontal Roco.
Carlon Mendoza Ivn Manuel
Prez Martnez Jorge Alberto.
Loyola Gmez Diana Itzel.

Tema: Electroforesis y cuantificacin del ADN humano.

Grupo:
1452
Equipo:
1
Da: jueves.

Fecha: 29 de octubre del 2015

Resultados:

Lectura en el biofotmetro antes Lectura en el biofotmetro

de prueba hipercrmica despus de prueba hipercrmica.
ANALISIS DE RESULTADO:

Como se puede observar en la revelacin del gel utilizado en la electroforesis, no

se aprecia el corrimiento de ninguna de las muestras de ADN pero si del marcador
de pesos moleculares, lo que indica que el sistema se prepar de manera
correcta, por lo que el error se produjo al momento de realizar la disolucin del
ADN, ya que este quedo muy diluido dando como consecuencia que no se pueda
apreciar el avance de la muestra a travs del gel.

Otro factor que pudo influir en este resultado fue la poca cantidad de ADN que se
extrajo de la sangre, lo que provoco que la concentracin de la muestra aplicada
en la electroforesis fuera an menor.

Para la muestra que se coloc en el biofotmetro result con una concentracin de

37.4 g, demostrndose de esta manera que la extraccin del ADN fue exitosa al
marcar el instrumento una concentracin aceptable. Por otra parte el resultado
obtenido despus de que se llev a cabo los pasos necesarios para el efecto
hipercrmico muestran un aumento en la absorbancia lo cual termina por
confirmar que el efecto hipercrmico refleja mayor absorbancia por la
desnaturalizacin del ADN resultando en dos cadenas sencillas.

Discusin de resultados.

Conclusin.
Los objetivos se cumplieron ya que se realiz la extraccin, cuantificacin y
purificacin de ADN obtenido de los glbulos blancos de la sangre aplicando en la
placa de gel mezclado con una sustancia cuya finalidad es aumentar la densidad
de la muestra y colorear para facilitar la separacin del ADN y su visualizacin
est placa elecrofortica, para poder hacer su anlisis respectivo el cual no tuvo
aparente movimiento.

Si se desea repetir esta prctica se recomienda que al momento en que se estan

realizando las centrifugaciones se hagan las necesarias porque en el caso de
este experimento por cuestiones de tiempo no fue posible centrifugar lo suficiente
y no se pudo precipitar todo el ADN que se haba obtenido con anterioridad y eso
hizo que se presentaran perdidas.

Cuestionario.
CUESTIONARIO DE ELECTROFORESIS.
1.- Qu otros polmeros existen para realizar geles para electroforesis?

Poliacrilamida, agarosa, bis- acrilamida, N, N diallitartar diamina (DATN), N, N

(1-2 dihidroxietileno) bis acrilamida

2.- Mencione otros ejemplos de electroforesis

- Electroforesis capilar

- Electroforesis de frente mvil

- Electroforesis contina.

3.- qu caracterstica presentan la molculas para que se puedan separar

por medio de la electroforesis?

Que tengan carga entre s.

4.- Mencione el fundamento de la tincin con bromuro de etidio

Es un agente intercalado usado como aclarador de cidos nucleicos para

procesos de electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone a luz ultravioleta,
emite una luz rojo naranja, que se intensifica unas 20 veces despus de haberse
unido a una cadena de ADN. Este efecto es debido al aumento de la hidrofobia del
medio, y no a la regidificacin del anillo bencnico, no estando ste en pares de
bases del ADN.

Cuando el bromuro de etidio se intercala en el ADN tiene un poderoso efecto

mutgeno, y puede ser cancergeno o teratgeno.
5.- Qu otros tipos de colorantes se pueden utilizar para teir geles de
agarosa?

Azul de metileno.

CUESTIONARIO DE EXTRACCIN DEL ADN.

Qu funcin tiene la RNasa?

La Ribonucleasa es usada para aislar ADN libre de ARN. Esta enzima hidrolisa
ARN en los residuos Citosina y Uracilo, cortando entre el grupo fosfato 3 del
nucleotido pirimidina y el grupo 5 hidroxil del nucleotido adyacente.

Para qu sirve cada uno de los reactivos que se ocupa en la extraccin de

ADN?

La solucin de lisis celular, se utiliza en la extraccin de ADN para realizar un

proceso de ruptura de la membrana celular lo cual produce la salida del material
intracelular. Para realizar la lisis qumica, las clulas se suspenden en una
solucin que contiene detergentes y otros reactivos que interfieren con los enlaces
qumicos que sostienen las protenas de las membranas juntas. Esto resulta en la
rotura de la membrana y la liberacin de los componentes intracelulares.

La solucin de lisis de ncleos se encarga de romper los ncleos que son

liberados con la lisis celular, al romper los ncleos se libera todo el ADN que est
almacenado en estos.

La solucin de precipitacin de protenas se basa en el fundamento de que el

proceso mediante el cual una protena desnaturalizada recupera su estructura
nativa es la renaturalizacin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los
procesos de aislamiento y purificacin de protenas, la desnaturalizacin conduce
a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena precipita. La formacin de
agregados fuertemente hidrofbicos impide su renaturalizacin, y hacen que el
proceso sea irreversible. La precipitacin de protenas es para eliminar las
histonas que se encuentran presentes en el ADN, las histonas se unen al ADN
para empaquetarlo, por lo tanto se retiran para poder liberar adecuadamente a
este.

La solucin RNasa es para eliminar el ARN, y as poder aislar ADN que no lo

contenga, lo que se lleva a acabo es una hidrlisis del ARN.

La solucin de rehidratacin de ADN se encarga de concentrar el ADN y desalarlo

con isopropanol provocando una preciptacin.
Por qu se recomienda que el material que se utilice sea estril?

Como se est manejando una sustancia biolgica, es necesario que todo el

material sea estril para evitar cualquier contaminacin con algn agente externo
que pueda arruinar la muestra modificando sus propiedades.

De qu otro tipo de clulas se podra obtener el ADN?

Clulas de cultivo de tejidos, tejido animal, tejido de plantas, levaduras, bacterias

Gram Positivas y Negativas.

CUESTIONARIO DE CUANTIFICACIN DE ADN.

Por qu otro mtodo se puede cuantificar la concentracin de ADN?

Por espectrofotometra y por fluorometra

Cul es la importancia de obtener ADN con coeficiente 260/230 y 260/280

entre 1.7 y 2?

Este coeficiente nos indica que nuestro ADN es puro, si el rango es menor quiere
decir que hay protenas presentes en la muestra y si es mayor indica la presencia
de contaminantes como etanol.

Por qu se recomienda medir la absorbancia a 280 nm?

Determina la concentracin de ADN con evaluacin a travs de un factor. Los

mtodos se diferencian por el lugar programados, esta longitud es para la
comprobacin de pureza.

Bibliografa.

Adams L. (1980). Bioqumica de los cidos Nucleicos. Ed. Reverte. Espaa.

Campbell, M (1991). Biochemistry. Ed. Saunders College Publishimg.
Hengen, P.N. (1996). Methods and Reagents. Carriers foe precipitating
nucleic acids. TIBS 21: 224-225.
Plummer D.T. (1987). Introduccin a la Bioqumica Prctica. Ed McGraw-
Hill.