PRACTICA N1

BIOSEGURIDAD
I. INTRODUCCIN
El personal del laboratorio de microbiologa, trabaja por definicin con organismos
infecciosos o con materiales que lo contienen, algunos de estos son patgenos o con
potencial de convertirse en ello. De acuerdo a lo anterior es importante que el personal que
labora en las instalaciones conozca y aplique todos los conceptos de bioseguridad.
El objetivo principal de estas normas es la proteccin de todo el personal que trabaja,
reduciendo el riesgo en cada una de las etapas del proceso, as como, evitar la contaminacin
de las prcticas desarrolladas.
Todos los establecimientos laborales, incluyendo los laboratorios de anlisis,
investigacin y dems, necesitan tener una serie de normas para llevar un desempeo seguro
y garantizar resultados exitosos. Las normas generales son:
- El acceso al laboratorio estar limitado solo al personal autorizado.
- El personal que trabaje en el laboratorio debe cumplir a cabalidad las normas de
bioseguridad.
- Toda rea debe estar marcada con la respectiva seal de riesgo biolgico y su nivel
de contencin.
- Al ingresar al laboratorio se debe tener en cuenta el debido porte de la bata manga
larga, abotonada y limpia, as mismo una vez se ingrese se debe colocar los abrigos
libros y dems objetos, en sitios adecuados para evitar un posible accidente y nunca
sobre los bancos o mesas.
- Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la sesin de laboratorio
para evitar la contaminacin por corrientes de aire.
- Al inicio y trmino de una prctica se debe limpiar la superficie de trabajo con una
solucin desinfectante.
- El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado, durante el trabajo o el trmino
del mismo.
- Se deben lavar las manos al inicio y al trmino de cada sesin de trabajo, secndolas
posteriormente con toallas de papel.
- Se debern usar todos los implementos necesarios para la proteccin segn el nivel
de riesgo biolgico.
- Durante la prctica no se deben guardar ni consumir alimentos y bebidas.
- Se debe colocar un calzado adecuado para las prcticas en el laboratorio, as como
mantener las uas cortas, limpias y sin esmalte.
- Utilizar los equipos segn las instrucciones o los procedimientos operativos
estandarizados.
- Realizar el trasporte de materiales o de muestras de manera tal que en caso de cadas
no se produzca salpicadura.
- Todo personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto con materiales
potencialmente infecciosos sin la debida proteccin.
- Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente el supervisor de
laboratorio.
- Utilizar mscaras faciales si existe el riesgo de salpicaduras o aerosoles.
- Apagar los instrumentos elctricos antes de manipular las conexiones.
II. OBJETIVOS
- Conocer las normas de bioseguridad en el laboratorio de fsica, qumica y biologa
- Tomar las medidas necesarias para evitar cualquier tipo de inconvenientes dentro o fuera
del laboratorio de microbiologa.
- Reconocer e identificar el riesgo que implica el manejo de microorganismos que en
muchos casos pueden ser patgenos.
- Comprender y valor la importancia que tiene la limpieza y el orden que tiene el trabajo
en el laboratorio.

III. FUNDAMENTO TERICO

1. Principios Bsicos de Bioseguridad

El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar materiales
infecciosos en el ambiente de laboratorio donde son manipulados o conservados. El
objetivo de la contencin es reducir o eliminar la exposicin de quienes trabajan en
laboratorios, de otras personas y del medio ambiente externo a agentes potencialmente
peligrosos.
1.1 Niveles de Contencin
El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las
prcticas y tcnicas microbiolgicas de procesamiento de las muestras de laboratorio.
Cuando las prcticas de laboratorio no son suficientes para controlar los riesgos asociados
a un agente o un procedimiento de laboratorio en particular, es necesario aplicar medidas
adicionales. Estas medidas adicionales corresponden a los equipos de seguridad
diseados para la proteccin del personal y las prcticas de manejo (barrera primaria),
as como el diseo de instalacin y caractersticas de ingeniera adecuados (barrera
secundaria).

