(Aplicacin Mdica)

ADN Plasmdico de alta calidad purificado

con CA.
Los plsmidos son pequeas molculas de ADN que se pueden replicar
independientemente. Comnmente se encuentran en bacterias en forma de
doble cadena circular. La demanda de plsmidos en biomedicina va en
aumento, pues sumamente tiles para replicar genes especficos. Si se desea
generar grandes cantidades de alguna protena se puede hacer que estas sean
producidas por alguna especie de bacteria que haya sido modificada por el gen
establecido. Es por esto que contar con una forma de plsmidos de alta pureza
es importante, comnmente el ADN se trata con RNasa para eliminar los
fragmentos de nucletidos que suelen acompaar a los plsmidos.

Sin embargo la RNasa es un reactivo costoso por lo que se opto por utilizar el
CA, un reactivo mucho ms econmico, para poder purificar el ADN plasmdico
de los fragmentos de nucletidos que se mantienen unidos a ste y solo
provocan estorbos y un decaimiento de pureza.

Para verificar la eficiencia del CA, se aadi de ste a tubos de ensayo que
contenan 1,2,4 y 8 microgramos de ADN plasmdica. Utilizando 5mg de CA
encada uno (se hizo lo mismo con RNasa para fines comparativos).

Los resultados demostraron que la RNasa si logro remover fragmentos de

nucletidos en el ADN plasmdico final, pero algunos fragmentos se
mantuvieron intactos. En los 4 tubos con ADN plasmdico y CA, se removieron
por completo los fragmentos con nucletidos.

Se decidi investigar ms sobre las capacidades de adsorcin del CA en ADFN

plasmdico, al aadir 1,1.25, 2.5 y 5 mg de CA a muestras de ADN plasmdico
de 1.5 ml la cantidad de nucletidos eliminados fue proporcional al CA aadido
(siendo 5mg suficientes para eliminarlos por completo)

Se realizaron tambin una serie de purificaciones con CA, en diferentes

cantidades y diferentes repeticiones para observar si exista alguna prdida de
plsmidos pero en todos los casos, la cantidad de plsmidos finales fue la
misma.