LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA BAHAN ALAM

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT

SEKUNDER SERTA UJI AKTIOKSIDAN, ANTIBAKTERI DAN
TOKSISITAS PADA DAUN KERSEN
(Muntingia calabura Linn.)

Disusun oleh :

Silvia Fidyati 11140960000066

Nurul Qomariyah Eka 11140960000067
Nurlathifah 11140960000071
Larissa Risky Amalia 11140960000072
Septeen Adi Pratiwi 11140960000073
Chinta Permatasari S 11140960000078
Muhammad Fajar 11140960000081
Putri Andira 11140960000084

Dosen Pengampu : Tarso Rudiana M.Si dan Fitriyanti M.Si

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2016
 ABSTRAK

Kandungan bioaktif yang memiliki manfat yang berbeda dan dapat mempengaruhi
efek fisiologis tubuh manusia. Muntingia calabura L merupakan tanaman yang
memiliki kandungan bioaktif yan berfungsi sebagai antitumor. Penelitian ini
dimulai dengan melakukan isolasi dilanjutkan dengan identifikasi senyawa
bioaktif dalam tanama. Hasil ektraksi didapatkan ekstrak n-heksana yang
kemudian didapatkan hasil KLT terbaik dengan eluen n-heksana : diklorometana
7:3 sebagai fase gerak dan fase diam adalah plat alumina.Hasil kromatografi
kolom menggunakan pelarut hasil KLT. Kromatografi kolom menggunakan fase
diam silik dan fase gerak eluen n-heksana : diklorometana 7:3. Hasil kolom
didapatkan 2 fraksi yang selanjutnya untuk uji anti oksidan dan toksisitas. Hasil
skrinning fitokimia menunjukkan bahwa daun ceri memiliki kandungan biaoktif
tannin/polifenol, steroid/triterpenoid serta saponin. Berdasarkan hasil uji
antioksidan didapatkan nilai 9015,831 ppm serta aktivitas antioksidanya menurun
dikarenakan dalam sampel ini tidak mengandung flavonoid yang diduga memiliki
aktivitas antioksidan. Berdasarkan hasil uji toksisitas didapakan hasil LC 50
5
sebesar 1.38 10 menunjukan bahwa ekstrak tanaman ini bersifat sangat

toksik karena nilai LC 50 dikategorikan pada LC 50 30 ppm yaitu sangat

toksik.

2
 KATA PENGANTAR

Puji syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan
karunia-Nya kepada kami, sehingga kami dapat menyelesaikan makalah Isolasi
dan Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder serta Uji Antioksidan dan Toksisitas
pada Daun Karsen.Makalah ini disusun untuk memenuhi tugas mata kuliah
Praktikum Kimia Bahan Alam.
Dalam pelaksanaan penyusunan makalah ini, kami mendapat banyak bantuan,
bimbingan, dan arahan dari berbagai pihak. Oleh sebab itu dalam kesempatan ini
penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang tulus kepada Bapak Tarso
Rudiana, M.Si serta Fitriyanti M.Si selaku dosen Praktikum Kimia Bahan Alam
yang telah membimbing kami dalam mata kuliah ini.
Semoga arahan, motivasi, dan bantuan yang telah diberikan menjadi amal
ibadah bagi rekan-rekan, sehingga memperoleh balasan yang lebih baik dari Allah
SWT. Kami menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari kesempurnaan. Untuk
itu, kami mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk kesempurnaan
makalah ini maupun tulisan penulis berikutnya. Semoga makalah ini bermanfaat
bagi pembaca serta dapat dijadikan sebagai sumbangan pikiran.
Penulis

3
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI

ABSTRAK................................................................................................................i

KATA PENGANTAR..............................................................................................ii

DAFTAR ISI...........................................................................................................iii

DAFTAR GAMBAR..............................................................................................vi

DAFTAR TABEL..................................................................................................vii

BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1

1.1 Latar belakang...........................................................................................1

1.2 Tujuan........................................................................................................3

1.3 Rumusan masalah......................................................................................3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA..............................................................................4

2.1 Tumbuhan Karsen.....................................................................................4

2.1.1 Sistematika Tumbuhan Karsen..........................................................4

2.1.2 Nama Lain Tumbuhan Karsen...........................................................4

2.1.3 Morfologi Tumbuhan Karsen.............................................................5

2.1.4 Kandungan Tumbuhan Karsen...........................................................6

2.1.5 Efek Farmakologis Tumbuhan Karsen...............................................6

2.1.6 Manfaat Tumbuhan Karsen................................................................7

2.2 Isolasi Senyawa Bahan Alam....................................................................7

2.2.1 Ekstraksi.............................................................................................7

2.2.2 Fraksinasi.........................................................................................13

2.2.3 Skrinning Fitokimia.........................................................................15

2.2.4 Analisis Total Komponen Bioaktif..................................................23

2.2.5 Uji Aktivitas Antioksidan.................................................................25

4
 2.2.6 Uji Toksisitas....................................................................................28

2.3 Spektrofotometer UV-VIS.......................................................................31

BAB III METEDOLOGI PENELITIAN...............................................................33

3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian...................................................................33

3.2 Alat dan Bahan........................................................................................33

3.2.1 Alat...................................................................................................33

3.2.2 Bahan...............................................................................................33

3.3 Prosedur Kerja.........................................................................................34

3.3.1 Ekstraksi Simplisia...........................................................................34

3.3.2 Kromatografi Lapis Tipis.................................................................36

3.3.3 Kromatografi Lapis Tipis.................................................................37

3.3.4 Kromatografi Kolom .......................................................................38

3.3.5 Uji Antioksidan................................................................................39

3.3.6. Uji Toksisitas....................................................................................40

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...............................................................42

4.1 Penyiapan Bahan.....................................................................................42

4.2 Ekstraksi Bahan.......................................................................................42

4.3 Skrinning Fitokimia.................................................................................44

4.3.1 Uji Alkaloid......................................................................................44

4.3.2 Uji Flavanoid...................................................................................46

4.3.3 Uji Triterpenoid dan Steroid............................................................47

4.3.4 Uji fenolik Hidrokuinon...................................................................48

4.3.5 Uji Saponin......................................................................................48

4.3.6 Uji Polifenol/Tanin...........................................................................49

4.4 Pemisahan Senyawa Bahan Alam Metode Kromatografi Lapis Tipis....49

4.5 Pemisahan Senyawa Bahan Alam Metode Kromatografi Kolom...........51

5
 4.6 Uji Antioksidan.......................................................................................52

4.7 Uji Toksisitas...........................................................................................56

BAB V PENUTUP.................................................................................................59

5.1 Kesimpulan..............................................................................................59

DAFTAR PUSTAKA.............................................................................................60

LAMPIRAN...........................................................................................................61

6
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Tanaman Karsen..................................................................4

Gambar 2. Urutan Kepolaran Eluen.......................................................15
Gambar 3. Reaksi Uji Alkaloid Mayer....................................................17
Gambar 4. Reaksi Uji Alkaloid Wagner..................................................18
Gambar 5. Reaksi Uji Alkaloid Dragendroff............................................18
Gambar 6. Reaksi Uji Triterpenoid dan Streroid.......................................19
Gambar 7. Reaksi Uji Flavanoid...........................................................20
Gambar 8. Reaksi Uji Tanin................................................................21
Gambar 9. Reaksi Uji Saponin.............................................................22
Gambar 10. Reaksi Uji Kuinon............................................................23
Gambar 11. Reaksi Uji Total Fenolik.....................................................25
Gambar 12. Struktur DPPH.................................................................27
Gambar 13. Reaksi Penangkalan Radikal DPPH.......................................27
Gambar 14. Hasil Reaksi Uji Alkaloid Dragendrof....................................45
Gambar 15. Hasil Reaksi Uji MAyer......................................................45
Gambar 16. Hasil Reaksi Uji Wagner.....................................................46
Gambar 17. Hasil Reaksi Uji Flavanoid..................................................47
Gambar 18. Hasil Uji Steroid...............................................................48
Gambar 19. Hasil Reaksi Uji Saponin....................................................49
Gambar 20. Hasil KLT Ekstrak Daun Karsen...........................................50
Gambar 21. Reaksi DPPH...................................................................53
Gambar 22. Grafik Hubungan Inhibisi dengan Konsentrasi Sampel...............55
Gambar 23. Grafik Hubungan Konsnetrasi dengan Probility........................58

7
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Kandungan Daun Karsen...........................................................................6

Tabel 2. Derajat Toksisitas.....................................................................................30
Tabel 3. Hasil Rendemen Ekstrak Tanaman..........................................................43
Tabel 4. Konsentrasi dan IC50 Antioksidan...........................................................54
Tabel 5. Larva Udang Hasil Inkubasi 24 jam.........................................................57
Tabel 6. Konsentrasi Sampel dan Nilai Probility...................................................57

8
 BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Sudah sejak lama manusia menggunakan berbagai jenis tanaman untuk

mencegah, mengurangi dan menyembuhkan dari penyakit tertentu (Sari,
2006). WHO merekomendasikan penggunaan tanaman obat dalam
pemeliharaan kesehatan masyarakat, pencegahan dan pengobatan
penyakit. Salah satu tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai tanaman
obat adalah kersen (Muntingia calubura L.). Daun kersen berkhasiat
sebagai obat batuk dan peluruh dahak., buah yang telah masak dapat
digunakan untuk sakit kuning. Zakaria et al (2007) melaporkan bahwa
kersen yang mengandung flavonoid mempunyai khasiat hipotensi,
antinosiseptik, antioksidan, antiproliferatif dan antimikroba melalui
isolasi staphylococcus. Manusia mempunyai sistem perlindungan
antioksidan yang sangat canggih dan komplek yang melibatkan berbagai
komponen, baik endogen dan eksogen yang berfungsi secara interaktif
dan sinergi untuk menetralisir radikal bebas.
Tanaman kersen (Muntingia calabura Linn) dapat dengan mudah
ditemukan di Indonesia. Kersen merupakan tumbuhan yang berasal dari
daerah Amerika dan secara luas dikultivasi di daerah Asia. Secara
empiris, tanaman ini telah digunakan dalam pengobatan di berbagai
Negara. Akarnya digunakan sebagai abortivum di Malaysia, sementara di
Filipina bunganya digunakan untuk mengobati sakit kepala, flu, anti-
dispeptik (nyeri lambung), antispasmodik dan diaforetik. Infus bunganya
digunakan sebagai penenang dan tonikum di Negara Kolombia.
Efek farmakologi dibuktikan dengan adanya kemampuan sebagai anti
inflamasi dan anti piretik (Zakaria, 2007). Ekstrak dari daun kersen
merupakan sumber anti mikroba untuk mengobati infeksi yang
disebabkan oleh Staphylococcus aureus (Zakaria, 2006). Tanaman ini
kaya akan senyawa flavonoid, flavon, flavanon. Hasil penelitian

9
menunjukkan bahwa simplisia daun kersen dan ekstrak etanol daun ini
mengandung senyawa golongan flavonoid, kuinon, polifenolat, saponin,
steroid, dan triterpenoid, monoterpenoid dan seskuiterpenoid
(Redhamahsya. 2011).
Penelitian tentang isolasi senyawa flavanon, flavon, kalkon dan
isoflavon serta struktur senyawanya telah dilakukan di Chicago, hasil
penelitiann yaitu 7-methoxy-3,5,8 trihydroxyflavanone; 5-hydroxy-7
methoxyflavanone; 2,4 dihydroxychalcone; 4,2,4trihydroxychalcone,
7-hydroxyisoflavon; 7,3,4-trimethoxyisoflavone . Salah satu manfaat
dari kandungan flavonoid adalah sebagai antioksidan. Aktivitasnya telah
banyak diteliti, dimana flavonoid memiliki kemampuan untuk merubah
atau mereduksi radikal bebas dan juga sebagai anti radikal bebas sebagai
contoh, daun katuk misalnya, mempunyai aktivitas antioksidan yang kuat,
karena memiliki senyawa flavodoid (Zuhra, dkk 2008). Contoh lain
kandungan aktif antioksidan diisolasi dari ekstrak kasar methanol dari
daun jambu biji (Psidium guajaa L.) diantaranya quercetin serta dua jenis
flavonoid quercetin-3-O-glucopyranoside dan morin (Indriani Susi,
2006). Flavonoid yang sama dapat memiliki kemampuan sebagai
antioksidan dan juga prooksidan melawan radikal bebas tetapi dapat juga
berperan sebagai prooksidan jika digunakan pada logam transisi
(Tachakittirungrod S, et al 2007). Senyawa tumbuhan lain, selain
flavonoid yang memiliki aktivitas antioksidan diantaranya polifenol dan
saponin. Penelitian tentang perbedaan kandungan total polifenol dan
flavonoid yang terkandung dalam kulit pitaya (dragon fruit) menunjukkan
adanya aktivitas antioksidan.
Penelitian aktivitas antioksidan dari saponin, secara langsung
menunjukkan kadar lipid hydroperoxide pada serum lemak kelompok
tikus yang diberi saponin. Sumber-sumber antioksidan dapat berupa
antioksida sintetik maupun antioksidan alami. Tetapi saat ini antioksidan
sintetik mulai dibatasi karena dari hasil penelitian yang telah dilakukan
ternyata antioksidan sintetik seperti BHT (Butylated Hydroxy Toluena_
dapat meracuni binatang percobaan dan bersifat karsinogenik. Oleh

10
 karena itu industry makanan dan obat-obatan beralih mengembahkan
antioksidan alami dan mencari sumber-sumber antioksidan alami baru.
Dari bukti ilmiah berkenaan dengan kandungan senyawa dalam daun
kersen yang telah disebutkan diatas diharapkan bahwa daun kersen
memiliki suatu golongan senyawa tumbuhan yang mempunyai sifat
antioksidan. Hal ini perlu dibuktikan melalui penelitian yang dimulai
dengan pembuatan ekstrak daun kersen dan uji antioksidan kemudian
dilanjutkan dengan penelitian fraksi-fraksinya.
1.2 Tujuan

a. Mengisolasi senyawa bahan alam dalam jaringan tumbuhan melalui

metode ekstraksi maserasi dan soxhletasi.
b. Mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder pada sampel
tanaman.
c. Mengetahui kandungan komponen bioaktif dalam ektrak tanaman secara
kuantitatif.
d. Memisahkan fraksi yang terdapat dalam sampel dengan kromatografi lapis
tipis (KLT)
e. Mengetahui nilai Rf senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak tanaman.
f. Mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak tanaman dengan metode DPPH
dan metode TBA.
g. Mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak tanaman.
h. Menentukan diameter zona hambat dan konsentrasi hambat minimum
(KHM) ekstrak tanaman.
i. Menentukan nilai LC50 ekstrak bahan alam.
j. Mengetahui aktivitas antidiabet ekstrak tanaman dengan metode
penghambatan enzim -amilase dan -glukosidase
k. Mengidentifikasi senyawa bahan alam dalam ektrak tanaman dengan
instrumen spektrofotometri UV-VIS.