1.2 Barrera Primarias

Constituyen la primera lnea de defensa cuando se manipulan materiales biolgicos,
qumicos o fsicos. Se considera que las barreras de proteccin primaria son: equipos de
proteccin personal (guantes, mascarillas, mandiles); cabinas de seguridad biolgica (con
barreras de aire, que permiten que ste fluya en una sola direccin y a una v elocidad
constante originando el flujo de aire laminar o flujo con ausencia de turbulencias y con
filtros, que atrapan las partculas contenidas en el flujo de aire); normas de higiene
personal; inmunizacin (vacunacin); desinfeccin (alcohol, compuestos fenlicos,
hipocloritos) y esterilizacin (calor hmedo, calor seco) de instrumentos y superficies.
Principalmente se busca la proteccin del personal presente en un ambiente frente a los
agentes infecciosos o productos qumicos de riesgo. Seguridad.
1.3 Barreras Secundarias
El diseo y construccin de un laboratorio se conoce como contencin o barrera
secundaria, contribuye a la proteccin del personal del laboratorio as como el que se
localiza fuera del laboratorio y personas de la comunidad en general, frente a posibles
escapes accidentales de agentes infecciosos. Se incluye la localizacin del laboratorio
fuera del rea de trnsito, acceso restringido al personal autorizado con puerta cerrada
con llave ( nivel 2) o doble puerta ( nivel 3), presencia de lavamanos, duchas de
emergencia, mesas de trabajo resistentes al calor moderado, cidos y lcalis, reas con
la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin, tratamiento de residuos o transporte
en envases sellados, servicios auxiliares de gas, aire y elctrico de fcil acceso.
IV. CLASIFICACIN DE LOS AGENTES BIOLGICOS POR GRUPOS DE RIESGO.
Agentes Biolgicos del grupo 1
Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano
y en los animales; ejemplo: Escherichia coli K12, Saccharomyces cerevisiae, microorganismos que
se utilizan en la elaboracin de quesos, embutidos, entre otros.
Agentes Biolgicos del grupo 2
Agentes patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen
pocas probabilidades de extraar un riesgo grave para el personal del laboratorio, la poblacin,
el ganado y el medio ambiente. La exposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin
grave, pero existen medidas preventivas y teraputicas eficaces y el riesgo de propagacin es
limitado; ejemplo: Staphylococcus epidermidis, Salmonella spp., entre otros.
Agentes Biolgicos del grupo 3
Pueden causar una enfermedad grave en el hombre y presentan un serio peligro para los
trabajadores, con riesgo de que se propaguen a la colecti vidad; sin embargo, existe
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Implican patologa grave, de difcil y largo
tratamiento, pueden curar con secuelas y ocasionalmente producen la muerte. El mayor y ms
frecuente peligro es la infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos.
Ejemplo: Mycobacterium. tuberculosis, Brucella sp., Coxiella burneti, entre otros.
Agentes Biolgicos del grupo 4
Agentes patgenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales
que se trasmiten fcilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente.
Normalmente no existen medidas preventivas y teraputicas eficaces; ejemplo: virus Ebola,
Hantavirus, etc.
V. NIVELES DE BIOSEGURIDAD PARA LOS LABORATORIOS

Se consideran cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica, que consisten en la

combinacin, en menor o mayor grado, de los tres elementos de seguridad biolgica descritos:
tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad y diseo arquitectnico de las instalaciones del
laboratorio. Cada combinacin est especficamente dirigida al tipo de actividades que se
realizan, las vas de transmisin de los agentes infecciosos y la funcin o actividad el
laboratorio. De forma general, los cuatro niveles de bioseguridad definen la contencin
necesaria para proteger al personal y al ambiente.

