Clase 3

Unidad V. cidos Nucleicos

Parte de Caps. 10, 26 y 27 Nelson y Cox (Lehninger)
Ejercicios tutoriados de cidos ncleicos:
http://www.cecalc.ula.ve/bioinformatica/BIOTUTOR/pregs/
preg.htm

1
http://www.youtube.com/watch?v=-mtLXpgjHL0&feature=rec-LGOUT-exp_stronger_r2-2r-3-HM

2
 Replicacin
Mecanismo de
replicacin
semiconservativa

3
 NH4Cl

Experimento 1% ms denso
de Messelson-Stahl

4
Replicacin del DNA tiene un punto de
origen y es bidireccional

Ojos o burbujas de replicacin se asemejan a letra griega

5
 Replicacin del DNA
DNA polimerasas: residuo Asp en su sitio activo.
Catalizan la polimerizacion de dNTPs DNA.
Direccion 5 3. Requieren un cebador (DNA o RNA)
dNTP

Mg+2
cebador ataque nucleoflico

DNA molde
6
 Estructura cristalina del fragmento grande
de la DNA Pol I

Actividad polimerasa
Actividad exonucleasa
3-5

Complejo con dsDNA

7
 Replicacin semi-discontinua del DNA
Sntesis procede en direccin 5- 3

replicacin continua
Hebra lder

Hebra retrasada

replicacin discontinua

Los fragmentos de Okazaki son ligados posteriormente

entre s por la DNA ligasa

8
 reparacin
requiere extremo 3 OH

edicin

A partir de un nick resintetiza una porcin de ADN, removiendo

Cadena preexistente. Participa en la sntesis de cebadores en E coli.
9
 Correccin

DNA Polimerasa I

Actividad exonucleasa 35:

edicin

10
 Cebador: RNA o DNA

DNA Pol I

- Actividad exonucleasa 53.

Permite reparar cortes en el
DNA.

-Utilizada en Biologa Molecular

para etiquetar
el DNA con radioactividad =
nick translation.

11
 Tasa de error de PoI I- 10-7

Alta tasa de fidelidad

Par A-G

Pares A-T y G-C

Par A-C

Par G-T 12
DNA Polimerasa III de E. coli

*
*

* Pinza : responsable de la
alta procesividad de DNA Pol III.
13
Fases de la replicacin del DNA:
Iniciacin
Elongacin
Terminacin

14
 Iniciacin de replicacin
Ori C en E. coli

245 bp

15
Protenas requeridas para iniciar la replicacin
en el origen de E. coli

16
 Modelo de Iniciacin de
la replicacin en E. coli

Dna A=reconoce la secuencia en origen

y abre la doble cadena

HU= histone-like :DNA binding

DnaB= helicasa
DnaC= requerida para enlazamiento al origen

Sntesis de primers
17
DNA Polimerasa III de E. coli

*
*

* Pinza : responsable de la
alta procesividad de DNA Pol III.
18
 Protenas presentes en
la horquilla de replicacin en E. coli

19
 cebador

Elongacin

Coordinacin

20
 Coordinacin en la sntesis del DNA
Pol III

DNA Pol III

Replisoma
21
ltimo paso de sntesis de la
cadena retrasada

22
Reaccin de la ligasa

23
Terminacin de la replicacin de DNA en procariotes

Fork traps : regiones de ~350 kb que contienen siete sitios de

terminacin de 23 bp c/u:
- Ter B, C, F y G (sentido de las agujas del reloj)
-Ter A,D y E (sentido contrario a las agujas del reloj). Al unirse la
proteina Tus a las regiones Ter, detiene el desplazamiento de las
DNA helicasas.

24
 Estructura Secundaria de ARNs

Hlice A mano derecha

25
Estructura tridimensional del ARN

Patrones inusuales
de apareamiento

ARNt de fenilalanina
(levaduras) PDB ID 1TRA

26
Estructura
tridimensional
de ARN

Ribozima=
enzima ARN
PDB ID 1MME

Inactivadas por calor, agentes desnaturalizantes,

complementariedad de nucletidos
27
Estructura
tridimensional del
ARN

Segmento de ARNm=
Intrn es una ribozima y
cataliza su propia excisin y
separacin de exones

PDB ID1GRZ

28
 Tipos de ARN: ARN de Transferencia (ARNt):

Es el ms pequeo. Posee entre 73 y 90 nucletidos.

Representa el 45% del total de ARN.

Su funcin es llevar aminocidos a los ribosomas para incor-

porarlos a las protenas.

Existen distintos ARNt dentro de la clula, cada uno

reconoce un aminocido. Existe al menos uno por c/u de
los 20 aminocidos.

Adems de las cuatro bases fundamentales, presentan

otras bases pricas y pirimdinicas menos frecuentes

29
 Tipos de ARN: El RNA ribosomal (RNAr)

Es el ms abundante de las tres clases

correspondiendo al 50% del total del RNA, se
encuentra en los ribosomas, organelos
encargados de la sntesis de protenas.
Incluye tres tipos en clulas pro y eucariotas y
se nombran de acuerdo a su coeficiente de
sedimentacin (S).
En procariotas existen tres RNAr: 16S, 5S y 23S
En eucariotas existen tres RNAr: 18S, 5.8S y 28S
.

30
 Tipos de RNA: RNA Mensajero (RNAm)

Posee 1000-1500 nucletidos aproximadamente.

Corresponde aproximadamente al 5% del
total de RNA.
Cada RNAm representa una copia de la
secuencia de bases de una regin del DNA
que especifica la secuencia de aminocidos de
una protena.

31
 Transcripcin
Parte de Caps. 10, 26 y 27 Nelson y Cox
Ejercicios tutoriados de cidos nucleicos:
http://www.cecalc.ula.ve/BIOINFORMATICA/BIOTUTOR/pregs/preg-ind.htm

32
Es el proceso enzimtico por el cual la informacin
gentica contenida en una cadena de ADN es usada
para sintetizar una secuencia complementaria en
una cadena de ARNm.

33
Sntesis de ARN No necesita primer
o cebador iniciador

17pb

34
Movimiento de la ARN polimerasa

Topoisomerasas

No tiene actividad correctora

Error 10-4 10-5

ribonucletidos

35
 Complementariedad de bases entre la cadena
molde del ADN y transcrito de ARN.

Secuencia de cadena codificante = transcrito RNA, excepto por T-U

36
 Promotores tpicos en E. coli
reconocidos por RNA Pol
Sntesis no aleatoria
-70

37
Unin de la RNA
Polimerasa

Iniciacin
8-9 nucletidos

Elongacin
38
 Terminacin rho independiente

Pausa de RNA Polimerasa

Independiente de

Si el complejo sufre un
cambio conformacional y AAA----UUU
Dependiente
se forma horquilla en
de transcrito,
(C-A) el RNA se disocia
39
ARN Polimerasas de eucariotas
RNA Pol I: precursores de RNA ribosomal: 18S, 5.8S
y 28S
RNA Pol II: sntesis de RNAm
RNA Pol II: sntesis de RNAt
Pol II
Cientos o
Miles de pb

Inr= secuencia iniciadora

40
ARN Polimerasa II
Factores de transcripcin

41
 30
polipptidos

Regulacin Helicasa (ATP)

quinasa

TFIIF

42
TATA Binding Protein (TATA)

43
Inhibicin

44