1.3 Rumusan masalah

a. Metabolit sekunder apakah yang terdapat dalam ekstrak n-heksan daun

kersen ?
b. Bagaimanakah aktivitas antioksidan dari ekstrak n-heksan daun kersen?

11
 BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tumbuhan Akasia

2.1.1 Sistematika

3.1.1 Tumbuhan Akasia

Gambar 1. Tanaman Akasia

Rhegnum : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Fabales
Famili : Mimosaceae
Genus : Acacia
Spesies : Acacia auriculiformis A. Cunn. ex Benth.

2.1.2 Hhh2
Bahasa Jawa: talok, kersem, keres, kersen (Sunda). Jakarta:
kadang-kadang disebut ceri. Lumajang: anak-anak menyebutnya
baleci. Nama-nama lainnya di beberapa negara adalah: datiles,
aratiles, manzanitas (Filipina), mt sm (Vietnam); khoom smz,
takhb (Laos); takhop farang (Thailand); krkhb barang
(Kamboja); dan kerukup siam (Malaysia). Juga di kenal
sebagaicapulin blanco, cacaniqua, nigua, niguito (bahasa
Spanyol); Jamaican cherry, Panama berry, Singapore cherry
(Inggris) dan nama yang tidak tepat, Japanse kers (Belanda), yang

12
 lalu dari sini diambil menjadi kersen dalam bahasa Indonesia.
Nama ilmiahnya adalah Muntingia calabura L.

2.1.3 Morfologi Tumbuhan Karsen

Tumbuhan Seri merupakan perdu atau pohon kecil yang
tingginya sampai 12 m, meski umumnya hanya sekitar 3-6 m saja.
Selalu hijau dan terus menerus berbunga dan berbuah sepanjang
tahun. Cabang-cabang mendatar, menggantung di ujungnya
membentuk naungan yang rindang. Ranting-ranting berambut
halus bercampur dengan rambut kelenjar, demikian pula daunnya.
Daun-daun terletak mendatar, berseling, helaian daun tidak
simetris, bundar telur lanset, tepinya bergerigi dan berujung
runcing, 1-4 x 4-14 cm sisi bawah berambut kelabu rapat,
bertangkai pendek. Daun penumpu yang sebelah meruncing
berbentuk benang lk 0,5 cm, agak lama lalu mongering dan
rontok, sementara sebelah lagi rudimeter. Bunga dalam berkas
berisi 1-3(-5) kuntum, terletak di ketiak agak di sebelah atas
tumbuhnya daun, bertangkai panjang, berkelamin dua dan
berbilangan lima, kelopak berbagi dalam, taju meruncing bentuk
benang, berambut halus , mahkota bertepi rata, bundar telur
terbalik, putih tipis gundul lk 1 cm.
Benang sari berjumlah banyak, 10 sampai lebih dari 100 helai.
Bunga yang mekar menonjol keluar, ke atas helai-helai daun,
namun setelah menjadi buah menggantung ke bawah, tersembunyi
di bawah helai daun. Umumnya hanya satu-dua bunga yang
menjadi buah dalam tiap berkasnya. Bertangkai panjang, bulat
hampir sempurna, diameter 1-1,5 cm, hijau kuning dan akhirnya
merah apabila masak, bermahkota sisa tangkai putik yang tidak
rontok serupa bintang hitam bersudut lima. Berisi beberapa ribu
biji yang kecil-kecil, halus, putih dan kekuningan, terbenam
dalam daging dan sari buah yang manis sekali.
Buah kersen merupakan sumber antioksidan, karena
mempunyai kandungan vitamin C yang cukup tinggi yaitu sekitar

13
 80,5 mg. Buah kersen juga terdapat kandungan flavonoid, fenol,
niasin dan betakaroten yang berfungsi sebagai antioksidan.
Antioksidan yang terdiri dari vitamin C, vitamin E, mineral
selenium, seng, dan tembaga, bekerja dengan menghalangi
terjadinya stres oksidan dari radikal bebas dan memperbaiki
kerusakan endothel. Vitamin C merupakan karbon rantai 6 yang
tidak disintesis oleh manusa karena tidak adanya enzim
gulonolactone oksidase di dalam liver. Antioksidan dapat
melindungi lipoprotein khususnya LDL dan VLDL dari reaksi
oksidasi.

2.1.4 Kandungan Tumbuhan Karsen

Kandungan setiap 100 gr bagian buah kersen yang dapat
dimakan kira kira mengandung :

Zat Berat (gram)

Air 76,3
Protein 2,1
Lemak 2,3
Karbohidrat 17,9
Serat 0
Abu 1,4
Kalsium 1,25 x 10-1
Fosfor 9,4 x 10-2
Vitamin A 1,5 x 10-5
Vitamin C 9 x 10-2
Tabel 1. Kandungan Daun Karsen

2.1.5 Efek Farmakologis Tumbuhan Karsen

a. Penyembuh Asam Urat (anti urid acid)
Di Indonesia secara tradisional buah kersen digunakan
untuk mengobati asam urat dengan cara mengkonsumsi buah
kersen sebayak 9 butir 3 kali sehari hal ini terbukti dapat
mengurangi rasa nyeri yang ditimbulkan dari penyakit asam
urat.
b. Antiseptik
Kandungan dan rebusan daun kersen ternyata dapat
berkasiat sebagai pembunuh microba berbahaya dan dapat

14
 digunakan sebagai anti septik. dari penelitian yang dilakukan
oleh penelitian herbal dari Malaysia didapat hasil bahwa
rebusan daun kersen dapat digunakan untuk membunuh
bakteri C.Diptheriea, S. Aureus, P Vulgaris, S Epidemidis dan
K Rizhophil pada percobaan yang dilakukan secara invitro.
c. Antiflamasi
Rebusan daun kersen juga memiliki kasiat anti radang atau
mengurangi radang (antiflamasi) dan menurunkan panas.
d. Antitumor

Kandungan senyawa flavonoid yang dikandung daun

kersen ternyata memiliki kasiat dapat menghambat
perkembangan sel kanker (mouse hapatoma) secara laboratoris
yang dilakukan para ilmuwan dari peru. (Hariyono, 2010)
2.1.6 Manfaat Tumbuhan Karsen

Buah kersen langsung dapat dimakan atau diolah menjadi

sirup, selai dan permen, rasanya pun tidak kalah dengan minuman
olahan dari buah yang mahal. Kayu kersen lunak dan mudah
kering, sangat berguna sebagai kayu bakar. Kayu dari tanaman
kersen ini juga cukup kuat sehingga banyak yang dipakai untuk
membuat perabotan. Kulit kayunya yang mudah dikupas
digunakan sebagai bahan tali dan kain pembalut. Daunnya dapat
dijadikan semacam teh.
2.2 Isolasi Senyawa Bahan Alam

2.2.1 Ekstraksi

Ekstraksi merupakan suatu proses penarikan komponen

senyawa yang diinginkan dari suatu bahan dengan cara
pemisahan satu atau lebih komponen dari suatu bahan yang
merupakan sumber komponennya. Pada umumnya ekstraksi akan
semakin baik bila permukaan serbuk simplisia yang bersentuhan
dengan pelarut semakin luas. Dengan demikian, semakin halus
serbuk simplisia maka akan semakin baik ekstraksinya. Selain

15
luas bidang, ekstraksi juga dipengaruhi oleh sifat fisik dan kimia
simplisia yang bersangkutan.
Proses pemisahan senyawa dari simplisia dilakukan
dengan menggunakan pelarut tertentu sesuai dengan sifat
senyawa yang akan dipisahkan. Pemisahan senyawa
berdasarkan kaidah like dissolved like yang artinya suatu
senyawa akan larut dalam pelarut yang sama tingkat
kepolarannya. Bahan dan senyawa kimia akan mudah larut pada
pelarut yang relatif sama kepolarannya. Kepolaran suatu pelarut
ditentukan oleh besar konstanta dieletriknya, yaitu semakin besar
nilai konstanta dielektrik suatu pelarut maka polaritasnya
semakin besar.), beberapa aspek yang perlu diperhatikan dalam
pemilihan pelarut antara lain:

a. Selektifitas, yaitu pelarut hanya melarutkan komponen

target yang diinginkan dan bukan komponen lain.

b. Kelarutan, yaitu kemampuan pelarut untuk melarutkan

ekstrak yang lebih besar dengan sedikit pelarut.
c. Toksisitas, yaitu pelarut tidak beracun.
d. Penguapan, yaitu pelarut yang digunakan mudah diuapkan.
e. Ekonomis, yaitu harga pelarut relatif murah.
Pembagian metode ekstraksi menurut Ditjen POM yaitu:
a. Cara dingin
1) Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian simplisia
menggunakan pelarut dengan perendaman dan beberapa
kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (kamar). Cairan penyari akan menembus dinding
sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat
aktif yang akan larut, karena adanya perbedaan kosentrasi
larutan zat aktif didalam sel dan diluar sel maka larutan
terpekat didesak keluar. Proses ini berulang sehingga
terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan didalam

16
 dan diluar sel. Cairan penyari yang digunakan dapat
berupa air, etanol, metanol, etanol-air atau pelarut
lainnya. Remaserasi berarti dilakukan penambahan
pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama,
dan seterusnya. Remaserasi berarti dilakukan
penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan
maserat pertama, dan seterusnya. Keuntungan cara
penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan
peralatan yang digunakan sederhana yang mudah
diusahakan.
Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah
cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana
dan mudah diusahakan. Selain itu, kerusakan pada
komponen kimia sangat minimal. Adapun kerugian cara
maserasi ini adalah pengerjaannya lama dan penyariannya
kurang sempurna.
2) Perkolasi
Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan
dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk
simplisia yang telah dibasahi. Proses perkolasi terdiri dari
tahapan pengembang bahan, tahap maserasi antara, tahap
perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak),
terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat).
b. Cara panas
1) Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur
tititk didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut
terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin
balik.
Keuntungan dari metode ini adalah :
Dapat mencegah kehilangan pelarut oleh penguapan
selama proses pemanasan jika digunakan pelarut

17
 yang mudah menguap atau dilakukan ekstraksi
jangka panjang.

Dapat digunakan untuk ekstraksi sampel yang tidak

mudah rusak dengan adanya pemanasan.

Adapun kerugian dari metode ini adalah prosesnya

sangat lama dan diperlukan alat alat yang tahan
terhadap pemanasan.

2) Sokletasi

Sokletasi adalah ekstraksi dengan menggunakan

pelarut yang pada umumnya dilakukan dengan alat
khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dan dan jumlah
pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
Adapun keuntungan dari proses soxhletasi ini adalah cara
ini lebih menguntungkan karena uap panas tidak melalui
serbuk simplisia, tetapi melalui pipa samping.
Kerugiannya adalah jumlah ekstrak yang diperoleh lebih
sedikit dibandingkan dengan metode maserasi (Ditjen
POM, 1986).

3) Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan

kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari
temperatur ruangan, yaitu secara umum dilakukan pada
temperatur 40-500 C.