Nivel de bioseguridad 2

Es el nivel obligado para trabajar con agentes del grupo de riesgo 2. Considera personal
especializado para el manejo de stos microorganismos y corresponde a algunos
laboratorios de microbiologa clnica y de control de calidad sanitaria (tcnicos de
laboratorio, especialistas en microbiologa).
Nivel de bioseguridad 3

Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo de riesgo 3. El

material biolgico slo puede ser procesado por personal calificado y en una zona con
infraestructura apropiada para el nivel de contencin 3, es decir, con aire acondicionado
independiente, sin recirculacin de aire, con gradiente de presin, cabinas de bioseguridad,
 entre otras caractersticas; correspondiendo a algunos laboratorios de microbiologa clnica,
de produccin de biolgicos y de control de calidad sanitaria.
Nivel de bioseguridad 4

Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha de un agente biolgico de

riesgo 4, especialmente patgeno infecto contagioso, extico o no, que produce alta
mortalidad y para el que no existe tratamiento o es poco fiable. Este nivel tambin puede
utilizarse para trabajar con animales de experimentacin infectados por microorganismos
del grupo de riesgo 4.

VI. CONCLUSIONES

- El trabajar en el laboratorio de microbiologa implica un riesgo, para ello debemos seguir

las normas establecidas adems de conocer a los niveles de riesgo a los que nos vamos
a exponer, para as evitar cualquier tipo de accidente o contaminacin por algn agente.
- La higiene es un factor importante, del cual depende el buen desempeo de las
actividades que se realizan durante la prctica.

VII. BIBLIOGRAFA

- Granados, E. & Villaverde C. (1977). Microbiologa. Espaa: Editorial Paraninfo.

- Instituto Nacional de Salud. (2002). Manual de bioseguridad para los laboratorios.
Serie de Normas Tcnicas N 18 (2 ed.). Per
- Per, Ministerio de Salud. (2001). Buenas Prcticas de Laboratorio. Seminario Taller,
Lambayeque, Per.
 PRACTICA N 2
MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO
I. INTRODUCCION

Las tres fuentes del conocimiento son la observacin, la experimentacin y el

razonamiento. La experimentacin exige menos esfuerzo mental pero ms tiempo,
es decir ms presencia; por consiguiente se necesita equilibrar la enseanza con
ms horas de laboratorio para un buen aprendizaje. Una buena enseanza
experimental debe fomentar la capacidad de distinguir entre observar un fenmeno
o una reaccin, y el poder interpretarlo. La correcta observacin le dar el dominio
real sobre la materia. La capacidad de interpretacin le proporcionar adems la
preparacin tcnico-cientfica necesaria para ser un buen investigador.

Es de vital importancia el conocimiento y buen manejo del material y equipo de

laboratorio, slo as se lograr obtener buenas lecturas lo que permitir una buena
interpretacin de los resultados.

En la presente prctica se describir detalladamente algunos instrumentos

fundamentales en el laboratorio de microbiologa.

II. OBJETIVOS

Reconocer el material y equipo utilizados en el laboratorio de

Microbiologa.
Aprender a utilizar los equipos en el laboratorio de Microbiologa.
Aprender a esterilizar el material en el laboratorio de Microbiologa.

III. PROCEDIMIENTO

A. Reconocimiento del Material y Equipos Utilizados en el Laboratorio de

Microbiologa.

Tubos de ensayo
El tubo de ensayo es uno de los principales instrumentos de laboratorio ya
que este se usa en cualquier procedimiento, como la preparacin de
soluciones o la toma de muestras que luego sern depositadas en este. Para
estudios bioqumicos se usan tubos de 13 X 100 mm. y para diluciones tubos
de 16 X 150 mm y de 15 X 125 mm.
 Placas de Petri
Estn compuestas por dos cristalizadores, de los cuales el ms grande hace
de tapa. Se emplea para cultivar clulas, observar la germinacin de las
semillas o examinar el comportamiento de microorganismos.

Tubos de Smith
Son utilizados para cuantificar el gas producido en los procesos de
fermentacin.

Campanas de Durham
Son tubos de vidrio huecos con uno de sus extremos cerrado y dilatado y
permiten detectar la produccin de gas en los procesos de fermentacin.

Piepetas serolgicas o de medida

Presentan subdivisiones de su capacidad total y se calibran en mL a 20C.
Las marcas ms conocidas son PYREX, NORMAX y CORNING. Las pipetas
NORMAX se usan para trabajos de precisin, son contrastadas
individualmente por la Oficina Nacional de Patrones en Norteamrica y
tienen las siglas NBS y el ao de control. Por ejemplo, una pipeta NORMAX
 serolgica de 1 mL de capacidad tiene un error tolerable (ET) de 0,01 (1%),
mientras que una pipeta PIREX del mismo volumen tiene un ET de 0.02 (2%).

Las pipetas serolgicas son terminales y con capacidad de 0,1 a 25 mL. Las
de mayor uso son:

Pipetas de 10 ml 0,1 ml
Pipetas de 5 ml 0,1 ml
Pipetas de 1 ml. 0,1 y 0,01 ml
Pipetas de 0.1 ml 0,1 y 0,001 ml
Pipetas de Dhan de 0,125 0,0125 ml
Pipetas de Dhan de 0,250 0,0250 ml
Pipetas de Bang de 0,2 0,08 y 0,005 ml.

Las pipetas graduadas pueden ser terminales, cuando el vaciado del lquido
se realiza hasta la punta de la pipeta y pipetas no terminales cuando el
vaciado del lquido se realiza hasta la ltima lnea de graduacin.

Pipetas Pasteur
Son confeccionadas de varillas de vidrio de dimetro de 4 X 20 mm. y de 30
40 cm. de longitud. La calidad del vidrio debe facilitar el reblandecimiento
a la accin directa de la llama del mechero, para conseguir un estiramiento
a la capilaridad deseada. Se emplean para la toma de pequeos inculos de
siembra.
 Buretas
Son tubos largos de vidrio con una llave de descarga en uno de sus extremos
o bien con un tubo corto de jebe que termina en un pico de vidrio. Las ms
comunes son de 50 mL y estn graduadas al dcimo de mL. Las buretas se
emplean para descargar distintas cantidades de lquidos o soluciones y se
las usa mayormente en las titulaciones volumtricas.

Matraces
Son recipientes volumtricos muy tiles en la preparacin y
almacenamiento de soluciones, colorantes, reactivos, medios de cultivo,
etc. Su forma y tamao son muy variables.

- Matraces cnicos (Erlenmeyers): Se utilizan para hervir soluciones

cuando hay que reducir a un mnimo la evaporacin; son tiles para
las titulaciones. En Microbiologa sirven para la preparacin de
medios de cultivo. Es necesario emplear una tela de asbesto o una
tela de alambre cuando se realiza el calentamiento evitando as el
contacto directo entre el matraz y la llama.

- Matraces de fondo redondo: Estos matraces soportan mejor el

calor directo sobre el mechero. Para calentar solventes orgnicos, o
para manipulaciones muy prolongadas, es preferible emplear
matraces con cuello esmerilado que pueden recibir los
condensadores correspondientes y permiten un cierre mucho ms
hermtico que los tapones de caucho o de corcho.
 - Matraces aforados o fiolas: Idnticos a los matraces erlenmeyer.
Estn calibrados a medidas exactas mediante un aforo en la parte
media del cuello del recipiente en el que se indica la medida. Se
emplean para la preparacin de reactivos y de soluciones buffer.

- Matraces kitasato: Son matraces que adems de la boca tienen una

tabulacin corta lateral para hacer vaco. Se utilizan como
complemento del equipo de filtracin (esterilizacin en fro).

Esptulas de Drigalsky
Se utiliza para la diseminacin del material sobre la superficie de los medios
de cultivo. Se confeccionan a partir de las pipetas Pasteur.
La fraccin recta y horizontal facilita la siembra y aislamiento de bacterias
por diseminacin.