4) Dekok

18
 Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama dan
temperatur sampai titik didih air, yakni 30 menit pada
suhu 90-1000 C.
Berdasarkan fase yang terlibat, terdapat dua jenis ekstraksi yaitu:
a. Ekstraksi cair-cair
Merupakan suatu metode ekstraksi yang menggunakan
corong pisah sehingga biasa juga disebut dengan ekstraksi
corong pisah. Ekstraksi cair-cair (corong pisah) merupakan
pemisahan komponen kimia diantara dua fase pelarut yang
tidak dapat saling bercampur dimana sebagian komponen
larut pada fase pertama dan sebagiannya lagi larut pada fase
kedua. Kedua fase yang mengandung zat terdispersi dikocok,
lalu didiamkan sampai terjadi pemisahan sempurna dan
terbentuk dua lapisan fase zat cair. Komponen kimia akan
terpisah ke dalam dua fasa tersebut sesuai dengan tingkat
kepolarannya dengan perbandingan konsentrasi yang tetap
(Sudjadi, 1986). Ekstraksi cair-cair dilakukan dengan cara
pemisahan komponen kimia diantara 2 fase pelarut yang
tidak saling bercampur. Dimana sebagian komponen larut
pada fase pertama, dan sebagian larut pada fase kedua. Lalu
kedua fase yang mengandung zat terdispersi dikocok, dan
didiamkan sampai terjadi pemisahan sempurna dan terbentuk
dua lapisan. Yakni fase cair dan komponen kimia yang
terpisah.
b. Ekstraksi padat-cair
Pemindahan komponen dari padatan ke pelarut pada
ekstraksi padat-cair melalui tiga tahapan, yaitu difusi pelarut
ke pori-pori padatan atau ke dinding sel, di dalam dinding sel
terjadi pelarutan padatan oleh pelarut, dan tahapan terakhir
adalah pemindahan larutan dari pori-pori menjadi larutan
ekstrak. Ekstraksi padatcair dipengaruhi oleh waktu ekstraksi,
suhu yang digunakan, pengadukan, dan banyaknya pelarut
yang digunakan. Terdapat dua macam ekstraksi padat-cair,

19
yaitu dengan cara sokhlet dan perkolasi dengan atau tanpa
pemanasan.Metode lain yang lebih sederhana dalam
mengekstrak padatan adalah dengan mencampurkan seluruh
bahan dengan pelarut, lalu memisahkan larutan dengan
padatan tak terlarut
2.2.1.1 Soxhletasi
Sokletasi merupakan proses ekstraksi yang
menggunakan penyarian berulang dan pemanasan.
Penggunaan metode sokletasi adalah dengan cara
memanaskan pelarut hingga membentuk uap dan
membasahi sampel. Pelarut yang sudah membasahi
sampel kemudian akan turun menuju labu
pemanasan dan kembali menjadi uap untuk
membasahi sampel, sehingga penggunaan pelarut
dapat dihemat karena terjadi sirkulasi pelarut yang
selalu membasahi sampel. Proses ini sangat baik
untuk senyawa yang tidak terpengaruh oleh panas.
2.2.1.2 Ekstraksi cair-cair (Partisi)
Merupakan suatu metode ekstraksi yang
menggunakan corong pisah sehingga biasa juga
disebut dengan ekstraksi corong pisah. Ekstraksi
cair-cair (corong pisah) merupakan pemisahan
komponen kimia diantara dua fase pelarut yang
tidak dapat saling bercampur dimana sebagian
komponen larut pada fase pertama dan sebagiannya
lagi larut pada fase kedua. Ekstraksi cair-cair
merupakan metode ekstraksi yang didasarkan pada
sifat kelarutan komponen target dan distribusinya
dalam dua pelarut yang tidak saling bercampur.
Ektraksi cair-cair ditentukan oleh distribusi Nerst
atau hukum partisi yang menyatakan bahwa pada
konsentrasi dan tekanan yang konstan, analit akan

20
 terdistribusi dalam proporsi yang selalu sama
diantara dua pelarut yang saling tidak campur.
Syarat pelarut untuk ekstraksi cair-cair adalah
memiliki kepolaran yang sesuai dengan bahan yang
diekstraksi (Khopkar, 2000).
2.2.2 Fraksinasi

Fraksinasi merupakan prosedur pemisahan yang bertujuan

memisahkan golongan utama kandungan yang satu dari
kandungan yang lain. Senyawa yang bersifat polar akan masuk ke
pelarut polar dan senyawa non polar akan masuk ke pelarut non
polar (Harborne, 1996). Metode fraksinasi yang digunakan dalam
penelitian ini adalah menggunakan kromatografi kolom. Kolom
diisi dengan penyerap padat sebagai fase tetap dan dialiri dengan
pelarut sebagai fase gerak. Cuplikan yang akan difraksi
dimasukan ke dalam kolom dan dialiri fase gerak yang akan
membentuk jalur-jalur serapan dari senyawa. Bila pelarut
dibiarkan mengalir melalui kolom, ia akan mengangkut senyawa-
senyawa yang merupakan komponen-komponen dari campuran.
Pemisahan komponen suatu campuran tergantung pada tingkat
kepolaran dari fase gerak dan senyawa yang terkandung dalam
campuran tersebut. Fraksinasi merupakan proses pemisahan
komponen-komponen dalam ekstrak berdasarkan tingkat
kepolarannya. Fraksinasi dapat dilakukan dengan kromatografi
cair vakum (KCV), kromatografi kolom (KK), size-exclution
chromatography (SEC), solid-phase extraction (SPE).
2.2.2.1 Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi merupakan pemisahan suatu senyawa
yang didasarkan atas perbedaan laju perpindahan dari
komponen-komponen dalam campuran. Pemisahan
dengan metode kromatografi dilakukan dengan cara
memanfaatkan sifat-sifat fisik dari sampel, seperti
kelarutan, adsorbsi, keatsirian dan kepolaran. Kelarutan

21
merupakan kecenderungan molekul untuk melarut dalam
cairan. Adsorpsi penjerapan adalah kecenderungan
molekul untuk melekat pada permukaan serbuk halus.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan kromatograsi
kolom pada prinsipnya sama. Apabila suatu cuplikan
yang merupakan campuran dari beberapa komponen yang
diserap lemah oleh adsorben akan keluar lebih cepat
bersama eluen, sedangkan komponen yang diserap kuat
akan keluar lebih lama (Hostettman,1995). KLT
merupakan suatu teknik pemisahan dengan menggunakan
adsorben (fase stasioner) berupa lapisan tipis seragam
yang disalutkan pada permukaan bidang datar berupa
lempeng kaca, pelat aluminium, atau pelat plastik.
Pengembangan kromatografi terjadi ketika fase gerak
tertapis melewati adsorben (Deinstrop, Elke H,2007 ).
Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan
banyaknya komponen dalam campuran, identifikasi
senyawa, memantau berjalannya suatu reaksi,
menentukan efektifitas pemurnian, menentukan kondisi
yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta untuk
memantau kromatografi kolom, melakukan screening
sampel untuk obat.
Senyawa yang berinteraksi lemah dengan fase diam
akan bergerak lebih cepat melalui sistem kromatografi.
Senyawa dengan interaksi yang kuat dengan fase diam
akan bergerak sangat lambat. Penggunaan umum
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) adalah untuk
menentukan banyaknya komponen dalam campuran,
identifikasi senyawa, memantau berjalannya suatu reaksi,
menentukan efektifitas pemurnian, menentukan kondisi
yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta untuk
memantau kromatografi kolom, melakukan screening

22
 sampel untuk obat. Parameter pada KLT yang digunakan
untuk identifikasi adalah nilai Rf. Dua senyawa dikatakan
identik jika mempunyai nilai Rf yang sama jika diukur
pada kondisi KLT yang sama. Jarak pengembangan
senyawa pada kromatogram biasanya dinyatakan dengan
angka Rf atau hRf

Berikut ini merupakan urutan eluen pada kromatografi

berdasarkan kenaikan tingkat kepolarannya:

2.2.2.2

Gambar 2. Urutan Kepolaran Eluen

Kromatografi Kolom
Pada prinsipnya Kromatografi Kolom (KK) digunakan
untuk pemisahan campuran beberapa senyawa yang
diperoleh dari isolasi tumbuhan. Dengan menggunakan
fase padat dan fasa cair maka fraksi-fraksi senyawa akan
menghasilkan kemurnian yang cukup tinggi. Teknik KK,
pada dasarnya sama dengan KCV, yaitu merupakan
kromatografi cair-adsorpsi, hanya saja KK dilakukan
pada sistem yang bekerja pada kondisi normal tanpa
vakum. Waktu yang dibutuhkan dalam pelaksanaannya

23
 lebih lama, namun diharapkan akan mendapat hasil
dengan pemisahan yang lebih baik dan lebih murni.

2.2.3 Skrinning Fitokimia

Dalam kajian farmakologi tentang pengujian komponen
farmaka dalam simplisia lahan sediaan obat erat kaitannya dengan
uji fitokimia pada suatu sampel yang pada dasarnya adalah
mengetahui golongan senyawa kimia yang terkandung dalam
sediaan bahan obat tersebut.Tujuan utama dari penapisan
fitokimia adalah menganalisis tumbuhan untuk mengetahui
kandungan bioaktif yang berguna untuk pengobatan. Fitokimia
atau kimia tumbuhan merupakan disiplin ilmu yang mempelajari
aneka ragam senyawa organik pada tumbuhan, yaitu mengenai
struktur kimia, biosintesis, metabolism, penyebaran secara ilmiah
dan fungsi biologisnya. Pendekatan secara penapisan fitokimia
meliputi analisis kualitatif kandungan dalam tumbuhan atau
bagian tumbuhan (akar, batang, daun, bunga, buah dan biji)
terutama kandungan metabolit sekunder yang merupakan senyawa
bioaktif seperti alkaloid, flavonoid, glikosida, terpenoid, saponin,
tanin dan polifenol.
Pada tahun terakhir ini fitokimia atau kimia tumbuhan telah
berkembang menjadi satu disiplin ilmu tersendiri, berada diantara
kimia organik bahan alam dan biokimia tumbuhan, serta berkaitan
dengan keduanya. Bidang perhatiannya adalah aneka ragam
senyawa organik yang dibentuk dan ditimbun oleh tumbuhan,
yaitu mengenai struktur kimianya, biosintesisnya, perubahan serta
metabolismenya, penyebarannya secara ilmiah dan fungsi
biologisnya.
Metode yang dilakukan untuk melakukan penapisan fitokimia
harus memenuhi beberapa persyaratan antara lain: sederhana,
cepat, dapat dilakukan dengan peralatan minimal, selektif
terhadap golongan senyawa yang dipelajari, semikualitatif dan

24
dapat memberikan keterangan tambahan ada atau tidaknya
senyawa tertentu dari golongan senyawa yang dipelajari.
2.2.3.1 Identifikasi Alkaloid
Alkaloid adalah suatu golongan senyawa organik yang
banyak ditemukan di alam. Hampir seluruh senyawa
alkaloid berasal dari tumbuh- tumbuhan dan tersebar
dalam berbagai jenis tumbuhan. Alkaloid adalah suatu
golongan senyawa yang tersebar luas hampir pada semua
jenis tumbuhan. Semua alkaloid mengandung paling
sedikit satu atom nitrogen yang biasanya bersifat basa dan
membentuk cincin heterosiklik. Sifat basa tersebut
tergantung adanya pasangan elektron pada nitrogen.
Kebasaan alkaloid tergantung pada pasangan elektron
bebas pada atom nitrogen mereka (Kakhia, 2012 : 9).
a) Pereaksi Mayer

Alkaloid mengandung atom nitrogen

yang mempunyai pasangan elektron bebas
sehingga dapat digunakan untuk
membentuk ikatan kovalen koordinat
dengan ion logam (McMurry, 2004). Pada
uji alkaloid dengan pereaksi Mayer, atom
nitrogen pada alkaloid akan bereaksi
dengan ion logam K+ dari kalium
tetraiodomerkurat II) membentuk
kompleks kalium-alkaloid yang
mengendap.

25
 Gambar 3. Reaksi Uji Alkaloid Mayer

b) Pereaksi Wagner
Hasil positif alkaloid pada uji Wagner ditandai
dengan terbentuknya endapan coklat muda sampai
kuning. Diperkirakan endapan tersebut adalah kalium-
alkaloid. Pada pembuatan pereaksi Wagner, iodin
bereaksi dengan ion I- dari kalium iodida
menghasilkan ion I3- yang berwarna coklat. Pada uji
Wagner, ion logam K+ akan membentuk ikatan
kovalen koordinat dengan nitrogen pada alkaloid
membentuk kompleks kalium-alkaloid yang
mengendap.

Gambar 4. Reaksi Uji Alkaloid Wagner

c) Pereaksi Dragendroff
Uji alkaloid dengan pereaksi dragendrof dikatakan
positif ditandai dengan endapan jingga-merah.
Endapan tersebut adalah kalium-alkaloid. Pada uji ini
nitrogen pada alkaloid digunakan untuk membentuk

26
 ikatan kovalen koordinat dengan kalium yang
merupakan ion logam.

Gambar 5. Reaksi Uji Alkaloid Dragendroff

2.2.3.2 Identifikasi Triterpenoid/Steroid

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya
berasal dari enam satuan isoprene dan secara biosintesis
diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik yaitu skualen.
Senyawa ini berstruktur siklik yang nisbi rumit,
kebanyakan berupa alkohol, aldehid atau asam
karboksilat. Secara kimia, terpenoid umumnya larut
dalam lemak dan terdapat didalam sitoplasma sel
tumbuhan. Biasanya diekstraksi memakai petrolium eter,
eter atau kloroform dan dapat dipisahkan secara
kromatografi pada silika gel dengan pelarut ini. Uji yang
banyak digunakan adalah Lieberman-Buchard anhidrida
asetat- H2SO4 pekat yang dengan kebanyakan triterpen
dan sterol memberikan warna hijau biru. Sterol satu
steroid adalah triterpenoid yang kerangka dasarnya
cincin siklopentana perhidrofenantren. Senyawa sterol
pada tumbuhan disebut dengan fitosterol, yang umumnya
terdapat pada tumbuhan tinggi adalah sitosterol,
stigmasterol, dan kampesterol.
Senyawa triterpenoid/steroid akan mengalami
dehidrasi dengan penambahan asam kuat dan membentuk
garam yang memberikan sejumlah reaksi warna

27
 (Mukhlish, 2010). Adapun reaksi perkiraan uji
terpenoid/steroid berikut ini :

Gambar 6. Reaksi Uji Triterpenoid dan Streroid

2.2.3.3 Identifikasi Flavanoid

Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai
campuran, jarang sekali dijumpai, hanya flavonoid
tunggal dalam jaringan tumbuhan. Disamping itu, sering
terdapat campuran yang terdiri atas flavonoid yang
berbeda kelas. Penggolongan jenis flavonoid dalam
jaringan tumbuhan mula- mula didasarkan pada telaah
sifat kelarutan dan reaksi warna. Kemudian diikuti
dengan pemeriksaan ekstrak tumbuhan yang telah
dihidrolisis secara kromatografi. Flavonoid umumnya
terikat pada gula sebagai glukosida dan aglikon
flavonoid. Uji warna yang penting dalam larutan alkohol
ialah direduksi dengan serbuk Mg dan HCl pekat.
Diantara flavonoid hanya flavalon yang menghasilkan
warna merah ceri kuat

28
 Gambar 7. Reaksi Uji Flavanoid

2.2.3.4 Identifikasi Tanin

Tanin adalah senyawa organik yang terdiri dari
campuran senyawa polifenol kompleks, dibangun dari
elemen C, H, dan O serta sering membentuk molekul
besar dengan berat molekul lebih besar dari 2000. Tanin
yang terdapat pada kulit kayu dan kayu dapat berfungsi
sebagai penghambat kerusakan akibat serangan serangga
dan jamur, karena memiliki sifat antiseptik . Dari struktur
kimianya, tanin dapat digolongkan menjadi dua macam,
yaitu tanin terhidrolisis dan tanin terkondensasi.
Identifikasi Tanin dapat dilakukan dengan cara:
1. Diberikan larutan FeCl3, berwarna biru tua/hijau
violet/hitam kehijauan.
2. Ditambahkan Kalium Ferrisianida + amoniak,
berwarna coklat.
3. Diendapkan dengan garam Cu, Pb, Sn dan larutan
Kalium Bikromat, berwarna coklat.

29
 Gambar 8. Reaksi Uji Tanin

2.2.3.5 Identifikasi Saponin

Saponin merupakan triterpena atau steroid yang
terutama terdapat sebagai glikosida. Saponin
merupakansenyawa aktif permukaan dan bersifat seperti
sabun, dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya
membentuk busa dan menghemolisis sel darah. Sifat-
sifat Saponin:
1) Mempunyai rasa pahit.
2) Dalam larutan air membentuk busa yang stabil.
3) Menghemolisa eritrosit.
4) Merupakan racun kuat untuk ikan dan amfibi.
5) Membentuk persenyawaan dengan kolestrol dan
hidroksistreroid lainnya.
6) Sulit dimurnikan dan diidentifikasi.
7) Berat molekul relative tinggi, dan analisa hanya
menghasilkan formula empiris yang mendekati.

Uji saponin yang sederhana ialah dengan mengocok

ekstrak alkohol- air daritumbuhan dalam tabung reaksi,

30
 kemudian amati apakah ada busa tahan lama pada
permukaan cairan. Timbulnya busa menunjukkan adanya
glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk buih
dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa
lainnya ( Marliana, dkk; 2005).

Gambar 9. Reaksi Uji Saponin

2.2.3.6 Identifikasi Kuinon

Kuinon adalah senyawa berwarna dan mempunyai
kromofor dasar seperti kromofor pada benzokuinon, yang
terdiri atas dua gugus karbonil yang berkonjugasi dengan
dua ikatan rangkap karbon- karbon. Untuk tujuan
identifikasi, kuinon dapat dipulih menjadi empat
kelompok : benzokuinon, naftokuinon, antrakuinon, dan
kuinon isoprenoid. Tiga kelompok pertama biasanya
terhidroklisasi dan bersifat senyawa fenol serta mungkin
terdapat in vivo dalam bentuk gabungan dengan gula
sebagai glikosida atau dalam bentuk kuinol. Untuk
memastikan adanya suatu pigmen termasuk kuinon atau
bukan, reaksi warna sederhana masi tetap berguna.
Reaksi yang khas ialah reduksi bolak balik yang
mengubah kuinon menjadi senyawa tanwarna, kemudian
warna kembali lagi bila terjadi oksidasi oleh udara.

31

Gambar 10. Reaksi Uji Kuinon

2.2.4 Analisis Total Komponen Bioaktif
Ada dua cara untuk menetukan kandungan fenol suatu
sampel. Pertama, dengan metode Folin Ciocalteu (FC), yang
merupakan metode yang paling umum digunakan untuk
menetukan fenol total. Hasil yang didapatkan adalah estimasi
kandungan fenol total. Alternatif lainnya adalah dengan teknik
identifikasi dan karakterisasi masing-masing senyawa fenol,
seperti dengan teknik Thin layer chromatography, Liquid
cromatography, dan gas cromatography. Hasil yang didapatkan
adalah jenis-jenis fenol yang dikandung, kuantitas masing-
masing, dankadar totalnya.
Nilai yang didapat dari metode teknik identifikasi dan
karakterisasi dengan kromatografi biasanya lebih rendah
daripada yang diestimasi dengan metode FC. Salah satu
alasannya adalah beberapa polifenol dapat lolos dalam
determinasi oleh kromatografi. Hal ini dapat berupa senyawa
yang tidak diketahui, senyawa yang muncul sebagai sisa-sisa
yang tidak dipertimbangkan dalam kromatografi, atau senyawa
yang tidak dapat dipisahkan oleh kromatografi,
contohnya seperti polifenol teroksidasi. dan
polimerproantosianidin.
Kadar total senyawa fenolat dapat ditentukan secara
spektrofotometri dengan menggunakan metode Folin-Ciocalteu
dan sebagai pembanding digunakan asam galat. Kandungan
fenolat total dalam tumbuhan dinyatakan dalam GAE (gallic acid
equivalent) yaitu jumlah kesetaraan miligram asam galat dalam 1
gram sampel. Dalam penelitian ini dipilih metode Folin-

32
Ciocalteu dengan pertimbangan bahwa teknik ini lebih murah
dan sederhana cara pengerjaannya.
Prinsip metode Folin-Ciocalteu adalah reaksi oksidasi dan
reduksi kolorimetrik untuk mengukur semua senyawa fenolik
dalam sampel uji. Pereaksi Folin-Ciocalteu merupakan larutan
kompleks ion polimerik yang dibentuk dari asam fosfomolibdat
dan asam heteropolifosfotungstat. Pereaksi ini terbuat dari air,
natrium tungstat, natrium molibdat, asam fosfat, asam klorida,
litium sulfat, dan bromin (Folin dan Ciocalteu, 1944). Pada
kenyataannya reagen ini mengandung rangkaian polimerik yang
memiliki bentukan umum dengan pusat unit tetrahedral fosfat
(PO4)3- yang dikelilingi oleh beberapa unit oktahedral asam-
oksi molibdenum. Struktur tungsten dapat dengan bebas
bersubstitusi dengan molibdenum.
Prinsip metode Folin-Ciocalteu adalah oksidasi gugus fenolik
hidroksil. Pereaksi ini mengoksidasi fenolat (garam alkali),
mereduksi asam heteropoli menjadi suatu kompleks
molibdenum-tungsten (Mo-W). Fenolat hanya terdapat pada
larutan basa, tetapi pereaksi Folin-Ciocalteu dan produknya tidak
stabil pada kondisi basa. Selama reaksi belangsung, gugus
fenolik-hidroksil bereaksi dengan pereaksi Folin-Ciocalteu,
membentuk kompleks fosfotungstat-fosfomolibdat berwarna biru
dengan struktur yang belum diketahui dan dapat dideteksi
dengan spektrofotometer. Warna biru yang terbentuk akan
semakin pekat setara dengan konsentrasi ion fenolat yang
terbentuk, artinya semakin besar konsentrasi senyawa fenolik
maka semakin banyak ion fenolat yang akan mereduksi asam
heteropoli sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat
(Singleton dan Rossi, 1965).

33
 Gambar 11. Reaksi Uji Total Fenolik

2.2.5 Uji Aktivitas Antioksidan

2.2.5.1 Metode BCB (-Carotene Bleaching Method)

Metode carotene bleaching atau sering dikenal metode

-karoten-asam linoleat merupakan metode untuk
mengevaluasi aktivitas antioksidan berdasarkan pada
kemampuan antioksidan untuk mencegah peluruhan
warna jingga karoten akibat oksidasi dalam sistem emulsi
minyak dan karoten. Dalam pengujian aktivitas
antioksidan dengan metode carotene bleaching digunakan
bahan-bahan utama, seperti beta karoten sebagai indikator
aktivitas antioksidan, minyak sebagai sumber radikal
bebas, dan senyawa antioksidan sampel sebagai
penghambat reaksi oksidasi. Pada uji aktivitas
antioksidan dengan menggunakan metode -karotenasam
linoleat, radikal bebas terbentuk dari hidroperoksid yang
dihasilkan oleh asam linoleat. Radikal bebas asam
linoleat terbentuk karena pengurangan atom hidrogen dari
satu gugus metilen dialil yang menyerang ikatan rangkap
pada beta karoten sehingga terjadi oksidasi beta karoten
yang menyebabkan hilangnya gugus kromofor yang
memberi warna orange. Perubahan warna ini dapat diukur
secara spektrofotometri. Panjang gelombang maksimum

34
 (maks) yang digunakan dalam pengukuran metode -
karoten-asam linoleat menurut literatur adalah 470 nm.
Lama pengukuran metode -karoten-asam linoleat
menurut literatur yang direkomendasikan adalah 0 menit
sampai 120 menit dengan interval waktu 15 menit.
2.2.5.2 Metode Pemerangkapan Radikan Bebas DPPH 1,1-
diphenyl-2- picrylhydrazil)
DPPH pertama kali ditemukan pada tahun 1922 oleh
Goldschmidt dan Renn. DPPH berwarna ungu pekat
seperti KMnO4, bersifat tidak larut dalam air (Ionita,
2005). DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil) merupakan
radikal bebas yang stabil pada suhu kamar dan sering
digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan
beberapa senyawa atau ekstrak bahan alam. DPPH
menerima elektron atau radikal hidrogen akan
membentuk molekul diamagnetik yang stabil. Interaksi
antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron
atau radikal hidrogen pada DPPH, akan menetralkan
karakter radikal bebas dari DPPH (Molyneux, 2004).
Struktur kimia DPPH dapat dilihat pada Gambar berikut

Gambar 12. Struktur DPPH

Metode DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil)

merupakan salah satu uji untuk menentukan aktivitas
antioksidan. Metode DPPH memberikan informasi
reaktivitas senyawa yang diuji dengan suatu radikal
stabil. DPPH memberikan serapan kuat pada panjang
gelombang 517 nm dengan warna violet gelap.

35
Pemerangkapan radikal bebas menyebabkan elektron
menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan
penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah
elektron yang diambil (Kuncahyo, 2007).Prinsipnya
adalah reaksi penangkapan hidrogen oleh DPPH dari zat
antioksidan dengan reaksi sebagai berikut:

Gambar 13. Reaksi Penangkalan Radikal DPPH

Ketika larutan DPPH dicampurkan dengan senyawa yang
dapat mendonorkan atom hidrogen, akan dihasilkan
bentuk tereduksi dari DPPH dan berkurangnya warna
ungu (Molyneux, 2004). Parameter yang dipakai untuk
menunjukan aktivitas antioksidan adalah harga
konsentrasi efisien atau Efficient Concentration (EC50)
atau Inhibitory Concentration (IC50) yaitu konsentrasi
suatu zat antioksidan yang dapat menyebabkan 50%
DPPH kehilangan karakter radikal atau konsentrasi suatu
zat antioksidan yang memberikan persen penghambatan
sebesar 50%. Zat yang mempunyai aktivitas antioksidan
tinggi, akan mempunyai harga EC50 atau IC50 yang
rendah. Metode ini akan memberikan hasil yang baik
dengan menggunakan pelarut metanol atau etanol dan
kedua pelarut ini tidak mempengaruhi dalam reaksi antara
sampel uji sebagai antioksidan dengan DPPH sebagai
radikal bebas (Molyneux, 2004).
Panjang gelombang maksimum (maks) yang digunakan
dalam pengukuran sampel uji sangat bervariasi. Menurut
beberapa literatur panjang gelombang maksimum untuk

36
 DPPH antara lain 515 nm, 516 nm, 517 nm, 518 nm, 519
nm dan 520 nm. Apabila pengukuran menghasilkan tinggi
puncak maksimum, maka itulah panjang gelombangnya
yaitu sekitar panjang gelombang yang disebutkan di atas.
Nilai absorbansi yang mutlak tidaklah penting, karena
panjang gelombang dapat diatur untuk memberikan
absorbansi maksimum sesuai dengan alat yang digunakan
(Molyneux, 2004).