Probetas
Recipientes cilndricos con base para la estabilidad. Pueden estar graduadas
y tener capacidad de 10 mL hasta 2 000 mL. Las ms utilizadas son las de
100, 250, 500 y 1000 mL.
 Beacker o vasos de precipitacin
Recipientes cilndricos y cortos, con una depresin en el margen de la boca.
El vidrio debe ser necesariamente resistente al calor. Existen desde 1 mL
hasta 4 000 mL de capacidad.

Varillas de vidrio macizo

Fragmentos de 30 a 60 cm, que sirven para la confeccin de agitadores o
baguetas. Las varillas cortas de 20 cm pueden utilizarse como mangos para
las asas de siembra.

Frascos reactivos
Frascos de vidrio de paredes gruesas, transparentes o de color mbar. Son
cilndricos, tienen cuello estrecho y tapones de cristal esmerilado (algunos
con tapas especiales para facilitar su vaciado y su tamao vara de 25 mL a
1000 mL). En los frascos pequeos se pueden almacenar HCl, H 2SO4, CCl 4,
etc. En los frascos grandes se pueden almacenar reactivos desinfectantes u
otros reactivos.

Frascos goteros
Tienen una capacidad de 50 mL, pueden ser de vidrio claro o mbar, y sus
tapones son ranurados para que su contenido salga gota a gota cuando se
inclinan. Se pueden utilizar para colorantes o para indicadores.
 Picetas
Son botellas plsticas de color blanco con una especie de cao que al
presionar el frasco permite que el lquido salga con fuerza. Se utilizan para
lavar lminas portaobjetos con tinciones. Tambien se denomina frasco
lavador o matraz de lavado. Generalmente se utiliza agua destilada para
eliminar productos o reactivos impregnados en los laboratorios.

Porta objetos y cubre objetos

Los portaobjetos son lminas de vidrio transparente de forma rectangular y
de mnimo grosor. Los cubreobjetos son finsimas lami nillas de mucho
menor tamao que los portaobjetos y pueden ser de forma rectangular,
cuadrada o circular. Ambos son material indispensable para
la observacin microscpica de las bacterias u otros organismos.

Jarra de Brewer
Denominada tambin campana de anaerobiosis, est constituida por una
tapa de baquelita en cuya parte inferior presenta una canastilla conteniendo
granos de paladio. El cuerpo es un cilindro de vidrio en cuyo interior se
colocan los tubos o placas de Petri. La jarra es cerrada hermticamente
mediante una abrazadera de metal.

Asas de siembra
Con mango de vidrio o de metal aislante del calor y un alambre o aguja de
micrn resistente a elevadas temperaturas. Se usan en la siembra y
trasplante de bacterias y hongos.
 Mangos de Kolle
Vstagos de metal con una cubierta aislante del calor y en el extremo
proximal, una tuerca para insertar el alambre de platino o micrn en el asa
de siembra. Pueden ser reemplazados por mangos de vidrio.

Alambres de platino en aro y en punta

Pueden ser acoplados a los mangos de Kolle.

Canastillas o cestos de metal

Las mejores son de aluminio. Favorecen el almacenamiento de tubos de
prueba en medidas conocidas, sin riesgo de roturas.

Gradillas
Permiten una mayor estabilidad a los tubos de ensayo, evitando accidentes.

Soportes universales
Con tenazas y aros de metal, para asegurar cuellos y bases de matraces,
beackers, etc. Son de metal de preferencia de fierro y son muy buenos
soportes de recipientes sometidos al calentamiento.
 Trpodes
Son de metal, de preferencia de fierro. Muy buenos soportes de recipientes
sometidos al calentamiento. De variada altura y dimetro.

Rejilla o malla metlica

Malla de alambre galvanizado, resistente a la corrosin a elevadas
temperaturas. Se coloca sobre el trpode.