2.2.6 Uji Toksisitas

Toksisitas adalah sifat relatif toksikan berkaitan dengan
potensinya mengakibatkan efek negatif bagi makhluk hidup.
Sifat relatif ini merupakan fungsi dari konsentrasi dan durasi
pemaparan toksikan. Sebagai sifat relatif maka data toksisitas
dipakai sebagai perbandingan toksikan (Mangkoediharjo,
1999).
Uji toksisitas merupakan uji hayati yang berguna untuk
menentukan tingkat toksisitas dari suatu zat atau bahan
pencemar dan digunakan juga untuk pemantauan rutin suatu
limbah. Uji toksisitas akut dengan menggunakan hewan uji
merupakan salah satu bentuk penelitian toksikologi perairan
yang berfungsi untuk mengetahui apakah effluent atau badan
perairan penerima mengandung senyawa toksik dalam
konsentrasi yang menyebabkan toksisitas akut. Parameter yang
diukur biasanya berupa kematian hewan uji, yang hasilnya
dinyatakan sebagai konsentrasi yang menyebabkan 50%
Kematian hewan uji (LC50) dalam waktu yang relatif pendek
satu sampai empat hari (Husni dan Esmiralda, 2010).
Sebelum percobaan toksisitas dilakukan, sebaiknya telah ada
data mengenai identifikasi, sifat obat, dan rencana
penggunaannya. Data ini dapat dipakai untuk mengarahkan
percobaan toksisitas yang akan dilakukan untuk meneliti

37
berbagai efek yang berhubungan dengan cara dan waktu
pemberian suatu sediaan obat.
Pengujian toksisitas biasanya dibagi menjadi tiga kelompok,
yaitu:
1. Uji toksisitas akut
Uji ini dilakukan dengan memberikan zat kimia yang
sedang diuji sebanyak satu kali atau beberapa kali dalam
jangka waktu 24 jam.
2. Uji toksisitas jangka pendek (subkronis)
Uji ini dilakukan dengan memberikan zat kimia tersebut
berulang-ulang, biasanya setiap hari, atau lima kali
seminggu, selama jangka waktu kurang lebih 10% masa
hidup hewan.
3. Uji toksisitas jangka panjang (kronis)
Percobaan jenis ini mencakup pemberian zat kimia secara
berulang selama 3-6 bulan atau seumur hidup hewan.
Uji toksisitas digunakan untuk mengevaluasi besarnya
konsentrasi toksikan dan durasi pemaparan yang dapat
menimbulkan efek toksik pada jaringan biologis. Salah satu
biota yang dapat digunakan untuk uji toksisitas adalah ikan,
dengan syarat harus mempunyai kepekaan tinggi, memenuhi
syarat umur, berat, dan panjang, serta sesuai dengan ikan yang
hidup diperairan yang telah dalam keadaan tercemar (Pararaja,
2008 diacu oleh Pratiwi, dkk., 2012). Toksisitas akut adalah
efek total yang didapat pada dosis tunggal/multiple dalam 24
jam pemaparan. Toksisitas akut sifatnya mendadak, waktu
singkat,biasanya reversibel, yang secara statistik dapat
menyebabkan kematian 50% dari hewan percobaan, dinyatakan
dengan LC50. Nilai LC50 sangat berguna untuk menentukan
klasifikasi zat kimia sesuai dengan toksisitas relatifnya. Kriteria
derajat toksisitas (Lu, 1995 dalam Retnomurti, 2008) dapat
dilihat pada Tabel berikut

38
 Tabel 2. Derajat Toksisitas

Lethal Concentration (LC50) merupakan konsentrasi yang

menyebabkan kematian sebanyak 50% dari organisme uji yang
dapat diestimasi dengan grafik dan perhitungan, pada suatu
waktu pengamatan tertentu, misalnya LC50 48 jam, LC50 96
jam (Dhahiyat dan Djuangsih 1997 diacu oleh Rossiana 2006)
sampai waktu hidup hewan uji. Brine Shimp Lethality Test
(BSLT) merupakan salah satu metode uji toksisitas yang
banyak digunakan dalam penelusuran senyawa bioaktif yang
toksik dari bahn alam. Metode ini menunjukkan aktifasi
farmakologis yang luas, tidak spesifik dan dimanifestasikan
sebagai toksisitas senyawa terhadap larva udang (Artemia
Salina Leach).
Metode ini dapat dilakukan dengan cepat, murah, mudah
dan cukup reproduksibel sehingga dapat digunakan sebagai
bioassay Guided Isolation yaitu isolasi komponen kimia
berdasarkan aktifitas yang ditunjukkan oleh bioessay tersebut.
Dengan mengetahui aktifitas dari suatu kelompok komponen
kimia (fraksi), dapat dilakukan isolasi senyawa sehingga
diperoleh senyawa tunggal aktif.Toksisitas diukur dengan
mengamati kematian pada hewan coba. Kematian hewan coba
dianggap sebagai respon dengan menggunakan kematian
sebagai jawaban toksik adalah titik awal untuk mempelajari
toksisitas. Median Lethal Dosis (LD50) adalah dosis dari

39
 sample yang diuji yang mematikan 50% dari hewan coba,
sedangkan Median Lethal Concentration LC50 adalah
konsentrasi sample yang diuji yang dapat mematikan 50% dari
hewan coba. Angka kematian dari hewan percobaan dihitung
sebagai Median Lethal Dosis (LD50) atau median Letal
Concentration (LC50). Penggunaan LC50 dimaksudkan untuk
pengujian ketoksikan dengan perlakuan terhadap hewan coba
secara inhalasi atau dengan media air (Anonim,2011).
2.3 Spektrofotometer UV-VIS

Spektrofotometri UV-Vis adalah teknik spektroskopik yang

menggunakan sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat
(190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm). (Mulja dan
Suharman, 1995). Serapan cahaya oleh molekul dalam daerah
spektrum ultraviolet tergantung pada struktur elektronik dari
molekul. Spektra ultraviolet dari senyawa-senyawa organik
berkaitan erat transisi-transisi diantara tingkatan-tingkatan tenaga
elektronik. Hal ini dikarenakan serapan radiasi ultraviolet/terlihat
sering dikenal sebagai spektroskopi elektronik. Dalam praktek,
spektrofotometri ultraviolet digunakan terbatas pada sistem-sistem
terkojugasi (Sastrohamidjojo, 2004). Spektrofotometri ultraviolet
adalah suatu gambar antara panjang gelombang atau frekuensi
serapan lawan intensitas serapan (transmitasi atau absorbansi).
Sering juga data ditunjukkan sebagai gambar grafik atau tabel
yang menyatakan panjang gelombang lawan serapan molar atau
log dari serapan molar, Emax atau log Emax (Sastrohamidjojo,
2004).

40
 BAB III METEDOLOGI PENELITIAN

3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Pusat Laboratorium Terpadu (PLT) lantai 3

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta sejak
3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

Alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu peralatan

soxhletasi, evaporator, corong pisah, tabung vial, plat KLT, piala
gelas,kromatografi kolom, timbangan digital, tabung ulir, labu ukur
dan spektrofotometer UV-VIS
3.2.2 Bahan

Bahan yang digunakan adalah bahan uji dan bahan kebutuhan

kimia lain yang digunakan. Bahan uji yang digunakan adalah
tanaman karsen atau disebut juga tanaman ceri. Bagian tanaman
yang digunakan adalah bagian daun. Tanaman ini didapatkan di
daerah ciledug.
Untuk bahan kimia yang digunakan pada penelitian ini yaitu n-
heksana, metanol, diklorometana, silika gel, DPPH, pereaksi
wagner, pereaksi mayer, pereaksi dragendroff, reagen liberman-
buchard, aquades, besi klorida, HCl 2%, NaOH 2N, serbuk Mg,
HCl pekat, reagen folin ciocalteu 50%, natrium karbonat 20%,
natrium nirat 5%, alumunium klorida 10%, telur udang dan
DMSO.

41
 3.3 Prosedur Kerja Daun Ceri

3.3.1 Ekstraksi Simplisia

Simplisa kering Dikeringkan

Dicacah

+ Metanol
Ampas 300 ml Ekstrak

Diekstraksi 4 jam

Ekstrak Pekat

Dievaporasi

Corong Pisah
Dipartisi cair
+ Metanol 25 ml

+n-heksana 50 ml
Lapisan Bawah Lapisan Atas
(metanol) Dikocok (n-heksana)

+ n-heksana 50 ml
Dikocok

42
 Lapisan Bawah (metanol)

Lapisan Bawah Lapisan Atas

(metanol) + n- (n-heksana)
heksana 50 ml
Dikocok

Ekstrak pekat (metanol) Ekstrak Pekat (n-heksan)

Dievaporator

Lapisan Atas (n-heksana)

Lapisan Bawah (metanol)

43
 3.3.2 Kromatografi Lapis Tipis

Ekstrak Pekat (n-heksan)

+ Metanol 5 tetes
Ditotolkan

Plat KLT Dimasukkan

Heksan:diklorometana Heksan:diklorometana Heksan:diklorometana

(3:7) (5:5) (7:3)
Diamati

Pemisahahan terbaik
(7:3)

44
 3.3.3 Kromatografi Lapis Tipis

Ekstrak Pekat (n-heksan)

10 gram
+ 50 ml metanol
Didiamkan
60 Residu
Filtrat Disaring

Diuji

Alkaloid Triterpenoid Flavanoid Fenolik Saponin Tanin/

/ Hidrokuinon polifenol
steroid

Busa dan Cincin coklat Larutan Busa dan Larutan hijau

larutan (+ triterpenoid) merah stabil (+) kehitman
(+)
orange (+) & larutan hijau (+tannin) dan
(+steroid) larutan kebiruan
(+polifrenol)
+ 2 ml filtrate +2 ml filtrate +2 ml filtrat + 2 ml filtrat
+ serbuk Mg + 10 ml + NaOH 2N +FeCl3
+ 10 tetes HCl liberman-bucard

10 ml filtrat
+ 10 ml kloroform

45
+10 tetes ammon +0,5 ml HCl 5%

Fraksi
kloroform

Dragendrof: Endapan jingga-

merah (+)
Wagner: Endapan coklat (+)

Mayer: Endapan putih-kuning (+)

46
3.3.4 Kromatografi Kolom

Silika

Ditimbang

1.000 gram 0.1000 gram

+0.1 gram ekstrak

+aseton Kolom
Impregnasi + n-heksana secukupnya
(Bubur)

Kolom

+ n-heksana 10 ml
Tabung Vial Diitampung

+ n-heksana : diklorometana
Tabung Vial Ditampung

Diuapkan
+ metanol
KLT Dilakukan

47
3.3.5 Uji Antioksidan
3.3.5.1 Metode Bioautografi dengan DPPH
Ekstrak n-heksana

+ metanol (larut)
Ditotolkan pada plat

Dimasukkan dalam chamber

+ n-heksan:diklorometan (7:3)

Bercak kuning (+antioksidan)

Dikering-anginkan
Disemprot DPPH

25 mg sampel

3.3.5.2 Larutan induk 1000 ppm Metode DPPH

Free Radical Scavenger

+25 ml metanol (1000 ppm)

48
 + 2ml DPPH
Divortex
Diinkubasi 30 menit
Diukur absorbansi (UV-VIS)

500 250 100 50 ppm 25 ppm 10 ppm

ppm ppm ppm

Dihitung nilai inhibisinya

49
3.3.6. Uji Toksisitas
3.3.6. Penetasan Telur A.salina Leach

Wadah

+ NaOH 1N(pH 8,5)

+ telur udang
Ditutup alumunium foil
Disimpan dibawah sinar lampu (48jam)
Larva siap

3.3.6.2 Penentuan Range Konsentrasi

100 mg ekstrak

+ 1 ml DMSO
+ air laut
Labu ukur 100 ml

1000 100 10 ppm

ppm ppm

Botol
vial

50
 Botol
vial

+ 5 ml air laut
+ 10 ekor larva udang
Dibiarkan 24 jam (dibawah sinar)
Dihitung

Dicari nilai
LC50

3.3.6.3 Penentuan Fixed Konsentrasi

1000 100 10 ppm

ppm ppm

Deret Deret Deret Deret Deret Deret Deret

1 2 3 4 5 6 7

51
 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Penyiapan Bahan

Tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah Muntingia

calabura linn. Bagian tanaman ceri yang digunakan adalah bagian daun.
Tanaman tersebut diperoleh dari daerah Ciledug. Daun Karsen yang biasa
disebut daun ceri dilakukan proses perlakuan awal (pre-treatment) bahan
terlebih dahulu. Daun ceri tersebut dilakukan proses pengeringan dan
dilanjutkan dengan proses pencacahan. Dilakukan proses pengeringan
yang bertujuan untuk mengurangi kadar air sehingga simplisia tersebut
dapat disimpan dalam waktu lama. Proses pengeringan yang dilakukan
pada penelitian ini dengan cara pengeringan alamiah yaitu pengeringan
dengan diangin-anginkan tanpa menggunakan panas atau sinar matahari.
Hal ini bertujuan menghindari terjadinya kerusakan senyawa yang
terkandung akibat pemanasan dan meminimalisir terjadinya kehilangan
senyawa yang mudah menguap. Perlakuan selanjutnya yaitu proses
pencacahan yang merupakan proses pengecilan ukuran bahan dengan
menggunakan suatu alat seperti pisau untuk mendapatkan ukuran yang
lebih kecil dan tipis. Tujuan pencacahan yaitu untuk memperkecil ukuran
bahan dan memperluas permukaan daun sehingga kontak antara pelarut
dengan partikel tanaman semakin besar dan proses ektraksi semakin
maksimal.
4.2 Ekstraksi Bahan

Simplisia daun kering sebanyak 20 gram diekstraksi dengan metode

sokletasi menggunakan pelarut metanol sebanyak 300 ml dalam labu
destilasi 500 ml. Proses ektraksi dilakukan selama 4 jam dan dengan 22
siklus. Tujuan dari proses ekstraksi adalah untuk menarik semua
komponen kimia yang terdapat didalam sampel. Proses ekstraksi ini
dihentikan ketika pelarut metanol sudah tidak memberikan warna atau
pelarut metanol sudah berubah menjadi bening. Hal ini disebabkan karena

52
telah terekstraksi secara sempurna kandungan yang ada pada daun ceri
tersebut oleh metanol. Dilakukan pemekatan larutan dengan proses
evaporasi sehingga didapatkan ekstrak pekat metanol.
Selanjutnya dilakukan metode fraksinasi yaitu dengan cara partisi cair-
cair pada ekstrak metanol. Prinsip dari ektraksi cair-cair adalah pemisahan
senyawa berdasarkan tingkat kepolarannya menggunakan 2 pelarut yang
tidak saling bercampur. Dikenal dengan istilah like dissolve like artinya
senyawa akan larut dalam pelarut yang sesuai dengan kepolarannya.
Tujuan dari partisi cair-cair adalah untuk mendapatkan fraksi berdasarkan
kepolarannya. Pada penelitian ini ekstak daun sokletasi yang merupakan
hasil evaporasi dilakukan metode fraksinasi dengan cara partisi cair-cair.
Hasil evaporasi kemudian ditambah metanol yang kemudian ditambahkan
heksana lalu di kocok di corong pisah hingga didapatkan dua lapisan.
Lapisan atas merupakan n-heksana dan lapisan bawah merupakan metanol.
Fraksinasi dengan n-heksana dilakukan sampai n-heksana bening. Warna
bening menunjukan semua senyawa non-polar telah tertarik kedalam fraksi
n-heksana. Semua fraksi n-heksana ditampung dan dijadikan satu. Masing-
masing fraksi tersebut dievaporasi yang kemudian ektrak dari fraksi yang
digunakan (fraksi n-heksana) dilakukan skrinning fitokimia dan KLT.
Hasil evaporasi masing-masing fraksi dihitung %rendemen. Pada
penelitian ini yang digunakan fraksi n-heksana dan dihitung % rendemen
hasil ektraksi sokletasi dan % rendemen fraksi n-heksana.

Bobot ekstak metanol

%Rendemen= X 100
berat simplisia

No Pelarut Berta simplisia Berat ekstrak % Rendemen

(gram) (gram)
1 Metanol 20,000 3,000 15 %
2 N-heksana 20,000 2,000 10 %

Tabel 3. Hasil Rendemen Ekstrak Tanaman

53
4.3 Skrinning Fitokimia

Hasil ektrak n-heksana kemudian dilakukan uji fitokimia. Dimana uji

fitokimia ini adalah untuk mengetahui adanya kandungan metabolit
sekunder dalam tanamn. Uji fitokimia ini meliputi uji alkaloid, flavonoid,
triterpenoid dan streroid, fenolik hidrokuinolin, tannin/polifenol dan
saponin. Dilakukan preparasi sampel sebelum uji fitokimia, yaitu ekstrak
n-heksana hasil partisi cair-cair ditimbang 10 gram dan dilarutkan dalam
metanol dan kemudian dilakukan penyaringan. Filtart tersebut digunakan
untuk proses uji fitokimia.
4.3.1 Uji Alkaloid

Uji alkaloid digunakan 3 pereaksi yaitu pereaksi dragendrof,

wagner dan mayer. Sebelum ditambahkan pereaksi tersebut, filtrat
ditambahkan kloroform dan ammonia, lalu ditambahkan HCl yang
selanjutnya akan dibagi untuk 3 uji alkaloid diatas. Pertama
dilakukan uji dengan menggunakan pereaksi dragendrof. Uji
alkaloid dengan pereaksi dragendrof dikatakan positif ditandai
dengan endapan jingga-merah. Endapan tersebut adalah kalium-
alkaloid. Pembuatan pereaksi dragendroff yaitu bismuth nitrat
dilarutkan dengan HCl agar tidak terjadi hidrolisis yang disebabkan
oleh garam bismut. Karena garam bismuth mudah terhidrolisis

+ 3+
menjadi bismutil BiO . Supaya ion Bi tetap berada dalam

larutan, maka larutan tersbeut ditambah asam sehingga

3+
kesetimbangan akan bergeser kekiri. Selanjutnya ion Bi
dari

bismuth nitrat bereaksi dengan KI membentuk kalium

tetraiodobismutat. Pada uji ini nitrogen pada alkaloid digunakan
untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan kalium yang
merupakan ion logam.
Reaksi uji dengan dragendroff sebagai berikut

54
 Gambar 14. Hasil Reaksi Uji Alkaloid Dragendrof

Berdasarkan hasil uji alkaloid dengan pereaksi dragendroff

didapatkan hasil bahwa ekstrak daun ceri yaitu menghasilkan hasil
negatif karena tidak didapatkan perubahan larutan menjadi
endapan jingga-merah.
Selanjutnya uji alkaloid dengan pereaksi mayer dimana
berdasarkan literatur adanya alkaloid dalam tanaman ditandai
dengan terbentuknya endapan berwarna putih-kuning. Endapan
tersebut adalah kompleks kalium-alkaloid. Pada pembuatan reagen
mayer, larutan merkurium (II) klorida ditambahkan dengan KI
akan bereaksi membentuk endapan merah merkurium(II) iodide.
Jika KI yang ditambahkan berlebih maka akan terbentuk
tetraiodomerkurat(II) (Svhela,1990). Alkaloid memiliki atom
nitrogen yang mempunyai pasangan electron bebas sehingga dapat
digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion
logam (McMurry,2004). Reaksi dengan uji mayer adalah sebagai
berikut

Gambar 15. Hasil Reaksi Uji MAyer

55
 Berdasarkan hasil uji alkaloid dengan pereaksi mayer
didapatkan hasil bahwa ekstrak daun ceri yaitu tidak memberikan
hasil negatif karena tidak terbentuk endapan berwarna putih-
kuning. Sehingga pada ekstrak ini tidak mengandung golongan
alkaloid.
Selanjutnya uji alkaloid dengan pereaksi wagner dimana
berdasarkan literatur adanya alkaloid ditunjukan dengan
terbentuknya endapan coklat. Endapan tersebut merupakan
kompleks kalium-alkaloid. Pembuatan reagen wagner, iodin

berekasi dengan ion I dari KI menghasilkan ion I3 yang

berwarna coklat . Pada prinsip pembentukan reaksi ini sama

dengan dragendrof dan mayer yaitu pembentukan ikatan kovalen
koordinat sehingga membentuk kompleks yang mengendap. Reaksi
dengan reagen wagner sebagai berikut

Gambar 16. Hasil Reaksi Uji Wagner

Berdasarkan hasil uji alkaloid dengan pereaksi wagner

didapatkan hasil bahwa ekstrak daun ceri yaitu menghasilkan hasil
negatif dikarenakan tidak terbentuk endapan coklat. Jadi, untuk uji
alkaloid pada ekstrak daun ceri dengan semua pereaksi uji alkaloid
memberikan hasil negatif yang menyatakan bahwa dalam ektrak
daun ceri tidak ditemukan senyawa metabolit sekunder golongan
alkaloid.

56
4.3.2 Uji Flavanoid

Uji selanjutnya yaitu uji flavonoid yaitu menggunakan uji

wilstater yang menunjukan positif flavonoid ditandai dengan
terbentuknya buih dan endapan bening-orange. Magnesium dan
HCl pada uji ini bereaksi membentuk gelembung yang merupakan
adanya gas hidrogen. Logam Mg dan HCl pekat pada uji ini
berfungsi mereduksi inti benzopiron yang terdapat pada struktur
flavonoid sehingga terjadi perubahan warna menjadi jingga. Jika
dalam tumbuhan terdapat flavonoid akan terbentuk garam
flavillium saat penambahan Mg dan HCl yang berwarna jingga
(Achmad,1986)

Gambar 17. Hasil Reaksi Uji Flavanoid

Berdasarkan hasil yang diperoleh bahwa pada tanaman ceri ini

tidak ditemukan adanya flavonoid karena tidak terbentuk larutan
bening-orange, tetapi yang dihasilkan larutan berwarna hijau muda.
4.3.3 Uji Triterpenoid dan Steroid

Uji ini dilakukan dengan pereaksi liberman-Burchard yang

merupakan uji karakteristik sterol tidak jenuh dan triterpen
(Santos,et,al.,1978). Hasil positif ini ditandai dengan cincin
berwarna coklat,merah ataupun ungu untuk triterpen dan larutan
berwarna hijau untuk steroid. Pereaksi liberman-buchar berisi
perakasi asetat anhidrat dan asam sulfat pekat. Berdasarkan hasil
percobaan bahwa pada ektrak n-heksana tidak ditemukan hasil
positi mengandung triterpenoid. Namun, hasil uji adanya

57
 triterpenoid dan steroid ini didapatkan hasil positif pada ektrak n-
heksana bahwa terkandung senywa metabolit sekunder yaitu
steroid. Adanya steroid ditunjukan perubahan warna larutan
menjadi hijau.

Gambar 18. Hasil Uji Steroid

4.3.4 Uji fenolik Hidrokuinon

Hidrokuinon disebut juga 1,4-diolbenzen atau quinol yang

merupakan senyawa aromatik yang merupakan jenis fenol.
Hidrokuinon berfungsi sebagai agen pereduksi yang larut dalam
air. Pada percobaan kali ini didapatkan hasil bahwa ektrak n-
heksana tidak memberikan warna merah. Sehingga dalam ekstrak
daun ceri ini tidak mengandung senyawa fenolik hidrokuinion.
4.3.5 Uji Saponin

Ektrak n-heksan tanaman dilakukan uji saponin dengan

penambahan aquadest yang kemudian dipanaskan dan disaring
serta dilakukan pengocokan hingga timbul busa. Timbulnya busa
ini menunjukan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan
membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan
senyawa lain (Rusdi,1990). Berdasarkan hasil percobaan bahwa
didapatkan hasil untuk ekstrak n-heksan tanaman ceri memberikan
hasil positif yaitu terbentuk busa. Berikut reaksi yang terjadi pada
uji saponin.