Mecheros
- Mechero de alcohol: Constituido de un recipiente de vidrio
borosilicato y una tapa de metal por donde se introduce la mecha.
Se utiliza cuando no se necesita un gran poder calorfico, funciona
con alcohol etlico. Como un accesorio de seguridad se utiliza una
pieza que en caso de accidente, cubre la entrada de oxgeno, de
manera que el fuego se sofoca. Se utiliza en laboratorio para hacer
combustin.

- Mechero de bunsen: Funciona a gas. Es uno de los instrumentos

ms tiles en el laboratorio. Fue inventado por el alemn Robert
Bunsen en 1866. Existen diferentes tipos de mecheros, algunos
tienen regulacin de gas y otros no. Los que se usan en laboratorio
son simples, no regulan el gas, y queman gas propano.
 Autoclave
Consta de una caldera de acero o de cobre batido estaado interiormente,
protegida por una camisa metlica de cobre; quedando formado de paredes
dobles. En su base est instalada la fuente calrica (gas o electricidad). A una
distancia del fondo del recipiente, est la placa cribosa para apoyo del
material y para la salida del vapor; en la parte superior se halla la tapa
que es pesada (de bronce fundido) en cuyo borde interno est adaptado un
arandel de caucho 12 para el cierre hermtico del aparato. Los tornillos o
bulones en el margen superior refuerzan el cierre, evitndose el escape del
vapor. Presenta adems, un manmetro (que marca las libras de presin),
una vlvula de seguridad, un termmetro y una llave o espita (para la salida
del aire y vapor al empezar a hervir el agua). El vapor de agua se aplica en
una cmara cerrada en la que existe un generador de vapor; cuando ste se
produce, desplaza el aire, que sale por un orificio que se cierra en el
momento en que ya sale vapor. Posteriormente se consigue la presin
deseada, teniendo en cuenta que el vapor a 1 atm. de presin corresponde
a 121C de temperatura. Esta temperatura, aplicada durante 15 o 20
minutos, o una temperatura de 134 C durante 7 minutos destruye todas las
formas vegetativas y esporuladas. El autoclave requiere de indicadores, que
comprueben que en el interior del recipiente se han dado las condiciones
deseadas de temperatura y tiempo. Los indicadores de esterilizacin
ms usados son productos qumicos (que cambian de color segn los niveles
alcanzados) y esporas de ciertas bacterias.

Horno Pasteur
Es un aparato muy utilizado en la esterilizacin por calor seco. Las paredes
son metlicas y revestidas de planchas de asbesto al igual que la puerta.
Por los lados o al fondo, entre las paredes media y externa se halla un
colector de mechero mltiple o juego de resistencia (fuente calorfica).

Emplea altas temperaturas (160-180 C) durante un tiempo prolongado (1.5

a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetracin se usa para esterilizar
vidrio y metales. Acta principalmente desnaturalizando las protenas y
secundariamente oxidando los compuestos celulares.
 Espectrofotmetro
Es un instrumento que permite medir la intensidad de la luz transmitida y se
utiliza mucho en anlisis bioqumicos. Las sustancias disueltas tienen
determinados colores porque absorben ciertas longitudes de onda de luz y
dejan pasar otras. Ejemplo: La hemoglobina tiene color rojo porque absorbe
los colores complementarios del rojo, es decir las longitudes de onda ms
cortas del azul y el verde.

Potencimetro
Es un aparato utilizado para medir el pH de soluciones buffer, fluidos
biolgicos, medios de cultivo, etc.

Contador de colonias
Lo ms difcil en la determinacin de una colonia es el conteo en las placas
de Petri. El contador de colonias soluciona este problema convirtindose en
un auxiliar indispensable para todo laboratorio microbiolgico y adems no
ocasiona problemas con su mecanismo de conteo.
 Refrigeradoras y congeladoras
Son incubadoras de temperaturas fras. Se requieren para almacenar
medios de cultivo, sueros y reactivos especiales. Las congeladoras se
requieren para almacenamiento ms prolongado de sueros, enzimas, etc.