58
 Gambar 19. Hasil Reaksi Uji Saponin

4.3.6 Uji Polifenol/Tanin

Pada uji polifeno/tannin ini digunakan pereaksi besi klorida 1%,

dimana menurut literatur bahwa apabila tanaman tersebut positif
mengandung tannin maka diperoleh larutan berwarna hijau
kehitaman dan untuk polifenol didapatkan hasil larutan berwarna
kebiruan. Terbentuknya warna hijau kehitaman terjadi karena

3+
tannin bereaksi dengan Fe
membentuk senyawa kompleks

berwarna hijau kehitaman. Berdasarkan hasil uji ekstrak tanaman

didapatkan bahwa tanaman ceri mengandung tannin karena
memberikan hasil positif berwarna hijau kehitaman dimana
menunjukan adanya tannin
4.4 Pemisahan Senyawa Bahan Alam Metode Kromatografi Lapis Tipis

Pemisahan senyawa bahan alam pada penelitian ini bertujuan untuk

memisahkan senyawa yang terdapat didalam hasil ektrak dan menentukan
jumlah komponen yang terpisah berdasarkan spot. Dilakukan KLT
sebelum kromatografi kolom ini dilakukan untuk mencari eluen terbaik
dalam pemisahan senyawa yang diinginkan. Eluen yang baik adalah eluen
yang bisa memisahkan senyawa dalam jumlah yang banyak ditandai
dengan munculnya noda. Noda yang terbentuk tidak berekor dan jarak
noda satu dengan yang lainnya jelas (Harborne,1987). Pemisahan senyawa
hasil ektrak tersebut dilakukan dengan menggunakan plat KLT alumina
sebagai fasa diamnya. Plat tersebut diberi tanda batas bawah setinggi 1,5

59
cm dan batas atas setinggi 1 cm. Untuk pengujian dengan kromatografi
lapis tipis ini, penelitian ini menggunakan ekstrak n-heksana. Hasil ekstrak
dilarutkan sedikit dengan metanol kemudian ditotolkan dengan pipa
kapiler pada plat KLT pada tepi bawah. Eluen yang digunakan yaitu n-
heksana:diklorometan sebanyak 5 ml dengan perbandingan 3:7; 5:5; dan
7:3 kemudian dimasukkan kedalam chamber dan dijenuhkan.
Masing-masing KLT yang telah ditotolkan dimasukan kedalam
chamber dan diamati pergerakan eluen. Proses tersebut dihentikan ketika
eluen telah mendekati batas atas KLT. Masing-masing plat tersebut
dikeingkan dengan cara diangin-anginkan yang selanjutnya di lihat spot
pada plat dibawah sinar UV. Berdasarkan hasil KLT didapatkan hasil
pemisahan terbaik dengan menggunakan eluen n-heksana:diklorometan
7:3. Hasil yang diperoleh terlihat bahwa terdapat pemisahan sempurna
ditandai spot tidak berbentuk tailing serta spot satu dan yang lainnya jelas
dan tidak berdekatan.

Gambar 20. Hasil KLT Ekstrak Daun Karsen

Berdasarkan gambar diatas bahwa hasil tersebut merupakan hasil KLT

dimana secara berurutan dari sebelah kiri yaitu eluen n-
heksan:diklorometan 7:3, 3:7 serta 5:5. Hasil KLT yang digunakan yaitu
dengan eluen n-heksana:diklorometana 7:3. Sehingga eluen yang
digunakan untuk memisahkan spot/noda tersebut dengan n-

60
 heksan:diklrometana. Kemudian setelah didapatkan spot dari hasil KLT
terbaik dihitung nila Rf. Niali ini diperoleh dari jumlah perbedaan warna
yang telah terbentuk pada plat KLT. Tujuannya untuk memudahkan
identifikasi senyawa-senyawa yang muncul. Pengukuran ini didasarkan
pada jarak yang ditempuh oleh pelarut dan jarak yang ditempuh oleh
bercak warna masing-masing.
4.5 Pemisahan Senyawa Bahan Alam Metode Kromatografi Kolom

Pemisahan senyawa bahan alam dilakukan dengan menggunakan

kormatografi lapis tipis didapatkan hasil bahwa eluen yang cocok untuk
pemisahan senyawa metabolit sekunder yang terkandung didalam daun
ceri menggunakan elun n-heksana:diklorometana perbandingan 7:3.
Tujuan dilakukan pemisahan berdasarkan kromatografi lapis tipis adalah
untuk menentukan eluen yang cocok untuk pemisahan selanjutnya
menggunakan kromatografi kolom. Pada kromatografi kolom dilakukan
dua preparasi yaitu preparasi silica. Dimana silica yang digunakan
ditimbang dalam berat yang berbeda sehingga didapatkan data
penimbangan silica sebanyak dua data. Data pertama silika yang
digunakan untuk preparasi kolom sebanyak 0.1000 gram. Data kedua
silika yang digunakan untuk preparasi impregnasi sebanyak 1.000 gram.
Pada data pertama silika yang digunakan untuk kolom dilarutkan
dengan menggunakan aseton secukupnya. Silika tersebut kemudian
dimasukan kedalam kolom secara perlahan dan tidak boleh terlihat adanya
silika yang tidak padat atau ada jarak antara silika yang telah dimasukan
pertama dengan silika yang dimasukan selanjutnya. Sedangkan untuk data
kedua silika digunakan untuk proses impregnasi. Silika untuk impregnasi
ini dilarutkan dengan menggunakan n-heksana hingga menjadi bubur
kemudian ditambahkan hasil ekstrak daun ceri. Kemudian dimasukan
kedalam kolom.
Eluen yang digunakan adalah n-heksana:diklrometana dimana eluen
tersebut dimasukkan kedalam kolom dengan menggunakan perbandingan
mulai dari pelarut non polar 10:0 hingga pelarut semi polar 10:0.
Kemudian setiap penambahan preaksi dengan berbagai perbandingan

61
 ditampung di tabung vial dan didapatkan 30 botol dan 15 perbandingan
eluen . Masing-masing perbandingan (15 perbandingan) dalam tabung di
ditotolkan sebanyak 15 perbandingan diplat KLT. Didapatkan hasil
terdapat 15 fraksi, dimana ada beberapa fraksi yang memiliki nilai RF
sama sehingga digabungkan menjadi satu karena memiliki senyawa yang
sama. Fraksi yang didapatkan yang memiliki nilai RF yang sama yaitu
fraksi 7 dan 8, 9 dan 10, 5 dan 6 serta fraksi 3 dan 4 sehingga menjadi 4
fraksi atau 4 botol vial. Fraksi yang sama tersebut digabung menjadi satu
sehingga terdapat fraksi 1;2; 3 dan 4; 5 dan 6; 7 dan 8; 9 dan 10; 11
sehingga menjadi 11 fraksi. Kesebelas fraksi tersebut ditotolkan kembali
diatas plat KLT dan kemudian dimasukann kedalam eluen n-
heksana:diklorometan yaitu 7:3.
Dari hasil KLT kedua didapatkan pula hasil nilai RF yang hampir sama
yang kemudian digabung kembali menjadi satu. Fraksi yang memiliki nilai
sama yaitu fraksi 1 dan 6; 4 dan 7; serta 2 dan 5. Sehingga didapatkan 3
fraksi yang hampir sama nilai Rf nya dan digabungkan kembali menjadi
satu botol vial kemudian didapatkan 3 vial ditambah fraksi 3 sehingga
terdapat 4 vial. Kemudian ditotolkan kembali diatas plat KLT untuk
mendapatkan isolate murni dalam sampel daun tersebut. Setelah diuji
kembali dengan KLT didaptkan 2 fraksi yang memiliki nilai Rf sama yaitu
fraksi nomor 1 dan 4: serta 2 dan 3. Sehingga yang tersisa hanya 2 fraksi
saja. Pengujian dengan KLT dilakukan untuk mendapatkan isolat murni
atau pemisahan yang baik. Kedua fraksi tersebut diuji kembali dengan
KLT namun yang didapatkan 1 fraksi. Analit yang memiliki ukuran dan
jumlah spot yang sama dimasukkan dalam satu fraksi.Setelah didapatkan 1
fraksi yang merupakan isolat murni, dilanjutkan ketahap uji antioksidan
dan toksisitas
4.6 Uji Antioksidan

Antioksidan merupakan substansi yang dapat menghambat proses

oksidasi oleh molekul oksigen. Menurut Kumalaningsih (2006),
antioksidan adalah senyawa yang mempunyai struktur molekul yang dapat
memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan memiliki

62
kemampuan untuk memutus reaksi berantai dari radikal bebas.
Antioksidan sangat bermanfaat bagi kesehatan dan berperan penting dalam
mempertahankan mutu produk pangan.

Gambar 21. Reaksi DPPH

Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak dilakukan dengan menggunakan
metode DPPH. Berdasarkan pada penelitian terdahulu metode ini paling
umum digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan sampel secara in
vitro dan juga merupakan metode yang sederhana, cepat serta bahan kimia
dan sampel yang digunakan hanya sedikit. Pengukuran dilakukan secara
spektrofotometer UV-Vis. Penentuan panjang gelombang DPPH dilakukan
pada 515-517 nm dan selanjutnya pengukuran dengan metode peredaman
radikal DPPH dilakukan dengan panjang gelombang tersebut.
Prinsip dari metode DPPH adalah interaksi antioksidan dengan DPPH
baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH akan
menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH. Jika semua electron pada
radikal bebas DPPH menjadi berpasangan maka warna larutan berubah
dari ungu tua menjadi kuning terang dan absorbansi yang diukur pada
panjang gelombang 517 nm (Green, 2004; Gurav et al, 2007). Pengukuran
serapan diakukan setelah dilakukan inkubasi selama 30 menit di ruang
gelap agar terjadi reaksi antara DPPH sebagai radikal bebas dengan
sampel yang diuji.
Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode DPPH menggunakan
prinsip spektrofotometri. Senyawa DPPH dalam methanol berwarna ungu
tua terdeteksi pada panjang gelombang sinar tampak sekitar 515-517 nm.
Parameter untuk menginterprestasikan hasil pengujian DPPH adalah

dengan nilai IC 50 (Inhibitor Concentration). IC 50 merupakan

63
konsentrasi larutan substrat atau sampel yang mampu mereduksi aktivitas

DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin tinggi

simivitas antioksidan. Secara spesifik suatu senyawa dikatakan sebagai

antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 10 ppm. ( IC 50

<50 ppm), kuat (50 ppm< IC 50 <100 ppm), sedang (100 ppm< IC 50

<150 ppm), lemah (150 ppm< IC 50 <200 ppm), dan sangat lemah (

IC 50 <200 ppm). Struktur DPPH radikal bebas dan DPPH yang telah

bereaksi dengan antioksidan dapat dilihat seperti pada gambar dibawah ini
(Molineux, 2004).
Uji aktivitas antioksidan ini dilakukan pada fraksi hasil uji KLT pada
praktikum sebelumnya. Hasil uji KLT yang digunakan yaitu ada 2 fraksi
yang paling bagus yang sudah dilarutkan didalam methanol sebagai
larutan induk. Dari larutan induk ini dibuat sampel dengan konsentrasi 5,
25, 50 dan 100 ppm yang kemudian ditambahkan DPPH 0,002% di vortex
agar sampel homogen. Kemudian diinkubasi selama 30 C pada suhu
ruang dalam ruangan gelap. Karena DPPH mudah rusak jika terkena
cahaya. Selanjutnya diukur absorbansi larutan sampel dan blanko (2mL
methanol dicampurkan dengan 2mL DPPH 0,002%) dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 515-517 nm.
Penentuan aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH
dinyatakan dengan % inhibisi. Semakin besar % inhibisi yang didapatkan
maka aktivitas antioksidannya semakin tinggi, hal ini dibuktikan dengan
hasil yang diperoleh dari konsentrasi secara berturut-turut 5 ppm, 25 ppm,
50 ppm, dan 100 ppm yaitu 68,4375%; 56,25%; 46,875%; dan 44,0625%.
Maka dapat diperoleh hasil dari aktivitas antioksidan dari daun ceri atau
kersen rendah.

Konsentras Absorbans % IC 50 Blank

i Sampel i Sampel Inhibisi o

64
 (ppm)

5 0,101 68,437 9015,83 0,32

5 1
25 0,140 56,25
50 0,170 46,875
100 0,179 44,0625

Tabel 4. Konsentrasi dan IC50 Antioksidan

Berdasarkan table diatas yaitu menunjukan konsentrasi sampel yaitu 5

ppm; 25 ppm; 50 ppm; 100 ppm serta nilai absorbansi maisng-masing
konsnetrasi. Dapat dilihat bahwa semakin tinggi konsentrasi maka nilai
absorbansinya semakin meningkat. Namun apabila dilihat dari hasil nilai
% inhibisinya maka semakin meningkat konsentrasinya maka nilai %

inhibisinya semakin menurun. Untuk menentukan IC 50 , diperlukan

persamaan kurva standar dari %inhibisi sebagai sumbu y dan konsentrasi

fraksi antioksidan sebagai sumbu x. IC 50 dihitung dengan cara

memasukkan nilai 50% ke dalam persamaan kurva standar sebagai sumbu

y kemudian dihitung nilai x sebagai konsentrasi IC 50 . Semakin kecil

nilai IC 50 menunjukkan semakin tinggi aktivitas antioksidannya

(Molyneux 2004). Nilai IC 50 merupakan bilangan yang menunjukkan

konsentrasi ekstrak (ppm) yang mampu menghambat proses oksidasi

sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin tinggi aktivitas

antioksidan (Zuhra, Tarigan & sihotang, 2008, pp.10)

65
 Hubungan Konsentrasi Sampel dengan % penangkal radikal bebas DPPH (% inhibisi)
80
70
60 f(x) = - 8.28x + 74.66
50 R = 0.94

% inhibisi 40
30
20
10
0
5 25 50 100

konsentrasi (ppm)

Gambar 22. Grafik Hubungan Inhibisi dengan Konsentrasi Sampel

Grafik diatas menunjukan hubungan konsentrasi sampel dengan %

inhibisi. Nilai inhibisi adalah nilai penghambatan radikal DPPH.
Berdasarkan grafik diatas didapatkan persamaan regresi y = -8.275x +

74.656. Perhitungan IC 50 diperoleh dari persamaan regresi diatas dan

didapatkan nilai IC 50 sebesar 9015,831 ppm . IC 50 merupakan

konsentrasi larutan substrat atau sampel yang mampu mereduksi aktivitas

DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin tinggi

simivitas antioksidan. Sehingga dapat disimpulkan bahwa hasil

perhitungan IC 50 sangat tinggi melebihi 200 ppm dan berdasarkan

grafik diatas bahwa aktivitas oksidannya menurun. Sehingga berdasrkan

pernyataan Molineux, 2004 bahwa Semakin kecil nilai IC 50 berarti

semakin tinggi simivitas antioksidan adalah benar karena pada hasil

analisa data dan perhitungan grafik diatas bahwa nilai IC 50 besar

sehingga aktivitas antioksidannya menurun.

66
4.7 Uji Toksisitas

Senyawa sitotoksik adalah suatu senyawa yang dapat merusak sel

normal dan juga sel kanker, serta digunaka untuk menghambat
pertumbuhan dari sel tumor maligan (Siregar & Amalia, 2004). Untuk
mengetahui suatu tanaman memiliki potensi sebagai antitumor dan
antikanker, maka perlu dilakukan uji dengan melakukan uji sitoksitas
menggunakan metode BSLT. Pada ekstrak tanaman dilakukan uji
toksisitas, dinama uji ini dilakukan dengan menggunakan larva udang dan
dengan metode Brine Shirmp Lethality Test (BSLT). Dalam uji toksisitas
dilakukan pada konsnetrasi 1000 ppm; 100 ppm; 10 ppm. Metode ini
ditunjukan terhadap tingkat mortalitas larva udang yang disebabkan oleh

esktrak uji. Hasil yang diperoleh dihitung sebagai nilai LC 50 yaitu

jumlah dosis atau konsentrasi ekstrak uji yang dapat menyebabkan

kematian larva udang 50% setelah masa inkubasi 24 jam. SLT (Brine
Shrimp Lethality Test) merupakan salah satu metode skrinning bahan yang
berpotensi sebagai tanaman berkhasiat. Metode penelitian ini
menggunakan larva udang (Artemia salina Leach.) sebagai bioindikator.
Larva udang ini merupakan organisme sederhana dari biota laut yang
sangat kecil dan mempunyai kepekaan yang cukup tinggi terhadap toksik
(Parwatidan Simanjuntak,1998).
Bila bahan yang diuji memberikan efek toksik ter hadap larva udang,
maka hal ini merupakan indikasi awal dari efek farmakologi yang
terkandung dalam bahan tersebut. Beberapa penelitian menunjukkan
bahwa A salina memiliki korelasi positif terhadap ekstrak yang bersifat
bioaktif. Metoda ini juga banyak digunakan dalam berbagai analisis
biosistim seperti analisis terhadap residu pestisida, mikooksin, polusi,
senyawa turunan morfin, dan karsinogenik dari phorbol ester (Meyer et al.,
1982).Semakin kecil nilai LD50 berarti semakin tinggi daya toksisitasnya

67
 Konsentrasi 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Kontrol
Benur Masuk 10 10 10 10 10 16 10 10
Total Masuk 20 20 26 20
Rata-rata Masuk 10 10 13 10

Benur Hidup 6 5 4 3 2 3 9 9
Total Hidup 11 7 5 18
Rata-rata Hidup 5,5 3,5 2,5 9

Benur Mati 4 5 6 7 8 13 1 1
Total Mati 9 13 21 2
Rata-rata Mati 4,5 6,5 10,5 1

Tabel 5. Larva Udang Hasil Inkubasi 24 jam

Konsentras Log C Rata-rata Nilai Nilai Nilai

i (ppm) (x) Kematian Terkecil Terbesar Probit (y)
(100%) (Xt) (Xb)
0 0 10 3.659 3.718 3.777
10 1 45 4,747 4,900 5,053
100 2 65 5.253 5.383 5.517
1000 3 81 5,842 5,878 5,914

Tabel 6. Konsentrasi Sampel dan Nilai Probility

Tabel diatas merupakan haisl uiji toksisitas dengan menggunakan larva

udang dimana dilakukan secara duplo dan dengan konsentrasi 10 ppm; 100
ppm; 1000 ppm dan dibandingkan dengan kontrol. Dimana total larva
yang masuk tiap konsentrasi baik duplo dan simplo sama. Sehingga
perhitungan rata-rata larva udang yang masuk yaitu julmah simplo
ditambah jumlah duplo dibagi dua. Selanjutnya dilakukan inkubasi dan
diamati. Untuk setiap konsentrasi diperhatikan berapa jumlah larva udang
yang baik baik pada simplo dan duplo. Dimana seharusnya jumlah yang
mati antara simplo dan duplo tidak jauh berbeda tidak berbeda jauh.
Apabila selisih perebdaan larva udang yang mati antara simplo dan duplo
berbeda maka dilakukan triplo. Berdasarkan tabel diatas untuk data
kematian simplo dan duplo selisihnya tidak terlalu jauh unuk setiap
konsentrasi. Perbedaan selisish ini harus sekecil mungkin karena

68
 perlakuan pemasukan larva udang pasa satu konsnetrasi baik simplo atau
duplo sama tidak ada jumlah yang berbeda baik larva udangnya maupun
jumlah reagen yang dimasukkannya.
Menurut Meyer et al.(1982) melaporkan bahwa suatu ekstrak
menunjukkan aktivitas ketoksikan dalam uji toksisitas jika ekstrak dapat
menyebabkan kematian 50% hewan uji pada konsentrasi < 1000 ppm.
Selanjutnya yaitu table kedua menunjukan rata-rata kematian dari larva
udang. Berdasarkan hasil percobaan bahwa kenaikan berbanding lurus
dengan nilai mortalitas.

Gambar 23. Grafik Hubungan Konsnetrasi dengan Probility

Hubungan Log Konsentrasi Sampel dengan Probility

7,000 5,914
5,517
6,000 5,053
5,000 f(x) = 687.5x + 3346.5
3,777R = 0.91
4,000
Probit 3,000
2,000
1,000
0
0 1 2 3

Log C

69
 Hasil uji toksisitas ektrak tanaman ceri ditunjukan oleh grafik diatas yaitu
dapat disimpulkan semakin tinggi konsentrasi maka akan semakin tinggi

tingkat kematian larva. Perhitungan LC 50 didapatkan persamaan regresi

linear yaitu y = 687.5x + 3346.5. Lalu dimasukkan angka 5 pada

persaamaan regresi didapatkan LC 50 sebesar 1.38 10

5
. LC 50

dibagi kedalam tiga bagian yaitu lebih dari 1000 ppm dikategorikan tidak
toksik, 30-1000 ppm dikategorikan toksik dan dibawah 30 ppm
dikategorikan sangat toksik. Sehingga dari analisa data dan perhitungan

nilai LC 50 menunjukan bahwa ekstrak tanaman ini bersifat sangat

toksik karena nilai LC 50 dikategorikan pada LC 50 30 ppm yaitu

sangat toksik.

BAB V PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil pecobaan bahwa sampel yang digunakan dah daun

karsen dan hasil ektrak yang diperoleh adalah ektrak n-heksana. Hasil
dari ektrak n-heksana ini dilakukan uji KLT dan didapatkan hasil bahwa
eluen terbaik yang digunakan adalah perbandingan n-heksana :
diklorometana yaitu 7 : 3. Karena pada eluen ini memberikan hasil spot
yang yang baik dan tidak berbentuk tailing atua ekor. Hasil dari
skrinning firokimia bahwa ektrak tanaman ini mengandung senyawa

70
tannin/polifenol, saponin dan triterpenoid dan steroid. Untuk hasil dari
kromatografi kolom terdapat 15 fraksi yang kemudian dikrucutkan
kembali dikarenakan memiliki nilai Rf yang sama sehingga dapat
dijadikan satu fraksi dan didapatkan hasil akhir dari kolom yaitu 2 fraksi.
Hasil dari uji antioksidan ini digunakan metode DPPH dimana senyawa
antioksidan ini berfungsi untuk menangkal radilkal bebas, namun pada
hasil percobaan ini tidak ditemukan senyawa antioksidan sehingga

berdasrkan hasiln nilai IC 50 yaitu sebesar 9015,831 ppm . Semakin

kecil nilai IC 50 maka aktivitas antioksidan semakin mneingkat.

Karena dalam ektrak tersebit tidak mengandung senyawa yang bersifat

antioksidan maka hasilnya nilai IC 50 besar sehingga hasil grafiknya

menurun. Sedangkan untuk uji toksisitas didapatkan hasil LC 50

sebesar 1.38 105 . Dimana hasil ini bila dibandingkan dengan

kategori LC 50 bahwa LC 50 < 30 ppm memiliki aktivitas sangat

toksik karena diduga senyawa ini mengandung senyawa antitumor dan

antikanker yaitu polifeno/tanin serta golongan terpenoid.

71
 DAFTAR PUSTAKA

Carballo JL,dkk. 2002. Comparison between two brine shrimp assays to detect in
vitro cytotoxicity in marine natural products. BMC Biotechnology.
Elke. 2007. Applied Thin-Layer Chromatography. 2 nd ed. Weinheim: Wiley-VCA
hal. 1-2.
Fessenden, R. J., Fessenden, J. S. (1999), Kimia Organik, Jilid 1, Edisi ketiga,
Penerbit Erlangga, Jakarta
Folin, Octo, Ciocalteu, Vintila, 1944, On Tyrosine and Tryptophane
Determinations in Proteins, Jour.Bio.Chem., 73 : 627-650, 1927, in. Todd-
Sanford, 10, 412.
Ganiswarna, Sulistia G. 1995. Farmakologi dan Terapi. FK-UI: Jakarta.
Harborne, J.B,1996. Metode Fitokimia, Edisi 2. Bandung: ITB Press
Hostettman, 1995.Cara Kromatografi PreparatifPenggunaan pada Isolasi
Senyawa Alam ITB, Bandung
Khopkar, S.M. 2008. Dasar-dasar kimia analitik. Erlangga : Jakarta
Lodish, H dkk. 2004. Molecular Cell Biology, 5th ed. WH Freeman:New York.
Mayer BNNR, Ferrigni ML.1982. Brine Shrimp, a convinient general bioassay
for
active plant constituents. J of Plant Medical Research.
McMurry, J. and R.C. Fay. 2004. McMurry Fay Chemistry. 4th edition. Belmont,
CA.: Pearson Education International.
Miroslav, V. 1971. Detection and Identification of Organic Compound. New York:
Planum Publishing Corporation and SNTC Publishers of Technical
Literatur.
Rahayu, L. 2009. Isolasi dan Identivikasi senyawa flavonoid dari Biji
Kacang Tunggak (Vigna unguiculata L.). Universitas Brawijaya: Malang.
Sari L.O.R.K., 2006. Pemanfaatan Obat Tradisional dengan Pertimbangan
Manfaat dan Keamanan.Majalah Ilmu Kefarmasian UI.03:01 07
Singleton, V.L. and Rossi, J.A., 1965, Colorimetry of Total Phenolic with
Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid Reagent, Am. J. Enol. Vitic, 16,
147.
Sudjadi. 1988. Metode Pemisahan. Kanisius: Yokyakarta
Talamona A. 2005. Laboratory Chromatography Guide. Bchi Labortechnik AG..
Switzerland. hal 12.
Tobo, F. 2001. Buku Pegangan Laboratorium Fitokimia I. UNHAS: Makassar
Underwood, A.L. 1986. Analisis kima kuantitatif. Erlangga : Jakarta
Watson, David G. 2005. Analasis Farmasi Edisi 2. EGC: Jakarta
Zakaria Z. A., Mohd N. A., Hazalin N., et al, 2007. Antinociceptive, anti-
inflammatory and antipyretic effects of Muntingia calabura aqueous
extract

72
 in animal models. J. Nat. Med. 61:443-8

LAMPIRAN
Perhitungan

1. Uji Antioksidan

A blanko A sampel
%Inhibisi= 100
A sampel

a) 5 ppm
0,320,101
100 =68,4375
0,32

b) 25 ppm
0,320,140
100 =56,25
0,32

c) 50 ppm
0,320,170
100 =46,875
0,32

d) 100 ppm
0,320,179
100 =44,0625
0,32

y=ax+b

IC 50=ax +b

2. Perhitungan Uji Toksisitas

ratarata mati
Ratarata Kematian= 100
rataratamasuk

a) 1000 ppm

73
 10,5
100 =81
13

b) 100 ppm
6,5
100 =65
10

c) 10 ppm
4,5
100 =45
10

d) 0 ppm
1
100 =10
10

Nilai Probit =Xb+(XbXt ) 1

a) 1000 ppm
5,878+ ( 5,8785,842 ) 1
5,878+0,036
5,914

b) 100 ppm
5,385+ ( 5,3855,253 ) 1
5,385+0,132
5,517

c) 10 ppm
4,900+ ( 4,9004,747 ) 1
4,900+0,153
5,053

d) 0 ppm
3,718+ ( 3,7183,659 ) 1

74
 3,718+0,059
3,777

y=687.5 x +3346.5

LC50 =ax+ b

5=687.5 x +3346.5
x=4.8604 ppm
antilog=1.379 105 ppm

75