Deben localizarse lejos de los hornos de aire caliente, de radiadores de

tuberas de agua caliente.

Estufas de cultivo
Sirven para realizar el proceso de incubacin, que brinda una temperatura
adecuada para que los microorganismos permanezcan viables y se
desarrollen. Existen dos mtodos de incubacin:

- Incubacin por calor seco: Se realiza en incubadoras e i ncluso en

hornos. Las incubadoras y los hornos se basan en los mismos
principios y la diferencia entre stos radica en la temperatura que
puede obtenerse en su interior. Usualmente se denomina horno al
aparato que es capaz de soportar temperaturas de 100 C ms. El
ms conocido es el horno Pasteur.

- Incubacin por calor hmedo (bao Mara): El llamado bao Mara

presenta un dispositivo enrollable que es sumergido en el agua y la
calienta. La fuente de calor es por medio de una corriente de
conveccin, lo que permite que el agua se caliente en forma ms
uniforme.
 Microscopio ptico
La Microbiologa se ha podido desarrollar a partir de la aparicin y progreso
del microscopio. Podemos encontrar un microscopio simple que no es ms
que una lente biconvexa, o un microscopio compuesto, que emplea dos
sistemas de lentes separadas, consiguiendo con ello mayor aumento.
Los microscopios se clasifican bsicamente en dos grupos en funcin del tipo
de luz utilizada y amplificacin: microscopio de luz ptica y microscopio
electrnico. El microscopio mediante el cual la amplificacin de la imagen se
obtiene por un sistema de lentes pticas, corresponde a los microscopios de
luz. El microscopio mediante el cual la amplificacin de la imagen se hace a
travs de un haz de electrones en lugar de ondas luminosas corresponde al
microscopio electrnico. Los diversos componentes del microscopio ptico
pueden ser agrupados en cuatro sistemas:

a) Sistema de soporte: Pie, bastidor, revlver porta objetivos, platina.

b) Sistema de aumento: Objetivos, oculares
c) Sistema de iluminacin: Fuente luminosa, espejo, condensador,
diafragma, filtros.
d) Sistema de ajuste: Tornillo macromtrico, tornillo micromtrico,
condensador, elevador del diafragma iris, reguladores de la platina
mecnica, tornillos para centrar el condensador.
B. Manejo de los Equipos en el Laboratorio de Microbiologa
Microscopio

Obtener una muestra de sarro dentario con asa bacteriolgica

estril.
- Homogenizar la muestra en solucin salina fisiolgica estril (1 gota)
sobre una lmina porta objetos.
- Cubrir el preparado con laminilla. Tiene Ud. un preparado en fresco
para examen directo.
- Enfoque y observe al microscopio con objetivos de: 3,5 X, 10 X y 40X.

Horno Pasteur
- Colocar en el horno el material a esterilizar debidamente
acondicionado.
Cerrar la puerta y encender la fuente calorfica.
- Graduar la temperatura del horno a 180 C y mantener el material
por espacio de 2 horas.

Precauciones en el manejo

No abrir la puerta del horno mientras la temperatura en su interior

se mantenga elevada. Un cambio brusco de la temperatura puede
causar destrozos del material de vidrio.
Cuidar de no elevar excesivamente la temperatura; de sta manera
se evitar la carbonizacin del papel y tapones de algodn.
No colocar materiales que pueden ser destruidos por la
temperatura como delantales, guantes de goma, etc.

Autoclave
- Depositar agua en la caldera hasta unos centmetros de la parrilla.
- Colocar el material a esterilizar en la canastilla.
- Cerrar la tapa y asegurar el cierre ajustando los tornillos o mariposas
tomando de dos en dos tornillos diagonalmente opuestos.
- Dejar abierta la espita. - Encender la fuente de calor.
- Cerrar la espita cuando se produzca un flujo de vapor continuo.
- Observar el manmetro y mantener la presin en 15 libras mediante
el control de la temperatura (121 C) durante 15 a 20 minutos.
- Iniciar la cuenta del tiempo en el momento que se consigue la
temperatura y la presin deseada.
- Apagar el sistema de calefaccin, despus del tiempo de
esterilizacin. - Dejar enfriar hasta que el manmetro marque cero.
- Abrir la espita para que salga el exceso de vapor de agua.
- Aflojar los tornillos y levantar la tapa ponindose detrs del aparato
para evitar que los vapores lleguen a la cara del operador.
Precauciones en el manejo:
Para evitar la prdida de material por ebullicin se recomienda no
llenar los recipientes.
No colocar los materiales muy juntos. Es preferible dejar espacios
libres para favorecer la circulacin del vapor.
 No bajar la presin abriendo la espita. Esta medida puede ocasionar
prdida de material y ruptura de los recipientes de vidrio por el
cambio brusco de la presin.
Estufa
- Colocar en la estufa el material a incubar: placas de Petri o tubos de
ensayo con el medio de cultivo inoculado.
- Cerrar la puerta y encender la fuente calorfica.
- Graduar la temperatura deseada y mantener el material en incubacin
durante 24, 48 horas o ms tiempo si es requerido.
Bao Mara
- Colocar la cantidad de agua suficiente en la canastilla del equipo.
- Encender la fuente calorfica.
- Graduar la temperatura deseada.
- Colocar dentro del agua el material a calentar y mantenerlo durante el
tiempo deseado.

C. Esterilizacin del Material de Uso en el Laboratorio de Microbiologa

Placas de Petri
- Empaquetar las placas de Petri conteniendo material contaminado o de
descarte y esterilizar en autoclave a 121 C durante 20 minutos.
- Eliminar los restos de agar y lavar las placas de Petri con detergente,
enjuagar y dejar secar.
- Envolver con papel y asegurar con pabilo.
- Esterilizar en el horno a 180 C durante 2 horas.
Tubos de ensayo
- En una canastilla o un depsito que los sostenga depositar los tubos que
contengan material contaminado o de descarte.
- Esterilizar en el autoclave a l21 C durante 20 minutos.
- Eliminar los restos de agar y lavar los tubos de ensayo con detergente,
enjuagar y dejar secar.
- Taponar los tubos con algodn no graso, de modo que el tapn ajuste
perfectamente y facilite su uso posterior.
- Envolver con papel. De preferencia formar grupos de seis tubos,
envolver y asegurar con pabilo.
- Esterilizar en el horno a 180 C durante 2 horas.

Matraces
- Esterilizar en autoclave los matraces que contienen medios de cultivo
recin preparados o cultivos de descarte.
- Eliminar los restos de agar, lavar con detergente, enjuagar y dejar secar.
- Colocar tapones de algodn no graso, de modo que el tapn ajuste
perfectamente y facilite su uso posterior.
- Esterilizar en el horno a 180 C durante 2 horas.
Pipetas
- Colocar un tapn de algodn ligeramente ajustado en el orificio superior
de las pipetas.
- Envolver con tiras de papel de 3 cm, de modo que cubran totalmente
las pipetas.
- Esterilizar en el horno a 180 C durante 2 horas.
IV. CONCLUSIONES
Identificar los materiales en el laboratorio de microbiologa, asi como tambin su
funcin y uso correcto para llevar un buen desempeo durante el desarrollo de las
prcticas establecidas.
Aprender lo importante que es trabajar con material no contaminado, aprender a
esterilizar el material correctamente es un gran punto a favor para que los resultados
obtenidos sean lo deseados.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

- Granados, E. & Villaverde C. (1997). Microbiologa. Espaa: Editorial Paraninfo.

- Mendo, M. (1999).Instrumentacin de Laboratorio. Lima, Per: Editorial Cientfica
Mundi E.I.R.L.